UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTONOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS
SUPERIORES ZARAGOZA

MICROBIOLOGÍA GENERAL II
LABORATORIO
AISLAMIENTOS DE HONGOS DE
DIFERENTES FUENTES

Integrantes:
Martinez Ortiz Beatriz Adriana
Medrano Ávila Niza Arlette
Meléndez Cabrera Grisell
Mimbrera Sánchez Gabriel

Equipo:7
Asesor: Carolina Jiménez López
OBJETIVOS
Evidenciar la presencia y
distribución de hongos en el medio
ambiente
Analizar la morfologia de los
hongos provenientes de distintas
fuentes
Identificar y clasificar los hongos
aislados de los diferentes
especimenes trabajados
HONGOS FILAMENTOSOS
CONTAMINANTES CONDICIONES
Los podemos encontrar GENERALES PARA SU
prácticamente en todo
el ambiente: suelo, CRECIMIENTO
aire, alimentos y en los
seres vivos. FACTORES FISICOS
Actividad del agua (aw): 0.8
Luz (no es vital para su crecimiento)
Humedad : 60-80%
Oxígeno: aerobios, anaerobios,
microaerófilos
TEMPERATURA
Temperatura optima: entre 25 y 30ºC
Límite: entre 40 y 45ºC
Excepción: Por debajo de 5ºC (Aspergillus flavus, Aspergillus candidus y Aspergillus fumigatus) hasta
55°C y 0ºC (Penicillium expansum y el Penicillium cyclopium)
Mesófilos 0-50 °C (óptimo 15-40°C)
Termófilos 20-50°C
Psicrófilos 0-20 °C óptimo 15°C -17°C
Patógenos 35-40°C
FACTORES QUIMICOS
pH
pH 4-7 óptimo 5.6-6.8
Soportan mejor el medio ácido
que el alcalino. Es de destacar
que ellos mismos son capaces de
alterar el pH
Nutrientes Básicos
Heterótrofos (saprofitos, parásitos)
Fuentes de nitrógeno
Fuentes de carbono
iones inorgánicos
MÉTODOS PARA AISLAR
HONGOS.
 MÉTODOS PARA AISLAR HONGOS

Depende principalmente de:

Técnica de muestreo
Parámetros para la toma de
muestra
Cantidad y sitio de la toma de
muestra
Duración y frecuencia del
muestreo
 Técnicas de muestreo
Suelo Aire
Se puede tomar muestras de distintas Exponer caja Petri al aire por 15-30
zonas del suelo a examinar, tomando min.
una muestra de profundidad de 0 a 20 Incubar Tº ambiente
cm, con una cantidad de hasta 500g. Lugar húmedo

Se suspende muestra en agua Agar Saboraud

estéril o soluciones de agar. Agar Littman
Vertido en placa
IMPORTANCIA DEL MUESTREO Y /O AISLAMIENTO DE
HONGOS DEL AIRE
Existen más de 80 géneros de hongos reportados como
causantes de alergias del tracto respiratorio, entre
los que se encuentranlos generos:
Aspergillus Helminthosporium
Penicillium Epicoccum
Cladosporium Fusarium
Alternaria Rhizopus
Mucor
Destacando los cuatro primeros por su mayor
importancia clínica
IMPORTANCIA DEL MUESTREO Y /O AISLAMIENTO DE
HONGOS DEL AIRE
La mayoría son saprófitos

Riesgo a la salud (si la concentración de esporas

supera las 2.00 UFC/m3.

Pueden provocar una reacción alérgica, infección a

pacientes qué utilizan apoyo ventilatorio (UCI), o que
se encuentran inmunosuprimidos.
MEDIOS DE
CULTIVO
AGAR SABOURAUD Utilidad:
Componentes: Medio utilizado para el aislamiento,
Peptona
identificación y conservación de
Tripteína
Glucosa hongos patógenos y saprófitos.
Cloranfenicol También es útil para el cultivo de
Ágar
levaduras.
Agua purificada
pH 5,6 ± 0,2

Fundamento:
La tripteína, la peptona y la glucosa son los
componentes que funcionan como fuente de nutrición
para el desarrollo de los hongos. El alto contenidos de
glucosa, cloranfenicol y un pH ácido inhiben el
crecimiento de bacterias y propician el crecimiento de
hongos y levaduras.

AGAR MYCOSEL
Componentes
Medio altamente selectivo para el
aislamiento de hongos patógenos a partir
de muestras con gran cantidad de otros
hongos y bacterias
Nutrientes suministrados por
peptonas (Nitrógeno, Fosforo,
Azufre) . La glucosa es una fuente
de energía. La cicloheximida se
utiliza para inhibir determinados
hongos no patógenos, como los
mohos y levaduras saprofitas. Es
especialmente útil para el
aislamiento de los dermatofitos
El cloranfenicol es un inhibidor
para una amplia variedad de
bacterias gram negativas y
positivas, pero puede inhibir
varios hongos patógenos
 ROSA BENGALA
Utilidad: Para el recuento y el
COMPOSICIÓN
Dextrosa aislamiento de hongos y levaduras
Peptona mitológica de alimentos o del medio
Sulfato de magnesio ambiente.
Rosa de bengala
Fosfato
monopotasico
Fundamento:
Rosa de bengala inhibe el crecimiento de
bacterias y disminuye la dispersión de las
colonias de hongos
 PDA (AGAR PAPA DEXTROSA)
COMPOSICIÓN
Extracto de papa......4 g
Dextrosa.....................20 g
Agar...............................15 g
pH: 5.6 +/- 0.2
Aparencia: Transperente,
color ámbar
FUNDAMENTO
No es selectivo. Aporta elementos nutricionales, la infusión
de papa es una fuente de almidones y la dextrosa de
azúcar, lo cual es la base para el crecimiento de hongos y
levaduras.

INCUBACIÓN
A 25-30°C ó 20-25°C durante 18-48 hrs o incluso hasta 7 días

UTILIDAD
Es el medio más utilizado para el crecimiento de
hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas
o materia vegetal muerta en descomposición
(hongos fitopatógenos)
COMPOSICIÓN
AGAR LITTMAN
Peptona ..................... 10g
FUNDAMENTO
Medio Selectivo que Contiene
Estreptomicina ........... 10g colorante cristal violeta, y
Dextrosa ....................... 10g suplementado con
estreptomicina.
Cristal violeta ........ 0.01g
Agar ............................... 20g Cultivo de
hongos, especialmente
dermatofitos.
pH: 7.0 +/- 0.2

INCUBACIÓN:
A 25 +/-2ºC. durante 48-60h

UTILIDAD
Crecimiento de hongos
patógenos a un pH neutro.

Aislamiento primario de
hongos y recuento en placa de
hongos saprofitos viables.
GENEROS DE HONGOS AISLADOS COMUNMENTE
DESCRIPCION DE LA MORFOLOGIA COLONIAL

Color
Aspecto Consistencia Textura Tamaño Superficie
Se ve en el
anverso o frente Dura Yesosa Plana
Plegado Limitado
(blanco, gris, Radiado Suave Glabra Elevada
Ilimitado
naranja) Velloso Terrosa
Firme Levantamiento
Cerebriforme Granulosa Velocidad de central
Membranosa
Pigmento Crateriforme
Pastosa Vellosa crecimiento
Se ve en el Liso
reverso, algunos Observar de Mucoide Cérea
Lento (5-10
metabolitos froma lateral Cremosa
hidrosolubles se
días)
Borde Algodonosa
difunden en el Moderado
medio y es lo que Regular Rápido (24-
da color (se ve en
Irregular 48 hrs)
centro o periferia)
 DESCRIPCION DE LA MORFOLOGIA COLONIAL

Aspecto/
Superficie

Plegado Crateriforme
Cerebriforme

Umbonada
Radiado Liso /plana
 LEVADURAS
Morfologia: Redondeada u
ovaladas, por lo general colonias
lisas, aplanadasy se reproducen por
gemación

MOHOS
Morfologia: Estructuras
tubulares denomidas hifas y
crecen por ramificacion y
extensión longitudinal
Morfología colonial de hongos
contaminantes
Absidia sp.
Características
macroscópicas
Anverso: tamaño
ilimitado; color: en un
inicio (2 y 3 días) es
blanca, después toma
una tonalidad blanca-
grisácea; forma y
aspecto: vellosa-
algodonosa y seca;
reverso: no presenta
pigmentos.
 Mucor sp. Rhizopus sp.
Características macroscópicas de la
colonia:
Anverso: tamaño ilimitado, tiende a
llenar los tubos y cajas de Petri; color:
en un inicio (dos a tres días) es blanco,
tiempo después toma un color gris
oscuro; forma y aspecto: vellosa-
algodonosa y seca; reverso: no
presenta pigmentos.
Macroscópicas:
Anverso: Tamaño ilimitado,
tiende a llenar de crecimiento.
Color: Inicia (2 a 3 días) es
blanca, posteriormente toma una
tonalidad blanco-grisácea.
Forma y aspecto: vellosa-
algodonosa, seca; reverso: no
presenta pigmentos.
Cunninghamella sp
Macroscopicas: Colonias de tamaño
ilimitado (llegan a cubrir toda la caja), en
un inicio son blancas, pero mas tarde
comienzan a volverse grisáceas; son
vellosas-algodonosas
Geotrichum sp.

Macroscopica: Colonias de rapido crecimiento ,

de tamaño ilimitado, crecen mejor a 25°C, de
color blanco, húmeda, levaduriforme, de fácil
obtención. En la periferia de la colonia, se
generan hifas sumergidas en el medio, lo que
se observa como vidrio esmerilado
Acremonium sp. (Cephalosporium sp.)

Macroscópica
Anverso: Tamaño ilimitado;
color: blanco-amarillento; en
algunas cepas se observan
pigmentos naranja o violeta.
Forma y aspecto: vellosa-
húmeda; da el aspecto de
“pelos mojados de ratón”;
Reverso: por lo general no
presenta pigmentos.
Aspergillus clavatus
Anverso: tamaño ilimitado, tiende a ocupar todo el medio; color: verde, con un ligero halo
blanco micelial
Forma y aspecto: plana, granulosa o polvosa
Reverso: no presenta pigmentos.

Aspergillus clavatus (azul de algodón, 10X).

 Aspergillus flavus
Características
macroscópicas
Anverso: tamaño ilimitado;
color: verde amarillento, con
un halo micelial blanco; forma
y aspecto: plana, polvosa y
aterciopelada. Reverso: no
presenta pigmentos.
 Aspergillus fumigatus
Anverso: tamaño ilimitado, tiende a ocupar todo el medio
Color: verde, con un halo micelial blanco y en ocasiones rosa
Forma y aspecto: plana, polvosa, aterciopelada y seca
Reverso: no presenta pigmentos.

Aspergillus fumigatus
(azul de algodón, 40X)
 Aspergillus niger
Anverso: tamaño ilimitado, tiende a cubrir todo el medio; color:
al inicio (uno a dos días) forma una colonia blanca-amarillenta y
luego se convierte a negra; forma y aspecto: polvoso; reverso:
no presenta pigmentos.
Aspergillus terreus
Macromorfología
Anverso: tamaño ilimitado,
tiende a llenar el medio
Color: en un inicio es
blanca, para luego tomar un
color beige o beige-café
Forma y aspecto: plana,
granulosa o polvosa
Reverso: no presenta
pigmentos.

Aspergillus terreus (azul de

algodón, 40X)
 Fusarium sp.
Características
macroscópicas
Anverso: tamaño ilimitado; color:
en un inicio (1 a 3 días) es blanca,
para tornarse en tonalidades
naranja, café o violeta-lila
(dependiendo de la especie);
forma y aspecto: vellosa-seca, se
adhiere a las paredes del tubo;
reverso: presenta color naranja o
violeta, difusible al medio
Chrysonilia sp. (AnterNeurospora
sp. Monilia sp.)

Macroscópica:
Anverso: tamaño ilimitado, tiende a
cubrir todo el medio y llenar tubos y
cajas de Petri; color: amarillo-
naranja, rojo; algunas cepas son de
color blanco-amarillento; forma y
aspecto: vellosas, polvosas y secas;
reverso: tiene pigmento naranja
poco difuso.
 Penicillium sp.
Macroscópicas
Anverso: tamaño ilimitado, ocupa todo el medio de
cultivo; color: verde, con un halo blanquecino en la
periferia.
Forma y aspecto: plana, polvosa, aterciopelada;
Reverso: la mayoría de cepas no presentan pigmentos.
Algunas especies como P. notatum dan color café-ocre.
Scopulariopsis sp.
Anverso: tamaño ilimitado, tiende a cubrir el
medio de cultivo;
Color: en un inicio (dos a tres días) es blanca, luego
toma un color beige.
Forma y aspecto: aterciopelada, polvosa, seca,
cerebriforme (con surcos).
Características especiales: es una colonia
sumamente pleomórfica.
reverso: no presenta pigmentos.
Alternaria sp.
Características macroscópicas
Anverso: tamaño ilimitado ;color: negro, con
tonalidades café-oscuro; forma y aspecto:
plana, aterciopelada, seca y en ocasiones la
cubre un velo velloso blanco; reverso:
presenta un pigmento café oscuro, que
difunde al medio.
Ulocladium sp.
Caracteristicas macroscopicas:
Las colonias son de crecimiento rápido,
marrón oliváceo o gris-negro y como
aterciopelados
Procedimiento
 AISLAMIENTO DE HONGOS
DEL AIRE

Destapar la caja Petri con agar

Sabouraud y exponerla a la
corriente de aire por 15 minutos,
La gravedad y hacer lo mismo con agar Littman.
corrientes de aire
causan la
sedimentación de
microorganismos
transportados en Incubar la placa expuesta al aire a
el aire temperatura ambiente en un lugar
húmedo y libre de contaminación

Registrar las características

macroscópicas, de las colonias
aisladas de lo que se desarrollo
en los medios de cultivo.
 Aislamiento de Hongos del Suelo
Cernir la muestra de
tierra ,
seleccionando la Pesar 0.5 g de tierra y agregar
a un tubo que contiene 4.5
que este seca o
mL de solución salina
ligeramente
estéril con una dilución 1:10.
húmeda
*Hacer diluciones: Metodo de
siluciones
Fundir los medios
Sabouraud y Littman,
Proceder a realizar las diluciones
(aproximadamente
hasta alcanzar 10-5 y 10-6.
25-30°C), añadir dos
Tomar 1mL de cada dilución y
gotas de la mezcla de
vaciar en agares.
antibióticos.

Incubar a
temperatura 2 cajas con agar
ambiente en un lugar Sabouraud ( una para
húmedo 10-5 y otra con 10-6)
2 cajas de agar Littman
(una para 10-5 y otra
con 10-6)
Reportar morfología
colonial de las
colonias asiladas
 Aislamiento de Hongos de Verduras
y Frutas.

Por punción superficial En caso de tratarse de

sembrar en una caja
varias muestras dividir
Cortar una Petri con agar
pequeña las cajas y sembrar en
Sabouraud, repetir la
parte de la operación para la caja el centro de cada
fruta con con el agar Littman división.
hongo y con
asas
micológicas
pasar por
hipoclorito,
si el hongo Realizar la lectura y
es de reportar las
aspecto
características
polvoso
macroscópicas, de las
omitir este
paso colonias aisladas
OBTENCIÓN DE CEPAS PURAS
Se otorgaran 5 tubos de PDA
Seleccionar colonias aisladas (aire, tierra,
frutas y verduras)
Siembra: Inoclular en el centro del pico de
flauta.
Nota: Sellar con masking tape la caja petri y meter al
refrigerador para evitar el crecimiento.
No cerrar completamente el tapon de
rosca, incubar a temperatura ambiente
Detener el crecimiento antes de que llegue al
pico de flauta.
Cerrar completamente el tapon de rosca y
meter al refrigerador
Entregar en la practica 3
REPORTE DE RESULTADOS
Ejemplo de reporte de resultados
 Aplicaciones
Bioquímica clínica Farmacia Hospitalaria

Control en área de alimentación

Dx correcto de hongos patógenos parenteral
Tratamiento adecuado Prevención de enfermedades
Investigación nosocomiales (hospitales)
Monitoreo ambiental de área criticas (U.C.I. o
Aseguramiento de áreas para
quirófano )
pacientes inmunosuprimidos.
 Aplicaciones
Farmacia Industrial

Cumplimiento de Normas.
Control de partículas viables.
Producción de medicamentos
antifúngicos.
Evaluación de medicamento
parentales estériles.
Control de almacenamiento de
materias primas.
 REFERENCIAS
Gimeno A. Principales factores condicionantes para el desarrollo de los hongos y la producción de micotoxinas (2-
5) [Internet]. Engormix. 2002 [citado el 5 de octubre de 2022]. Disponible en:
https://www.engormix.com/micotoxinas/articulos/principales-factores-condicionantes-desarrollo-t26065.htm
INSTRUCCIONES DE USO -MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR [Internet]. Legacy.bd.com. [citado el 5 de octubre
de 2022]. Disponible en: https://legacy.bd.com/europe/regulatory/assets/ifu/hb/ce/pa/es-pa-254417.pdf
Seguir IPN. aislamiento y cultivo de Hongos filamentosos y levaduras [Internet]. Slideshare.net. [citado el 5 de
octubre de 2022]. Disponible en: https://es.slideshare.net/iltaitDes/aislamiento-y-cultivo-de-hongos-filamentosos-
y-levaduras
Eliseo X. Atlas de hongos Micología médica [internet]Studylib.es [consultado el 4 de octubre de 2022]. Disponible
en: https://studylib.es/doc/8785568/atlas-de-hongos-micolog%C3%ADa-m%C3%A9dica
Linares MJ, Solis F. Identificación de levaduras. [internet] .guia.reviberoammicol.com [consultado el 4 de octubre de
2022]. Disponible en https://www.guia.reviberoammicol.com/Capitulo11.pdf
Maldonado A, López ML, Lores SL, Osorio E. Identificación morfológica de hongos y bacterias en lodos de
extracción de gas natural y de tratamiento de aguas residuales [Inernet] Temas de Ciencia y Tecnología. vol. 21
número 62 Mayo. Agosto 2017. pp 3 - 12 [consultado el 4 de octubre de 2022]. Disponible en:
https://www.utm.mx/edi_anteriores/temas62/T62_1E1_Identificacion%20morfologica%20de%20hongos%20y%20b
acterias.pdf
Equipo. Morfología de Hongos [Internet]. Blogspot.com. [citado el 20 de abril de 2022]. Disponible
en:http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/11/morfologia-de-hongos.html
Microbiology: an introduction / Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. 2019 [cited 2022 Oct 4]; Available from:
https://search-ebscohost-com.pbidi.unam.mx:2443/login.aspx?direct=true&db=edsoai&AN=edsoai.on1077286444&lang=es&site=eds-live
Bonifaz T.J.; Micología médica básica, 4ª ed. McGraw-Hill, México, D.F., 2014.
Arenas R.G.; Micología médica ilustrada 4° ed. McGraw-Hill, México, D.F., 2011.
¡GRACIAS!