El Ion Calcio - Su Regulación y Función en La Célula SS Pancreática

18/3/2021 El ion calcio: su regulación y función en la célula ß pancreática
Revista Cubana de Endocrinología Mi SciELO

versión On-line ISSN 1561-2953
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Rev Cubana Endocrinol v.14 n.3 Ciudad de la Habana sep.-dic. 2003
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El ion calcio: su regulación y función en la célula ß SciELO Analytics
pancreática Google Scholar H5M5 (2018)
Dr. Oscar Díaz Horta 1
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En el presente trabajo se realiza una revisión del conocimiento actual sobre Referencias del artículo
la regulación de las concentraciones intracelulares del ion calcio, los Como citar este artículo
principales mecanismos de entrada y salida de este a través de la
membrana plasmática, con especial atención en el intercambiador SciELO Analytics
Na+/Ca2+, y la función de este importante segundo mensajero en la
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secreción de insulina, así como la muerte celular programada de las células
ß pancreáticas. Indicadores
Palabras clave: Calcio, intercambio Na+/Ca2+, apoptosis, insulina. Links relacionados
El ion calcio es utilizado por las células para regular múltiples actividades. Al Compartir
inicio de la vida, un incremento rápido de Ca+2 intracelular durante la
fertilización desencadena el desarrollo de un nuevo organismo.1 Otros
Otros
Una vez diferenciadas las células, el Ca2+ es utilizado como una señal
intracelular para el control de diferentes procesos, entre los cuales se
encuentran la contracción muscular, la secreción, el metabolismo, la Permalink
excitabilidad y la proliferación celular. El Ca2+ no puede ser degradado
como ocurre con otras moléculas que actúan como segundos mensajeros,
por lo tanto, las células regulan estrictamente las concentraciones intracelulares de este ion. En el agua de mar,
donde se originó la vida, la concentración del otro catión divalente más común, el Mg2+, es mayor que la del
Ca2+, sin embargo, este no es excluido del citoplasma en la magnitud que ocurre con el Ca2+. Una explicación
para esta singularidad es la capacidad que posee el Ca2+, en mayor grado que el Mg2+, de precipitar al fosfato,
el cual es empleado por las células para almacenar y utilizar la energía. Las principales fuentes de Ca2+ son el
medio extracelular y algunos organelos intracelulares: el retículo endoplasmático (RE) o el retículo
sarcoplasmático (RS) en las células musculares.1
Se plantea que el mecanismo general de acción del Ca2+ es el siguiente: cuando las concentraciones del Ca2+
citoplasmático se mantienen en niveles bajos (10-00 nmol/L), las células permanecen quiescentes; sin embargo,
cuando esas concentraciones se elevan (500-1 000 nmol/L) dichas células se activan para realizar sus funciones
específicas. Existen sensores intracelulares responsables de la detección de los aumentos de Ca2+, como son la
calmodulina (CAM) y la troponina C (TnC). Esta señal es traducida en respuestas específicas de las células.1
La activación de las células está determinada por un balance entre mecanismos Ca2+-ON y Ca2+-OFF (figura 1).
Como se detalla a continuación, todos los elementos que promueven la entrada de Ca2+ hacia el citosol forman
parte de los mecanismos ON, y los que realizan la función contraria se incluyen en los mecanismos OFF.
scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1561-29532003000300008 1/19
FIG. 1. Resumen de los principales mecanismos ON y OFF que regulan la concentración intracelular de Ca2+. Los
estímulos elevan su concentración mediante la activación de los mecanismos ON, los cuales promueven la
entrada de Ca2+ externo y/o la liberación de Ca2+ de los reservorios intracelulares (RE/RS). Los cambios en
Ca2+ son atenuados por tampones situados ya sea en el retículo endoplasmático, como en el citoplasma. Los
mecanismos OFF devuelven los bajos niveles o de "reposo" de Ca2+ mediante su extracción hacia el medio
extracelular o hacia los reservorios intracelulares. Los efectos de una concentración elevada de Ca2+ están
mediados por sensores como la calmodulina (CAM) o la troponina C (TnC) para la regulación de una gran
variedad de actividades celulares.
Mecanismos de entrada del Ca2+ hacia el citoplasma (ON)

Las células presentan dos fuentes principales de Ca2+: la extracelular y la existente en organelos intracelulares.
El reservorio más importante de Ca2+ intracelular es el retículo endoplasmático, el cual es denominado retículo
sarcoplasmático en las células musculares. Por ser la concentración de Ca2+ en el exterior de la célula ~20,000
veces mayor que en el citoplasma y que el interior de la célula, y está cargado negativamente con respecto al
exterior, existe un gradiente electroquímico que favorece la entrada de Ca2+. Los 2 grupos de canales
encargados de la liberación de Ca2+ hacia el citosol son: los canales de Ca2+ de la membrana plasmática1 y los
canales de Ca2+ intracelulares.1,2 El primer grupo se compone de los canales sensibles a voltaje (VOCs), los
canales regulados por ligando (ROCs) y los canales activados por liberación de Ca2+ (CRAC). En el segundo
grupo se incluyen los canales intracelulares: los receptores de inositol 1,4,5-trifosfato2 y los receptores de
rianodina (RyRs).2 Además, el Ca2+ puede salir del retículo endoplasmático a través de un mecanismo
denominado "fuga de Ca2+".3
En las células no excitables, como son las sanguíneas, los hepatocitos y las endoteliales, el incremento de las
concentraciones de Ca2+ se realiza predominantemente a través de la vía del inositol 3-fosfato (InsP3). Existen
dos clases de receptores que conducen a la liberación de InsP3 por diferentes vías: los receptores que se acoplan
a la proteína G (GCR) y los receptores con función de tirosino-quinasas (RTK). Los receptores GCR activan a la
fosfolipasa Cß mientras que los RTK realizan la misma función sobre la fosfolipasa Cg. Ambas fosfolipasas
catalizan la conversión del fosfatidilinositol (4,5) difosfato en InsP3 y diacilglicerol.4 El InsP3 actúa como un
segundo mensajero mediante su unión al receptor tetramérico del InsP3 (~ 310 kD a cada subunidad) situado en
la membrana del retículo endoplasmático y este produce la liberación de Ca2+ almacenado en este organelo.1 La
liberación de Ca2+ por esta vía puede incrementar la concentración de Ca2+ citosólico desde ~0,1 hasta ~1
µmol/L. El receptor de InsP3 se encuentra expresado, en mayor o en menor medida, en todos los tipos celulares.
La unión del InsP3 a cada subunidad del receptor ocurre en la región N-terminal cargada positivamente porque
esta es rica en arginina y lisina. Esta unión puede ser bloqueada por la heparina y no se conoce otro antagonista
efectivo hasta el momento. El receptor de InsP3 posee una homología parcial con el receptor de rianodina,
mientras que esta semejanza no es significativa en relación con los canales de Ca2+ sensibles a voltaje. La
región N-terminal de este receptor contiene dos sitios de unión a ATP y un sitio de unión al Ca2+ 5. La regulación
de la actividad del receptor de InsP3 es compleja, pues este se desensibiliza por el propio InsP3, es sensible a las
concentraciones de Ca2+ citoplasmático y puede ser fosforilado por la protein-quinasa A.6 La sensibilidad de este
receptor es mayor a concentraciones de InsP3 entre 0,5 y 1 µmol/L; además, no es sensible al InsP3 a muy altas
o muy bajas concentraciones de Ca2+ citoplasmático.6,7
Las células excitables, como son las nerviosas y musculares, además de poseer el sistema descrito anteriormente
para las no-excitables, poseen canales de Ca2+ sensibles a voltaje. Estos canales de Ca2+ producen incrementos
superiores de la concentración citosólica de Ca2+ en comparación con los receptores del retículo endoplasmático.
Esto permite que las proteínas cercanas a la superficie interna de la membrana plasmática, las cuales constituyen
sensores de las variaciones de la concentración de Ca2+, inicien funciones especializadas como son la exocitosis
de neurotransmisores en las neuronas y la contracción en el músculo. La despolarización a partir del potencial
basal de membrana (entre -90 y -70 mV, generalmente) inicia cambios conformacionales en los canales de Ca2+
dependientes de voltaje, específicamente en regiones especiales sensibles a voltaje denominadas S4.1 Estos
cambios conformacionales permiten el flujo de Ca2+ a través de la membrana plasmática. Para el Ca2+, el
balance entre las fuerzas químicas y eléctricas es equivalente a la fuerza eléctrica resultante de un voltaje
aproximado de +150 mV, por lo tanto, existe un gradiente favorable para la entrada de este ion en todos los
potenciales de membrana fisiológicos (desde -90 hasta +60 mV). La actividad de los canales de Ca2+ sensibles a
voltaje está autolimitada, ya que estas proteínas se inactivan rápidamente después de la despolarización. Por otra
parte, una despolarización de mayor magnitud sólo provocaría la disminución de la fuerza electroquímica que
permite la entrada de Ca2+ al citoplasma. En las células excitables, la entrada de Ca2+ a través de los canales
de Ca2+ sensibles a voltaje produce directamente la activación de los receptores de rianodina, los cuales
provocan la liberación del Ca2+ acumulado en el retículo endoplasmático.1 El receptor de rianodina es
tetramérico y está formado por subunidades de ~560 kDa de peso molecular relativo. Su función es modulada
por Ca2+, Mg2+ y ATP; sin embargo, la inhibición ejercida por los primeros iones ocurre en el rango de los
mmol/L de concentración. Relativamente, el receptor de rianodina no es selectivo para los cationes aunque sí
excluye a todos los aniones.1
A principio de la década del 90, fue descrito que el vaciamiento de los reservorios intracelulares de Ca2+ inducía
la entrada de este ion a través de la membrana plasmática por un mecanismo desconocido hasta ese momento.8
Este fenómeno se denominó entrada capacitiva de Ca2+. Por ejemplo, la estimulación de los receptores
muscarínicos tipo 3, los cuales incrementan las concentraciones de InsP3 a través de la activación de la
fosfolipasa Cß, producen una elevación rápida y durante un período corto de las concentraciones de Ca2+ en el
citosol como consecuencia de la salida de Ca2+ del retículo endoplasmático.9 Sin embargo, las altas
concentraciones de Ca2+ citosólico se mantienen por un tiempo prolongado mediante mecanismos de entrada
capacitiva de Ca2+. El potencial de membrana puede influir en este proceso, pues la hiperpolarización puede
incrementar la concentración de Ca2+ en el citoplasma. Se ha propuesto que el papel fisiológico de la entrada
capacitiva de Ca2+ es permitir el retorno del Ca2+ a los reservorios intracelulares de una forma más rápida. La
entrada de Ca2+ a través de la membrana plasmática en ausencia de despolarización ha sido descrita por varios
autores10-12 y esta pudiera ocurrir a través de los denominados canales activados por liberación de Ca2+
(CRAC); sin embargo, ninguno de estos supuestos canales iónicos ha sido purificado o clonado. Por otra parte, la
corriente neta de Ca2+ relacionada con el mecanismo de entrada capacitiva es ~ 5 pA en una célula entera, a
diferencia de los cientos de pA de corriente neta que atraviesan la membrana plasmática a través de los canales
de Ca2+ sensibles a voltaje. La entrada capacitiva de Ca2+ es, además, inactivada por altas concentraciones de
Ca2+ en el citoplasma.
Aunque el incremento de Ca2+ citosólico producido por la salida de Ca2+ del retículo endoplasmático ocurre
fundamentalmente a través de los receptores de InsP3 y rianodina, se ha descrito la existencia de un fuga basal
de Ca2+ el cual es independiente de estos mecanismos.3 Por ejemplo, la inhibición de la Ca2+-ATPasa del
retículo endoplasmático como consecuencia de la exposición a la tapsigargina o la eliminación de ATP, da lugar a
la liberación relativamente rápida del 92 % del Ca2+ secuestrado en este organelo en células ß de ratón.13
Aunque la principal función del intercambiador Na+/Ca2+ es el transporte de Ca2+ desde el citoplasma hacia el
medio extracelular, esta proteína también contribuye a la entrada de Ca2+ mediante un fenómeno denominado
intercambio Na+/Ca2+ en modo reverso. Como se describe posteriormente, el intercambio Na+/Ca2+ en el
modo reverso puede ocurrir en determinadas condiciones fisiológicas, por ejemplo, durante la despolarización de
la membrana o el incremento de la concentración intracelular del ion sodio.
En la célula ß pancreática, los mecanismos de entrada de Ca2+ hacia el citoplasma son similares a los presentes
en las células excitables, aunque los primeros muestran algunas particularidades importantes. Por ejemplo, la
exposición a la cafeína (10 mmol/L) o a la rianodina (1 µmol/L) no produce la liberación del Ca2+ almacenado en
el retículo endoplasmático de las células ß, y esto ocurre por la ausencia de receptores de rianodina;13 sin
embargo, estas células sí poseen canales de Ca2+ sensibles a voltaje en la membrana plasmática, característica
típica de las células excitables. Por consiguiente, la entrada de Ca2+ a través de estos canales, inducida
indirectamente por las altas concentraciones de glucosa extracelular y el incremento del contenido de ATP
intracelular, lejos de provocar un aumento adicional de la concentración de Ca2+ citosólico por el vaciamiento del
retículo endoplasmático, facilita la entrada de Ca2+ a este organelo a través de la Ca2+-ATPasa localizada en su
membrana. Por otra parte, y a diferencia de las células musculares, la membrana del retículo endoplasmático de
las células ß exhibe altos niveles de fuga pasiva de Ca2+, y este fenómeno puede ser observado cuando las
células se exponen a inhibidores de la Ca2+-ATPasa del retículo endoplasmático o se les limita la disponibilidad
de ATP.13 Estas peculiaridades de la célula ß en cuanto al manejo del Ca2+ se ajustan estrechamente a su
función principal, la producción y secreción de insulina. En este sentido, un grupo de investigadores reveló la
importancia de la presencia de un alto contenido de Ca2+ en el retículo endoplasmático para el correcto
procesamiento de la proinsulina y la transferencia de este precursor a los gránulos secretores.13
Tampones y sensores de Ca2+ intracelular

Las células poseen una gran variedad de proteínas que unen Ca2+, y estas contribuyen a las señales mediadas
por Ca2+, ya sea cuando actúan como tampones del Ca2+ libre, que modulan la respuesta celular, o cuando lo
hacen como sensores que median el papel del Ca2+ como mensajero intracelular (figura 1).14 Las proteínas
capaces de funcionar como tampones de Ca2+ se encuentran tanto en el citoplasma como en el interior del RE.
Sólo una pequeña proporción de moléculas citoplasmáticas capaces de unir Ca2+ actúan como sensores, el resto
parece funcionar exclusivamente como tampones. El Ca2+ unido a estos tampones se encuentra en equilibrio con
el Ca2+ citoplasmático libre y como los mecanismos de extrusión disminuyen la concentración del Ca2+
citoplasmático, la cantidad de Ca2+ unido a estos tampones también disminuye.5
La calmodulina es el principal sensor de Ca2+ en las células ß.16 Esta proteína de 17 kDa de peso molecular
relativo es un receptor intracelular ubicuo de Ca2+ el cual contiene, como el elemento estructural que une Ca2+
de manera específica, a la denominada mano-EF.17 El término mano-EF describe a dos secuencias de estructura
helicoidal las cuales se orientan perpendicularmente entre ellas y están conectadas por un lazo que contiene
residuos aminoacídicos con alta afinidad por el Ca2+.
Las proteínas que contienen este elemento estructural son denominadas proteínas de mano-EF.18 La calmodulina
contiene 4 elementos del tipo mano-EF y todos pueden unir Ca2+ con una afinidad entre 10-5 y 10-6 mol/L con
alguna cooperatividad y una leve dependencia de las concentraciones de Mg2+. Después de la unión del Ca2+, la
calmodulina es capaz de interactuar con algunas proteínas dentro de las que se destacan las protein-quinasas
dependientes de calmodulina/Ca2+. Las regiones de interacción con la calmodulina/Ca2+ de estas proteínas no
constituyen secuencias conservadas, aunque generalmente son estructuras helicoidales a con un alto contenido
de aminoácidos básicos.
La calbindina-D28 es otra proteína de la superfamilia de proteínas de mano-EF. Esta posee 6 elementos

estructurales del tipo mano-EF pero el sexto elemento es aberrante y no une Ca2+. Se sugiere que la calbindina-
D28 cumpla la función de tampón de Ca2+ citoplasmático en la célula ß, pues no se han encontrado enzimas que
interactúen con ella.19
Desde el descubrimiento de la calmodulina como la principal proteína que une Ca2+ en las células ß
pancreáticas16 se sugirió que las protein-quinasas dependientes de Ca2+/calmodulina (quinasas CaM) eran las
principales mediadoras de la acción del Ca2+ como segundo mensajero. Seguidamente, se observó actividad de
la quinasa de la cadena ligera de la miosina (MLCK) en preparaciones de células de islotes pancreáticos,20 lo cual
indicaba que la fosforilación de la miosina ejercía una influencia en la secreción de insulina a través de la
modulación de la interacción actina-miosina;20,21 sin embargo, recientemente se describió que la acción de la
MLCK se limita a promover la movilidad de los gránulos secretores proximales.22 Contemporáneamente, se
encontró que las células ß poseían otra enzima con actividad de quinasa dependiente de Ca2+/calmodulina, la
cual fosforilaba proteínas diversas.23,24 Se determinó que esta proteína era la denominada quinasa CaM II y su
activación provocada por secretagogos de insulina se correlacionaba con la secreción de esta hormona.25 A pesar
de que la quinasa CaM II es una enzima que puede fosforilar varias proteínas, su función puede ser limitada por
su localización intracelular. En la célula ß, la quinasa CaM II se localiza en los gránulos secretores,26 lo cual indica
la participación específica de esta enzima en el proceso de secreción de insulina. Para conocer la relevancia de la
activación de la quinasa CaM II en la secreción de insulina, se identificaron las proteínas que son fosforiladas por
esta enzima, además de los efectos que las modificaciones de estas pudieran tener en su función. La sinapsina I
y la MAP-2 son los únicos substratos de la quinasa CaM II validados hasta la actualidad en la célula ß27,28 y
estas realizan funciones similares en la secreción neuronal.29,30 La última etapa de la exocitosis de la insulina
comienza con la interacción de proteínas que se encuentran en las vesículas secretoras (v-SNARE) y la membrana
plasmática (t-SNARE).31 Este complejo de anclaje, en realidad, es un receptor que reconoce a la NSF (proteína
de fusión sensible a la N-etil-maleimida) y a la SNAP (proteína de adherencia a la NSF soluble). La NSF posee la
capacidad de hidrolizar ATP y suministra la energía requerida en la formación de vesículas competentes
(denominadas vesículas "iniciadas") para la fusión con la membrana plasmática.32 La fusión de los gránulos
secretores a la membrana plasmática es independiente de protein-quinasas y se piensa que este proceso ocurra
por la acción directa del Ca2+ a través de proteínas que unen complejos Ca2+/fosfolípidos, como son la
sinaptotagmina 33 y la sincollina.34 Para la fusión de los gránulos secretores a la membrana plasmática, las
concentraciones de Ca2+ deben estar en el orden de los µmol/L y es muy probable que estas se alcancen en esta
zona, pues los canales de Ca2+ tipo-L se concentran en las regiones de la membrana plasmática donde la
exocitosis es más activa.35 Sólo una mínima fracción (~1 %) de los gránulos secretores se encuentran en el
estado de vesículas "iniciadas"36,37, o sea, listos para fusionarse con la membrana plasmática; sin embargo,
esta pequeña proporción de vesículas competentes puede contener la insulina suficiente para suplir la
denominada primera fase de liberación de insulina.36 Por su parte, la secreción prolongada de la hormona
depende del reclutamiento de gránulos de los reservorios adicionales o de reserva donde la quinasa CaM II
desempeña un papel importante.
La fosforilación de la sinapsina I por la quinasa CaM II ha sido propuesta como el mecanismo clave en el
reclutamiento de vesículas sinápticas, en células neuronales, para la liberación de su contenido hacia el medio
extracelular. En la célula ß pancreática, la sinapsina I es fosforilada por la quinasa CaM II cuando las
concentraciones de Ca2+ citoplasmático se elevan a niveles que se correlacionan con la secreción de
insulina.28,38
El proceso de ensamblaje y el desensamblaje de los microtúbulos es un factor importante en la secreción celular.

La estabilidad de estas estructuras es controlada por el estado de fosforilación de proteínas asociadas a los
microtúbulos.39 La fosforilación de la proteína MAP-2 por la quinasa CaM II reduce su afinidad por la tubulina y
favorece la ruptura del microtúbulo.30 La MAP-2 aparentemente desempeña un papel importante en la secreción
de insulina, pues se determinó que los gránulos secretores purificados sólo interactúan con los microtúbulos en
presencia de MAP-2 exógena.40 Además, la utilización del agente fosfato de estramustina, el cual interactúa
selectivamente con el dominio de unión de la MAP-2 con los microtúbulos, es capaz de inhibir la secreción de
insulina.41 La fosforilación de la MAP-2 también puede regular la secreción de insulina por su influencia sobre la
interacción de los microtúbulos con los microfilamentos de actina.42,43 En la célula ß, los microfilamentos forman
una red que actúa como una barrera que impide la migración de los gránulos secretores hacia la membrana
plasmática, aunque también puede proveer la fuerza motriz de dicha migración a través de su contracción cuando
la célula es estimulada.44 El reordenamiento de la red de actina cortical es dependiente de Ca2+ en células
neuroendocrinas.45
La quinasa CaM II posee la capacidad de autofosforilarse. Esta característica permite que la enzima pueda
fosforilar substratos durante un cierto tiempo posterior al cese del estímulo, lo cual es importante e incluso crítico
para la función de la célula ß.41 Por ejemplo, la célula ß para responder apropiadamente a estímulos repetidos
requiere de adecuadas reservas de gránulos secretores. Por lo tanto, la activación de la quinasa CaM II es
importante no sólo para el sustento de la denominada segunda fase de liberación de insulina, sino también para
el reaprovisionamiento de las reservas de gránulos después que la estimulación cesa. La quinasa CaM II es
desfosforilada por la proteína-fosfatasa I, pero la inactivación total de esta ocurre alrededor de 5 minutos
después que el estímulo finaliza.46
La calsecuestrina es el principal tampón de Ca2+ en el retículo sarcoplasmático de los músculos estriados, y su

función principal es el almacenamiento de Ca2+ en este organelo.47 Esta proteína de 45 kDa de peso molecular
relativo facilita el transporte de Ca2+ desde los sitios de entrada a través de la Ca2+ ATPasa del retículo
sarcoplasmático hasta los sitios de liberación a través de los receptores de rianodina. La calsecuestrina, además
de unir Ca2+ con una baja constante de disociación (400-600 µmol/L en presencia de KCl 150 mmol/L y 100
µmol/L en presencia de KCl 20 mmol/L) y una alta capacidad (40-50 mol/mol), posiblemente neutraliza los
efectos potencialmente negativos de las altas concentraciones de Ca2+ sobre la función del retículo
sarcoplasmático (ej. la inhibición de la Ca2+ ATPasa).48 El punto isoeléctrico de este tampón es pH 3,75 y posee
más de un 30 % de residuos ácidos. La calsecuestrina se expresa también en el músculo liso y en otros tipos
celulares como las neuronas e incluso en células de plantas.15
La calreticulina, cuyo peso molecular relativo es de 60 kDa, se considera la proteína homóloga de la

calsecuestrina en células no musculares, y aunque está presente en el retículo endoplasmático a altas
concentraciones, también se expresa en el núcleo celular. La calreticulina contiene 37 residuos ácidos en el
dominio cercano al extremo carboxilo-terminal y une Ca2+ de dos modos: con alta capacidad (25 mol/mol) y
baja afinidad (Kd ~ 250 µmol/L) y con baja capacidad (1 mol/mol) y alta afinidad (Kd ~ 1 µmol/L). El extremo
carboxilo terminal culmina con la secuencia señal KDEL (lisina-ácido aspártico-ácido glutámico-leucina). Esta
secuencia interactúa con el receptor KDEL, y por lo tanto, la calreticulina es retenida mayoritariamente en el
retículo endoplasmático. Además de su función como tampón de Ca2+, la calreticulina realiza otras funciones,
dentro de las cuales se destacan la regulación de la proliferación celular y la transcripción génica.49
Mecanismos de extrusión del Ca2+ citoplasmático (OFF)

Una vez que el Ca2+ citoplasmático alcanza el nivel umbral para generar señales de activación de la célula, se
desencadenan los procesos que promueven el retorno al estado basal de la concentración de Ca2+. Estos
procesos son muy activos, pues deben extrudir no sólo el Ca2+ libre sino también el Ca2+ unido a tampones y
sensores cuando el catión se disocia de estos. La eliminación del Ca2+ citoplasmático es realizado por bombas e
intercambiadores.
Las Ca2+-ATPasas
Las células disponen de 2 familias de Ca2+-ATPasas: la Ca2+-ATPasa de la membrana plasmática (PMCAs)50 y la
Ca2+-ATPasa del retículo sarco/endoplasmático (SERCAs),15 cuyas funciones son transportar el Ca2+ introducido
en el citoplasma hacia el medio extracelular o hacia el retículo endoplasmático, respectivamente. Ambas Ca2+-
ATPasas utilizan el ATP como fuente de energía para transportar Ca2+ contra el gradiente electroquímico
existente a través de las membranas donde estas se localizan.50 Ellas son miembros de las ATPasas tipo P, pues
forman un intermediario covalentemente fosforilado durante el ciclo de reacción.15,50
La PMCA es una proteína de ~135 kDa de la cual se han descrito hasta la actualidad 4 isoformas. Cada isoforma
de la PMCA puede mostrar variabilidad estructural, la cual es generada por splicings alternativos de los
transcriptos primarios.51 Esta proteína parece estar expresada en todas las células eucarióticas y se considera
que constituye el principal transportador de Ca2+ de alta afinidad localizado en la membrana plasmática.52 La
PMCA posee 10 segmentos que atraviesan la membrana plasmática, mientras que los extremos carboxilo y amino
se localizan en la parte citoplasmática de esta. La mayor parte de la PMCA se encuentra localizada hacia el citosol
y consiste en 3 grandes fragmentos: un lazo intracelular limitado por los segmentos transmembrana 2 y 3, otro
entre los segmentos 4 y 5 y finalmente una larga "cola" a continuación del último segmento transmembrana. El
segundo lazo (constituido por ~400 residuos) contiene el dominio catalítico el cual incluye el sitio de unión del
ATP y el residuo de aspartato que forma el intermediario acil fosfato durante la hidrólisis del ATP. La extensa
"cola" carboxiterminal constituye el principal dominio regulatorio de la PMCA.53 El complejo Ca2+-calmodulina se
une a una secuencia situada a una distancia de ~40 aminoácidos posterior al último segmento transmembrana.
En ausencia de Ca2+-calmodulina esta secuencia actúa como un dominio autoinhibitorio, pues interactúa con dos
sitios situados en el primer y segundo lazos citosólicos, mientras mantienen a la proteína en un estado inactivo.
Cuando se incrementa la concentración de Ca2+ en el citosol, aumenta también la concentración del complejo
Ca2+-calmodulina, el cual se une con alta afinidad al sitio autoinhibitorio. Consecuentemente, la PMCA se libera
de la autoinhibición y su actividad se recupera. La Km para el Ca2+ de la PMCA es 0,4-0,7 µmol/L en presencia
de Ca2+-calmodulina.54
La estructura de la SERCA se asemeja considerablemente a la estructura de la PMCA. La diferencia estructural

principal entre ambas bombas está confinada a la "cola" carboxi-terminal. Este segmento es mucho más pequeño
en la SERCA (~20-50 residuos) que en la PMCA (~70-200 residuos). El peso molecular relativo de la SERCA es de
~110 kDa y transporta 2 iones Ca por cada ATP hidrolizado, a diferencia de la PMCA, la cual transporta solo 155.
Mediante estudios de mutagénesis se han identificado 2 sitios (I y II) de alta afinidad por el Ca2+ en la SERCA,
formados en su mayor parte por residuos ácidos conservados en todas las bombas tipo P. Estos sitios se
encuentran localizados dentro de los segmentos transmembrana 4, 5 y 6.56 La PMCA, sin embargo, conserva sólo
el sitio II. La SERCA, además, contiene secuencias que interactúan con la tapsigargina, su inhibidor específico, el
cual fue aislado originalmente de la planta Thapsia garganica.57
El intercambiador Na+/Ca2+
El intercambiador Na+/Ca2+ (NCX) se encuentra en la membrana plasmática y utiliza la energía almacenada en
el gradiente electroquímico de Na+ para extrudir Ca2+ de la célula.58 Este mecanismo de extrusión está más
desarrollado en células excitables como son las neuronas, el músculo cardíaco y liso, y en células
neuroendocrinas, como las ß pancreáticas. El intercambiador Na+/Ca2+ puede, en ocasiones, operar en el modo
reverso y causar influjo de Ca2+, como ocurre en el potencial de acción cardíaco, donde un incremento temporal
de la concentración de Na+ en el citoplasma revierte la dirección de operación del intercambiador, que resulta en
un rápido influjo de Ca2+. Una vez que la concentración de Na+ disminuye en el interior de la célula, el
intercambiador revierte su acción a la extrusión de Ca2+ 59.
El intercambiador Na+/Ca2+ de la membrana plasmática
En la década de los años 60, se obtuvieron las primeras evidencias acerca de la existencia del intercambiador
Na+/Ca2+ en el músculo cardíaco60,61 y desde entonces esta proteína ha sido detectada virtualmente en todos
los tejidos62 y en especies, como el hombre,63 el perro,64 el calamar65 y la mosca de la fruta.66 La función
principal del intercambiador Na+/Ca2+ es la de extrudir Ca2+ desde el citosol, intercambiándolo por Na+, sin
consumo directo de ATP, pues utiliza el gradiente electroquímico favorable del último ion. Este intercambiador
puede actuar en el modo reverso bajo algunas condiciones, permitiendo la entrada de Ca2+ al citosol. Además, el
intercambiador Na+/Ca2+ puede realizar intercambios Ca2+/Ca2+ y Na+/Na+.67 Todas las formas del
movimiento de iones del intercambiador se resumen en la figura 2.
FIG. 2. Diferentes modos de transporte de iones vía el intercambiador Na+/Ca2+.
El intercambio Na+/Ca2+ es electrogénico, pues su estequiometría es 3Na+:1Ca2+. 68,69 Por lo tanto, se crea
una corriente eléctrica hacia el citoplasma por el movimiento de una carga positiva neta. Además, el
intercambiador Na+/Ca2+ es sensible a cambios en el potencial de membrana y al gradiente de Na+.
Recientemente, determinaciones realizadas del potencial reverso de la corriente del intercambio Na+/Ca2+, han
sugerido que la estequiometría de la proteína intercambiadora pudiera ser de 4Na+:1Ca2+ y que esta varía en
dependencia de las concentraciones iónicas de Na+ y Ca2+ en el lado citoplasmático.70
El intercambio Na+/Ca2+ es una reacción que incluye 2 sustratos y su mecanismo puede ser clasificado como
secuencial o consecutivo (ping-pong). En el mecanismo consecutivo, el primer sustrato es unido por la proteína y
el primer producto es liberado antes de la unión del segundo sustrato, mientras que en el secuencial, ambos
sustratos se unen a la proteína antes de la liberación de los productos. Mediante la determinación de las
velocidades iniciales de incorporación de 45Ca2+ dependiente de Na+ a proteoliposomas reconstituidos con el
intercambiador Na+/Ca2+, donde se incorporó el agente quelante EDTA y el estudio de los parámetros cinéticos,
se propuso que el intercambio Na+/Ca2+ se realiza a través de un mecanismo consecutivo.71
De igual forma, la utilización de técnicas electrofisiológicas de alta resolución ha permitido resolver ciclos de
reacciones parciales en el intercambio Na+/Ca2+ 72. Aparentemente, el paso electrogénico de este mecanismo
de transporte iónico incluye la translocación del ion sodio, mientras que el movimiento del Ca2+ es
electroneutral. Esto último implica que 2 cargas negativas pertenecientes a la proteína del intercambiador
Na+/Ca2+ atraviesan el campo eléctrico creado a través de la membrana plasmática mediante cambios
conformacionales que acompañan el transporte iónico.69,73,74 El ciclo de reacción hipotético para el intercambio
Na+/Ca2+ se muestra en la figura 3.75,76
FIG. 3. Mecanismo de intercambio Na+/Ca2+ en el modo directo (extrusión de Ca2+). El intercambiador expone
su sitio de unión a iones hacia el lado citoplasmático (conformación E2), une un Ca2+ y provoca así un cambio de
conformación hacia E1. Posteriormente el Ca2+ es liberado en el lado extracelular, se unen 3Na+ y ocurre un
cambio de conformación de regreso hacia E2. El sitio que une Na+ se expone hacia la cara citoplasmática, se
liberan los iones de Na+, y el intercambiador vuelve a unir Ca2+ para completar el ciclo.
Características moleculares del intercambiador Na+/Ca2+
Clonaje del intercambiador Na+/Ca2+. Hasta el momento, 3 isoformas del intercambiador han sido clonadas en
mamíferos: la NCX1,64 la NCX277 y la NCX3.78 La NCX1 se encuentra ampliamente distribuida en el corazón63 y
en muchos otros tejidos y tipos celulares.62 En cambio, la expresión de la NCX2 y la NCX3 se limita al cerebro y
al músculo esquelético.77,78 Otras isoformas del gen que codifica para el intercambiador Na+/Ca2+ se han
clonado en la Drosophila melanogaster (Dmel/Ncx),66 el nemátodo Caenorhabditis elegans79 y el calamar (NCX-
SQ1).65 La isoforma NCX1 posee sitios de splicing alternativos en 6 exones: A, B, C, D, E y F.80 Sin embargo,
todas las variantes incluyen a los exones A o B, que se excluyen mutuamente. Las isoformas con combinaciones
de exones diferentes presentan variabilidades especie-específicas y expresiones tejido-específicas (tabla 1).80-82
Los tejidos excitables poseen usualmente intercambiadores que contienen el exón A, mientras que en otros
tejidos predomina el exón B. Por ejemplo: en el corazón se encuentra una isoforma única (NCX1.1, combinación
de exones ACDEF) del intercambiador, mientras otros órganos como el riñón, el cerebro, los ojos, etc, presentan
2 o más isoformas.81,83 Hasta el momento, no se conoce el significado fisiológico y funcional de la existencia de
diferentes variantes de splicing descritas.
Tabla 1. Expresión tejido-específica de las diferentes isoformas del intercambiador Na+/Ca2+ en ratas
Isoformas NCX1 1 12 5 4 2 9 7 3 10 11
Exones ACDF ADEF ADF AD BCD BDE BDF BD BDEF BCDEF
Corazón Ö
Músculo
Ö Ö Ö Ö
esquelético
Cerebro Ö Ö Ö Ö Ö
Ojos Ö Ö Ö
Aorta Ö Ö Ö
Riñon Ö Ö
Intestino Ö Ö
Timo Ö Ö
Bazo Ö Ö
Células
Ö Ö
endoteliales
Células b Ö Ö
La isoforma NCX1 fue inicialmente clonada en el corazón del perro, constituida por 2 910 pares de bases que
codificaban para una proteína de 970 aminoácidos, cuyo peso molecular teórico correspondía a 110 kDa.64
Estructura y topología en la membrana del intercambiador Na+/Ca2+. Los modelos iniciales basados en análisis
hidropáticos de la isoforma NCX1 del intercambiador Na+/Ca2+ sugerían que esta proteína poseía 12 segmentos
transmembrana. Posteriormente, se encontró que el segmento hidrofóbico inicial de 32 aminoácidos es un
péptido señal, el cual se separa de la proteína durante su procesamiento inicial en el retículo
endoplasmático.84,85 En la actualidad, se plantea que el intercambiador posee solamente 9 segmentos
transmembrana.86 La región N-terminal de esta proteína está glicosilada en la posición 9, y por lo tanto, es
extracelular. Se ha descrito que la glicosilación85 y la hidrólisis del péptido señal no influyen significativamente en
la función de este transportador.87,88
El intercambiador Na+/Ca2+ posee dos dominios hidrofóbicos que contienen los fragmentos transmembrana.
Estos dominios están separados por un lazo intracelular largo constituido por 550 aminoácidos (figura 4). El
dominio hidrofóbico N-terminal posee 5 segmentos transmembrana y el C-terminal está formado por 4
segmentos de este tipo. Mediante la eliminación del lazo intracelular, se demostró que esta región no es esencial
para el transporte iónico y que los segmentos transmembranas son los responsables de la función de la proteína.
Sin embargo, el lazo intracelular contiene secuencias relacionadas con funciones reguladoras, tales como una
zona de splicing alternativo y un dominio de unión a Ca2+.
FIG. 4. Modelo actual de la topología del intercambiador Na+/Ca2+. La proteína posee 9 segmentos, los cuales
atraviesan la membrana plasmática. El extremo amino-terminal se glicosila y es extracelular. Entre los segmentos
7 y 8 hay un fragmento hidrofóbico con estructura similar al lazo P presente en los canales de K+ (área
sombreada con gris claro, GIG: Gli-Ile-Gli). Las regiones homólogas a, las cuales intervienen directamente en el
transporte iónico y se sitúan en los segmentos transmembrana 2,3 y 7, se indican con sombreado gris oscuro. Se
muestran además en el lazo intracelular la región reconocida por el péptido inhibitorio XIP, el sitio de unión al
Ca2+ regulatorio y la región correspondiente a la secuencia de ARN donde ocurre el splicing alternativo. El lazo
citoplasmático no está dibujado a escala, pues constituye más de la mitad de la longitud de la proteína (550
aminoácidos). Tomado de: (Philipson y Nicoll, 2000).
Existen regiones del intercambiador Na+/Ca2+ que muestran una homología intramolecular. La secuencia que
abarca una parte de los segmentos transmembrana 2 y 3 es muy similar a la secuencia correspondiente al
segmento 7 (figura 4). Las regiones homólogas anteriores se denominaron a-1 y a-2, respectivamente, y
aparentemente desempeñan un papel importante en el transporte iónico. Esta homología indica que durante la
evolución del intercambiador ocurrió un evento de duplicación génica. La actividad de intercambio Na+/Ca2+ es
muy sensible a mutaciones en las regiones a. Por ejemplo, un cambio del aminoácido serina por alanina, cisteína
o treonina en la posición 110 inactiva al intercambiador Na+/Ca2+. Lo mismo ocurre cuando se sustituye el ácido
glutámico por el ácido aspártico o la glutamina en la posición 113. Algunas mutaciones en la región cercana al
citoplasma del segmento 2 alteran la selectividad a iones.89 Normalmente, el intercambiador utiliza solamente el
ion sodio para realizar su función y este requerimiento es muy riguroso. La sustitución de la treonina por la valina
en la posición 103 no solo permite la realización de intercambio Na+/Ca2+, sino también Li+/Ca2+.
Existen también secuencias homólogas en el lazo intracelular. Estas poseen un tamaño aproximado de 60
aminoácidos y se denominaron ß-1 y ß-2. Sin embargo, hasta el presente no se conoce la importancia de estas
regiones en la función de la proteína. Generalmente, el intercambio Na+/Ca2+ no se afecta por mutaciones en el
lazo intracelular, aunque algunas de estas pueden influir sobre las propiedades reguladoras del propio Ca2+ 72.
Por ejemplo, el intercambiador Na+/Ca2+ se inactiva si no hay Ca2+ unido a un sitio localizado en el lazo
intracelular. Algunos autores han propuesto que las concentraciones de Ca2+ inferiores a 100-300 nmol/L 72
pueden inactivar el intercambiador Na+/Ca2+ y otros sugirieron que estas pueden ser menores (20-50
nmol/L).90,91 Si estos últimos valores fueran las concentraciones de Ca2+ requeridas para la activación del
intercambio Na+/Ca2+, entonces el sitio del lazo intracelular regulado por el Ca2+ quizás estuviera siempre
saturado, y su relevancia en la regulación de la función de la proteína fuera insignificante. Si lo fuesen los
primeros, el intercambiador sólo se activaría cuando se elevan las concentraciones de Ca2+ citosólico, como
ocurre durante la contracción del músculo cardíaco. Hasta el presente, no existe un consenso en relación con
estos valores.
Los datos más recientes acerca de la topología del intercambiador se han obtenido mediante experimentos de
mutagénesis, en los que se sustituyeron diferentes cisteínas de la secuencia aminoacídica de la proteína.86,89 El
acceso a las cisteínas, intracelulares y extracelulares, por reactivos que contienen grupos sulfhidrilos ha ayudado
al mapeo de casi la totalidad de la molécula del intercambiador. El mapeo de epítopos también ha aportado
informaciones útiles sobre su topología.92 Los experimentos anteriormente mencionados han permitido conocer
que el intercambiador Na+/Ca2+ posee un enlace disulfuro extracelular entre la cisteína de la posición 792 y la
cisteína de la posición 14 ó 20.93 Además, entre los fragmentos de membrana 7 y 8 (figura 4), se plantea que
existe un lazo parecido a las regiones formadoras de poros presentes en otros canales iónicos. El centro de este
fragmento hidrofóbico posee una secuencia aminoacídica (GIG, glicina-isoleucina-glicina), la cual propicia la
formación de un giro similar al motivo característico del lazo P de los canales de K+. Por otra parte, las regiones
de homología intramolecular, específicamente las a, se encuentran en lados opuestos de la membrana plasmática
(figura 4). Esta disposición es similar a la presente en los canales de agua: aquaporinas.94
Papel fisiológico del intercambiador Na+/Ca2+

El intercambiador Na+/Ca2+ en el control del acoplamiento de la excitación-contracción del músculo cardíaco. En
el músculo cardíaco, el acoplamiento de la excitación-contracción comienza cuando se activan los canales de
Ca2+ tipo L por la despolarización del potencial de membrana.95 La entrada de Ca2+ a través de estos canales
incrementa localmente la concentración intracelular de Ca2+, hasta valores suficientes para activar además la
liberación de Ca2+ del RS por los canales RyR, mediante un fenómeno conocido como "liberación de Ca2+
inducida por Ca2+" 96,97. El intercambiador Na+/Ca2+ extrude el Ca2+ que entra a la célula desde el espacio
extracelular, y este es distribuido por toda la superficie extracelular, incluyendo los túbulos transversales.98 La
eficiencia del intercambiador Na+/Ca2+ como principal ejecutor dentro del mecanismo de extrusión de Ca2+
resulta posiblemente de su densa distribución (aproximadamente de 250 a 400 unidades de intercambiador
Na+/Ca2+ por micrómetro cuadrado).69,99,100
El intercambiador Na+/Ca2+ puede además operar en el modo reverso y suministrar el Ca2+ necesario para
activar los canales RyR, del mismo modo que lo hacen los canales de Ca2+ tipo-L. Esto posiblemente ocurriría
después de la despolarización, cuando los niveles locales de Na+ intracelular pudieran favorecer la entrada de
Ca2+ a través del intercambiador Na+/Ca2+.59,101,102
El retículo sarcoplasmático de los cardiomiocitos está poco desarrollado en muchos mamíferos neonatos. El
acoplamiento excitación-contracción de las células cardíacas depende, en gran medida, de los flujos de Ca2+ a
través de los canales de Ca2+ y el intercambiador Na+/Ca2+ durante el inicio de la vida. De hecho, la expresión
del intercambiador Na+/Ca2+ cardíaco es mayor en mamíferos neonatos y disminuye rápidamente con la edad.
La disminución de la actividad de intercambio Na+/Ca2+ es simultánea al desarrollo del retículo sarcoplasmático
y los túbulos transversos.
El intercambiador Na+/Ca2+ neuronal. Imágenes obtenidas mediante técnicas de inmunofluorescencia han

sugerido que existe una alta concentración del intercambiador Na+/Ca2+ en las zonas de sinapsis neuronal y en
las uniones neuromusculares .103 Debido a que las señales locales de Ca2+ parecen ser importantes en la
sinapsis neuronal, probablemente el intercambiador Na+/Ca2+ participe en la extrusión de Ca2+ que entra a
través de los canales de Ca2+ de la membrana plasmática.104
El intercambiador Na+/Ca2+ en el riñón. El riñón, junto al corazón y al cerebro, son 3 fuentes ricas en proteína
del intercambiador Na+/Ca2+. En el riñón, la más alta concentración del intercambiador Na+/Ca2+ se localiza en
el túbulo colector de la neurona;81,105 sin embargo, los detalles referentes a su función no se conocen
totalmente. Se han descrito diferentes isoformas del intercambiador Na+/Ca2+ en el riñón106 y estas pudieran
explicar funciones diferentes para este tejido.
El intercambiador Na+/Ca2+ en las células ß del páncreas. En las células ß pancreáticas el intercambiador
Na+/Ca2+ participa de forma importante en el control de la concentración citoplasmática de Ca2+.107-109
Recientemente, se identificaron dos isoformas del intercambiador (NCX1.3 y NCX1.7) en la célula ß pancreática, y
su papel en la fisiología de esta fue caracterizado.108,110 Mediante la utilización de oligonucleótidos que
contenían una secuencia antisentido a la del ARNm que codifica para el intercambiador Na+/Ca2+, con el objetivo
de bloquear la biosíntesis de la proteína, los autores de estos estudios demostraron que el intercambio Na+/Ca2+
puede contribuir hasta en un 70 % al retorno de las concentraciones citosólicas de Ca2+ ([Ca2+]i) a sus valores
basales cuando cesa un estímulo despolarizante.
Se describió además que esta contribución a la extrusión de Ca2+ a través del intercambio Na+/Ca2+ se hace
significativa a una concentración de Ca2+ citosólico alrededor de 200-500 nmol/L, lo cual implica la participación
limitada del intercambiador Na+/Ca2+ en el mantenimiento de la [Ca2+]i basal (~150 nmol/L) (Van Eylen et al.,
1998). Este hallazgo concuerda con la baja afinidad por el Ca2+ referida para esta proteína. Sin embargo, está
claro que el intercambiador Na+/Ca2+ participa activamente en la restauración de las [Ca2+]i y este es
complementado por otros efectores, como son los tampones intracelulares de Ca2+ y las Ca2+-ATPasa de la
membrana plasmática y del retículo endoplasmático. Por otra parte, el intercambiador Na+/Ca2+ puede funcionar
en el modo reverso, lo que permite la incorporación de Ca2+ desde el medio extracelular bajo determinadas
condiciones, como son la despolarización de la membrana plasmática y la disminución o la inversión del gradiente
de Na+.
Papel del Ca2+ en la apoptosis

Apoptosis, definición y características. La apoptosis es un término empleado para describir un modo de muerte
celular que se caracteriza por la constricción de la célula, la condensación del núcleo (sin afectar la permeabilidad
de la membrana citoplasmática) y la fragmentación de la célula, lo cual conduce a la formación de los cuerpos
apoptóticos.111 El destino de los cuerpos apoptóticos es un fenómeno de gran importancia biológica; ellos son
englobados por fagocitos "profesionales", como pueden ser las células epiteliales adyacentes, sin provocar una
respuesta inflamatoria porque conservan su contenido hasta que ocurre la fagocitosis.112 De esta forma, el daño
accidental de los tejidos causado por la liberación de enzimas de los gránulos está minimizado.
Consecuentemente, esta forma de muerte celular participa en la remodelación de los tejidos, prerequisito
importante para un desarrollo embriológico normal. Por esta razón, el término apoptosis se intercambia de forma
habitual con el de "muerte celular programada". La apoptosis ocurre donde exista proliferación celular y es
controlada por genes compartidos que participan en el ciclo celular. La relación estrecha entre el control de la
apoptosis y la proliferación significa que un defecto en alguna de ellas probablemente de lugar a una alteración
del número de células. En realidad, algunos genes involucrados en la inducción de la apoptosis (p53)113 se
reconocen como clásicos genes supresores de tumores, mientras otros que previenen la apoptosis e incrementan
la proliferación celular (blc2)114 son oncogenes clásicos. La apoptosis se diferencia de forma significativa de la
necrosis, ya que esta última es un evento accidental donde la célula pierde la capacidad de mantener su vida,
pues el resto de los procesos vitales se desacoplan de la respiración, se pierde energía y finalmente se degrada
de forma incontrolada. Esto provoca la pérdida del contenido celular, que contiene además moléculas reactivas y
enzimas activas.114 La liberación de estas últimas hacia el intersticio representa un potente estímulo para que
ocurra una inflamación aguda que conduce a un daño tisular adicional.
La regulación de la apoptosis y sus principales vías. El concepto filosófico que proclama a "la muerte como una
condición esencial de la vida" se evidencia en el hecho de que la apoptosis es necesaria para el desarrollo normal
de los organismos pluricelulares.115 Pero también la apoptosis es un "arma de doble filo", y el descontrol de este
tipo de muerte celular está implicado en numerosas patologías;116 por esta razón, este proceso debe estar
estrechamente regulado. Uno de los elementos implicados en dicho control es la compartimentación de los
componentes de la maquinaria apoptótica en diferentes organelos.
Sólo cuando la señal de muerte es enviada, los instrumentos de su ejecución son llevados al citosol y el programa
de suicidio es activado. Los organelos conocidos que participan en esta compartimentación son la membrana
plasmática, donde se sitúan los receptores de muerte y supervivencia, la mitocondria, que alberga a algunas
proteínas que regulan la apoptosis, y muy recientemente fue incluido el retículo endoplasmático, pues en él se
localiza la enzima pro-apoptótica caspasa-12.117,118
Las principales moléculas que participan en la ejecución de la muerte celular programada son las caspasas. Estas
proteínas pertenecen a la familia de proteasas dependientes de cisteína y aspartato específicas.119 Según su
función, se dividen en 2 grupos conocidos como caspasas iniciadoras (caspasas-8 y -9), cuya función es la de
activar otras caspasas, y las caspasas ejecutoras (caspasas-3, -6 y -7), que son responsables de la digestión de
proteínas celulares, tanto funcionales como estructurales.
Las caspasas de mamíferos son análogas al producto del gen de muerte celular Ced-3 del nemátodo
Caenorhabditis elegans. Estas proteasas normalmente se encuentran en la célula en forma de proenzimas
inactivas (procaspasas), y pueden ser activadas mediante un corte proteolítico realizado por un complejo de
activación o por otra caspasa.120 Se ha descrito que la activación de las caspasas contribuye a la muerte celular
en la isquemia cerebral,121 en la isquemia cardíaca122 y en enfermedades crónicas neurodegenerativas, como la
enfermad de Alzheimer123 y de Huntington.124
La activación de las caspasas se realiza por 2 vías, denominadas extrínseca e intrínseca. La vía extrínseca
consiste en la transducción de señales a través de receptores de muerte, la cual provoca la activación de la
caspasa-8. Esta activación ocurre si los receptores de muerte, como el Fas y el receptor del factor de necrosis
tumoral, se oligomerizan después de la unión a sus ligandos específicos. A continuación, la caspasa-8 produce la
activación de caspasas efectoras como son las caspasa-3 y -7125. La otra vía más estudiada, la intrínseca, se
inicia con la liberación de una proteína mitocondrial: el citocromo-c, el cual forma un complejo con dATP y la
proteína Apaf-1.126,127 Este complejo une a la caspasa-9 y le produce un corte proteolítico. La caspasa-9 activa
es liberada del complejo y cataliza la activación de las caspasas efectoras
-3, -6 y -7.127,128 Las caspasas efectoras activadas, ya sea por la vía extrínseca como por la intrínseca, son
capaces de hidrolizar proteínas estructurales del citoesqueleto y del núcleo celular, y además, proteínas
funcionales como la poli-ADP-ribosa polimerasa.129 Estas cascadas de reacciones conducen finalmente a la
muerte celular.
Recientemente, la activación de la caspasa-12 se asoció específicamente al estrés del retículo

endoplasmático.118 El tratamiento de las células con un inhibidor del transporte desde el retículo endoplasmático
hacia el complejo de Golgi: la brefeldina A, y con un inhibidor de la N-glucosilación en el retículo endoplasmático:
la tunicamicina, provoca la activación de la caspasa-12. Sin embargo, la activación más significativa de la
caspasa-12 se obtiene al exponer las células a un inhibidor de la Ca2+-ATPasa del retículo endoplasmático: la
tapsigargina. La apoptosis inducida por estímulos que no afectan al retículo endoplasmático, como es la supresión
de suero o activación del Fas, no resulta en una activación de la caspasa-12.
La caspasa-12 forma parte de una subfamilia de caspasas denominada ICE (interleukin-1ß converting enzime, en
inglés).118 La secuencia aminoacídica de la caspasa-12 murina contiene secuencias homólogas a las caspasas
murinas -1 y -11 (39 % y 38 % de identidad, respectivamente) y a las caspasas humanas -4 y -5 (48 % y 45 %
de identidad, respectivamente). La caspasa-12 está presente en todos los tejidos de ratones, aunque la expresión
es superior en el músculo, el hígado y el riñón. Esta proteasa se localizó en las fracciones microsomales y
solubles de células nerviosas mediante la utilización de una técnica de fraccionamiento celular.118 Sin embargo,
la forma inactiva de esta proteína, las procaspasa
-12 (60 kDa de peso molecular relativo) se detectó predominantemente en la fracción microsomal, mientras que
su forma activa, la caspasa-12 (36 kDa de peso molecular relativo), se localizó en la fracción soluble. Estas
determinaciones sugieren que la procaspasa-12 está asociada al retículo endoplasmático y que la caspasa-12 se
liberó durante el proceso de fraccionamiento celular. Además, la asociación específica de esta proenzima con el
retículo endoplasmático se comprobó por inmunohistoquímica mediante la utilización de anticuerpos
monoclonales que reconocen a esta proteína y a proteínas asociadas a este organelo.118
Por otra parte, se determinó que la activación de la caspasa-12 no ocurre a través de la vía extrínseca descrita
anteriormente, pues la exposición de timocitos aislados de ratones transgénicos que expresan o no la
procaspasa-12 (procaspasa-12 +/+ y procaspasa-12 -/-, respectivamente) a un anticuerpo que reconoce al
receptor Fas, produjo decrementos similares de la vitalidad en ambos grupos de células. La participación de la
caspasa-12 en la vía intrínseca o mitocondrial también fue descartada. Para demostrar esta hipótesis se
realizaron estudios en fibroblastos Sack2 (Apaf-1 -/-) los cuales carecen de la proteína Apaf-1. Las células Sack 2
son resistentes al tamoxifeno, un activador de la vía apoptótica mitocondrial; sin embargo, la exposición a la
brefeldina A y a la tapsigargina redujeron la vitalidad de estas células.118
La muerte celular y el ion calcio

La sobrecarga de Ca2+ ha sido relacionada con el daño celular en muchos tipos de tejidos. En las neuronas, por
ejemplo, la neurotoxicidad inducida por glutamato está asociada con un incremento prolongado de las [Ca2+]i y
se plantea que la acumulación excesiva de este ion en el citosol produce pérdidas neuronales severas como la
isquemia y el trauma cerebral,130,131 además de enfermedades degenerativas como la de Alzheimer.132,133
Otros estudios han mostrado que la prevención de la sobrecarga de Ca2+, mediante el pretratamiento con
agentes quelantes134 y bloqueadores de canales de Ca2+ 135, puede poseer efectos protectores sobre las
células. De forma similar, se ha comprobado que las células que expresan altos niveles de una proteína que une
Ca2+ (calbindina-D28K), son más resistentes a la muerte celular.136
Teniendo en cuenta que el Ca2+ es un activador de algunas enzimas que participan en el catabolismo de una
gran variedad de biomoléculas, se supone que un incremento sostenido de la [Ca2+]i pudiera resultar en la
degradación incontrolada de macromoléculas de importancia vital en el mantenimiento de la estructura y función
de la célula. En realidad, se conoce muy poco acerca de los sustratos preferenciales de las proteasas activadas
por Ca2+, aunque existen evidencias de que algunas proteínas del citoesqueleto pueden ser degradadas por
estas enzimas. Otra enzima, como la fosfolipasa A2, por ejemplo, es dependiente de Ca2+ y calmodulina, y al ser
activada por altas y sostenidas [Ca2+]i pudiera degradar la membrana de forma extensiva y generar metabolitos
tóxicos.137
Se plantea que la sobrecarga de Ca2+ puede mediar la muerte celular del tipo necrótico, aunque existen
numerosas pruebas que involucran al Ca2+ en la apoptosis. Por ejemplo, el corte de la cromatina nuclear en
fragmentos oligonucleosómicos, característico en el proceso apoptótico, es el resultado de la activación de una
endonucleasa dependiente de Ca2+ 138. Además, se ha descrito que el incremento del ion calcio puede
comenzar en el núcleo de algunos tipos celulares, lo cual sugiere que un aumento selectivo de la concentración
del ion divalente en esa estructura pudiera ser suficiente para el inicio de la fragmentación del ADN; Sin embargo,
no resulta aun claro si la fragmentación del ADN mediada por Ca2+ comienza con la activación de algunas
endonucleasas o con la alteración de la superestructura de la cromatina, lo cual pudiera hacer accesible sitios
adicionales de las cadenas de ADN a la digestión por endonucleasas. En realidad, algunas determinaciones
indican que el corte del ADN en fragmentos internucleosómicos es secundario a la condensación de la cromatina y
al debilitamiento de la interacción histona-ADN.137
Recientemente, existe una creciente acumulación de pruebas que demuestran que la disminución de la
concentración de Ca2+ en el lumen del retículo endoplasmático produce un estado de estrés en este organelo con
la consiguiente afectación de sus funciones, dentro de las cuales se encuentran la síntesis, el plegamiento y el
transporte de proteínas.139 Este evento se ha relacionado con la activación de una vía apoptótica mediada por la
proteasa caspasa-12117,118 y la inducción de un factor de transcripción codificado por el gen CHOP, también
conocido como GADD153 (growth arrest and DNA-damage-inducible gene, en inglés) el cual es capaz de detener
el crecimiento celular y provocar daños en el ADN nuclear.139,140
Summary
The present paper made a review of the present knowledge on regulation of intracellular concentrations of
calcium ion, the main mechanisms of inlet/outlet through the plasma membrane, with special attention to
Na+/Ca2+, and the function of this important second messenger in insulin secretion and in programmed cell
death of pancreatic cells.
Key words: Calcium, Na+/Ca2+ exchange; apoptosis; insulin
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Recibido: 13 de octubre de 2003. Aprobado: 23 de septiembre de 2003.

Dr. Oscar Díaz Horta. Instituto Nacional de Endocrinología. Zapata y D, Vedado, Ciudad de La Habana, Cuba.
1 Doctor en Ciencias Biológicas. Investigador Agregado.
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Key words: Calcium, Na+/Ca2+ exchange; apoptosis; insulin

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Recibido: 13 de octubre de 2003. Aprobado: 23 de septiembre de 2003.

1 Doctor en Ciencias Biológicas. Investigador Agregado.

Calle 23 # 654 entre D y E, Vedado

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