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Prctica 6: Hidrolisis de una protena y

ensayos para protenas y aminocidos.


4 de Octubre de 2016
Grupo: 2QM2 Equipo: 20
Cabrera Rendn Citlalli Odaliz
Gonzlez Tournier Magali Anne
Plata Ortz Mario Alberto
Profesora: Rosa Mara Bauelos Avila

Objetivos
1.- Efectuar la hidrolisis total de una protena.
2.- Identificar algunos aminocidos presentes en un hidrolizado de protena, por medio de sus propiedades fsicoqumicas.
3.- Identificar por cromatografa en capa fina algunos de los aminocidos presentes en un hidrolizado.

Presentacin de resultados
Como parte del desarrollo experimental se realizaron reacciones de identificacin, como mtodo cualitativo para verificar
la hidrolisis de protenas, en primera instancia la reaccin Xantoproteica, que sigui un mecanismo de reaccion (Fig.1) de
sustitucin electrofilia aromtica, siendo la albumina quien dio resultados positivos, aminocido cuyo nombre es tirosina.

Fig. 1. Mecanismo de reaccin Xantoprotica en albumina, con aminocido tirosina.

En la reaccin de precipitacin para identificar aminocidos azufrados se ilustra la reaccin general, reaccin que dio
positiva en solucin de albumina, dando a relucir la existencia del aminocido metionina y cistena. (Fig. 2)

Fig. 2. Reaccin general de precipitacin.

La reaccin de Biuret que dio como resultado la existencia de un complejo de cobre, es ilustrada la reaccin general de
cualquier protena en contacto con sulfato de cobre e hidrxido de sodio (Fig. 3).

FIg. 3. Reaccin general de Biuret.

La reaccin de ninhidrina se ilustra de manera general en la siguiente imagen, la cual present resultados positivos al
tratarse de la involucracin de grenetina hidrolizada y solucin de albumina (Fig. 4).

Fig. 4. Mecanismo de reaccin de un aminocido tratado con ninhidrina.

La reaccin de identificacin de grupos aminos libres como lo es la reaccin de cido nitroso sige el siguiente mecanismo
de reaccion de manera general en cualquier aminocido presente en una muestra problema, siento caracterstico el
burbujeo de la disolucin y tomando este como ilustracin de un resultado positivo (Fig. 5).

Fig. 5. Mecanismo de reaccin de aminocidos con cido nitroso.

Para comprobar la accin reguladora de los aminocidos al momento de agregar cido o una base, se relaciona con el
siguiente mecanismo de reaccin (Fig.6).

Fig. 6. Reaccin de aminocido al agregar cido e hidrxido.

Al realizar las reacciones de identificacin de aminocidos e hidrolisis de una protena, se obtuvieron los siguientes
resultados expresados en la tabla de resultados (Fig. 7).
PRUEBA IDENTIFICACIN
Reaccin Xantoproteca

Reaccin Precipitacin
Reaccin de Biuret

Reaccin Ninhidrina

Reaccin cido Nitroso

SUSTRATO
Disolucin A

PRUEBA +/Negativo

Disolucin D

Positivo

IDENTIFICACIN
Aminocidos en
anillos
compuestos

Disolucin A
Disolucin D
H2O destilada
Disolucin A

Negativo
Positivo

Enlaces
azufrados

Negativo

Disolucin C

Positivo

Enlaces
peptdicos

Disolucin D
H2O destilada
Disolucin B
Disolucin C
Disolucin D

Positivo

Disolucin aa.
Patrn
H2O destilada
Disolucin A
Disolucin C
Disolucin D

Positivo ++

Positivo +++
Negativo
Positivo +

Positiva +++
Positiva ++
Positiva +

Fuerte coloracin azul rey

Grupos aminos
libres

Grupos
libres

OBSERVACIONES
Coloracin transparente a amarillo
intenso
Coloracin amarilla a verdosa
transparente.
No presenta precipitado caf
Se present un precipitado caf
Coloracin azul claro turbio
Sin reaccin, se mantuvo incoloro

aminos

Coloracin tenue azul marino


Incoloro
Fuerte coloracin morada
Sin cambios, incoloro
Coloracin morada menos evidente
Coloracin morada
Incoloro
Constante burbujeo (N2)
Poco burbujeo (N2)
Menor cantidad de burbujeo (N2)

Fig. 7. Tabla de resultados en la parte experimental.

En la accin reguladora de los aminocidos al momento de emplear la solucin de grenetina hidrolizada neutralizada
como muestra problema, se obtuvieron los siguientes resultados expresados en la siguiente tabla (Fig. 8).
DISOLUCIN

INDICADOR

H2O destilada
Disolucin B
H2O destilada
Disolucin B
OBSERVACIONES:

Rojo Congo
Rojo Congo
Fenolftalena
Fenolftalena

COLOR
INICIAL
Rojo
Rojo
Incoloro
Incoloro

ML HCl 0.1N

COLOR FINAL

5 gota
16 gotas
1 gota
7 gotas

Morado
Morado
Rosa Violeta
Rosa claro (pH neutro)

Fig. 8. Tabla de resultados de accin reguladora de aminocidos.

Como resultado de cromatografa en capa finase realizo la siguiente tabla (Fig. 9). Expresando los Rf de la grenetina
hidrolizada (Solucin B) y los Rf de los aminocidos patrn, el cual solo fue la glicina la cual se encuentra en la grenetina.
Productos
Glicina
Disolucin B

Fenilalanina

Mancha
a) 1cm
b) 2.8 cm
a) 0.3 cm
b) 0.5 cm
c) 0.6 cm
d) 1.0 cm
e) 1.5 cm
f) 1.7 cm
g) 2.1 cm
a) 2.2 cm

Rf
0.28
0.80
0.08
0.14
0.17
0.28
0.42
0.48
0.60
0.62

Dentro de la cromatografa se encontr


que dentro de la disolucin B () se
encontraban diversos aminocidos, de ah
la gran cantidad de manchas que se
visualizaron en la placa; sin embargo,
comparando con dos aminocidos
patrones, se concluye que la disolucin
B contiene glicina pero que no contiene
fenilalanina.

Fig. 9. Tabla de resultados de cromatografa en capa fina.

Anlisis de resultados
En esta prctica se llev acabo la hidrolisis de una protena, as como la identificacin de aminocidos presentes en un
hidrolizado y no hidrolizado de protena haciendo uso de la preparacin de distintas soluciones de grenetina y albumina,
para posteriormente llevar a cabo las pruebas de identificacin correspondientes segn el caso, las cuales fueron:
Reaccin xantoproteica: reaccin positiva para aminocidos aromticos, siendo una prueba en la que los compuestos
que presentan bencenos sustituidos (con grupos unidos al anillo bencnico), al reaccionar con el cido ntrico
concentrado forman compuestos nitrados de color amarillo, el cual se intensifica en un medio alcalino. De acuerdo a
nuestros resultados obtenidos lo dicho anteriormente fue comprobado gracias al empleo de la solucin de albumina,
visualizando en esta claramente la coloracin amarillenta (prueba positiva) formada al emplear el medio alcalino
correspondiente (NaOH), esto debido a que en la solucin estaban presentes aminocidos con anillos aromticos, como
triptfano, fenilalanina, tirosina, histidina y prolina. Caso contrario se observ en la solucin A, contenida de glicina, lisina,
arginina entre otras, en donde no estuvo presente la coloracin amarilla puesto que era simplemente una mezcla de
aminocidos los cuales presentaban rupturas entre sus enlaces. [3]
Reaccin de precipitacin: El enlace disulfuro es un enlace covalente que se produce cuando dos grupos sulfhidrlo
(SH) reaccionan para formar un puente disulfuro (SS). Los residuos de cistena pueden formar puentes disulfuro.
Pueden unir 2 cadenas peptdicas o una sola para formar un anillo. Dicha prueba identifica los enlaces disulfuro
de las protenas, mayor parte las protenas que contengan un nmero mayor de puentes disulfuro, en esta reaccin
los aminocidos azufrados se reconocen por la formacin de precipitados de sulfuro de plomo de color oscuro que se
forma cuando reacciona con acetato de plomo en medio alcalino. Basndose esta reaccin en la separacin mediante un
lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo forma el sulfuro de
plomo. Comprobndose lo anteriormente mencionado con los resultados obtenidos en donde la prueba que resulto
positiva fue la empleada con solucin D (albumina) la cual, por presentar aminocidos azufrados, como metionina y
cistena se form un precipitado color caf indicndonos la existencia de puentes disulfuro. [3]
Prueba Biuret: esta reaccin se basa en la reaccin del sulfato de cobre con compuestos que presenten dos o ms
enlaces peptdicos, en un medio alcalino. El producto es un complejo color azul cuya intensidad de color depende de la
cantidad de enlaces peptdicos presentes. De acuerdo a los resultados obtenidos, estos indicaron que las soluciones que
contenan Albumina, grenetina no hidrolizada y una pequea porcin de agua destilada presentaron enlaces peptdicos,
observando en ellas una colocacin azul cielo en el caso del agua destilada y azul rey para las dos pruebas restantes,
confirmando con esto que, a mayor intensidad de color, mayor son los enlaces pptidos presentes, esto establecido
anteriormente en la teora. Respecto a la otra solucin realizada, se pudo observar que esta resulto incolora, debido a
que la solucin contena grenetina hidrolizada y por ende en ella exista la ruptura de enlaces entre los aminocidos
presentes que al no presentar enlaces peptdicos los resultados fueron la no coloracin azul. [3]
Reaccin de Ninhidrina: Esta reaccin es bastante importante, pues es universalmente empleada para detectar
cualitativamente y cuantitativamente a los aminocidos. Para los aminocidos esta es una de las reacciones de color,
verdaderamente importante. La Ninhidirna es una agente oxidante, uno de los grupos alfa-amino, liberando amoniaco,
CO2 y el correspondiente aldehdo (Fig. 4). Una coloracin violeta determina positiva la prueba y para este caso tambin
un color Vino tinto la determinara como positiva. En esta prueba se obtienen los resultados en grenetina hidrolizada y
solucin de aminocido patrn presentaron una coloracin violeta intensa, lo cual indica que presentan aminocidos o
grupos amino libres, la grenetina con presencia de lisina y arginina, en cambio el agua y la solucin de grenetina sin
hidrolizar era obvio el resultado, el agua sin presencia de ningn tipo de aminocidos y la grenetina al no hidrolizarse los
aminocidos seguan unidos por enlaces peptdicos. [3]
Reaccin con cido nitroso: Esta es la reaccin que se utiliza para determinar el nitrgeno del grupo amino, se conoce
como procedimiento de Von Slyke y sirve para estimar los grupos aminos libres de los pptidos y las protenas midiendo
la cantidad de nitrgeno liberado. El cido nitroso reacciona con el grupo amino de los aminocidos. Formando los cidos
hidroxilos correspondientes, liberando nitrgeno gaseoso. Presento resultados positivos en el tubo que contena
grenetina hidrolizada debido que con los aminocidos libres (grupo amino) producto de la hidrolizaran de la protena se
logr hacer la reaccin, desprendiendo nitrgeno gaseoso (N 2) en forma de burbujeo, lo mismo que pas con los tubos
que contenan solucin de grenetina sin hidrolizar y solucin de albumina de huevo, pero en menor porcin dicho
burbujeo, explicacin que reside en su naturaleza, debido a que no presenta en cantidades considerables aminocidos
libres. [3]
Accin reguladora de aminocidos: En esta reaccin se pone en manifiesto como un aminocido acta como un cido
o una base, ya que los aminocidos son anfteros, utilizamos hidrxido de sodio y cido clorhdrico para las diferentes
reacciones. Agregamos a dos tubos de ensayo, en el primero colocamos 2mL de (Sol. B) y en otro 2mL de agua

destilada, 6 gotas de rojo congo, primero observamos que ambos mostraron un color rojo intenso, esto quiere decir que
nuestras soluciones estaban bsicas, puesto que rojo congo al contacto si sigue rojo significa que nuestras soluciones
estn en un pH bsico, al agregarle cido clorhdrico, el tubo 1 y tubo 2 cambiaron la coloracin a morado en
diferentes velocidades, el tubo que contena agua cambio rpido al agregar cinco gotas, el cambio fue en cuestin de
segundos, mientras que en el tubo que contena la solucin B cambio lento, se le tuvieron que agregar 16 gotas para ello,
la diferencia entre las velocidades del cambio de cloracin se debe a que los aminocidos presentes en la solucin B
producen un efecto bfer que de manera amortigua o dicho en otras palabras hace que la reaccin se lleve a cabo
de manera lenta, con hidrxido de sodio fue lo mismo solo que viraron con fenolftalena a color rojo. El aminocido para
realizar dicho efecto de bfer, presenta dos centros activos, por una parte del lado del ion carboxilato el cual es receptor
de los protones al agregar soluciones acidas, en compensacin del lado del ion amonio quien es receptor de los iones
hidroxilo y para el tubo 1 se necito una gota y para el tubo que contena la grenetina hidrolizada 7 gotas, como se
muestra en la siguiente imagen (Fig. 6). [2]
Cromatografa en placa fina: Con esta prueba se pudo confirmar que aminocido que est presente en la grenetina
(Sol. B) el aminocido glicina, de acuerdo al Rf, se utilizaron alcohol terbutilico y agua, un disolvente apolar y otro polar,
para lograr que los aminocidos se desplacen por lo largo de la palca de una manera gradual y lenta para que se lograra
separar cada componente de la muestra de grenetina hidrolizada, pues el agua tiene un poder eluyente muy potente, a
comparacin con otro disolvente como hexano y acetona. [1]

Cuestionario
6.- Indicar por medio de reacciones, el efecto regulador de aminocidos.

7.-Explicar los resultados obtenidos en la prueba del efecto regulador de los aminocidos.
El tubo que contena agua cambio rpido al agregar cinco gotas, el cambio fue en cuestin de segundos, mientras que en
el tubo que contena la solucin B cambio lento, se le tuvieron que agregar 16 gotas para ello, la diferencia entre las
velocidades del cambio de cloracin se debe a que los aminocidos presentes en la solucin B producen un
efecto bfer que de manera amortigua o dicho en otras palabras hace que la reaccin se lleve a cabo de manera
lenta, con hidrxido de sodio fue lo mismo solo que viraron con fenolftalena a color rojo. El aminocido para realizar
dicho efecto de bfer, presenta dos centros activos, por una parte del lado del ion carboxilato el cual es receptor de los
protones al agregar soluciones acidas, en compensacin del lado del ion amonio quien es receptor de los iones hidroxilo
y para el tubo 1 se necito una gota y para el tubo que contena la grenetina hidrolizada 7 gotas.
1.- Cmo sabra si la hidrolisis fue parcial o total?
De acuerdo a las pruebas de identificacin previamente realizadas, como en la reaccin de biuret ya que en esta se
puedo visualizar que exista hidrolisis total cuando dicha prueba resulto translucida (prueba negativa) debido a la
carencia de enlaces entre los aminocidos presentes (mezcla de aminocidos) y cuando la prueba resulto con una
coloracin intensa (prueba positiva ) indico la no generacin de dicha hidrolisis, por lo contrario, se tena hidrolisis parcial
cuando la prueba resultaba con una ligera coloracin (prueba positiva) ya que an se encontraban presentes enlaces
entre los aminocidos.
2.- Describa: tres tipos de hidrolisis de protenas.

Hidrolisis cida: Se basa en la ebullicin prolongada de la protena con soluciones cido fuertes (HCl y H 2 SO 4).
Este mtodo destruye completamente el triptfano y parte de la serina y la treonina.

Hidrolisis bsica: Respeta los aminocidos que se destruyen por la hidrolisis anterior, pero con gran facilidad,
forma racematos. Normalmente se utiliza (NaOH e BaOH).

Hidrolisis enzimtica: es la hidrolisis que se produce mediante un grupo de enzimas llamadas hidrolasas. Estas
enzimas ejercen un efecto cataltico hidrolizante, producen la ruptura de enlaces por agua segn: H-OH + R-R
R-H + R-OH

3.- Describa el mecanismo que se lleva a cabo en la reaccin xantoproteica.

4.- Indicar cul es la razn de agregar hidrxido de sodio en la reaccin xantoproteica.


Para neutralizar algunas trazas de cido ntrico que probablemente no hayan reaccionada en la SEA e impedir que
acten con los grupos bsicos (amino) del aminocido.
5.-Indicar que tipo de aminocidos debe contener una protena para dar positiva la reaccin de precipitacin con acetato
de plomo.
METIONINA

CISTEINA

6.- Indicar por medio de reacciones el efecto regulador de aminocidos.

7.-Explicar los resultados obtenidos en la prueba del efecto regulador de los aminocidos.
El tubo que contena agua cambio rpido al agregar cinco gotas, el cambio fue en cuestin de segundos, mientras que en
el tubo que contena la solucin B cambio lento, se le tuvieron que agregar 16 gotas para ello, la diferencia entre las
velocidades del cambio de cloracin se debe a que los aminocidos presentes en la solucin B producen un
efecto bfer que de manera amortigua o dicho en otras palabras hace que la reaccin se lleve a cabo de manera
lenta, con hidrxido de sodio fue lo mismo solo que viraron con fenolftalena a color rojo. El aminocido para realizar
dicho efecto de bfer, presenta dos centros activos, por una parte del lado del ion carboxilato el cual es receptor de los
protones al agregar soluciones acidas, en compensacin del lado del ion amonio quien es receptor de los iones hidroxilo
y para el tubo 1 se necito una gota y para el tubo que contena la grenetina hidrolizada 7 gotas.
8.-Indicar la frmula de los aminocidos que identifico por cromatografa.

Glicina.
9.- Investigar algunos de los aminocidos que se encuentran presentes en grenetina y albumina.

GRENETINA

Glicina

Prolina

cido glutmico

Lisina

Arginina

ALBUMINA

Alanina

Arginina

Glutamin
a

Glicina

Metionina

Fenilalanina

Triptfano

Tirosina

cido asprtico

Histidin
a

Prolina

Cistena

Isoleucina

Serina

Acido glutmico

Leucina

Treonina

Valina

10.- Investigar de que protena se obtiene la grenetina.


Del colgeno

Obtencin de grenetina a partir de la hidrlisis parcial del colgeno de pieles, tendones y huesos
Conclusin

Existen diversas maneras de poder identificar compuestos orgnicos de alguna protena, en sta prctica realizamos
diversas experimentaciones que nos ayudaron a visualizar aminocidos, grupos aminos libres, enlaces peptdicos,
aminocidos en anillos aromticos y enlaces azufrados.
De entre todas las biomolculas, las protenas desempean un papel fundamental en el organismo. Son esenciales para
el crecimiento, gracias a su contenido de nitrgeno, que no est presente en otras molculas como grasas o hidratos de
carbono. Tambin lo son para las sntesis y mantenimiento de diversos tejidos o componentes del cuerpo, asimismo,
ayudan a transportar determinados gases a travs de la sangre, como el oxgeno y el dixido de carbono, y funcionan a
modo de amortiguadores para mantener el equilibrio cido-base y la presin onctica del plasma, por lo que para un QBP
es importante trabajar y conocer a las protenas para su buen desempeo laboral.
La hidrolisis de protenas es un proceso en el cual se produce la ruptura de la estructura primaria, es decir la ruptura de
la secuencia normal de una protena; lo cual termina por fragmentar las protenas para convertirlas en aminocidos. Las
protenas estn formadas por mltiples aminocidos que se unen entre s por enlaces peptdicos. En cada enlace se
eliminan un ion hidroxilo de un aminocido y un ion de hidrgeno del aminocido siguiente; as los aminocidos
sucesivos de la cadena protica estn unidos por condensacin, y su digestin se debe al efecto opuesto: la
hidrolizacin.

Bibliografa
1. - H. D. Durst, G. W: Gokel. Qumica Orgnica Experimental, Espaa: Revert, 1ra Ed. 2003. Pp. 91-96.
2.- Mc Murry.J. Qumica Orgnica. Cengage Learning, 7 Ed. Mxico. 2008. Pp. 1016-1018, 1022-1027.
3.- Voet, voet. Bioqumica 3 edicin, editorial panamericana, Mxico, 2006, Pp. 71-100.