ESTRUCTURA, FUNCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE
LAS ENZIMAS
4.1. CONCEPTOS GENERALES
Toda reacción química, biológica o inorgá-
nica, es un proceso en el que una o varias
moléculas interactúan entre sí para transfor-
marse en otras moléculas siguiendo una
dirección determinada por leyes fisicoquí-
micas (termodinámicas) hasta llegar a un es-
tado de equilibrio:
A+B , ) C+D
Existen sustancias llamadas catalizadores
que tienen la capacidad de acelerar las reac-
ciones químicas sin alterarse al final de éstas
y sin modificar el equilibrio químico; sólo
acortan el tiempo en que se alcanza dicho
equilibrio.
Los catalizadores se dividen en dos gru-
pos: orgánicos e inorgánicos. Dentro de los
primeros tenemos las enzimas y en el segun-
do los iones H + , OH " o metálicos.
Las enzimas son moléculas producidas
por las células de los organismos vivos con
la función específica de catalizar reacciones
químicas, las que sin ellas, ocurrirían muy
lentamente.
Hasta hace pocos años se consideraba que
todas las enzimas eran proteínas. Sin embar-
go, recientes investigaciones realizadas por
Cech y colaboradores (Cech, T.R., Science,
236, 1532-39 (1987) han demostrado que
moléculas de RNA pueden actuar como en-
zimas con una elevada actividad catalítica.
Se ha comprobado experimentalmente que
la molécula de RNA L-19 derivada de un in-
trón de un precursor de una RNAr de un pro-
tozoario ciliado actúa como ribonucleasa y
como RNA polimerasa. Esta enzima de
RNA o RNA enzimático o ribozima muestra
las mismas propiedades cinéticas que las
otras enzimas tradicionales, un alto grado de
especificidad y susceptibilidad a la inhibi-
ción competitiva. Este descubrimiento pue-
de tener importantes implicaciones sobre la
evolución de las moléculas y puede contri-
buir a aclarar el mecanismo de acción de los
catalizadores.
La vida y el crecimiento celular requieren
la continua síntesis de macromoléculas aco-
plada a procesos proveedores de energía. El
acoplamiento controlado de las reacciones
químicas mediante la acción de enzimas es
propiedad única de las células vivas. Entre
las miles de sustancias presentes en una cé-
lula, las enzimas constituyen la parte más
importante de las proteínas celulares. Esen-
cialmente, todas las reacciones bioquímicas
son catalizadas por enzimas.
cia emplean coenzimas del tipo del NAD + ,
NADP + , FAD, ácido lipoico y CoQ como
aceptores de hidrógeno; otros aceptores in-
cluyen al grupo hemo y al oxígeno molecular.
En este grupo se incluyen deshidrogenasas y
oxidasas de gran importancia en los proce-
sos oxidativos de la respiración celular. La
catalasa es única en el sentido de que el pe-
róxido de hidrógeno (H2O2) sirve tanto co-
mo donador y como aceptor. La catalasa
funciona en la célula eliminando el peróxido
de hidrógeno que es tóxico.
2.- Transferasas.- Muchos pasos impor-
tantes del metabolismo requieren la transfe-
rencia de una molécula a otra de grupos
ámino, carboxilo, carbonilo, metilo, ácido,
glucosilo, o fosforilo. Las coenzimas utili-
zadas son el tetrahidrofolato (FH4) coenzima
A (CoA-SH) y fosfato de piridoxal (PPal). Las
aminotansferasas (transaminasas) transfieren
grupos amino de un aminoácido a un cetoá-
cido aceptor, dando lugar a la formación de
un nuevo aminoácido y un nuevo cetoácido.
Las cinasas catalizan la transferencia de un
fosfato del ATP a grupos aceptores, alcohol o
ámino, como ejemplo tenemos la glucocina-
sa que forma glucosa-fosfato. La síntesis de
glucógeno depende de glucosiltransferasas.
3.- Hidrolasas.- Catalizan el rompimiento
de una molécula, con participación de agua,
entre enlaces carbono y cualquier otro áto-
mo. Este grupo de enzimas se puede conside-
rar como una clase especial de transferasas
en las que el grupo donador se transfiere al
agua. La rotura del enlace peptídico es buen
ejemplo de esta reacción llevada a cabo por
peptidasas. Nombres triviales de algunas
peptidasas incluyen pepsina, tripsina, qui-
motripsina y dipeptidasa. Otras subclases
son las esteraseis como la lipasa, colineste-
rasa, y colesterol esterasa. Las fosfatasas
eliminan grupos fosfatos, como la glucosa-
6-fosfatasa y las fosfatasas acida y alcalina.
4.- liosas.- Catalizan el rompimiento no
hidrolítico entre carbono-carbono, carbono-
azufre y algunas carbono-hidrógeno. A este
grupo pertenecen las descarboxilasas. Aldehi-
do nasas como la aldolasa, fumara y otras.
5.- Isomerasas.- Incluye a todas las enzi-
mas que catalizan la interconversión de todo
tipo de isómeros ópticos, geométricos, de
posición y reacciones de oxidorreducción
intramolecular. A este grupo pertenecen las
racémosos, epimerasas y mutasas.
6.- Ligasas.- Catalizan la formación de
enlaces entre carbono-oxígeno, nitrógeno y
otros átomos a expensas de un enlace fosfa-
to de alta energía del ATP. El término de
sintetasas se reserva para este grupo particu-
lar de enzimas. La piruvato carboxilasa es
un buen ejemplo de una ligasa. También la
acetil-CoA sintetasa, la aminoacil-RNAt
sintetasa, enzimas activadoras de aminoáci-
dos en la síntesis de proteínas.
En la Tabla 4.4 se describen algunas enzi-
mas y su clasificación de acuerdo a la comi-
sión de enzimas.
4.4 LOCALIZACIÓN Y DISTRIBUCIÓN
DE LAS ENZIMAS
Las enzimas dentro de un organismo se en-
cuentran distribuidas en los diferentes órga-
nos y tejidos donde realizan su función
específica. Dentro de una célula, algunas en-
zimas se encuentran compartamentalizadas
y ordenadas; ejemplo: en las células hepáti-
cas, las enzimas de la glicólisis están locali-
zadas en el citoplasma, en tanto que las
enzimas del ciclo de Krebs en las mitocon-
drias. Dentro de la mitocondria, las enzimas
del ciclo del ácido cítrico se encuentran dis-
puestas en forma secuencial, lo cual da al
proceso ergopoyético de la célula la máxima
eficacia.
4.4.1. Nivel celular. Sistema microsomal
La localización de una enzima particular en
un tejido o célula es el fundamento de una
 Tabla 4.4
Clasificación Internacional de las enzimas

Número Nombre sistemático Nombre trivial

1. Oxidorreductasas
1.1 Grupos CH-OH
1.1.1 NAD+ o NADP + aceptor
1.1.1.1. Alcohol NAD + oxidorreductasa: Deshidrogenasa Alcohólica
1.1.3. O2 como aceptor
1.1.3.4. p-D-glucosa: oxígeno Oxidorreductasa Glucosa oxidasa
(FAD)

1.2. Grupos C = 0
1.2.1.12. Gliceraldehído 3-P:NAD* Triosa-P-deshidrogenasa
Oxidorreductasa (NAD+)
1.2.3.2. Xantina:oxígeno oxidorreductasa. Xantino oxidasa
1.2.4.1. Piruvato: lipoato Oxidoreductasa Piruvato deshidrogenasa

1.3. Grupos CH-CH

1.3.1.1. 4,5-Dihidrouracilo: NAD+ oxidorreductasa Dihidrouracilo deshidrogenasa

1.4 Grupos CH-NH2

1.4.1.2 L-glutamato: NAD+ oxidorreductasa Glutamato deshidrogenasa

1.5 Grupos C-NH-

1.5.1.5 5,10-Metilenotetrahidrofolato: Metilen-FH4-deshidrogenasa
NADP + oxidorreductasa

1.6. Sobre NADH o NADPH como donador

1.6.2.1. NADH: citocromo C oxidorreductasa Citocromo C reductasa

1.9. Sobre grupos hemo donadores.

1.9.3.1. Citocromo C: oxígeno oxidorreductasa Citocromo oxidasa

1.11. Con H2O2 como aceptor

1.11.1.6 Peróxido de hidrógeno: H2O2 Catalasa
oxidorreductosa
2. Transferasas
2.1 Grupos de 1 carbono
2.1.1 metil transferasas
2.1.1.2 S-adenosil-metionina: guanidino-acetato Guanidometil transferasa
N-metil Transferasa

2.1.2 Hidroximetil y fomil transferasa

2.1.2.1 L-serina: FH4 5,10-hidroximetil trasferasa Serina hidroximetil transferasa
 CONTINUA TABLA 4.4
Número Nombre sistemático Nombre trivial

2.1.3 Carboxil o carbamoil transíerasas

2.1.3.2 Carbamoil-P: L-aspartato transferasa Aspartato transcarbamilasa

2.2 Transferencia de grupos aldehídicos o

cetónicos
2.2.1.1 Sedoheptulosa 7-P: gliceraldehido Transcetolasa
glicolaldehído transferasa
2.2.1.2 Sedoheptulosa: 7-P: gliceraldehido Transaldolasa
Dihidroxiacetona transferasa

2.6.1 Aminotransferasas
2.6.1.1 L-aspartato: 2-oxoglutarato aminotransferasa Transaminasa glutámico oxalacética
2.6.1.2 L-alanina: 2-oxoglutarato aminotransferasa Transaminasa glutámico pirúvica

2.7.1 Fosfotransferasas
2.7.1.2 ATP: glucosa 6-P transferasa Glucocinasa
2.7.7.10 UTP: galactosa 1-P uridil transferasa UDP-galactosa pirofosforilasa

3. Hidrolasas
3.1 Enlace éster
3.1.1 Carboxílico
3.1.1.7 Acetilcolina acetil hidrolasa Colinesterasa
3.1.2 Tióester
3.1.2.1 Acetil CoA hidrolasa Tiolasa
3.1.3 Ester fosfórico
3.1.3.9 Glucosa 6-P fosfohidrolasa Glucosa 6-fosfatasa

3.2.1 Glucósido hidrolasas

3.2.1.1 a l - 4 gluca-4glucano hidrolasa a-amilasa

3.4.4 Péptido hidrolasas

3.4.4.1 Pepsina

3.5.1.5 Urea amidohidrolasa Ureasa

3.6.1.3 ATPfoshidrolasa ATPasa

4 Liasas
4.1.1 Carboxiliasas
4.1.1.1 2-oxo-ácido carboxil iasa Piruvato descarboxilasa
4.1.2 Aldehidoliasas
4.1.2.7 Cetona 1-Paldehidoliasa Aldolasa
 CONTINUA TABLA 4.4

Número Nombre sistemático Nombre trivial

4.1.3 Cetoacidoliasas
4.1.3.7 Citrato oxalacetato liasa Citrato sintetasa

4.2.1 Hidroliasas
4.2.1.2 L-malatohidroliasa Fumarasa

5 Isomerasas
5.1 Racemasas y epimerasas
5.1.1.1 Alanina recemasa Alanina racemasa
5.1.3.1 D-ribulosa 5-P, 3 epimerasa Epimerasa

5.2 Cis-trans isomerasas

5.2.1.1 Malea to cis-trans isomerasa Maleato isomerasa

5.3.1 Aldo-ceto isomerasas

5.3.1.1 D-gliceraldehído 3-P cetol isomerasas Triosa-P isomerasa

6 Ligasas
6.1.1 Aminoácido-RNA
6.1.1.1 L-tirosina: RNAt ligasa(AMP) Tirosil-RNAt sintetasa

6.2.1 Acido tiol

6.2.1.1 Acetato: CoA ligasa (AMP) Acetil CoA sintetasa

6.3 Enlaces C-N

6.3.4.2 UTP: amonio ligasa (ADP) CTP sintetasa

6.4 Enlaces C-C

6.4.1 Piruvato: C 0 2 ligasa (ADP) Piruvato carboxilasa

rama de la histoquímica denominada his- las que regulan la acción de hormonas o

toenzimología. La distribución de las enzimas
en los organelos subcelulares se estudian
fraccionando en ultracentrífuga homogenei-
zados de células. En células eucarióticas las
enzimas se distribuyen en la membrana ce-
lular, mitocondrias (matriz y espacios inter-
membranas) lisosomas, vacuolas, retículo
endoplásmico, etc. (tabla 4.5). En la mem-
brana celular se encuentran enzimas que
participan en el transporte de metabolitos y
neurotransmisores sobre los receptores
membranales. En tanto que muchas enzimas
se encuentran solubles en el citoplasma,
otras se encuentran fijas ordenadamente en
alguna membrana particular y funcionan en
forma secuencial, como es el caso de las en-
zimas oxidativas de la mitocondria. Gene-
ralmente las vías anabólicas y catabólicas se
localizan en organelos diferentes a fin de
maximizar la economía celular.
 Tabla 4.5
Localización intracelular de las principales enzimas y rutas metabólicas

Citoplasma Glucólisis: ruta de las hexosa monofostato; glucogénesis y glucogenóli-

sis: síntesis de ácidos grasos; catabolismo de purinas y pirimidinas; pep-
tidasas; aminotransferasas; aminoacilsintetasas

Mitocondria Ciclo de los ácidos tricarboxílicos; oxidación de ácidos grasos; oxida-

ción de aminoácidos; alargamiento de ácidos grasos; síntesis de la urea;
transporte electrónico y fosforilación oxidativa acoplada.

Lisosomas Lisozima; fosfaíasa acida; hidrolasas, incluyendo proteasas, nucleasas,

glucosidasas, arilsulfatasas, lipasas, fosfolipasas y fosfatasas.

Retículo NADH y NADPH citocromo c reductasas; oxidasas de función mixta

endoplasmático relacionadas con el citocromo b, y el citocromo P450; glucosa 6-fosfata-
(microsomas) sa; nucleósido difosfatasa; esterasa, P-glucuronidasa, y glucuroniltrans-
ferasa; rutas de síntesis de proteínas; síntesis de fosfoglicéridos y
triacilgliceroles, síntesis y reducción de esteroides

Golgi Galactosil y glucosiltransferasa; condroitina sulfotransferasa; 5-nucleo-

tidasa; NADH-citocromo c reductasa, glucosa 6-fosfatasa

Peroxisomas Urato oxidasa; D-aminoácido oxidasa; a-hidroxiácido oxidasa; catalasa;

oxidación de ácidos grasos de cadena larga

Núcleo Rutas de biosíntesis de DNA y RNA

a
La NADH-citocromo b, reductasa se ha encontrado en el retículo endoplasmático, Golgi, membrana
mitocondrial externa y en la envoltura nuclear. Varias de las enzimas señaladas en la tabla son comunes a
uno o más organelos membranosos.

4.4.2. A nivel de organismo mico pirúvica, TGP) se localiza en hígado.

La localización y distribución de enzimas
que funcionan específicamente en determi-
nados órganos es el fundamento de la enzi-
mología clínica.
Dos subclases de aminotransferasas se lo-
calizan en órganos distintos; la aspartato
aminotransferas (antes transaminasa glutá-
mico oxalacética, TGO) se localiza princi-
p a l m e n t e en m i o c a r d i o y la a l a n i n a
aminotransferasa (antes transaminasa glutá-
La creatina fosfocinasa se localiza en mús-
culo estriado (esquelético y miocardio). La
deshidrogenasa láctica posee varias isoenzi-
mas, algunas de ellas específicas de deter-
minado órgano; la LDH-1 (H4) se localiza
en miocardio y la LDH-5 (M4) se localiza en
hígado y músculo esquelético; otra variante
isoenzimática la LDH-X se localiza en testí-
culo. La amilasa y lipasa pancreáticas ayu-
dan al diagnóstico de pancreatitis aguda
cuando se elevan en suero (ver más adelan-
te). Las fosfatasas, con su localización parti-
cular, la fosfatasa acida en próstata y la fos-
fatasa alcalina en hígado y hueso,
determinan la presencia de carcinoma pros-
tético y óseo respectivamente, cuando se
elevan en suero.
4.5 MECANISMO DE ACCIÓN
El mecanismo de acción de las enzimas se
estudiará primero desde el punto de vista ge-
neral de la catálisis y luego de cada sistema
enzimático en particular.
4.5.1. Aspectos termodinámicas. Energía
de activación
Conviene analizar previamente los concep-
tos termodinámicos, que determinan el sen-
tido de una reacción y su equilibrio, en
virtud de que las enzimas sólo aceleran reac-
ciones espontáneas o metaestables, termodi-
námicamente posibles, las cuales pueden
ocurrir aún en ausencia de enzimas pero
muy lentamente. Las enzimas no catalizan
reacciones que jamás sucederían espontá-
neamente, es decir aquellas termodinámica-
mente imposibles.
La realización y extensión de las reaccio-
nes bioquímicas están controladas por el flu-
jo energético. El estudio de esto, es el campo
de las termodinámica, rama de la fisicoquí-
mica, cuyos conceptos principales se esta-
blecen en d o s p r i n c i p i o s de la
termodinámica llamados primero y segun-
do, los cuales permiten comprender el senti-
do de las reacciones químicas, si una
reacción procediera de izquierda a derecha,
si es reversible, y si hay que suministrarle
energía para que ocurra, o si la libera y en
qué magnitud.
La aplicación del primer principio de la
termodinámica (principio de conservación
de la energía) a las reacciones químicas ha
dado origen a la termoquímica que estudia la
cantidad de calor que se absorbe o se des-
prende en una reacción y permite calcular la
energía libre (F) y la entalpia o contenido
calórico (H). Si en la reacción se absorbe ca-
lor, los productos tendrán más energía que
los reactantes; los cambios de energía libre
(AF) y de entalpia (AH) son positivos y se
dice que la reacción es endergónica (o endo-
térmica si es en forma de calor). En las reac-
ciones en que se desprende calor, AF y AH
son negativos y la reacción es exotérmica
{exergónica en general).
AF = LFf productos - LFf reactantes
AH - LHf productos - LHf reactantes
Una reacción que es exotérmica en senti-
do directo, será endotérmica en sentido in-
verso. Se habla así de calor de formación y
calor de reacción, ejemplo: en la fotosínte-
sis, la energía solar permite la síntesis de
glucosa (Ce H12 0¿) y es una reacción en-
dergónica; la degradación metabólica de la
glucosa por la célula, con formación de CO2
y H 2 0 es una reacción exergónica, de la
misma magnitud.
Energía
C H
6 12°6 +
°2 6C0 2 + ÓHjO
Energía
El segundo principio de la termodinámica
determina la dirección de una reacción quí-
mica. Este principio establece que los proce-
sos espontáneos tienden al equilibrio; esto
determina que un cuerpo caliente ceda calor a
otro más frío y no al revés, que el agua corra
por un declive y no suba por una pendiente.
El cambio de energía libre (AF) o energía
útil se correlaciona con la constante de equi-
librio (Keq), la cual a su vez se rige por la
ley de acción de masas. Para cualquier reac-
ción química: la ecuación que determina el
cambio de energía libre respecto a la con-
centración de reactantes y productos es la si-
guiente:
Donde AF° es el cambio de energía libre
en condiciones estándar: este valor es equi-
valente al pKa de la ecuación de Henderson-
Hasselbach (ver unidad 2). En el equilibrio,
no hay cambio de energía libre y AF=0, por
lo tanto:
AF° = -RT lnKeq
si AF° es negativo, el proceso se desarrollará
espontáneamente, es decir es termodinámi-
camente posible; si AF° es positivo, la reac-
ción sólo transcurrirá si se le proporciona
energía (tabla 4.6).
Existen sistemas de reacción que se pre-
sentan en estado metaestable, es decir ter-
modinámicamente posible; pero no
espontáneo. Esto sucede con algunos com-
Tabla4.6
Relación entre Keq y AF° (a 25°C)
puestos orgánicos inflamables expuestos al
aire, como la gasolina, que necesitan una
chispa para su ignición y su transformación
en CO2 y H2O. Esa barrera termodinámica
es la energía necesaria para alcanzar el esta-
do de transición como energía de activación
(fig.4.1).
La energía de activación es la energía ne-
cesaria para pasar las moléculas reaccionan-
tes al estado de transición y que de ahí
proceda la reacción. En ausencia de catali-
zadores enzimáticos, muchas reacciones
químicas proceden excesivamente lentas a
la temperatura del organismo, no reaccionan
con rapidez debido a que la energía cinética
que poseen es insuficiente para superar esa
barrera de energía. Al disminuir la energía
de activación, las enzimas hacen que las re-
acciones termodinámicamente posibles pro-
cedan con rapidez en la célula pero no
modifican la constante de equilibrio.
4.5.2. Cinética enzimática
Dado que las enzimas modifican la veloci-
dad de las reacciones químicas, este capítulo
tratará de los factores que inciden en la acti-
vidad de una enzima. La cinética estudia la
velocidad de cambio entre el estado inicial
de reactantes y productos y su estado final.
La velocidad cambia constantemente a me-
dida que se aproxima al equilibrio (estado
final) siendo cero en el equilibrio.
En un sentido cinético, los componentes
iniciales del sistema enzimático (sustrato
(S), cofactores y enzimas) se añaden a una
serie de recipientes en un medio con fuerza
iónica, temperatura y pH conocidos. La ve-
locidad del cambio en la concentración del
producto o del sustrato en función del tiem-
po, expresa la velocidad de la reacción.
En todos los procesos enzimáticos, la ve-
locidad de la reacción depende de la concen-
tración de enzima y de su sustrato. Si se
aumenta progresivamente la concentración
de enzima, manteniéndose constante (pero en
exceso) la concentración del sustrato, se ob-
tiene una relación directa y lineal (fig. 4.7).
A concentración fija de enzima y concen-
traciones crecientes de sustrato se obtiene
una segunda relación interesante. Al princi-
pio, la velocidad de la reacción aumenta
proporcionalmente a la concentración de
sustrato; a este punto, se le designa como re-
acción de primer orden en virtud de que la
velocidad depende de la concentración del
sustrato (S) elevada a la primera potencia.
Después, la velocidad de la reacción decrece
progresivamente hasta que permanece cons-
tante (Vmax) aun con elevadas concentra-
ciones de sustrato (cinética de orden cero);
esto se explica porque la enzima se ha "satu-
rado" con sustrato (fig. 4.8).
En otras palabras, la enzima debe tener un
número finito de sitios catalíticos para el
sustrato y cuando están todos ocupados ya

no puede aumentar la velocidad de la reac-

ción.
Modelo de Michaelis-Menten. Para expli-
car matemáticamente este comportamiento
Michaelis y Menten invocaron la existencia
de un complejo intermedio enzima-sustrato:
K
E + S ' [ES] • E+P
K, K„

La formación del complejo enzima-sus-

trato [ES] se dedujo de las siguientes obser-
vaciones; a) fibrina tratada con tripsina y
lavada posteriormente, seguía degradándo-
se; b) la enzima sacarasa en presencia de sa-
carosa resistía la desnaturalización térmica
comparada con la sacarasa sola. Por otro la-
do, Keilin y Mann en 1937 comprobaron
que la peroxidasa presenta un desplaza-
miento de las bandas de absorción cuando se
adiciona H2O2:
K
i ron que la actividad PRPP sintetasa estaba
Peroxidasa + H J O J ;==? [Peroxidasa - H J O J ]
En presencia de un donador de hidróge-
nos (colorante oxidable) tiene lugar una re-
acción posterior:
K3
[Peroxidasa - H 2 0 2 ] + R-H 2
roxidasa + 2 H 2 0 + R
La observación en el espectroscopio de
estas dos reacciones resultó una prueba con-
vincente de que es correcta la hipótesis de la
formación del complejo [ES].
La ecuación matemática que define la re-
acción enzimática es una hipérbola que reci-
be el nombre de ecuación de
Michaelis-Menten:
_ Vmax [S]
Km + [S]
El valor de Km (constante de Michaelis)
que se expresa en moles/litro, resulta de las
constantes de velocidad.
Km- - ¿ - - I
Al
En términos prácticos, la Km es un valor
que indica la afinidad de la enzima por el
sustrato. Cuanto más baja sea Km, mayor es
la afinidad. Las dos constantes de la ecua-
ción de Michaelis Menten, Vmax y Km son
únicas para cada enzima. Así, en este senci-
llo modelo, la actividad de la enzima se pue-
de separar en dos fases; fijación del sustrato
seguida de su modificación química. Esta
naturaleza bifásica se demuestra en el si-
guiente ejemplo clínico: en una familia
aquejada de hiperuricemia y gota, un pa-
ciente excretaba tres veces la cantidad nor-
mal de ácido úrico por día y tenía también
niveles elevados de fosforribosil pirofosfato
(PRPP) en eritrocitos. Los ensayos indica-
aumentada tres veces; la Km de la enzima
era normal pero la Vmax era tres veces ma-
yor.
Nótese que si la velocidad (v) se hace
igual a - Vmax, la Km se hace igual a [S] en
la ecuación de Michaelis-Menten, Por tanto,
Pe- en una curva de saturación (fig. 4.8) el valor
numérico de la Km puede deducirse en la
gráfica en concentración de sustrato [S],
cuando la velocidad es la mitad de la veloci-
dad máxima.
Modelo de Lineweaver-Burk. Debido a
que en la práctica la determinación de Km a
partir de la curva de saturación de Michae-
lis-Menten no es muy precisa, ya que la
Vmax se hace asintótica, es necesario tomar
el recíproco de la ecuación y transformarla
en una línea recta:
Km
i . 1 + 1
v Vmax [S ] Vmax
y = ax + b
La gráfica que se obtiene es la de Line-
weaver-Burk o del doble recíproco (fig. 4.9),
donde se puede calcular Km en la intersec-
ción negativa de la abscisa.
Modelo de Eadie-Hofstee. Otra transfor-
mación a la gráfica de Michaelis-Menten
que permite calcular con mayor precisión la
Km es la ecuación de Eadie-Hofstee:
V v Vmax
+
[S] ~~Km Km
La gráfica obtenida se muestra en la fig. 4.10,
donde la pendiente negativa es la inversa de
Km.
4.5.2.1. Actividad enzimática
La actividad de una enzima se expresa habi-
tualmente en términos de la cantidad de pro-
ducto formado (o desaparición de sustrato)
por cantidad determinada de enzima por
unidad de tiempo. La unidad estándar de ac-
tividad enzimática (U) es la cantidad de en-
zima que cataliza la transformación de un
micromol de sustrato por minuto a 25 °C en
condiciones óptimas de ensayo. La activi-
dad específica se define como el número de
unidades de enzima por miligramos de pro-
teína (U/mg proteína). Sin embargo esto no
indica si en la muestra la única proteína pre-
sente es la enzima. Durante la purificación
enzimática este valor va aumentando a me-
dida que se van eliminando proteínas conta-
minantes. El antiguo "número de recambio"
recientemente sustituido por actividad mo-
lecular o molar, se define como el número
4.1.1. Importancia de las enzimas
El estudio de las enzimas en medicina es ca-
da vez más importante. Son múltiples las
implicaciones que tienen las enzimas en el
origen, diagnóstico, tratamiento y preven-
ción de enfermedades. Muchas enfermeda-
des se deben a la carencia o anormalidad en
la síntesis de una determinada enzima (ga-
lactosemia, fenilcetonuria, albinismo, pen-
tosuria esencial y muchas otras que se
revisarán más adelante). Estos errores están
codificados en el genoma y se denominan:
"errores innatos del metabolismo", "enfer-
medades moleculares", "enfermedades he-
reditarias" o "enfermedades bioquímicas".
El diagnóstico de muchas enfermedades se
puede'realizar con bastante precisión deter-
minando la actividad de ciertas enzimas o
isoenzimas que son indicadores de la des-
trucción tisular de órganos específicos. Es-
tas determinaciones son tan importantes que
han dado lugar a una nueva especialidad: la
enzimología clínica; que es el área de la me-
dicina que utiliza las enzimas como auxilia-
res diagnósticos.
Otras enfermedades se deben a la carencia
de cofactores enzimáticos y la administra-
ción de ellos produce la rápida curación de
estas enfermedades carenciales, como suce-
de con las vitaminas (procoenzimas) y algu-
nos oligoelementos. En ocasiones son las
propias enzimas las que se usan para el tra-
tamiento de enfermedades, esta práctica se
conoce como enzimoterapia. El empleo de
enzimas proteolíticas para el tratamiento de
hematomas y de enzimas digestivas en casos
de dispepsia, son ejemplos del uso de enzi-
mas como fármacos. El empleo de enzimas
inmovilizadas es otra posibilidad de terapia
cuando hay carencia de enzimas en un orga-
nismo evitando así las reacciones de intole-
rancia y asegurando la estabilidad y las
condiciones óptimas para la actividad catalí-
tica. Es indudable que la enzimoterapia tie-
ne un futuro promisorio con las técnicas de
ingeniería genética que permiten introducir
la información genética para la síntesis de la
proteína ausente o defectuosa utilizando
plásmidos o partículas viriformes.
Otra importante vinculación de las enzi-
mas con la medicina, radica en el empleo ra-
cional de fármacos. La mayor parte de los
fármacos que se utilizan en el tratamiento de
enfermedades tienen como mecanismo de ac-
ción el modificar la actividad de una o varias
enzimas, ya sea, actuando como inhibidor
enzimático competitivo, no competitivo, acom-
petitivo o mixto, secuestrando o liberando
cofactores o induciendo la biosíntesis de al-
gunas enzimas. La eficacia del tratamiento
terapéutico y la magnitud de las reacciones
indeseables (reacciones secundarias, contra-
indicaciones, precauciones, interacciones
farmacológicas), sólo se podrán lograr y
prevenir en la medida que se conozca el me-
canismo de acción de cada fármaco y las
múltiples interacciones que pueden ocurrir
con las enzimas.
4.1.2. Concepto de enzima, sustrato y
producto
En una reacción enzimática se identifican
tres componentes: la enzima (E) específica
de la reacción, el sustrato (S) que es la molé-
cula sobre la que actúa la enzima y el pro-
ducto (P) molécula o moléculas resultantes
de la acción de la enzima sobre el sustrato.
Dado que muchas reacciones son reversi-
bles, los productos de la reacción directa
(que procede hacia la derecha) son los sus-
tratos de la reacción inversa (que procede
hacia la izquierda).
directa
A+B . C+D
sustratos inversa productos
En reacciones secuenciales de una vía
metabólica, el producto de una reacción ca-
de moles de sustrato transformado por un
mol de enzima por minuto (mol/min/mol de
enzima) (tabla 4.7). Debido a que muchas
enzimas son oligoméricas, con un sitio cata-
lítico en cada subunidad, la actividad molar
se denomina actividad del centro catalítico:
número de moles de sustrato por mol de su-
bunidad activa o por sitio catalítico, por mi-
nuto. La comisión de enzimas de la Unión
Internacional de Bioquímica ha propuesto
una nueva unidad, el Katal (Kat) que se de-
fine como la conversión de un mol de sus-
trato por segundo; se puede expresar en
milika tales (mKat) o microkatales (uKat).
Hasta que todos los laboratorios de análi-
sis clínicos unan esfuerzos para estandarizar
sus informes, es imperativo, que el médico se
familiarice con las reglas locales en el ma-
nejo de unidades de actividad enzimática.
4.5.3. Factores que afectan la actividad
enzimática
actividad enzimática aumenta con los incre-
mentos de temperatura, la velocidad de los
procesos metabólicos crece notablemente
durante la fiebre; si la fiebre continuara
indefinidamente sería fatal. Muchos medi-
camentos actúan como inhibidores competi-
tivos de ciertas enzimas. Por otro lado, estos
factores deben considerarse al realizar los
ensayos in vitro para medir actividades enzi-
máticas en el plasma de un paciente.
4.5.3.1. Factores físicos y químicos
Temperatura. Las enzimas a temperaturas
bajas muestran un aumento de su actividad
al incrementar la temperatura, pero a altas
temperaturas la enzima sufre desnaturaliza-
ción térmica y la velocidad de la reacción
disminuye (fig. 4.11).
La gráfica de velocidad frente a tempera-
turas (Fig. 4.11) revela una curva en forma

La actividad enzimática es afectada por una

serie de factores externos e internos que
pueden ser físicos, químicos y biológicos:
temperatura, pH, fuerza iónica, concentra-
ción del sustrato, de la enzima, del producto
e inhibidores. Estos efectos son tan impor-
tantes in vivo como en condiciones de labo-
ratorio; en el primer caso, debido a que la

Tabla 4.7
Actividad molecular de algunas enzimas

Enzima Actividad molar

(moles de sustrato
por mol de enzima
por minuto)

Anhidrasa carbónica 36,000 000

Catalasa 5,600 000
p-amilasa 1,100 000
p-galactosidasa 12 000
Succinato deshidrogenasa 1 150
 de campana con un óptimo entre 40 y 45 °C
para enzimas humanas, denominada tempe-
ratura óptima. El incremento de velocidad
al acercarse la temperatura óptima se debe a
una mayor energía cinética de los reccionan-
tes (sustrato). El factor que resulta por cada
10°C de incremento en la temperatura se de-
nomina coeficiente térmico (Qio) y en las
reacciones químicas habituales es de alrede-
dor de 2, o sea, se duplica la velocidad de la
reacción por cada 10°C de aumento en la
temperatura. Muchos procesos fisiológicos,
por ejemplo, la frecuencia de contracción de
un corazón extirpado, muestran un (Qio) • 2.
Por arriba de la temperatura óptima, la velo-
cidad de reacción decrece por desnaturaliza-
ción de la e n z i m a . L a s e n z i m a s de
microorganismos adaptados a vivir en aguas
termales muestran temperaturas óptimas
cercanas al punto de ebullición del agua. Por
el contrario en condiciones de hipotermia
muchas reacciones enzimáticas están depri-
midas lo que explica la baja demanda de
oxígeno de algunos organismos durante pe-
riodos de hibernación.
pH. Por ser proteínas, las enzimas poseen
un punto isoeléctrico en el que su carga eléc- turalizante sobre las proteínas en general.
trica es cero; el pH del punto isoeléctrico, Esta propiedad es útil en el laboratorio clíni-
sin embargo, no es el pH de máxima activi- co; las muestras de sangre son primero trata-
dad de la enzima (pH óptimo). Los cambios
das con ácidos como el tncloroacético,
de pH afectan profundamente el carácter ió-
nico de los grupos funcionales de la enzima fosfotúngstico y otros para desnaturalizar y
y, por lo tanto, alteran la conformación de la precipitar proteínas, la labilidad de la mayo-
proteína y con ello, el sitio catalítico. Ade- Tabla 4.8
más de los efectos puramente iónicos, los Valores óptimos de pH para algunas
valores altos o bajos de pH (ácidos o alcali-
enzimas
nos) provocan desnaturalización de la enzi-
ma (fig. 4.12).
El pH óptimo de la mayoría de las enzi-
mas se localiza entre los valores de 5 y 9.
Sin embargo, algunas enzimas, por ejemplo,
la pepsina o la arginasa son activas a valores
depH alejados de este óptimo (Tabla 4.8).
El efecto nocivo de las radiaciones, sales
y metales pesados (Ag, Pb, Hg) sobre la ac-
tividad enzimática se debe a la acción desna-
ría de las enzimas a estos agentes desnatura-
lizantes permite determinar si una reacción
es catalizada por una enzima.
4.5.3.2. Inhibidores enzimáticos
Aunque se requiere la molécula completa de
la apoenzima para su actividad catalítica,
existe una zona determinada donde se com-
bina con él sustrato al que se llama sitio acti-
vo o sitio catalítico. Este es un hueco
molecular en la estructura terciaria de la en-
zima con tres puntos de apoyo próximos en-
tre sí (tres aminoácidos) aunque en la
estructura primaria no estén próximos (fig.
4.13).
El peso molecular de la mayoría de los
sustratos es muy pequeño comparado con el
de las enzimas. Por ejemplo, la catalasa (PM
250,000) respecto al peróxido de hidrógeno
(PM 34). Pueden afectarse ciertos aminoáci-
dos de una enzima sin que ello altere su acti-
vidad catalítica siempre y cuando no se
afecten los involucrados en el sitio activo.
Quizá la prueba más evidente de la locali-
zación de sitios activos proviene de estudios
con inhibidores. Un inhibidor enzimático es
cualquier agente químico capaz de dismi-
nuir la velocidad de una reacción sin desna-
turalizar la enzima. Los inhibidores son
compuestos que tienen la capacidad de unir-
se a enzimas de tal forma que impiden la
combinación enzima-sustrato. Existen dife-
rentes tipos de inhibidores enzimáticos:
competitivos, no competitivos e incompeti-
tivos.
Inhibición competitiva. Está dada por una
molécula parecida estructuralmente al sus-
trato (isostérica) que se une al sitio catalítico
pero no se transforma. Esta molécula forma
un complejo reversible con la enzima (El)
que compite continuamente con el sustrato
por el sitio catalítico. La magnitud de la in-
 hibición dependerá de: a) la concentración
de inhibidor, b) la concentración de sustrato
y c) las afinidades relativas (Km) entre inhi-
bidor y sustrato por la enzima. El grado de
inhibición competitiva es proporcional a la
concentración de inhibidor (I); sin embargo,
un aumento en la concentración de sustrato
en presencia de una concentración fija del
inhibidor llega a superar la inhibición.
Un ejemplo muy conocido es la inhibición
competitiva de la succinato deshidrogenasa,
cuyo sustrato natural, el succinato y el inhi-
bidor, malonato, son parecidos (fig. 4.14).
Dado que sustrato e inhibidor compiten
por el mismo sitio de la inzima, la Km mues-
tra un incremento aparente en presencia del
inhibidor. Esto se puede ver en la gráfica de
Michaelis-Menten y en la de Lineweaver-
Burk (fig. 4.15). La Km que se obtiene expe-
rimentalmente es denominada Km aparente:
la Vmax no varía.
Ejemplos de inhibición competitiva es la
que se realiza al administrar ciertos fárma-
cos. Si denominamos metabolitos a los sus-
tratos fisiológicos presentes o producidos en
el metabolismo celular, serán antimetaboli-
tos, aquellos que impiden el aprovecha-
miento y utilización de los metabolitos
naturales debido a su parecido estructural.
Los animales superiores y muchos mi-
croorganismos son incapaces de sintetizar
algunos compuestos necesarios para su su-
pervivencia, por lo que estos adquieren la
categoría de nutrimentos esenciales. Estos
compuestos pueden ser aminoácidos, ácidos
grasos, vitaminas, etc.
Los organismos utilizan ciertos metabo-
litos y enzimas para sintetizar estos com-
puestos esenciales, estas enzimas pueden
inhibirse por medio de antimetabolitos.
La investigación de los antimetabolitos se
inició con la observación de Woods en
1940, quien comprobó que la inhibición del
crecimiento bacteriano por sulfas era contra-
rrestado por ácido paraaminobenzoico (PA-
BA).
Los microorganismos que necesitan PA-
BA para su crecimiento, lo utilizan como
metabolito para sintetizar ácido fólico. Este
crecimiento bacteriano puede inhibirse con
antimetabolitos como las sulfas. Aquellos
organismos que requieren ácido fólico pero
que no lo puedan sintetizar a partir de PA-
BA, no se afectarán por sulfas. La utiliza-
ción eficaz de las sulfas para combatir
infecciones en el hombre depende de este
hecho. Dado que el hombre adquiere fola-
to en forma exógena, las sulfanilamidas no
son dañinas a las dosis que inhiben a las bac-
terias.
Muchos antimetabolitos ejercen su acción
a nivel de coenzimas o grupos prostéticos
como los antifólicos como el metotrexate o
alguna antivitaminas como la oxitiamina o
la oxipiridoxina. Otro ejemplo es la inhibi-
ción de ciertos tumores por 5-fluorouracilo
y la de algunos virus como el herpes labial
por yododesoxiuridina. Toda o gran parte de
la farmacoterapia moderna está basada en
los conceptos de inhibición enzimática.
Inhibición no competitiva. Este tipo de in-
hibición es irreversible aun cuando se au-
mente la concentración de sutrato. Es decir,
no existe relación entre el grado de inhibi-
ción y la concentración de sustrato. La inhi-
bición solo depende de:
a) la concentración del inhibidor y b) la
afinidad del inhibidor por la enzima. En
contraste con la inhibición competitiva, la
formación del complejo enzima-inhibidor
puede o no ocurrir en el sitio activo de la en-
zima. El inhibidor no competitivo puede ser
unamólecula(Ii) que no se une en el sitio ac-
tivo sino cerca de él; puede unirse a uno de
los tres puntos esenciales del sitio activo (I2),
o incluso puede ser un análogo del sustrato
(I3) pero que no puede ser desplazado por al-
tas concentraciones del sustrato; puede ser un
inhibidor (I4) que no intervenga en la forma-
ción de ES, pero que provoque un cambio de
conformación en la enzima de suerte que és-
ta pierda su actividad catalítica (fig. 4.16).
Algunas enzimas tienen grupos sulfhidri-
lo (-SH) esenciales para su actividad; un
agente que reacciona con estos grupos es la
yodoacetamida (I-CH2—CO-NH2):
E-SH+I-O^-CO-NHj -* E-S-CH^-CO-NHj+HI
Enzimas como la peroxidasa y catalasa,
que contienen hierro como grupo prostético,
son inhibidas por compuestos que forman
complejos con el metal como el cianuro o el
H2S. Los iones fluoruro y oxalato inhiben
enzimas que requieren Ca+2 o Mg+2. El dii-
sopropilfluorofosfato (DIPFP) inhibe enzi-
mas con grupos funcionales oxidrilo (Ser-
OH) como la colinesterasa.
En la inhibición no competitiva no se alte-
ra la Km pero sí la Vmax (fig. 4.17).
Inhibición incompetitiva o acompetitiva.
Es una forma de inhibición no competitiva
pero reversible. En ésta, el inhibidor se pue-
de combinar con la enzima (El) o con el
complejo enzima-sustrato ya formado (EIS)
y la reacción puede retrasarse pero no impe-
dirse. Se presenta sobre todo cuando hay
más de un sustrato en la reacción. La modi-
ficación en la gráfica de Lineweaver-Burk
de la inhibición incompetitiva es la que se
observa en la fig. 4.18.
Estrictamente, los productos de la reac-
ción son inhibidores específicos de la reac-
ción enzimática. En otros casos, el sustrato
puede inhibir o activar su propia reacción
(fig. 4.19).
Un ejemplo de inhibición por producto lo
tenemos en la deshidrogenasa láctica (LDH)
de la cual existen dos isoenzimas particula-
res: en el músculo predomina la isoenzima
M4, que no es inhibida por producto; en co-
razón predomina la isoenzima H4 que es in-
hibida por producto (lactato). Esta
particularidad permite que en corazón se in-
 Figura 4.17 Inhibición no competitiva;
hiba la LDH por lactato y el piruvato se deri-
ve al ciclo de Krebs, productor de energía.
Esta es una ventaja fisiológica que garantiza
que el corazón tenga un aporte constante de
energía para la contracción (ver unidad de
Bioenergética).
Existen algunas aplicaciones prácticas,
desde el punto de vista clínico, de la inhibi-
ción enzimática. El suero contiene enzimas
como las fosfatasas acidas producidas por di-
ferentes tejidos, hay una producida por la
próstata, que se eleva en el carcinoma prosté-
tico. El ácido L-tartático inhibe competitiva-
mente la actividad de la enzima prostática,
pero tiene poco efecto sobre las fosfatasas
acidas de eritrocitos, hígado, riñon y bazo.
El formaldehído al contrario, inhibe la de
eritrocitos, pero no a la enzima prostática.
Los iones calcio inhiben no competitiva-
mente muchas fosfatasas acidas, de aquí la
necesidad de agregar quelantes a muestras
de sangre destinadas a este ensayo. El etanol
y ciertos narcóticos son también inhibidores
laelis-Menten (a) y Lineweaver-Burk (b).
no competitivos de la fosfatasa acida, lo cual
debe tomarse en cuenta al interpretar los re-
sultados.
4.6 REGULACIÓN ENZIMÁTICA
En el tubo de ensayo, las enzimas funcionan
en un sistema cerrado y se acumula el pro-
ducto de la reacción. Sin embargo, en la cé-
lula, los productos de la reacción no se
acumulan ya que son utilizados como sus-
tratos de otra enzima, y los productos de ésta
son sustratos de otra enzima y así sucesiva-
mente hasta llegar al llamado producto final.
La secuencia de reacciones entre un sustrato
inicial y su producto final se denomina vía
metabólica, la cual puede presentar ramifi-
caciones que constituirán otras vías metabó-
licas.
Aunque todas las reacciones catalizadas
por enzimas son reversibles en el tubo de
ensayo, en la célula, la característica secuen-
cial de las vías metabólicas hace que el flujo
del metabolismo celular sea irreversible y
permanentemente dinámico. El carácter di-
námico de los organismos vivos establece
que el verdadero equilibrio metabólico se al-
canza sólo con la muerte de la célula. La cé-
lula viva es un sistema abierto, en equilibrio
dinámico (estado estacionario), mantenido
por un flujo unidireccional de metabolitos.
El estado estacionario equivale al concepto
de homeostasis, propuesto por Claudio Ber-
nard a finales del siglo XIX, que indica que
los organismos mantienen su medio interno-
constante a pesar de las amplias variaciones
en alimentación, actividad física, temperatu-
ra externa, etc. (fig. 4.20).
En un sistema tan complejo como la célula
debe haber mecanismos de regulación o con-
trol de la multitud de reacciones simultáneas
que ocurren, reacciones que son, en su mayo-
ría, catalizadas por enzimas. En todas las áreas
de las ciencias biomédicas se encuentran
ejemplos de regulación normal o anormal:
muchas células cancerosas exhiben anorma-
lidades en la regulación de sus enzimas.
El conocimiento de los factores que regu-
lan la acción de las enzimas es, por tanto,
esencial para entender el mecanismo de ho-
meostasis celular y para comprender a nivel
molecular las enfermedades.
La regulación metabólica de una vía tiene
lugar mediante la modulación de la activi-
dad enzimática de una o más enzimas clave
de la ruta, llamada enzima limitante de la
vía, que generalmente corresponde a la pri-
mera enzima. Uno de los primeros ejemplos
de regulación fue la síntesis de CTP (citidi-
na trifosfato) a partir de aspartato y carba-
milfosfato (fig. 4.21).
La primera enzima del proceso de síntesis
de CTP, la aspartato transcarbamilasa (a), se
inhibe específicamente con CTP y UTP,
productos finales del proceso. Se considera
que la acción de CTP y UTP ocurre en un si-
tio regulador distinto del sitio catalítico por-
que: 1) CTP o UTP y aspartato difieren
mucho en estructura, tamaño y distribución
de cargas; 2) la inhibición por CTP o UTP
puede abolirse sin pérdida de actividad cata-
lítica; 3) el ATP, que no afecta la velocidad
enzimática, puede impedir la inhibición por
CTP o UTP, quizá por competencia con el
sitio regulador y 4) pueden fraccionarse dos
subunidades una que une aspartato y otra
que une CTP o UTP.
Pardee, Jacob, Monod y Changeaux, estu-
diaron este tipo de inhibición y la llamaron
inhibición alostérica (allos=otro) en virtud
de que el sitio regulador es distinto del sitio
activo (isostérico, de isos=igual).
Conviene distinguir este tipo de inhibi-
ción con la inhibición por producto, la cual
sigue la ley de acción de masas. Las reaccio-
nes enzimáticas, como cualesquiera otra,
obedecen esta ley. Si a la reacción:
Glucosa -6-P + H 2 0 -» Pi + glucosa
se le agrega inicialmente glucosa libre o fos-
fato, disminuye su velocidad; esto como ya
se mencionó se considera inhibición compe-
titiva o isotérica. A la inhibición alostérica
se le llama también inhibición por producto
final, por retroalimentación o regulación re-
troactiva ("feedback").
4.6.1. Regulación alostérica
La actividad catalítica de algunas enzimas
reguladoras es afectada por ciertas molécu-
las que producen un cambio en la actividad
enzimática, pero que no se modifican por la
acción enzimática. Estas moléculas se deno-
minan efectores, modificadores o modula-
dores; por lo general, estos tienen poca o
ninguna semejanza estructural con el sustra-
to. Monod, en 1963 observó esta falta de re-
lación estructural inhibidor-sustrato y
propuso denominar a este tipo de moléculas,
efectores alostéricos. Un efector alostérico
cambia la conformación de la enzima, de
manera que cambia la afinidad hacia el sus- inverso. El sitio alostérico donde se une el
trato. Los efectores alostéricos positivos (+) efector positivo se conoce como centro acti-
incrementan la afinidad enzima-sustrato y vador. El efector negativo se une a un centro
los efectores alostéricos negativos (-) hacen lo inhibidor. Una enzima alostérica, es una en-
talizada por una determinada enzima, deno-
minado metabolito, se convierte en el sustra-
to de la subsiguiente reacción
B y entrar al estado de transición. La diferen-
metabolito
4.1.3. Funciones generales
4.13.1. Catálisis enzimática
Se ha señalado que una enzima incrementa
la velocidad de la reacción química pero sin
modificar la constante de equilibrio ni el
sentido de la reacción, es decir, sin variar las
propiedades termodinámicas del sistema.
En un sistema catalizado por una enzima,
un sustrato (A) con determinado nivel ener-
gético, conocido como estado inicial, tiene
que alcanzar un nivel energético superior o
estado de transición antes de convertirse en
un producto (B) con un nivel energético co-
Figura. 4.1. Energía de activación de una reacción no catalizada (I) y una reacción catalizada (II).
rrespondiente al estado final. Para que la re-
acción tenga lugar, las moléculas reaccio-
nantes deben alcanzar un nivel de energía
suficiente para vencer la barrera energética
cia entre la energía libre de los reactantes y
el estado de transición se denomina energía
de activación. La función de un catalizador
(inorgánico o enzima) consiste en disminuir
la energía de activación, lo que conduce a
acelerar la reacción debido a que los reac-
tantes pueden alcanzar más fácilmente el es-
tado de transición (fig. 4.1).
4.1.4. Catalizadores inorgánicos y
biológicos
Los catalizadores inorgánicos son general-
mente átomos en estado iónico o metales
con propiedades similares a las atribuidas a
un catalizador biológico pero, a diferencia
de los catalizadores biológicos, no poseen la
REACCIÓN
zima cuya actividad en el sitio catalítico puede
ser modulada por la presencia de efectores
en los sitios alostéricos (fig. 4.22).
En el ejemplo de la aspartato transcarba-
milasa, el sitio catalítico radica en subunida-
des diferentes, a las del sitio alostérico; esta
enzima posee dos protómeros catalíticos y
tres o cuatro reguladores. Aunque una enzi-
ma monomérica puede, teóricamente, expe-
rimentar efecto alostérico, en la práctica
sólo se han encontrado dos enzimas alostéri-
cas monoméricas: ribonucleósido difosfato
reductasa y piruvato -UDP-n-acetil-gluco-
saminatransferasa. La mayoría de las enzi-
mas alostéricas son oligoméricas.
La cinética de interacción entre sustrato,
enzima e inhibidor alostérico sigue una cur-
va sigmoidea. Los efectos alostéricos nega-
tivos desplazan la curva hacia la derecha,
indicando aumento de la Km con pérdida de
afinidad enzima-sustrato. En presencia de un
efector positivo se alcanza la 1/2 Vmax a una
concentración menor de sustrato y se des-
plaza la gráfica de Michaelis-Menten hacia
la izquierda (fig. 4.23).
Figura 4.22 Representación esquemática de la regulación alostérica, S = sustrato; i = inhibidor; a = activador,
Las enzimas alostéricas permiten el control
fino de la actividad metabólica mediante pe-
queñas fluctuaciones en el nivel de sustratos.
Es frecuente la confusión entre los térmi-
nos de alosterismo y coopera ti vidad. La
cooperatividad se define como la influencia
que tiene la fijación de un ligando a un pro-
tómero sobre la fijación del ligando a un se-
gundo protómero de una proteína
oligomérica. Anteriormente se ha discutido,
en el capítulo de proteínas de transporte, la
cooperatividad en la fijación de oxígeno a la
hemoglobina. En la hemoglobina el centro
de fijación del oxígeno de cada subunidad
corresponde al centro del sustrato y no a un
sitio alostérico; por lo tanto, el cambio con-
formacional que induce el oxígeno sobre los
protómeros de hemoglobina, técnicamente
no es un efecto alostérico.
Las enzimas alostéricas se dividen en dos
clases según la influencia del efector alosté-
rico sobre la Km y la Vmax. En la clase K, el
efector afecta la Km pero no la Vmax. Para
las enzimas de la clase V, el efector alostéri-
co abate la Vmax sin afectar la Km aparente.
 No obstante que las enzimas K dan gráficas
parecidas a la inhibición competitiva, no es
adecuado utilizar los términos competitivos
y no competitivos con sistemas enzimáticos
absteneos porque el mecanismo del efector
de un inhibidor alostérico sobre una enzima
V o K es diferente al de un mecanismo com-
petivo o no competitivo sencillo. Puesto que
los inhibidores alostéricos actúan en un sitio
diferente (alostérico) el modelo cinético ya
no es válido.
El hecho de que los centros inhibidores y
activadores alostéricos están separados en-
tre sí como del centro catalítico, se ilustra en
el estudio de un paciente con gota cuyos eri-
trocitos tenían altos niveles de fosforribosil-
pirofosfato (PRPP). En este paciente, se
encontró que la PRPP sintetasa tenía una
Km y Vmax normales. Sin embargo, mostraba
menor sensibilidad a los inhibidores alosté-
ricos normales AMP, ADP, GDP y 2, 3-
DPG. Los productos finales endógenos de la
ruta (ATP, GTP) no eran capaces de inhibir
alostéricamente a la enzima y se acumula-
ban el PRPP y el ácido úrico. Aparentemen-
te una mutación había producido un cambio
en el centro inhibidor (I). En la fig. 4.24 que
ilustra el caso, se muestran los diferentes si-
tios de unión para sustrato (S) activadores
(A), e inhibidores (I).
4.6.2. Represión e inducción
El mecanismo de control alostérico de la
actividad enzimática es también aplicable a
sistemas de regulación a nivel génico. Se ha
mencionado al inicio de la unidad III que la
expresión de la función genética se realiza a
través de las enzimas (un gene - una enzi-
ma). Los estudios iniciales sobre la regula-
ción de la síntesis de proteínas enzimáticas
permitieron reconocer tres tipos de enzimas:
constitutivas, inducibles, y reprimibles.
4.6.2.1. Enzimas constitutivas y enzimas
inducibles
Las enzimas constitutivas están presentes en
concentraciones constantes durante la vida
de la célula, probablemente debido a una re-
 Figura 4.24 Inhibición alostérica o por retroalimentación.
lación constante entre síntesis y degradación
de la enzima, generalmente son las enzimas de
las principales vías metabóücas como las de la
vía glucolítica.
Las enzimas inducibles, son aquéllas cuya
concentración en la célula normalmente es
baja y a medida que se requiere mayor canti-
dad de enzima, la velocidad de síntesis au-
menta con respecto a su degradación. Es
decir, la inducción implica síntesis de novo
lo cual se ha demostrado puesto que siste-
mas donde la síntesis de proteínas está blo-
queada, no responden al estímulo inductor.
Él ejemplo de inducción de síntesis enzimá-
tica, más estudiado, es el sistema de la P-ga-
lactosidasa de E. coli.
Usualmente E. coli crece en un medio
simple, que contiene glucosa y sales, y pue-
de fabricar todos sus constituyentes esenciales
a partir de este medio. En estas condiciones,
el cultivo sólo contiene trazas de P-galacto-
sidasa. Cuando estos microorganismos se
transfieren a un medio con lactosa, como úni-
ca fuente de carbono, en breve empiezan a
aparecer cantidades apreciables de galactó-
sido permeasa, (3-galactosidasa y tiogalactó-
sidotransacetilasa (fig. 4.25). Si se quita la
lactosa del medio y se vuelve a dar glucosa,
se suspende la síntesis de dichas enzimas.
Con este tipo de control la célula no in-
vierte energía en sintetizar enzimas para ac-
tuar sobre un sustrato no presente. El
fenómeno se denomina inducción enzimáti-
ca coordinada.
El tercer tipo de enzimas es el de las re-
primibles. La síntesis de estas enzimas se
suspende si está presente en abundancia el
producto final de la vía metabólica donde
funcionan. Uno de los sistemas mejor estudia-
dos es el que conduce a la síntesis de histidi-
na en Salmonella. El aminoácido histidina
se forma por una secuencia de 10 reacciones
a partir de PRPP. Cuando se agrega histidina
al medio se reprimen los 15 genes que codi-
fican para 9 enzimas. El fenómeno se deno-
mina represión enzimática coordinada.

Debe subrayarse que la inducción y repre-
sión son mecanismos de control sobre sínte-
sis de enzima y no sobre actividad de la
enzima; por lo tanto, es distinto de la inhibi-
ción por producto final (retroacción o feed-
back). En general, la retroinhibición es un
mecanismo de control ejercido a corto pla-
zo, con un efecto inmediato sobre la ruta
metabólica, mientras que la represión nece-
sita más tiempo pero con efectos permanen-
tes al reducir el número de moléculas de
enzima.
4.6.3. Teoría del operan
En 1961, F. Jacob y J. Monod propusieron
un modelo ingenioso para explicar la induc-
ción y represión de la síntesis enzimática.
Por este trabajo y otras contribuciones reci-
bieron el premio Nobel de medicina 1965.
De acuerdo a su teoría, la regulación de
las enzimas involucradas en la inducción y
represión tiene lugar a nivel de la transcrip-
ción. Los genes que transcriben un RNA
mensajero (RNAm) policistrónico, que a su
vez codifica para las enzimas coordinada-
mente inducidas o reprimidas se denominan
genes estructurales. Por "mapeo" genético
del cromosoma involucrado se ha demostra-
do que estos genes estructurales se localizan
adyacentes, uno con otro, en el cromosoma
involucrado. El modelo presupone que la
transcripción de genes estructurales está
controlada por un gene operador y un sitio
promotor (donde se une la enzima RNA po-
limerasa), formando una unidad funcional
llamada operan. Otro gene, llamado regula-
dor que codifica para una proteína represora
del gene operador, se puede localizar en un
sitio distante del gene operador (fig. 4.26).
Para mayor comprensión de estos aspectos
se recomienda revisar los conceptos genéti-
cos de la unidad IX.
El operón Lac. de E. Coli, es uno de los
más estudiados, consta de 3 enzimas induci-
bles controladas por 3 genes estructurales
(Z, Y y A). El amino terminal de la p-galac-
tosidasa se sitúa del lado del operador. Así,
la síntesis de RNAm transcurre desde el
operador a través del operón completo. Este
fenómeno de polaridad se ha encontrado pa-
ra el operón del triptófano (operón Tri) y
otros. La proteína represora que actúa sobre
el operador y que impide la acción de la
RNA polimerasa y por tanto, la formación
del RNAm de todo el operón Lac es un tetrá-
mero de casi 150,000 daltones que se sinteti-
za continuamente. Cuando se dan inductores
como la lactosa o análogos se deforma el re-
presor, y el operón Lac se transcribe y traduce.
El control del operón Lac tiene otro ele-
mento efector positivo, el AMP cíclico
(AMPc). Células con glucosa disponible tie-
nen bajos niveles de AMPc. Al inducir con
lactosa, el AMPc se une a una proteína cata-
bólica activadora del gene (CAP, un dímero
con PM de 45,000 daltones, y este complejo
se une al sitio promotor en el DNA de tal
manera que la RNA polimerasa puede ini-
ciar la síntesis de RNAm. Así, la expresión
del operón Lac requiere del inductor (lacto-
sa) y de AMPc.
 Figura 4.26 Inducción enzimática en el operón LAC de E, coli. L = lactosa; CAP = proteína catabólica
activadora del gene operador.

En sistemas reprimibles, el gene regula- El operón His. de Salmonella typhimu-

dor elabora una proteína represora que regu-
larmente no interactúa con el operador.
Cuando se da el correpresor (por ejemplo,
histidina), se combina éste con la proteína y se
forma una sustancia efectivamente represo-
ra que bloquea al gene operador (fíg. 4.27).
Esto representa también un ahorro de ener-
gía para la célula ya que si existe histidina,
no tiene objeto la producción de enzimas pa-
ra su síntesis.
rium coordina la expresión de genes estruc-
turales (G, D; C, B, H, A, F, I, E.) que
codifican para 9 enzimas, que actuando
coordinadamente, participan en la biosínte-
sis de histidina. La histidina es también un
inhibidor alostérico de la primera enzima de
la secuencia biosintética.
Aunque los genes y mecanismos regula-
dores mencionados sólo han sido demostra-
dos en procariotes, se supone que también se
presentan en organismos eucariotes. Sin em-
bargo, hay que ser prudentes en extrapolar
los conocimientos adquiridos de una a la
otra clase de células (eucariotes). En esta úl-
tima, los mecanismos de regulación son más
complejos y tienen separados físicamente la
transcripción de los genes de la traducción.
Además, los RNAm eucarióticos son mono-
cistrónicos en contraposición a los RNAm
policistrónicos de las células procariotas.
Aspectos Clínicos de las Enzimas
La aplicación clínica de las enzimas anterior-
mente se restringía a su empleo como auxi-
liares en el diagnóstico; posteriormente se
vislumbró la posibilidad de emplearlas en el
tratamiento de algunas enfermedades, cam-
po que está en exploración muy activa. Las
enzimas se utilizan también como reactivos
clínicos para detectar otro tipo de moléculas
cuyas concentraciones son bajísimas en el
plasma o tejidos.
4.7.1. Como reactivos en el laboratorio
clínico
La disponibilidad de enzimas puras a pre-
cios razonables ha convertido a algunas de
ellas en reactivos de enorme valor para el la-
boratorio de análisis. Puede determinarse
enzimáticamente la concentración de un
compuesto en una mezcla cuando se dispone
de una enzima específica capaz de transfor-
marlo rápidamente en un producto.
Muchas determinaciones enzimáticas
pueden acoplarse con reacciones que utili-
zan NAD+ o NADP+ como coenzimas, en
virtud de que NADH y NADPH absorben a
340nm mientras que NAD+ y NADP+ no ab-
sorben a esa longitud. Cuando el NAD+ se
reduce, se incrementa proporcionalmente la
densidad óptica; cuando el NADH se oxida,
disminuye la densidad óptica (fig. 4.28).
Con este ensayo se puede determinar
urea, al acoplar la acción de la enzima urea-
sa con la glutamato deshidrogenasa (GDH).
La glucosa se determina oxidándola a glu-
conato en presencia de la enzima glucosa
oxidasa, con H2O2 como subproducto. Aco-
plando la reacción con peroxidasa, el H2O2
oxida la O-dianisina a un compuesto colori-
do (principio de la glucocinta).
Para determinar alcohol etílico, se con-
vierte éste en acetaldehído por medio de la
enzima deshidrogenasa alcohólica (ADH):
el aumento en absorbancia a 340 nm es pro-
porcional a la concentración de alcohol.
Aprovechando la especificidad enzimáti-
ca e inmunológica por un sustrato, se ha
ideado un método altamente específico lla-
mado enzimoinmunoensayo (EIA). El fun-
damento de este método es similar al
radioinmunoensayo (RÍA), basado en el
principio de la unión competitiva, y en la se-
lectividad y sensibilidad de la respuesta an-
tígeno-anticuerpo. En los últimos años
existen disponibles comercialmente las eri-
zarías inmovilizadas para usarse en sistemas
de determinación automatizados.
4.7.2. Como elementos diagnósticos
Una importante función de un laboratorio
clínico, es la de cuantificar las alteraciones
bioquímicas en el individuo enfermo, como
la determinación de enzimas en líquidos ex-
tracelulares (plasma y suero, orina, jugo
gástrico, líquido cefalorraquídeo, líquido
amniótico, líquido sinovial), y en algunos
tejidos o células sanguíneas.
4.7.2.1. Enzimas órgano específicas
En condiciones normales, las enzimas invo-
lucradas en los procesos metabólicos (glu-
cólisis, fosforilación, transaminación,
oxidación, etc.) se sintetizan en las células y
la mayoría ejerce su función en su interior.
Si las células permanecen intactas, las enzi-
mas intracelulares no pasan al torrente san-
guíneo, sin embargo, como resultado de una
lesión celular producida por agentes infec-
ciosos, toxinas bacterianas, o incluso por el
proceso de envejecimiento celular normal,
se producen daños en las membranas celula-
res que permiten el "escape" de enzimas a la
circulación. Este escape de enzimas de las
células al plasma se produce también cuan-
do mueren éstas como ocurre en el infarto
de miocardio y la hepatitis infecciosa. En
personas normales sanas, las enzimas de ori-
gen intracelular están presentes en plasma
en cantidades muy bajas pero mensurables.
En el diagnóstico de la alteración de un
órgano específico en un proceso patológico
sería ideal que se pudiesen identificar enzi-
mas específicas para cada órgano; no obs-
tante, esto es poco probable ya que el
metabolismo de muchos órganos es muy pa-
recido. Esta correlación ocurre sólo para al-
gunas enzimas, por ejemplo la alcohol
deshidrogenasa o la sorbitol deshidrogena-
sa que son casi exclusivamente de origen
hepático, la acetilcolinesterasa de eritroci-
tos, la fosfatasa acida de próstata, y la fosfa-
tasa alcalina de osteoblastos. Una de las
aspiraciones del diagnóstico clínico es pre-
cisamente lograr la asociación de una enzi-
ma específica en plasma o sangre con cada
tejido o situación patológica. Un grado ma-
yor de conocimiento de esta relación se está
consiguiendo con el estudio de determina-
das isoenzimas.
4.7.2.2. Isoenzimas
El interés médico por las isoenzimas fue es-
timulado por el conocimiento de que los
sueros humanos contenían varias isoenzi-
mas de la deshidrogenasa láctica y que sus
proporciones relativas cambian significati-
vamente en ciertos estados patológicos.
Las isoenzimas que han sido estudiadas
para aplicaciones diagnósticas son la deshi-
drogenasa láctica, la creatinfosfocinasa y la
fosfatasa alcalina (revisar subcapítulo
4.2.4).
4.7.2.3. Perfiles enzimáticos
El plasma circulante contiene cantidades
apreciables de enzimas que tienen su origen
en las células de diferentes tejidos del orga-
nismo; éstas pueden dividirse en tres gru-
pos:
1) Enzimas que realizan una función es-
pecífica en el plasma llamadas también enzi-
mas plasmáticas funcionales. Se encuentran
en alta concentración y están involucradas en
funciones como la coagulación de la sangre
(trombina y otras), disolución de la fibrina
(plasmina) y modificación de quilomicrones
(lipoproteinlipasa).
2) Enzimas elaboradas por células espe-
ciales y secretadas a un conducto o dentro de
un tejido especial, por ejemplo amilasa, li-
pasa, fosfatasa acida y fosfatasa alcalina.
 3) Enzimas que realizan su función en las
células que las originan y cuyas actividades
constituyen el proceso vital celular.
El segundo y tercer grupo de enzimas se de-
nominan también enzimas plasmáticas nojun-
donales y su presencia en plasma en cifras
mayores que las normales sugiere una veloci-
dad aumentada de destrucción celular. Su cuan-
tificación constituye para el médico una prueba
valiosa de diagnóstico y pronóstico clínico.
4.7.3. Alteraciones enzimáticas como
causa de enfermedad
Muchas enzimas se encuentran en casi todas
las células aunque algunas se encuentran
predominantemente en ciertos tejidos. Aun
cuando la enzima sea específica de un tejido
particular, niveles elevados de ésta en plas-
ma solo indican daño celular pero no el tipo
de proceso patológico. Por ejemplo, después
de cirugía mayor o de un trauma extenso, se
elevan los niveles de LDH-5, TGO y CPK a
partir del músculo esquelético dañado, si se
presenta insuficiencia circulatoria debida a
insuficiencia cardiaca o choque, y especial-
mente después de paro cardiaco, se elevan
notablemente algunas enzimas pero su valo-
ración no permite establecer la causa de la
insuficiencia o del paro.
Puede localizarse el tejido dañado para
confirmar un diagnóstico de dos formas:
a) Por determinación del perfil isoenzi-
mático, ejemplo: las isoenzimas de la LDH
(fig.4.29).
b) Por valoración de más de una enzima,
ejemplo: hígado y corazón contienen altos
niveles de aminotransferasas, antes llama-
das transaminasa glutámico pirúvica (TGP)
y glutámico oxalacética (TGO) pero el híga-
do contiene más TGP que TGO mientras que
en el corazón sucede al revés. En otro ejem-
plo se utiliza la valoración de isoenzimas de
la LDH y CPK para determinar la evolución
de un infarto de miocardio (fig. 4.30).
Existen causas de elevación no específica
de niveles enzimáticos que pueden ser; a)
fisiológicas, como en el recién nacido; los
niveles de TGO están elevados moderada-
mente en el periodo neonatal. Los niveles de
fosfatasa alcalina son altos hasta después de
la pubertad por la actividad osteoblástica.
En el último trimestre del embarazo están
elevados los niveles de fosfatas alcalina de
origen placentario. b) inducidas por drogas.
Ciertas drogas como difenilhidantoína y
barbitúricos pueden inducir la producción
de enzimas, como la fosfata alcalina. Los
niveles de gama-glutamiltransferasa se corre-
lacionan con ingestión de alcohol, c) eleva-
ciones artificiales. En general las muestras
hemolizadas son inadecuadas para valora-
ciones enzimáticas. Aun cuando los eritroci-
tos lisados no contengan la enzima por
valorar, contienen otras que interfieren y
producen falsas positivas.
Creatinfosfocinasa (CPK). Esta enzima
se encuentra distribuida en músculo cardia-
co, esquelético y cerebro. La enzima catali-
za la siguiente reacción:
CPK
CREATINFOSFATO + ADP -* CREATINA + ATP
Esta se acopla a otras dos, para determinar
cuantitativamente el NADPH:
ATP + GLUCOSA -+ GLUCOSA-6-P + ADP
GLUCOSA -6-P+ NADP+ -» 6-p-glucorolactona +
NADPH+H+
La enzima CPK, es un dímero que consta de
3 isoenzimas: CPK-1 (BB) de cerebro;
CPK-2 (MB) y CPK-3 (MM) de músculo.
Se eleva marcadamente en infarto de mio-
cardio, en la misma proporción que la TGO
y en distrofias musculares sobre todo la de
tipo Duchenne; moderadamente en lesiones
musculares, cirugía, ejercicio físico intenso,
accidentes cerebrovasculares, hipotiroidis-
 Figura 4.29 Patrones normal y patológico de las isoenzimas de la LDH en suero humano. A: paciente con
infarto de miocardio; B: suero normaj; C: paciente con enfermedad hepática.

mo (la tiroxina afecta el catabolismo de la

enzima) alcoholismo (miositis alcohólica)
episodios psicóticos agudos, y artificialmen-
te en muestras hemolizadas.
a-amilasa (AMS). La enzima está presen-
te en jugo pancreático, saliva, trompas de
Falopio y músculo. Se excreta por orina en
virtud de su bajo peso molecular. Los nive-
les urinarios se elevan paralelamente a los
niveles plasmáticos, a menos que exista in-
suficiencia renal. El ensayo se realiza por
acción de suero, plasma u orina sobre amilo-
pectina marcada con un colorante azul. La
intensidad del color azul liberado es propor- Fig. 4.30. Patrón isoenzimático de CPK y LDH
cional a la cantidad de enzima. después de un infarto de miocardio.
La amilasa se eleva notablemente (5 a 10 La isoenzima CPK2 (MB) aumenta hasta un máximo
veces) en casos de pancreatitis aguda (en dentro del primer día del infarto, CPK3, sigue más
lenta alrededor de un día, a la CPK2. El nivel total de
ocasiones en carcinoma de páncreas), ure- LDH aumenta muy lentamente. El incremento de
mia grave y cetoacidosis diabética severa; LDH 1 y LDH 2, dentro de las 12-24 h junto con un
moderadamente en casos de úlcera péptica incremento de CPK2; es diagnóstico del infarto de
perforada, colecistitis, obstrucción intesti- miocardio.
alta especificidad de éstos ni la capacidad 4.2.2.1. Cofactores coenzimáticos
para disminuir la energía de activación (ta-
bla 4.1). Una enzima puede acelerar una re- La mayoría de las coenzimas son formas
acción 105 veces más que un catalizador modificadas de las vitaminas (ver unidad de
inorgánico. nutrición). Entre las reacciones catalizadas

4.2. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS por enzimas que requieren coenzimas están
las de oxidorreducción, las de transferencia
4.2.1. Holoenzima y apoenzima de grupo, las de isomerización y las que for-
man enlaces covalentes. Las reacciones hi-
La parte proteica de la enzima desprovista drolíticas no requieren de coenzimas.
de los cofactores se denomina apoenzima. La coenzima puede considerarse como un
No todas las enzimas requieren cofactores cosustrato, por ejemplo, en las reacciones de
para ser activas, pero en las que los requie- oxidorreducción, una molécula de sustrato es
ren, la apoenzima es catalíticamente inacti- oxidada (deshidrogenada) y una molécula de
va. La adición del cofactor a la apoenzima coenzima es reducida (hidrogenada) (fig. 4.2).
da lugar a la holoenzima, o sea la enzima De modo similar, en las reacciones de
completa y activa. transaminación, el fosfato de piridoxal
(PPal) actúa como segundo sustrato en dos
reacciones combinadas (fig. 4.3).
4.2.2. Cofactores Relación entre vitaminas y coenzimas.
Las vitaminas del complejo B forman par-
Otros componentes de la enzima con bajo te de numerosas coenzimas. Tal es el caso
peso molecular, termostables y no proteicos, de la nicotinamida, riboflavina, tiamina, áci-
unidos a la apoenzima se llaman coenzimas, do pantoténico, ácido fólico y cianocobala-
si la unión es débil y se separa con facilidad mina. Coenzimas de oxidorreducción,
de la apoenzima, o grupos prostéticos, si es- derivadas de la vitamina nicotinamida son el
tán firmemente ligados a la apoenzima. Los nicotkiamida-adenina-dinucleótido (NAD+),
cofactores (coenzima o grupos prostéticos) y el nicotinamida-adenina-dinucleótido-fos-
son en general moléculas pequeñas, orgáni- fato (NADP+). (fig. 4.4). La vitamina C y las
cas e inorgánicas, que requiere la enzima pa- vitaminas liposolubles no tienen actividad
ra su actividad. coenzimática conocida.
nal, embarazo ectópico roto, parotiditis, cálcu-
los salivales, administración de morfina (es-
pasmo del esfínter de Oddi) y macro-amila-
semia.
Fosfatasa alcalina (ALP). Incluye isoen-
zimas que hidrolizan fosfatos a pH alcalino.
Se encuentran en hueso, hígado, pared intes-
tinal, glándula mamaria lactante y placenta.
En huesos se localiza en los osteoblastos
(la enzima es necesaria para los depósitos de
fosfato en hueso). Los niveles normales en
el adulto provienen específicamente de hí-
gado, en niños de la fracción ósea por la ac-
tividad osteoblástica. En el embarazo se
elevan los niveles normales debido a la
isoenzima termoestable de la placenta.
El método usado en la valoración es el de
Bassey Lowry-Brock que utiliza la siguiente
reacción.
pH 8.5-10
p-NITROFENOLFOSFATO — • p-NTTROFENOL + Pi
La enzima se eleva en enfermedades he-
páticas con elementos colestáticos junto con
la enzima 5'-nucleotidasa (NTP) que parece
tener también origen hepático. Se eleva tam-
bién en enfermedades óseas con actividad
osteoblástica elevada: osteomalacia y raqui-
tismo, hiperparatiroidismo, enfermedad de
Paget, osteocarcinoma y osteosarcoma; en el
raquitismo, la fosfatasa se eleva aun antes de
que aparezcan síntomas de la enfermedad.
Fosfatasa acida (ACP). Se encuentra en
próstata, hígado, eritrocitos, plaquetas y hue-
so. El método de determinación es similar al
de las fosfatasas alcalinas excepto el pH ópti-
mo que es de 5. El principal uso de la valora-
ción es el diagnóstico de carcinoma prostático
metastásico. Aunque es difícil detectar sólo la
fracción prostática, esta fracción tiene la pro-
piedad de ser inhibida por el L-tartrato. Nor-
malmente, la fosfatasa acida de la secreción
prostática drena a los conductos prostáticos y
aparece poco en sangre. En el carcinoma
prostático, particularmente si es metastási-
co, se elevan los niveles de ACP debido al
aumento de células prostáticas ectópicas.
4.7.4. Como agentes terapéuticos
Algunas enzimas se han utilizado como me-
dicamentos en la terapia de problemas médi-
cos específicos.
La estreptocinasa, preparada a partir de
estreptococos, es útil para disolver coágulos
de sangre formados en las extremidades infe-
riores. Esta enzima activa el plasminógeno
el cual se transforma en plasmina que es una
proteasa que ataca la fibrina y la degrada.
Utilizando fibrinolisina y estreptodornasa
(una DNAsa) por vía oral o tópico se puede
eliminar el material fibrinoso y purulento de
heridas infectadas o necrosadas. Varias en-
zimas proteolíticas como tripsina y quimo-
tripsina al igual que la estreptocinasa, se
utilizan en el tratamiento de la trombosis.
Algunas enzimas digestivas (peptidasas,
lipasas, amilasa, nucleasa y celulasas), se
usan en la deficiencia enzimática por pan-
creatitis crónica, pancreatectomía y trastor-
nos gastrointestinales.
La terapia con asparaginasa se usa en al-
gunos tipos de leucemia adulta. En virtud de
que las células tumorales tienen un requeri-
miento nutricional de asparagina, con aspa-
raginasa los n i v e l e s de asparagina
disminuyen sensiblemente lo que lleva a
disminuir la viabilidad del tumor.
En el capítulo de ácidos nucleicos se estu-
diarán algunas enfermedades en las que está
alterada la codificación de algunas enzimas;
su deficiencia o falta de actividad, es la cau-
sa de la enfermedad. En el futuro será posi-
ble el reemplazo enzimático por ingeniería
genética en individuos con deficiencia gené-
tica que afecte la síntesis de una enzima da-
da.
 C H0 L - C H - COO" C H3, - C - C O O ~
I II
OH O
Lactato Piruvato
( Sustrato reducido ( Sustrato oxidado )

+
NAD NADH + H

coenzima oxidada ( coenzima reducida )

Fig. 4.2. El NAD (nicotín-adenín-dinucleótido) actuando como cosustrato en una reacción de

oxidorreducción

COO"
I COOH
O H - N H 92
I C H - N H 92
CH? I
I
C H 9¿
I Alanina
COOH
Glutamato
COOH
COO" I
i
c=o C=0
I
CH«2 CH3
I
CH«¿
I Piruvato
COOH
oe-Cetaglutarato
Fig. 4.3. Transferencia de grupos ámino con PPal
(fosfato de piridoxal) como cosustrato.
 Clasificación de coenzimas
Las coenzimas pueden clasificarse como sigue:
Para la transferencia de grupos
distintos del H:
Uridina difosfato (UDP)
Pirofosfato de Tiamina (TPP)
Fosfato de Piridoxal (PPal)
Coenzima A (CoA-SH)
Acido tetrahidrofólico (TH4)
Biotina
Coenzimas de cobamida (B12)
Acido Lipoico
S-Adenosil metionina (S AM)
Algunos autores clasifican estructuralmente
a las coenzimas como: coenzimas nucleotí-
dicas y no nucleotídicas. Al primer grupo
pertenecen los nucleósidos di y trifosfato
que participan en reacciones de transferen-
cia como AMPC, AMP, ADP, ATP, S-ade-
nosil metionina, NALV, NADP+, FAD y
coenzima A. El resto serían las coenzimas
no nucleotídicas.
Otra sería la clasificación funcional que
las agrupa en coenzimas vitamínicas y no
vitamínicas.
Para la transferencia de H:
NAD + ,NADP +
FAD,FMN
Acido Lipoico
Coenzima Q
4.2.2.2. Grupos prostéticos
Funcionan también como cofactores o co-
sustratos enzimáticos pero, a diferencia de
las coenzimas, se encuentran firmemente
unidos a la apoenzima, ejemplos clásicos de
grupos prostéticos son el FAD (flavinade-
nin-dinucleótido) y el grupo hemo. En los
citocromos, el grupo prostético hemo está
unido fuertemente y requiere ácidos fuertes
para disociarse del citocromo.
42.23. Complementos
Algunos cofactores enzimáticos no pertene-
cen a coenzimas o grupos prostéticos deri-
vados de vitaminas sino que representan
elementos minerales por ejemplo, la lisina-
oxidasa es una enzima que necesita cobre y
la anhidrasa carbónica que requiere cinc.
cie, lo cual favorece la interacción de los
sustratos y su reacción. Sin embargo, la es-
pecificidad reside en una determinada re-
gión de la superficie enzimática llamado
sitio activo (fig. 4.5).
4.2.3.1. Tipos: Catalíticos, reguladores

El modelo original de sitio catalítico para

4.2.3. Sitio activo
Una propiedad muy importante de las enzi-
mas es su especificidad. Todas las enzimas,
por el hecho de ser micelas, son capaces de
adsorber moléculas pequeñas en su superfi-
referirse al sitio activo, propuesto por Émil
Fisher en 1894 representaba la interacción
sustrato-enzima en términos de la analogía
entre llave-cerradura. Sin embargo el mo-
delo de Fisher consideraba al sitio catalítico
rígido y las proteínas en solución son flexibles

Fig. 4.5. Sitio activo de una enzima. Ajuste inducido por un cambio conformacional en la estructura de la
enzima antes y después de la unión del sustrato.
por esto, Koshland en 1967 emitió un modelo
del sitio catalítico flexible, al que llamó de
ajuste inducido (fig. 4.5). En este modelo, el
sustrato induce un cambio conformacional
en la estructura terciaria de la proteína enzi-
mática como hace la mano en el guante. Este
modelo permite también explicar la influencia
de otros sitios, llamados reguladores o alos-
te'ricos, que modifican la actividad de la en-
zima al provocar cambios conformacionales
en el sitio catalítico; esto se discutirá más
adelante al hablar de efectores alostéricos.
4.2.4. Enzimas oligoméricas e isoenzimas
Existen enzimas que constan de una sola ca-
dena polipeptídica integrando un monóme-
ro. A este grupo pertenecen la lisozima,
ribonucleasa, tripsina y otras.
Otro grupo de enzimas contienen dos o
más subunidades asociadas por enlaces no
convalentes. A este grupo pertenecen algu-
nas enzimas de la glicólisis, las isoenzimas y
las enzimas alostéricas (Tabla 4.2).
Las isoenzimas o isozimas son diferentes
proteínas con la misma actividad enzimática
que se originan en diferentes tejidos y presen-
tan un desplazamiento electroforético diferen-
te. Las isoenzimas difieren en su composición
de aminoácidos por lo que sus diferencias
están determinadas genéticamente.
Las isoenzimas más estudiadas por sus
aplicaciones clínicas son la deshidrogenasa
Tabla 4.2
Enzimas oligoméricas
Número de
Enzimas subunidades
láctica, la creatina fosfocinasa y la fosfatasa
alcalina. El caso más ilustrativo es el de la
deshidrogenasa láctica, enzima tetramérica,
que posee dos subunidades distintas: H (de
corazón) y M (de músculo). Estas dos subu-
nidades se combinan de cinco formas dife-
rentes para formar cinco isoenzimas: H4,
H3M, H2M2, HM 3 y M4 (Fig. 4.6).
La isoenzima M4 predomina en músculo
esquelético y en hígado, la izoenzima H4
predomina en miocardio (Tabla 4.3). La dife-
rencia cinética entre estas dos isozimas se ex-
plica en otros capítulos.
4.2.5. Complejos multienzimáticos
Algunas reacciones requieren de múltiples
enzimas asociadas que participan secuen-
cialmente para transformar un sustrato,
ejemplos de este tipo son la piruvato deshi-
drogenasa con un peso molecular de 4.8 mi-
llones y la sintetasa de ácidos grasos.
4.3. NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN DE LAS
ENZIMAS
4.3.1. Nombres sistemáticos y nombres
triviales
En un principio se designó a las enzimas con
nombres triviales según el sitio anatómico
PM de cada peso molecular
subunidad Total
de procedencia, como la ptialina, la pepsina,
tripsina pancreática, etc. Después se les de-
nominó añadiendo al nombre del sustrato
sobre el que actuaban, el subfíjo asa; así las
que hidrolizan el almidón (latín amilum),
amilasa, las que hidrolizan las grasas o lípi-
dos, lipasas, las que hidrolizan proteínas,
proteasas. Más tarde se les dio el nombre
según la reacción química catalizada, ejem-
plo: deshidrogenaseis, oxidaseis, descarboxi-
lasas, adiaseis, esteraseis, etc.
4.3.2. Clasificación digital de las enzimas
En el año de 1961, la Unión Internacional de
Bioquímica (UIB) adoptó el sistema de cla-
sificación y nomenclatura propuesto por su
Comisión de Enzimas (E.C.) basado en el ti-
po de reacción química y su mecanismo de
acción. Según éste, cada enzima tiene un nú-
mero clave de 4 dígitos de manejo interna-
cional, de manera que independientemente
del país y el nombre trivial que se le dé en
cualquier idioma, la deshidrogenasa alcohó-
lica será la enzima E.C. 1.1.1.1.
El primer dígito identifica la clase a la que
pertenece la enzima. Las enzimas se clasifi-
can en las seis clases siguientes:
1.- Oxidorreductasas; 2.- Transferasas; 3.-
Hidrolasas: 4.- Liasas; 5.- Isomerasas: y 6.-
Ligasas, el segundo dígito identifica la sub-
clase, el tercero la sub-subclase y el cuarto
dígito para la enzima específica. El nombre
sistemático de la deshidrogenasa alcohólica es
alcohol: NAD+.oxidorreduetasa (E.C.l. 1.1.1.)
El primer dígito es por ser una oxidorredue-
tasa, el segundo porque el dador electrónico
es un alcohol, el tercero porque el aceptor es
la coenzima NAD + y el cuarto por el número
de orden de la enzima.
1.- Oxidorreductasas.- Estas enzimas ca-
talizan reacciones de oxidación y reducción
muy importantes en biología. Con frecuen-