INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD ACADEMICA.

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERÍA

QUÍMICA E INDUSTRIAS
EXTRACTIVAS.
ESPECIALIDAD.
INGENIERÍA QUÍMICA INDUSTRIAL
MATERIA:
LABORATORIO DE
ESPECTROSCOPIA MOLECULAR Y
ATOMICA

GRUPO: 3IM66
PRACTICA 1
RUTINAS DE
DIAGNOSTICO
PROFESORA;
MARCELA NORA GOMEZ FERNANDA
INTEGRANTES:
PINEDA GUERRERO KEVIN ERICK
TLAPALE MARTINEZ ALFREDO
VÁZQUEZ LEÓN ITZEL GUADALUPE

SEMESTRE

2021-2
OBJETIVOS
Conocer las partes principales, el manejo de un Espectrómetro UV-Visible y
verificar las condiciones actuales del equipo.

PARTICULARIDADES
• Identificar las partes principales de un espectrofotómetro Uv-Visible de
doble haz, Marca Lambda 25 Uv-Vis Spectrometer, Marca: Perkin Elmer
Intrumentes.
• Conocer el manejo del espectrofotómetro Uv-Vis.
• Analizar la documentación sobre la metrología y calibración Intrumental,
calibración de los espectrofotómetros utilizados en el laboratorio, según la
normativa para los laboratorios de calibración (ISO 17025/2005) y
organismos oficiales relacionados.
• Calibrar el espectrofotómetro Uv-Vis Spectrometer, Marca: Perkin Elmer
Instrumentes.
• Analizar los espectrogramas obtenidos experimentalmente y compararlos
con los teóricos para determinar el % de error en las mediciones
experimentales.
• Key words: Rutinas de diagnóstico; calibración, verificar, exactitud
fotométrica, linealidad fotométrica, ancho de banda espectral.

INTRODUCCIÓN
La química analítica es una ciencia de la metrología, sus resultados analíticos
provienen de la medición de distintos parámetros. Para hacer esto posible, se
debe recurrir a una estrategia analítica adecuada: tomar muestras representativas,
aplicar métodos validados, utilizar equipos apropiados que funcionen
correctamente calibrados y validados.
En la química analítica existen principalmente dos tipos de métodos, los
instrumentales y los no instrumentales o clásicos. Independientemente del método
a utilizar, se requiere una calibración del equipo. Posteriormente del método
instrumental que elijas requiere de una calibración metodológica, que asegura que
el procedimiento es válido para el problema concreto que se presente y el analito
que se estudie.
La calibración se puede realizar por tres técnicas:
a) Calibración simple o por estándar externo: Es el más simple, rápido y con
menos problema respecto al método.
 b) Calibración por adición de estándar: Compensa el efecto que pueden
producir otras sustancias a la señal que, mide el equipo.
c) Método del patrón interno: Para aquellos procesos analíticos en los que se
produzcan muchas variaciones entre cada operación y eso causa
resultados analíticos diferentes.
La calidad es la definición en donde habla de las propiedades o características
que sirven para evaluar la calidad analítica. Básicamente existen cuatro acciones
para el aseguramiento de la calidad analítica:

• Calibración del instrumental a usar.

• Validación de métodos.
• Verificación de los instrumentos.
• Realizar controles de calidad.
La calidad es la representación coherente que debe existir entre la información
que el cliente solicita y la que se proporciona en los resultados. Esto se le conoce
como ¨Fit-for.purpose¨.
Todos los laboratorios de química analítica, deberán asegurar su calidad y
competencia mediante el cumplimiento de los sistemas de calidad vigentes, siendo
la norma ISO 9001/2008 y la norma ISO 17025/2005 necesarias implantación y
cumplimiento en el ámbito analítico.

Calibración de un espectro UV-Visible

Un espectrofotómetro mide la cantidad de energía radiante absorbida por las
moléculas de una muestra en función de las longitudes de onda específicas. La
energía absorbida o absorbancia (A) y la longitud de onda (λ) son los parámetros
que intervienen y los que hay que considerar a la hora de calibrar el equipo cuyos
componentes se esquematizan con la siguiente figura.
Para asegurar la trazabilidad de las mediciones realizadas con un
espectrofotómetro se calibra el instrumento mediante una serie de pruebas. Cada
prueba usa un patrón distinto.
Los patrones son disoluciones de óxido de holmio en acido perclórico, sulfato de
cobre en ácido sulfúrico, dicromato de potasio en ácido sulfúrico y nitrito de sodio.
Se realizan las siguientes pruebas para el procedimiento de calibración.
1. Exactitud de la longitud de onda: Este parámetro se verifica midiendo el
estándar de óxido de holmio (III) en acido perclórico, con sus picos
definidos, comparándolo con la longitud de onda de dichos picos obtenidos
al medir con el espectrofotómetro.
2. Exactitud fotométrica: se obtiene comparando la absorbancia de las
disoluciones de referencia (sulfato de cobre en ácido sulfúrico, dicromato de
potasio en ácido sulfúrico) con la obtenida en el instrumento, a las mismas
longitudes de onda. Es recomendable comparar a distintas longitudes de
onda.
3. Luz difusa o parasita: es la radiación electromagnética de la longitud de
onda distinta a la seleccionada que se detecta. Esta luz difusa cauda
disminución de la absorbancia y reduce el rango lineal del instrumento. Se
utiliza una disolución de nitrito de sodio medida a tres longitudes de onda.
4. Linealidad fotométrica: El análisis de la linealidad fotométrica sirve para
establecer el rango de absorbancia en el que el espectrofotómetro tiene
respuesta lineal. Como patrones se utilizan disoluciones de dicromato
potásico a distintas concentraciones, utilizando una disolución de ácido
sulfúrico para el ajuste del equipo.

Material volumétrico

• Matraz aforado de 100 ml.

• Matraces aforados de 10 ml.
• Pipeta graduada de 1 ml.
• Pipeta graduada de 5 ml.
Material de referencia

• Filtro de Oxido de Holmio.

• Celdas de cuarzo paso óptico de 1 cm.
Equipo

• Espectrofotómetro UV-Visible.
Reactivos

• Ácido Sulfúrico Q.P

• Benceno Q.P
• Dicromato de potasio Q.P
Preparación de Soluciones.

• Ácido sulfúrico 0.2 N: Medir 2.69 ml de 𝐻2 𝑠𝑜4 y aforarla a 500 ml con agua
destilada.
• Dicromato de potasio 100 ppm: Pesar 0.01 g de dicromato de potasio y
aforar a 100 ml de 𝐻2 𝑠𝑜4

• Metodología
Reactivos, Materiales y Equipos
1. Preparar una solución de K2Cr2O7 a concentraciones de 25,50 y 75 ppm a
partir de una solución ¨madre¨ de 100 ppm de K2Cr2O7.
2. Equipo: espectrofotómetro UV-Vis de doble haz, modelo lambda 25 UV-Vis
Spectrometer marca Perkin Elmer; software Lambda 25; celda de cuarzo
pasó óptico 1 cm x 1cm.
3. Partes de un espectrofotómetro:
• Fuente de Luz
• Monocromador
• Porta muestra
• Detector
• Fotodetectores
• Celdas
4. Manual de operación del equipo: lambda 25 UV-Vis Spectrometer. Modelo
Perkin Elmer. Software Lambda 25 em UV winlab.
5. Enceder el equipo
6. Encender la computadora.
7. Ejecutar el programa Lambda 25 en Uv winlab.
8. Dar click en la pestaña SCAN e introducir las condiciones de operación, ver
la tabla 1, de acuerdo al material de referencia empleado.
9. Dar click en la pestaña INST y asignar:
• Modo: ON/OFF
• Lampara: UV y Vis
• Velocidad de barrido
10. Dar click en la pestaña Sample y configurar la gráfica que se genera.
11. Correr el blanco, según el analito a analizar
• Solido: En aire
• Liquido: Disolvente puro
• Gas: Con aire
12. Introducir en el porta muestra la celda de cuarzo con el analito y dar click en
star para iniciar el barrido, la gráfica se genera automáticamente.
13. Cuando se analizan muestras liquidas consecutivas, se debe iniciar con la
de más baja concentración y la siguiente se enjuaga con la muestra a
analizar al menos 3 veces.
14. Formatear espectrograma e imprimir.
15. Condiciones de operación del equipo: LAMBDA 25 UV-Vis Spectrometer.
Modelo Perkin Elmer. Software Lmabda 25 en UV winLab.

FILTRO DE ÓXIDO DE
HOLMIO DISOLUCIÓN DE K2Cr2O7 VAPORES DE BENCENO
(Sólido) (Líquido) (Gas)
Pestaña SCAN Pestaña SCAN Pestaña SCAN

MÁX: 690-220nm MÁX: 450- MÁX: 280-230nm

Ciclo: 1 250nm Ciclo: 1
Int: 1 Ciclo: 1 Int: 1
Ordena MÁX: 0-2.8 Int: 1 Ordena MÁX: 0-1
Data interval: 1 nm Ordena MÁX: 0-1.5 Data interval: 1 nm
Data interval: 1 nm
Pestaña INST Pestaña INST Pestaña INST

Mode: A Mode: A Mode: A

Lamp UV: ON Lamp UV: Lamp UV: ON
Lamp Vis: ON ON Lamp Vis: ON
Velocidad de barrido: 960 Lamp Vis: Velocidad de barrido:
ON 240
Velocidad de barrido:
480
Pestaña SAMPLE Pestaña SAMPLE Pestaña SAMPLE

Identify: Identify: Factor: Identify:

HO 25 1 C6H6 vap
50 1
75 1
 • Datos experimentales
Preparación de la curva estandarizada de K2Cr2O7 a las concentraciones de 25,50 y
75 mg/L en H2SO4 0.2N, a partir de una solución ¨madre¨ de K2Cr2O7. Leidas a una
λmax = 160.5 nm, en un equipo Lambda 235 VIS-Vis Spectrometer, modelo
Oerkin Elmer. Con el software Lambda 25 en Uv winlab.

𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2

No. de disolución Solución madre de K2Cr2O7 Concentración (mg/L)

(ml)
1 2.5 25
2 5.0 50
3 7.5 75

Valores de λ𝑚𝑎𝑥 obtenidos experimentales en la región del Uv.Vis con un cristal

del óxido de Holmio.

No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
de
pico
𝛌𝒎𝒂𝒙 289 296 342 372 430 458 466 472 551 657 669

Valores de λ𝑚𝑎𝑥 obtenidos experimentalmente en la región de UV-Vis con vapores

de benceno.

No. de 1 2 3 4 5 6
pico
𝛌𝒎𝒂𝒙 240.5 245.8 250 255.6 261.8 267.8
 • Tabla de resultados
Valores obtenidos experimentalmente de Absorbancia vs Concentración de 25,50
y 75 mg/L en H2SO4 0.2 N.

No. de disolución Concentración (mg/L) Absorbancia

1 25 0.214
2 50 0.4189
3 75 0.6092

Haciendo una regresión lineal tenemos que:

𝑎 = 0.0079

𝑏 = 0.0188

𝑟 = 0.9997

𝒚 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟕𝟗𝒙 + 𝟎. 𝟎𝟏𝟖𝟖

𝒓𝟐 = 𝟎. 𝟗𝟗𝟗𝟕

Para sacar el %error comparamos λ𝑚𝑎𝑥 𝑡𝑒𝑜𝑟 𝑣𝑠 λexp 𝑚𝑎𝑥 del espectro Uv-Vis de la
curva de estandarización de K2Cr2O7 y a una λ𝑚𝑎𝑥 = 360.5𝑛𝑚.

No. de disolución 𝛌𝒎𝒂𝒙 𝒕𝒆𝒐𝒓 𝛌𝒎𝒂𝒙 𝒆𝒙𝒑 Error %

(nm) (nm)
1 350 360.5 2.4

𝟑𝟔𝟎. 𝟓 − 𝟑𝟓𝟎
%𝑬𝑹𝑹𝑶𝑹 𝑿𝟏𝟎𝟎 = 𝟐. 𝟒
𝟑𝟔𝟎. 𝟓

Para sacar el %error comparamos λ𝑚𝑎𝑥 𝑡𝑒𝑜𝑟 𝑣𝑠 λexp 𝑚𝑎𝑥 del espectro Uv-Vis del
cristal de óxido de Holmio.

No. de 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Pico
𝛌𝒎𝒂𝒙 𝒕𝒆𝒐𝒓 279 287 333.5 360.5 418 445 453 459.5 536 637 648.5
(nm)
𝛌𝒎𝒂𝒙 𝒆𝒙𝒑 289 296 342 372 430 458 466 472 551 657 669
(nm)
%Error 3.46 3.04 2.49 3.09 2.79 2.83 2.79 2.65 2.72 3.04 3.06
%Error disolución 1
𝟐𝟖𝟗 − 𝟐𝟕𝟗
%𝑬𝑹𝑹𝑶𝑹 𝑿𝟏𝟎𝟎 = 𝟑. 𝟒𝟔
𝟐𝟖𝟗

%Error disolución 2
𝟐𝟗𝟔 − 𝟐𝟖𝟕
%𝑬𝑹𝑹𝑶𝑹 𝑿𝟏𝟎𝟎 = 𝟑. 𝟎𝟒
𝟐𝟗𝟔

%Error𝑚𝑎𝑥 𝑝𝑟𝑜𝑚=2.90

Para sacar el %error comparamos λ𝑚𝑎𝑥 𝑡𝑒𝑜𝑟 𝑣𝑠 λexp 𝑚𝑎𝑥 del espectro Uv-Vis de los
vapores de benceno.
No. de 1 2 3 4 5 6
Pico
𝛌𝒎𝒂𝒙 𝒕𝒆𝒐𝒓 237 242.2 247.8 253.6 259.6 266.8
(nm)
𝛌𝒎𝒂𝒙 𝒆𝒙𝒑 240.5 245.8 250 255.6 261.8 267.8
(nm)
%Error 1.46 1.46 0.88 0.78 0.84 0.37

%Error disolución 1
𝟐𝟒𝟎. 𝟓 − 𝟐𝟑𝟕
%𝑬𝑹𝑹𝑶𝑹 𝑿𝟏𝟎𝟎 = 𝟏. 𝟒𝟔
𝟐𝟒𝟎. 𝟓

%Error disolución 2
𝟐𝟒𝟓. 𝟖 − 𝟐𝟒𝟐. 𝟐
%𝑬𝑹𝑹𝑶𝑹 𝑿𝟏𝟎𝟎 = 𝟏. 𝟒𝟔
𝟐𝟒𝟓. 𝟖

%Error𝑚𝑎𝑥 𝑝𝑟𝑜𝑚=0.97
• Observaciones

Dentro de las rutinas de diagnóstico para el equipo, se utilizó oxido de

holmio que es de alta pureza, se programó la longitud de onda máxima, se
observó la ordenada máxima y mínima, que son las absorbancias. Al
observar el espectro de óxido de holmio, se examina los máximos de
absorción que tiene el material. La banda característica se encontró en 466
nm. El filtro se encuentra calibrado a diferentes longitudes de onda; en el
vapor de benceno la banda característica fue de 255.6nm
Es de suma importancia seleccionar la escala de pipeta adecuada de
acuerdo al volumen, la escala deberá ser mayor para así evitar
incertidumbre.
Para la linealidad fotométrica, nos auxiliamos con la solución de K2Cr2O7
en esta muestra la aplicación de la ley de Lambert – Beer está presente
donde la concentración de 75 ppm cuenta con mayor absorbancia. Se
observó que es de vital importancia que la ley anterior es aplicable para luz
monocromática y no es válida para altas concentraciones debido a las
desviaciones.
 • Cuestionario

1. ¿Cuál es el fundamento de los métodos espectroscópicos de análisis?

R: En la interacción de la radiación electromagnética con la materia.
2. ¿Qué se entiende por transición electrónica?
R: El cambio en el estado cuántico de un electrón, es decir cuando pasa un
electrón de su estado basal a su estado excitado.
3. ¿Cuáles son las transiciones electrónicas que se presentan en compuestos
orgánicos?
R: Esto dependerá de la molécula y su estructura:
Transiciones σ → σ*
Transiciones σ → π *
Transiciones π → π*
Transiciones π → σ* (de menor energía que la σ → σ*)
Cuando hay electrones no enlazantes (pares de e- no compartidos) se pueden
producir otros dos tipos de transiciones:
Transiciones n → π*
Transiciones n → σ*.
4. ¿Qué tipo de compuestos se pueden analizar por esta técnica?
R: Compuestos que presente enlaces dobles conjugados.
5. De dos ejemplos de compuestos que absorban en la región UV-VIS.
Proporcione la fórmula desarrollada.
6. Describe brevemente cual es el objetivo de la práctica. Conocer las rutinas
diagnósticas y de igual forma las partes de un espectrofotómetro.
7. Mencione cuáles son las partes que constituyen un espectrofotómetro UV-VIS.
R: Fuente, monocromador, área de muestra, detector, y medidor digital o
registrador
8. Explique cuál es el propósito de calibrar los equipos antes de realizar cualquier
tipo de análisis instrumental.
R: Para tener un estudio analítico correcto y no tener errores de medición.
9. ¿Qué se entiende por barrido espectral?
R: A la interacción de la sustancia a radiación electromagnética de las longitudes
de onda evaluadas, siendo este perfil propio de cada sustancia.
10. ¿Qué información analítica proporcionan los resultados de un espectrograma?
R: Las concentraciones a través de longitudes de onda.
11. ¿En qué tipo de industrias se puede aplicar la técnica UV-VIS?
R: Alimentaria, pinturas, farmacéuticas, plásticos.

• Conclusiones
Pineda Guerrero Kevin Erick
Al realizar la siguiente practica se llevaron a cabo un análisis de una muestra
madre de dicromato de potasio utilizando un espectrofotómetro a distintos
volúmenes y concentraciones, comparamos la longitud de onda teórica y
experimental, de esa manera calculamos un porcentaje de error para el óxido de
holmio y para vapor de benceno, al calcular los porcentajes de error podemos
concluir que tiene mayor porcentaje el óxido de holmio que el vapor de benceno.
En todas las disoluciones hubo variantes error no se comportó constante.

Tlapale Martínez Alfredo

Las rutinas de diagnóstico permiten conocer si los equipos se encuentran
calibrados o no, ya que al tener una mala calibración se puede caer en obtener
datos analíticos erróneos.
De igual forma no se puede manejar un espectrómetro UV-VIS si no se conocen
sus partes y que tipo de lámpara se ocupa en cada zona, ya que comúnmente la
lampara de deuterio es utilizada es la zona UV. La curva de calibración que se
hizo con las soluciones de K2Cr2O7 nos permiten conocer si dicho equipo sigue la
ley de Lambert-Beer, como se puedo observar a una mayor concentración se tiene
una mayor absorbancia. Es importante decir que para manejar este tipo de equipo
siempre deben hacerse estas rutinas ya que si no es así no se puede tener una
seguridad de que el equipo este trabajando al 100%, de igual forma es
recomendable conocer el software que maneja dicho equipo, un parámetro
erróneo puede darnos espectros equivocados.

Vázquez León Itzel Guadalupe

Es importante realizar las rutinas de diagnostico en el equipo para la función de
manera correcta y eficaz, ya que con las gráficas es fácil identificar si algo está
fallando. La curva de calibración que se realizó con la solución de K2Cr2O7 nos
permitió conocer que sigue la ley de Lambert-Beer, y de igual manera se logra
concluir que a mayor concentración, mayor absorbancia.
Es fundamental conocer el equipo y estar familiarizado con él, a partir de la
práctica se conocieron las partes principales del mismo como: fuente de luz,
monocromador, detectores, amplificador de señal y el ordenador para leer los
sistemas de lecturas.

Bibliografía
• Biomotek. (2018). Espectrofotómetro . 2021, de Biomotek Sitio web:
https://biomotek.com/?gclid=EAIaIQobChMI3oroytjC7wIVBZlkCh139QNlEAEYAS
AAEgIs7PD_BwE&fbclid=IwAR2RHXD-
ysE9N8DmW9wXpU9ljyIO9dUxrWyJwQdfMooZej-97-ExO-MB9RA
• Grau Cairo Luis, Colectivo de Autores, Organización Dirección y Operaciones
Fundamentales en el Laboratorio de Química/ Luis Grau Cairo_ La Habana
Editorial Pueblo y Educación.1982_ 619p