LA BIOTECNOLOGIA EN LA PRODUCCION

DE VACUNAS CONTRA EL VIRUS DE LA

RABIA

• Manolo Fernandez D. MV – MSc

CEO FARVET SAC
 Tipos de vacunas en desarrollo a nivel mundial

Vacuna basada en Vacuna basada

proteinas 37% en células
FARVET 1%

Vacuna en vector Unknown Vacuna basada

viral 22% 1% en bacterias
Otros
FARVET Vacuna con virus 2% FARVET
3%
completo Vacuna
16% reutilizadas
1% BCG
Vacuna genética
21%
 CLASIFICACIÓN DEL VIRUS DE LA RABIA
Los rhabdovirus pertenecen al orden Mononegavirales, que se
distribuye en tres familias:
1. Rhabdoviridae,
2. Paramyxoviridae (virus Sendai, de la enfermedad de
Newcastle, del sarampión, virus sincitial respiratorio y
rubulavirus porcino)
3. Filoviridae (virus de Marburg).
Los Rhabdovirus que infectan a los animales pertenecen a tres
géneros:
1. Vesiculovirus (cuyo prototipo es el virus de la estomatitis
vesicular -VSV-),
2. Lyssavirus (cuyo modelo es el virus de la rabia)
3. Ephemerovirus (representados por el virus de la fiebre efimera
bovina).
GENOMA VIRUS RABICO
Nicotínico de
acetilcolina y
Neurotrofina
MICROORGANISMOS UTILIZADOS

1.BACULOVIRUS
2.VIRUS DE NEWCASTLE
3.Salmonella enteritidis
Recombinacion DNA BACULOVIRUS VIRUS
 Proteína Recombinante GP
Célula de insecto Normal

1. Tecnología ADN Recombinante:

Clonación , expresión en células de
insecto

Diseño
ADN Cel. Insecto “Recombinante” Mostrando
“GP – Fluorescente : Rojo”
 A B C

D E F

Western Blot de proteinas recombinas expresadas en baculovirus mediante celuklas de insecto

(A) Spike glicoproteina (B) Glicoproteina–Ectodominio (C) Glicoproteina (D) Trimeric GP (E) Hlicoproteina–
Ectodominio (F) Nucleo proteina
Reverse Genetics and Vectorization VIRUS RNA
 Genoma rNDV (15186 bp)
AsiSI PciI BbvCI MluI SnaBI
5'
3'
CMV F HN L Trailer
promotor
Leader N P M

“Regla de seis”
GE: GEN END
IG: INTERGENIC REGION
GS: GEN START
GE IG GS S1 F S1: GEN FORÁNEO DEL SARS-CoV-2

BbvCI

AsiSI PciI BbvCI BbvCI MluI SnaBI

3' 5'
F
CMV Leader N P S1 M F HN L Trailer
promotor

Genoma rNDV-GP (17610 bp)

NDV Cuya Superficie Contiene GP Rabia

Glicoproteina

NDV Wild Type NDV-GP RABIA

Patente FARVET
RECOMBINANT Salmonella enteritidis
Monitoreo de presencia de Salmonella en ratones

Colecta de Heces:
Se observa presencia de
Salmonella hasta el día 6
For the expression of the fiber antigen of the avian adenovirus (IBH)
an expression cassette has been designed and constructed that
includes:
• Promotor region (PR)
• Sequence for export to fiber antigen membrane (SEM)
• Linker region of 8 amino acids
• Region of 6 histidine residues for the detection of the expression
(6XHis)
• 537 amino acid protein fragment (fiber 1-11)
• Terminator (TER)

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The expression cassette will be subcloned into the previously modified integrative plasmid pATTtn7, which, after a
step of cleavage at a non-permissive temperatura, will result in a stable integration of said antigenic expression unit.
The constructions will be verified through the analysis of the restriction and sequencing pattern.

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 VACUNAS SALMONELLA MODIFICADA GENETICAMENTE
La plataforma se basa en la cepa de vacuna bacteriana viva atenuada Ty21-
VAXIMM (VACFAR33925), que se ha administrado a millones de personas como
vacuna profiláctica para protegerlas temporalmente de la fiebre tifoidea. Se ha
demostrado que esta cepa es muy segura y bien tolerada. Todas las
inmunoterapias resultantes de esta plataforma son tomadas por vía oral por el
paciente.

Su uso en CANCER, después de la ingestión oral, la bacteria Ty21a

modificada, que contiene el ADNc de la diana (s) de cáncer deseada, pasa por
el estómago e invade las placas de Peyer del paciente ubicadas en el intestino
delgado. La captación de las bacterias en los macrófagos, las células
alimenticias presentes en estos tejidos linfoides, conduce a una fuerte
expresión y, posteriormente, a una respuesta inmune celular específica hacia
el (los) antígeno (s) del cáncer codificado. Estas células T "asesinas"
destruyen a continuación las células tumorales o estroma tumorales que
expresan el antígeno respectivo.
 THE TECHNOLOGY OF THE GENETIC
MANIPULATION OF BACTERIA DEVELOPED BY
FARVET INCLUDES:

• Chromosomal mutations in Salmonella enteritidis to transform them

into APATOGENES, obtaining a ROUGH STRAIN.
→ Salmonella enteritidis ROUGH strain
• Insertion of GENES that express antigenic proteins
→ Salmonella enteritidis R – IBDV
→ Salmonella enteritidis R – IBH
→ Salmonella enteritidis R – avian Laryngotracheitis (ILT)
→ Salmonella enteritidis R – solium tapeworm
→ Salmonella enteritidis R – PCV2
→ Salmonella enteritidis R – CSFV
→ Salmonella enteritidis R – swine mycoplasma
→ Salmonella enteritidis R – bovine piroplasm
→ Salmonella enteritidis R – canine rabia
→ Salmonella enteritidis R mix with Salmonella gallinarum 9R
→ Salmonella enteritidis R COVID 19 RBD - Spike

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 Vacfar 3925
Patente Farvet SAC

GLICOPROTEINAS
A, B
 Ensayo de unión
Detección de “Receptor Binding Domain” RBDr unido a ACE-2 de Vero E6
 Ensayo de Bloqueo
Anticuerpos del suero bloquean la unión de RBDr a VERO E6
Deteccion de Salmonella GLP en heces monos
 Prueba de aglutinacion rapira para detectar
anticuerpos COVID 19 con Salmonella modicada
Detección de la respuesta inmune celular (Interferón Gamma “IFNγ”) por EliSpot

Created with BioRender.com

 CONTROL VACUNADO

ASSAY ex vivo FOR THE CONTROL VACCINATED

DETECTION OF ANTIGEN-
PBMC unstimulated
SPECIFIC LYMPHOCYTES
SECRETORS OF gamma
interferon BY ELISPOT

Experimental evaluation of
the CSFV vaccine
Sample: Peripheral blood PBMC +
mononuclear cells (PBMC) Concanavalina A
Cultivation time: 36 horas
Antigen: Vacunal

PBMC + antigen

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Respuesta cellular CD4 - interferón Gamma

Vacuna de proteína recombinante Vacuna de salmonella modificada

 No GLP GLP
Con A
estimulado 4 ug/ml 2 ug/ml

Raton
Inmunizado:
Salmonella PL1

Elispot Bazo de 15 días post Vacunación GLP

Vacuna Salmonella
El trabajo de nuestros ancestros es la
inpiracion para nuestro futuro