Cálculo del punto isoeléctrico para un péptido Rosales Ocampo Iván 4QM1

1. Escoger un péptido con un péptido con tres grupos ionizables

2. Péptido por usar: FHPESYVM
3. Dibujar el péptido con todos sus grupos ionizables protonados

4. Desprotonar con NaOH 0.1 N

5. Hacer cálculos en tabla
Reacción del grupo que
Grupo Ionizable pKa 1.0 2.28 4.25 pI 6.0 7.0
se desprotona
R-COOH (0)
Alfa Carboxilo Met 2.28 0 -0.5 -1 5.74 -1 -1
R-COO- (-1)
R-COOH (0)
R = Gama carboxilo Glu 4.25 0 0 -0.5 3.22 -1 -1
R-COO- (-1)
NH+ (+1)
R = Imidazol His 6.0 +1 +1 +1 7.58 +0.5 0
N (0)
R-NH3+ (+1)
Alfa amino de Phe 9.13 +1 +1 +1 5.48 +1 +1
R-NH3 (0)
−OH (0)
R = Fenol de Tyr 10.07 0 0 0 5.65 0 0
−O- (-1)
- - - - - - - - - -
Carga total - - +2 +1.5 +0.5 0 -0.5 -1

Preguntas
1. ¿Qué carga tiene el péptido cuando está todo protonado? Una carga de +2
2. ¿Entre cuales valores de pKa cambia de carga el péptido, de positivo a negativo? Entre
9.13 y 4.25
3. Para calcular el pI del péptido, ¿Qué valores de pKa utilizarías? Los valores de 6.0 y 4.25
4. Define el punto isoeléctrico de una sustancia. Es el valor de pH que tiene un aminoácido (o
en este caso, un péptido) cuando su carga neta es de 0.
5. Calcula el valor del punto isoeléctrico, ¿Cuál es el valor numérico? 5.125
6. ¿Qué carga tiene el péptido a valores de pH mayores que su pI? Una carga de -0.5
7. ¿Que varga tiene el péptido a valores menores que su pI? Una carga de +0.5
8. ¿A cuál electrodo se moverá el péptido en una electroforesis a pH de 8.0? Al electrodo con
carga positiva
9. ¿A cuál electrodo se moverá el péptido en una electroforesis a pH de 2.5? Al electrodo con
carga negativa
10. Escribe la ecuación de Henderson-Hasselbach para calcular el pH de un ácido débil
[𝐵𝑎𝑠𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑎]
pH = pKa + log
[Á𝑐𝑖𝑑𝑜]
11. Usando la ecuación de Henderson-Hasselbach, calcula la carga total exacta del péptido a
pH de 3.0

12. ¿Cuál es el grupo que funciona como ácido débil a pH de 3.0? ¿Cuál es su base conjugada?
El grupo amino es el grupo que funciona como ácido débil.
13. Escribe las concentraciones de la solución reguladora (de un ácido débil) que usarías para
que el péptido se encontrara a pH de 3.0 exacto

14. Calcula el pI de un péptido como ALILFDKC

pH/Grupo Ionizable 1 1.71 3.86 8.50 9.69 10.53

Alfa carboxilo D
COOH (0) 0 -0.5 -1 -1 -1 -1
COO- (-)
Carboxilo
D
0 0 -0.5 -1 -1 -1
COOH (0)
COO- (-1)
SH
C
0 0 0 -0.5 -1 -1
SH (0)
S- (-1)
Alfa amino
A
+1 +1 +1 +1 +0.5 0
NH3+ (+1)
NH2 (0)
Grupo amino
K
+1 +1 +1 +1 +1 +0.5
NH3+ (+1)
NH2 (0)
- - - - - - -
Carga total +2 +1.5 +0.5 -0.5 -1.5 -2.5
Para calcular el pI usamos pKa de 3.86 y 8.50
3.86+8.50
Entonces: pI = 2
= 6.18 ~ 6.2
15. Escribe un péptido de seis aminoácidos usando los aminoácidos esenciales en la dieta.
¿Cuáles son los aminoácidos esenciales?

Aminoácidos esenciales: Lys, His, Leu, Ile, Val, Met, Thr, Trp, Phe, Arg

Péptido hipotético: LRFVAP