SEPARACIÓN DE FOSFOLÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN
CAPA FINA
Avilez Colín Angélica del Carmen.
Morales López Nahui Ollin
INTRODUCCIÓN.
Los lípidos son moléculas hidrófobas que
pueden originarse completamente o en parte a
través de condensaciones de tioésteres o
unidades de isopreno. Estos compuestos tienen
funciones como: aportadores de energía,
estructuradores de la membrana celular,
protectores de órganos, mediadores
hormonales, entre otros, por lo que convierten
en indispensables para la vida. Se dividen en 1.
lípidos simples; los que están constituidos por
ácidos grasos y alcohol, entre ellos céridos
(que da protección a tejidos y formación
dérmica) y​ acilglicéridos (fuente de energía).,
2. complejos; que además de
constituyentes de los simples, poseen
compuestos variados no lipídicos, ente ellos
los fosfolípidos (que forman bicapas lipídicas
en membrana celular), glucolípidos
(​reconocimiento celular y como receptores
antigénicos)​.
Los Fosfolípidos de membana son lípidos
anfipáticos, que se encuentran en todas las
membranas celulares, disponiéndose como
bicapas lipídicas. Pertenecen al grupo de
lípidos derivados del glicerol, presentando una
estructura similar a la de los triglicéridos.
Lisofosfatidilcolina (isolecitina) (LFC):
Estimula reclutamiento de fagocitos cuando
son liberadas por las células apoptóticas,
Grupo: 3IM2 Sección 1
activa células endoteliales durante la
aterosclerosis temprana​.
Esfingomielina (EM): mejora el aislamiento
de las fibras nerviosas y tejidos celulares.
Fosfatidilserina (FS): facilita la fluidez de las
membranas de las células nerviosas para su
buen funcionamiento y longevidad. Previene
el declive de funciones cognitivas vinculadas
al envejecimiento. ​Fosfatidilcolina (lecitina)
(FC): ​Fosfolípido que, junto con las sales
biliares, ayuda a la solubilización de los ácidos
biliares en la bilis.
Fosfatidiletanolamina (FEA): está asociada
al anclaje, estabilización y plegamiento de
los
múltiples proteínas de membrana, así como
también a los cambios conformacionales
necesarios para el funcionamiento de muchas
enzimas.
Lípidos neutros: ​Ésteres de ácidos grasos con
alcoholes, poco reactivos. Forman la mayor
parte de los lípidos de reserva energética.
Colesterol: contribuye al mantenimiento de la
fluidez de membrana y establece interacciones
con ciertas proteínas de membrana que pueden
regular la actividad de éstas.
Un extracto lipídico se define como la
obtención de lípidos concentrados desde una
fuente orgánica.
La saponificación es una reacción química
entre un ácido graso o lípido saponificable, y
una base o álcali, en la que se obtiene como
principal producto la sal de dicho ácido y la
base. Estos compuestos tienen la particularidad
de ser anfipáticos, es decir tienen una parte
polar y otra apolar (no polar), con lo cual
pueden interactuar con sustancias
propìedades dispares. Por ejemplo, los jabones
son sales de ácidos grasos y metales alcalinos
que se obtienen mediante saponificación.
Un lípido saponificable es todo aquel que esté
compuesto por un alcohol unido a uno o varios
ácidos grasos (iguales o distintos). Esta unión
se realiza mediante un enlace éster, muy difícil
de hidrolizar. Pero puede romperse fácilmente
si el lípido se encuentra en un medio básico.
OBJETIVOS.
● Aplicar la técnica de cromatografía en
capa fina para la separación de los
fosfolípidos de la yema de huevo.
● Comparar la técnica de cromatografía en
papel con la cromatografía en capa fina.
INTERPRETACIÓN: Análisis de la técnica
Para extraer los lípidos de la yema de huevo es
necesario mezclar la yema de huevo con
cloroformo-metanol 2:1 ya que los lípidos son
biomoléculas solubles en estos solventes
orgánicos, lo que permitirá su separación de
las demás moléculas hidrosolubles.
hidrosolubles. En la fase orgánica se
encuentran los lípidos, sin embargo, también
existen algunas vitaminas y aminoácidos
hidrófobos. Para poder separarlos se añade
KCl 0.1M agitando, por ser un compuesto
de iónico disociable, permite separar los
aminoácidos de los lípidos por afinidad,
manteniéndolos así en la fase acuosa.
Finalmente se desecha la fase acuosa y se
utiliza la fase inferior orgánica para la
separación cromatográfica, pues en esta fase
solo existen los lípidos deseados.
En este método se utilizan como soporte
placas de vidrio, plástico, aluminio, etc. en las
que se deposita una fina capa de adsorbente
(gel de sílice, almidón, polvo de celulosa, etc.)
Dependiendo del tipo de separación que se
desee (cualitativa o preparativa) se utilizará un
tamaño de placa u otro. En general para
realizar una separación preparativa de un
gramo de muestra es necesario una placa de
vidrio de 20x20 cm., 35 gramos de adsorbente
y 80 ml. de agua destilada
RESULTADOS.
Fórmula para obtención de Rf de cada una de las
muestras.
Rf =​FsFd​ ​Fs= ​Centro de soluto ​Fd=​ frente de
disolven

En esta mezcla cloroformo-metanol, además

de los lípidos existen otras moléculas como
proteínas, para poder separarlas se agita
enérgicamente en un baño de hielo, para evitar
la volatilización del solvente, y filtrar, las
proteínas por ser biomoléculas de gran tamaño
se quedan en el papel filtro. Se forman dos
fases después del filtrado; en la acuosa se
encuentran los carbohidratos, azúcares, sales,
aminoácidos, péptidos, vitaminas
Figura 1. Perfiles cromatográficos 1. Molibdato 2. Yodo
3. Ninhidrina 4. Bismuto
Tabla 1. Valores calculados de Rf. Cromatografía
en capa fina.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS.
El uso del método de cromatografía en capa
fina nos permitió separar diferentes
fosfolípidos encontrados en la yema de huevo
y en la de gallina.
En la yema de huevo prevalece la
fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina,
esfíngomielina, colesterol y lípidos neutros,
Lisofosfatidilcolina y fosfatidilcolina, lípidos
solubles en solventes orgánicos por lo que
estuvieron en la mezcla cloroformo-metanol.
Los fosfolípidos se distribuyen a través en la
placa con ayuda de una fase móvil, en base a
la polaridad de cada lípido. Los lípidos
polares se unirán fuertemente a la sílica,
mientras que los lípidos neutros fluirán por ser
bastante hidrófobos y terminarán arriba, como
el caso del colesterol. Las moléculas que
actúan como reveladores reaccionan con
diferentes grupos estructurales de los lípidos,
como los dobles enlaces, que se revel​aron con
yodo,, los observamos de color café, los ácidos
grasos, como con el reactivo de molibdato, que
se identificaron los fosfolípidos en general
dando una coloración ​azul ya que reacciona
con grupos fosfatos. Los grupos amino de la
cabeza polar o de cadenas laterales se
identificaron con el reactivo de ninhidrina
dando una coloración violeta
(fosfatidiletanolamina y fosfatidil serina). Con
bismuto se revelaron fosfolípidos que
contienen colina (fosfatidilcolina,
esfingomielina, lecitina e isolecitina) La
identificación se hace comparando cada
cromatograma con el perfil de corrimiento en
capa fina de fosfolípidos. Otros métodos de
separación que se pueden utilizar ​son la
cromatografía de adsorción o cromatografía de
fase reversa.
La técnica de cromatografía en capa fina es
una muy buena técnica para separar solo que
los resultados no se mantienen tanto ,puesto
que se comienzan a despintar al pasar el
tiempo y para las aplicaciones se debe de tener
una suma precaución de no maltratar la
sílica,pero los resultados se obtiene mucho
más rápido y tienen un contraste más fuerte, a
diferencia de una cromatografía en papel, la
cual requiere cuidados pero sus resultados son
más un poco tenues y requiere de bastante
tiempo para que puedan observarse los
resultados.
CONCLUSIONES.
● La separación de los fosfolípidos por
cromatografía en capa fina y la
posterior adición de los diferentes
reactivos (molibdato, bismuto,yodo y
ninhidrina) demuestran la
composición de cada uno de los
fosfolípidos que integran la yema de
un huevo de gallina.
● La cromatografía en capa fina es una
de las mejores técnicas de separación
de fosfolípidos.
● Las propiedades de polaridad de los
fosfolípidos permiten su separación
por cromatografía.
PREGUNTAS EXTRA extraneurales; son entre el 5 y el 8% de los
lípidos del cerebro.
1.- ​Investigar
los lípidos complejos
llamados cerebrósidos, sulfátidos,
P​lasmalógenos​, abundantes en el tejido
globósidos, gangliósidos y plasmalógenos cardiaco de vertebrados y también en las
membranas de ciertas bacterias y de
Son esfingolípidos, lípidos complejos que
invertebrados.
derivan del aminoalcohol insaturado de 18
carbonos de esfingosina, aparte de su BIBLIOGRAFÍA
papel estructural como componentes de las
● Souccar T. (2004). ​La Guía de Los
membranas, los esfingolípidos regulan la
Nuevos Estimulantes.​ España:
dinámica de éstas y forman parte de los
Paidotribo.
microdominios de membrana denominados ● Campbell M., Farrell S.(2004).
balsas de membrana que tienen Bioquímica​, Editorial Thomson,
propiedades y funcionalidad propias. México, pág. 232.
● Yañez J., Villar J., Dislipemias,
Los esfingoglucolípidos pueden ser: lipoidosis, lipodistrofias y obesidad,
Universidad de Sevilla, España, 2002,
Cerebrósidos :mono glucosilceramidas, págs. 97-103.
ceramida con mono hexosa, comúnmente ● ​Serrano, H, M., Rosales C. V.
galactosa o glucosa. ​son constituyentes Lípidos: Características principales y
habituales de las membranas de animales y su metabolismo.​ ​ Rev. Act. Clin. Med
[online]. 2014, vol.41, pp. 2142-2145.
plantas
Sulfátidos :ésteres sulfúricos de
galactosilceramida.​Muchos sulfátidos
protegen la mucosa intestinal de las
enzimas digestivas.
Globósidos :oligo glicosil ceramidas,
ceramida con oligosacárido.son
constituyentes normales de las membranas
celulares de órganos sistémicos no
nerviosos de muchos mamíferos. Por
ejemplo, los riñones, el intestino, los
pulmones, las glándulas suprarrenales y
los eritrocitos.
Gangliósidos :oligo glicosil ceramidas con
ácido siálico. Tienen carga negativa a pH
neutro.​se encuentran en grandes cantidades
en las células ganglionares del sistema
nervioso central y, en menor cantidad, en
la membrana plasmática de tejidos