METALOTIONENAS (MTs)

Valentina Granados Gonzalez. Cd: 25531204

Sandra Catalina Sarmiento. Cd: 25561228

Descubrimiento y primeros estudios

En 1957, Vallee y Margoshe las aislaron de la corteza renal

de los equinos y se identificaron como protenas capaces
de unir cadmio (Cd).

En un principio, se consider que la presencia de estas

protenas estaba relacionada con un mecanismo de
detoxificacin del Cd acumulado en el tejido renal de
estos animales.

Se avanz en su descubrimiento en la dcada de 1990,

gracias a la cristalografa de rayos X y espectroscopia por
resonancia magntica nuclear .

Metallothionein Structure. http://lynes.

uconn.edu/, 21-11-2015,

Definicin y localizacin

Protenas de bajo peso molecular (48

kDa), generadas transcripcionalmente
y con capacidad de ligar iones
metlicos (por su alto contenido en
residuos de cistena, 30% del total de la
protena) para evitar as una
intoxicacin por metales.

Yeast Metallothionein Bound to Silver.2014.igem.org, 21-11-2015,

DNDE SE ENCUENTRAN LAS MTs?

Se han identificado en el reino animal, as como en las
plantas superiores, microorganismos eucariotas y algunos
procariotas.

En los mamferos se encuentran presentes en todos

los tejidos, con mayor concentracin en hgado,
rin, pncreas e intestino.

A nivel celular se sitan en el citoplasma (en la

membrana del aparato de Golgi), sin embargo
estudios han mostrado su presencia en el interior de
las lisozimas y en el ncleo celular.

journal.frontiersin.org, Metallothionein in specific tissues. 21-11-2015,

ESTRUCTURA
La estructura primaria ha sido
la base de su clasificacin.
sta
la
determina
los
parmetros taxonmicos y los
patrones de distribucin de los
residuos de Cistena a lo largo
de la secuencia de a.

Polypeptides having the functional characteristics of metallothioneins as described above may be used in
accordance with the invention. http://www.google.com.na/patents/EP0557042B1?cl=en, 21-11-15,

ESTRUCTURA

La estructura secundaria ha
sido observada en varias
especies pero se posee poca
informacin
sobre
su
relevancia funcional.

Partial 3D model for rhMT structure obtained by clustering the 5,000 generated models. This structure represents the lowest freeenergy state obtained in the sampled conformational space.http://2012.igem.org/wiki/images/3/37/UANLDCRhMT11.png

ESTRUCTURA
La estructura terciaria es
heterognea y depende la
especie y de la afinidad con el
metal.
Un dominio; levaduras y
procariotas.
Dos dominios; vertebrados
y crustceos.
Dos dominios
correlacionados; plantas.

Clasificacin estructural
(Fowler et, al. 1987)

CARACTERSTICAS
Las clases I y II se caracterizan por ser protenas de cadena sencilla.

CLASE I (61 a 64 a, 20 Cys)

Aisladas de los mamferos, sus polipptidos se caracterizan por:
Alto contenido de metales pesados (4-12 tomos/mol) unidos a las
protenas especialmente por enlaces tiol y formando dos agrupamientos
o dominios metlicos.
Alto contenido de Cistenas (del 23 al 33%)
Baja masa molecular, menor a 10000 Daltons.
Homologa estructural o funcional relacionada con las MT aisladas de los
mamferos.

CARACTERSTICAS
Las clases I y II se caracterizan por ser protenas de cadena sencilla.

CLASE II (Rep 2 a 11 unds de glutamil - cisteinil)

Su secuencia y la distribucin de aminocidos es diferente a las
metalotionenas aisladas de mamferos.
Su longitud es variable.
Estas metalotionenas han sido encontradas en eucariotas como las levaduras
y ciertos procariotas como las cianobacterias.
En las plantas se agrupan en cuatro tipos (Mt1, Mt2, Mt3, Mt4) de acuerdo con
el ordenamiento de los residuos de cistena en la protena, y fueron
identificadas por primera vez en embriones maduros de trigo como una
protena 'quelatante' del zn (Cobbett y Goldsbrough, 2002).

Funciones

 Enlace de metales por medio de

mecanismo secuencial y no cooperativo.
Captacin, transporte y regulacin del
Zinc en los sistemas biolgicos. Ayuda a
la sealizacin celular.
En MTs bacterianas los resto de His
forman enlaces con el Zinc.
Reguladora de protena supresora de
tumores.
Metallothioneins have four main functions in aquatic
vertebrate. http://www.frontiersin.org/files/Articles/98870/fmars-01-00034r2/image_m/fmars-01-00034-g001.jpg.

 Capturan radicales oxidantes

como superxido e hidroxilo /
Mecanismo de control de estrs
oxidativo.
Biomarcadores para
investigaciones.
Relacionadas con anticuerpos.

Metallothionein scavenging of reactive oxygen species. http://www.mdpi.com/14220067/14/3/6044/htm.

INVESTIGACIONES SOBRE FUNCIONALIDAD EN PLANTAS

GRUPO MT

OBJETO DE ESTUDIO

MT 4

Semillas de maz

MT 1

Brassica jncea y Vicia faba (expuestas

a Cu y Zn)

La expresin del gen en el tallo de estas plantas fue

inhibida con el tratamiento de Cu

Foley et al., 1997; Schafer

et al., 1997

MT2

Arabidopsis thaliana

Mayor induccin del ARNm en el tallo y en las hojas

que en races

Guo et al., 2003

MT1

Arabidopsis thaliana

Mayor induccin del ARN mensajero (ARNm) en races

Zhou y Goldsbrough, 1995

MT3

Arabidopsis thaliana, guineo (pltano,

banano), el kiwi y la manzana

Sobreexpresin en las hojas de las plantas

Edger y Gardner, 1994; Guo

et al., 2003

Los niveles de ARNm se incrementan en las hojas

senescentes (proteccin de las clulas contra el
estrs oxidativo)

Hsieh et al., 1995; Garca

Hernndez et al., 1998

MT2

Arroz y Arabidopsis

APORTE
Mecanismo para proporcionar
requeridos para la germinacin

AUTOR
micronutrientes

White y Rivin, 1995.

Polimorfismo
Regulacin gnica

Las MT humanas presentan el polimorfismo ms complejo; se ha descrito la existencia de

al menos 12 genes que dan origen a diferentes isoformas, algunas de ellas caractersticas
de algn tejido en particular.
La MTIII se localiza especficamente en cerebro, contiene 68 aminocidos, 38 de los cuales
son idnticos a los encontrados en las isoformas convencionales aisladas de otros tejidos.
Se ha descrito que la MTIII posee una afinidad inhibitoria para el crecimiento celular en
cerebro y debido a que su sntesis disminuye en pacientes con enfermedad de Alzheimer
se ha implicado en la etiologa de este desorden neurolgico.

En los seres vivos la concentracin de las MT vara ampliamente, lo que depende de la influencia de varios
factores como el tipo de organismo, el tejido, la edad, el estado de desarrollo, el rgimen diettico, la historia
de exposicin a metales y seguramente la presencia de otros factores aun por identificar.
Las MT aisladas del hgado humano contienen en su molcula casi exclusivamente Zn, mientras que las MT
aisladas del Rin Contiene Cd y Cu. Probablemente las diferencias de los metales que contienen reflejan la
expresin diferencial de algunas formas moleculares o iso metalotionenas.

Unin de metales por las

metalotionenas

Las MT son capaces de ligar metales esenciales (Zn y Cu), como no esenciales (Hg, Au, Pb, Cd,
etc.). Cuando se saturan con sales de Zn o Cd, fijan 7 tomos de metal por molcula de protena.
Los metales se agrupan en dos dominios:

(C-terminal), que tiene 11 cistenas capaces de fijar 4 tomos de metal.

(N-terminal), que tiene 9 cistenas,capaces de fijar 3 tomos de metal.

Los iones metlicos divalentes como el Zn y el Cd se coordinan tetradricamente con

cuatro Cistenas divalentes.
Cada molcula de MT es capaz de unir 12 metales monovalentes.

Empleando tcnicas de proteolisis parcial para separar los dominios de las MT, se ha
encontrado que cada uno de stos fija 6 tomos del metal monovalente. Actualmente no se
conoce la estructura tridimensional de las MT con iones metlicos monovalentes, sin embargo,
los complejos cistena-metal forman enlaces de coordinacin trigonales.

Induccin y sntesis

AGENTES INDUCTORES DE MT-I Y MT -2 in vivo y/o in vitro

METALES

ANTIBITICOS

Cd, Zn, Cu, Hg, Au, Ag, Co, Ni, Bi

Estreotozotocina, Acetaminofeno,
Cicloheximida

HORMONAS Y FACTORES DE CRECIMIENTO

AGENTES CITOTXICO

Glucocorticoides, Progesterona, Estrgenos, Hidrocarburos, Etanol, Isopropanol,

Catecolaminas, Glucagn, Insulina,
Cloroformo, Tetracloruro de carbono,
Angiotensina II, IGF-1, EGF
EDTA
AGENTES INFLAMATORIOS Y CITOQUINAS

CONDICIONES ESTRESANTES

LPS, Dexametazona, Turpentina, IL-1, IL-6,

IFN- y , TNF-

Privacin de movimiento, inflamacin,

irradiacin, inmovilizacin

Estudio de caso


MODULACIN DE LA SNTESIS DE
METALOTIONENAS EN Perna viridis PRE
EXPUESTOS A COBRE Y EXPUESTOS A
CADMIO
Lemus, M., Eucaris, E., Salazar-Lugo, R., Chung, K.

INTRODUCCIN
La induccin a la sntesis de MTs ocurre durante exposicin a iones metlicos en la
clulas (Mao et al. 2012), se han propuesto el uso de estas protenas como indicador
bioqumico especfico para la bioacumulacin de metales en organismos en
ambientes contaminados.
Las relaciones dadas entre la protena y los metales depende de la especie de
bivalvo, de factores biticos y abiticos (Webb y Keaugh 2002, Rojas et al. 2009, Mao et al. 2012).

La historia de vida de un organismo determinar la magnitud de la respuesta.

El objetivo de la investigacin fue evaluar los efectos de pre exposiciones de Cu
sobre la posterior bioacumulacin a Cd y los efectos sobre los niveles de Mts en
juveniles de P. viridis.

METODOLOGA

Se recolectaron en un banco
natural ubicado en la localidad de
Guayacn

Se transportaron en contenedores
isotrmicos al laboratorio

Talla promedio : 18 3 mm de longitud.

15 das en acuarios con agua de mar,
aireacin
continua,
salinidad
36,
temperatura promedio de 25 2C,
alimentados con microalga (previamente)

DETERMINACIN DEL LC 50 PARA Cu y Cd en Perna viridis

1.

Grupos de 8 organismos por acuario

(Lmite de tolerancia media).

2.

Los bioensayos duraron 96 horas y se

realizaron por duplicado.

3.

Se utiliz CdCl2 como fuente de Cd y CuSO2

como fuente de Cu.

4.

Utilizacin el mtodo de Logit.

BIOENSAYO DE EXPOSICIN
Ubicacin de 15 ejemplares de P. viridis con talla promedio de 16,5 3,6
mm de longitud en un acuario de PVC de 2,6 L .
Se expusieron a una dosis 10 veces por debajo del LC50.
Grupo Cd: La concentracin subletal utilizada fue de 5,48 g Cd/L.
Grupo Cu/Cd: Fue pre expuesto a 0,33 g Cu/L durante 15 das y
posteriormente expuesto a Cd.
Grupo no expuesto: Estudiado como control.

DETERMINACIN DE Cd

Se
tom
1,0
mL
de
homogeneizado realizado para la
determinacin de Mts y digerido
con cido ntrico (HNO3 ).
Se filtraron las muestras en papel
Whatman N 2
Se diluy con agua desionizada
hasta 10 mL.
Finalmente se ley la absorbancia
a una longitud de onda de 228 nm
en
espectrofotmetro
de
absorcin
atmica
PERKINELMER, calibrado con estndares
de metal con rango de 0,25-4,00
mg/L.

DETERMINACIN DE MTs

Se us el mtodo de Viarengo.
Se extrajo el tejido hmedo de cada
organismo, se pes y se homogeneiz
en fro con 3 mL de una solucin buffer
por cada gramo de tejido.
Se centrifug, se aadi etanol fro y
Cloroformo, se centrifug otra vez.
Se realiz un secado bajo atmsfera de
nitrgeno y otros procesos de mezcla y
centrifugacin.
Se
ley
la
absorbancia
del
sobrenadante de las muestras a 412 nm.
La concentracin de Mts se estim
utilizando una curva de calibracin,
usando glutatin reducida (GSH) como
estndar.

DETERMINACIN DE
PROTENAS TOTALES

Se us el mtodo de Bradford.
Las muestras fueron ledas a
595
nm,
utilizando
un
espectrofotmetro de luz
visible Helios modelo 1.0.
Se realiz una curva de
calibracin con albmina srica
de bovino (20 mg/dL, Sigma)
como estndar.

ANLISIS ESTADSTICO
Se aplic anlisis de varianza doble para ver si existan diferencias
significativas en las concentraciones de Mts y de Cd con respecto al tiempo
de exposicin, en los grupos experimentales y el control.
Adems se realiz anlisis de regresin lineal simple para determinar si
existe relacin entre los niveles de Mts y la bioacumulacin de Cd.

RESULTADOS

RESULTADOS

DISCUSIN
EVENTO

GRUPO PRE EXPUESTO A Cu

GRUPO EXPUESTO A Cd

Acumulacin de Cd en los
tejidos de organismos

6,64 1,90 g/g.

4,74 2,33 g/g.

Concentraciones de MTs
(durante los 21 das de
exposicin)

Cu/Cd : 1,36 0,52 g/g.

0,79 0,47 g/g

Relacin entre los niveles

de Mts y la bioacumulacin
de Cd

Lineal y significativa

No lineal

Cu

Inductor
Aumento

CONCENTRACIN
DE MTs

Acumulacin
de Cd

na
mi

Au

ter

De

ta

n
me

Tolerancia y
bioacumulacin de
Cd

Exposiciones
previas

CONCLUSIN
La preexposicin de Perna viridis a una dosis subletal de un metal
esencial como el Cu aument la capacidad de incorporacin de Cd
en el organismo y su tolerancia al metal, sugiriendo un efecto
protector de las Mts previamente inducidas por el Cu, al efecto
txico de una posterior exposicin a Cd.

BIBLIOGRAFA , IMGENES Y REFERENCIAS

Natthiya, S. (2012). Metallothionein: An Overview on its Metal Homeostatic Regulation in Mammals /
Metalotioneina: Una Visin General de su Regulacin Homeosttica de Metales en Mamferos. International
Journal Of Morphology, (3), 1007. doi:10.4067/S0717-95022012000300039.
Brambila, M., Lozano, P., (1996). Metalotionenas, bioqumica y funciones propuestas. Centro de
investigaciones
microbiolgicas.
Puerto
Rico.
From:
http://www.smb.org.mx/smbanterior/text/beb/beb991812127.pdf.
Artculo :
Lemus, M., Eucaris, E., Salazar-Lugo, R., Chung, K. (2014), Modulacin de la sntesis de metalotionenas en
perna viridis pre-expuestos a cobre y expuestos a cadmio SABER. Revista Multidisciplinaria del Consejo de
Investigacin de la Universidad de Oriente, vol. 26, nm. 1, enero-marzo, 2014, pp. 10-17 Universidad de
Oriente Cuman, Venezuela. From: http://www.redalyc.org/pdf/4277/427739465003.pdf.
https://es.wikipedia.org/wiki/Metalotione%C3%ADnas
http://www.deaventura.pe/blog/wp-content/uploads/2014/10/Buceo-modalidad-Apnea.jpeg
http://www.jaxshells.org/green7.htm