Precursor de vitaminas

Fluorescencia es la emisión de luz, no todas las moléculas la pueden emitir.

H= radiación electromagnética.

Al absorber la molécula se excita

Pero esa molécula se tiene que des excitar y emite calor. La des excitación no es tan fácil

Singulete= electrones apareados, nivel energético basal.

Al inducir un fotón en el. Sigue en estado singulete pero un electrón se transfiere a un nivel más
alto de energía.

Esto triplete excitado. Cambio de spin, durante la relajación y se da el efecto de fosforescencia. La

presencia de oxígeno en el medio, presencia de moléculas, solventes con metales pesados puede
favorecer un estado triplete excitado.

Los focos, los de ahorro de luz, medio verdosa.

Fosforecencia los podemos ver. 10-4 10s, relajación radiante

Es más tardada.

Fluorescencia no la podemos ver  10-4 s, relajación radiante.

La Fluorescencia es muy rápida, solo instrumentos.

Depende de la estructura de la molécula

Relajación vibracional. Empieza a ver des excitación

La fluoresencia se hace a longitudes de onda mayores, es decir, a menor energía

Conversión inter, cambios a través de los orbitales y externa, hacia el medio, la des excitación se
transmite al medio.

Todas las líneas rectas es luz y ondas es calor.

Rendimiento cuántico o eficiencia cuántica (fi). Relación entre las moléculas que emiten
fluorescencia y si todas las moléculas regresan al estado basal por simplete. Cuál sería el valor de
la eficiencia cuántica seria 1.

Mientras más rígida sea la molécula mayor eficiencia cuántica, mayor número de anillos en su
estructura

Puede regresar a su estado basal, por fluorescencia, crece entre sistemas, conversión externa,
conversión interna, pre disociación y disociación.
Otra diferencia es que las moléculas que emiten fluorescencia regresan al estado basal es simplete
y para fosforescencia es en forme de triplete.

Las moléculas fluorescentes tienen 2 anillos fusionados,

Disociación. Sale un electrón de la molécula, que se forme un ión. Wue la molécula se disocie.

METALES PESADOS- se favorece el cruce entre sistemas.

Variables que afectan a la fluorescencia:

Rigidez estructural

 Viscosidad
 Temperatura
 Disolvente
 Oxígeno disuelto
 Concentración de la molécula que florece.
 pH, se desprortonan o protonan las moléculas. Pueden alterar a la estructura de la
molécula

CONCETRACIÓN:
La potencia de la emisión fluorescente F es proporcional a la potencia radiante del haz de
excitación absorbido por el sistema.
F= 2.3 (fi) (épsilon) bc Po
Si Po es constante
F= Kc
La concentración y la intensidad de fluorescencia (I) son proporcionales si A es > 0.05
Concentraciones elevadas provocan la autoabsorción y el apagamiento que son factores
responsables de las desviaciones negativas de la linealidad.

Para llevar a cabo la determinación cuantitativa de un compuesto por fluorometría, es

necesario conocer las longitudes de onda de máxima excitación y máxima emisión.
Conociendo o determinando experimentalmente estas longitudes de onda, se elabora una
curva de calibración, representada por la intesidad de la emsión contra la concetración del
analito y por interpolación….

Fotómetro: el selector de longitud de onda se usan filtros

Espectrofotómetro: el selector de onda es un monocromador.

Hay dos selectores de longitud de onda.

1. Para la excitación
2. Para captar la emisión
Espectro fluorimetro. Son moncromaadores.
Espectrofluorimetro partes:
 Fuente luminosa. Filtro de excitación, celda, filtro de emisión, celda. Detector.
 El detector está en un Angulo de 90º respecto a la fuente luminosa.

Estrucutura de la riboflavina:
Adenina, un azúcar (ribosa), 2 fosfatos.

Concentración: 1ppm
2 ppm
3ppm
4ppm
5ppm

Emsión 540 nm
Exitaciób 425 nm
Las CELDAS deben de estar transparente por todos los lados
Celda son de poliestireno o metilcrilato.
RFU= intesidad de fluorecencia relativas
No se ajusta al blanco, se mide también la emisión del blanco

CALCULAR EL PH DEL HCL, CHA3COOH 0.9M NaOH 0.1 M

GRAFICAS PARA LA SIGIENTE SESIÓN
Curvas de calibración para los cuatro disolventes, ajustándolas por regresión lineal

TERORIA

Fotoluminesecica- previa absorción

Quimioluminsencia: reacción química.
Adición de un floroforo. Aumenta la emisión de fluorecsencia.
En todos estos procesos se busca ceder energía.
Si no ocurre el entrecruce de orbitales entonces mi molécula no emitirá
fosforesencia.
La conversión externa se dará con moléculas vecinas, el medio.
Estado triplete excitado. Cruce de sistemas, hay un giro de spin.

Se absorbe a menor longitud de onda, y se emite a mayor longitud de onda.

90º
La emeisón de la fluoresencia se da en todos los sentidos, pero el 90º se ocupa
para eviar que la luz que no se absorbe no sea detectada por el equipo. Para evitar
interferencias.

RENDIMEINTO CUÁNTICO. Cociente o fracción del número de moléculas con

fluorescencia sobre el número total de moléculas excitadas.
Variables que afectan a la fluorescencia.

Temperatura. En la mayor parte de las moléculas, la eficiencia cuántica de la

fluorescencia disminuye al aumentar la temperatura, debido a que aumenta la
frecuencia de colisiones entre las moléculas.

Disolvente. La disminución de la viscosidad de los disolventes ocasionada el

mismo efecto que el aumento de la temperatura.

pH. Lo determina el disolvente. Tanto la longitud de onda como la intensidad de

emisión pueden ser diferentes para la forma ionizada y no ionizada de un
compuesto.

Las formas resonantes emiten la fluorescencia con diferente intensidad.

Concnetración del analito. La intensidad de la fluorencia

Hay dos factores responsables de las desviaciones negativas de la linealidad a

elevadas concetraciones:
La auto atenuación es el resultado de colisiones entre moléculas excitadas. Se da
en concnetraciones altas.

Auto absorción. Tiene lugar cuando la longitud de emisión se solapa con un pico
de absorción, la fluorescencia, entonces, disminuye porque la radiación emitida es
reabsorbida por otras moléculas absorbentes.

Si aumenta la concentración, las moléculas están más juntas.