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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL


ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
QUMICA BIOORGNICA
QUMICO BACTERILOGO PARASITLOGO

PRCTICA #6 HIDRLISIS DE UNA


PROTENA Y ENSAYOS PARA PROTENAS
Y AMINOCIDOS

INTEGRANTES:
ROSALES VAZQUEZ MA. LUISA
RANGEL MORALES V. DENISE
SOTO VILLANUEVA ITZEL
GOMEZ ARAUJO NANCY
LUIS ANGEL GUERRERO SALINAS
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OBJETIVOS:

1. Efectuar la hidrlisis total de una protena.


2. Identificar algunos aminocidos presentes en un
hidrolizado y protena, por medio de sus propiedades
fsico-qumicas.
3. Identificar por cromatografa en placa fina algunos de
los aminocidos presentes en un hidrolizado de
protena.
Las protenas son polmeros lineales de L-aminocidos unidos
mediante enlace peptdico.

Robert K. Murray, David A. Bender. (2010). HARPER Bioqumica Ilustrada.


Universidad de California: McGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES 3
Enlace peptdico

Se produce al reaccionar el grupo amino de un aminocido con el grupo


carboxilo de otro aminocido.

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AMINOCIDOS
Un aminocido es un cido carboxlico que tiene un grupo amonio
unido en el carbono alfa .

Los aminocidos se pueden clasificar en a, b o g-aminocidos


dependiendo de la posicin del grupo amino en la cadena
carbonada.

David L. Nelson, Michael M. Cox.. (2009). LEHNINGER,Principios de Bioqumica.


Californio: Ediciones Omega. 5
Los aminocidos existen en disolucin acuosa principalmente en la
forma de un ion dipolar , o zwitterion (del alemn zwitter, que
significa hibrido)
Los zwitteriones de los aminocidos son sales internas y por lo tanto
tienen muchas de las propiedades fsicas asociadas con las sale.
Son solubles en agua pero insolubles en hidrocarburos y son
sustancias cristalinas con puntos de fusin relativamente altos.

Son anfteros ya que pueden reaccionar cmo cidos o bases.

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Los a-aminocidos son
especialmente
importantes, a esta familia
pertenecen los 20
aminocidos que forman
parte de las protenas
Dos aminocidos se
pueden unir a travs de un
enlace amida, formando
un dipptido. El dipptido
puede incorporar un tercer
aminocido,
tripptido. Cadenas con
ms de 80 aminocidos se
denominan protenas.

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LA ESTRUCTURA DE CUALQUIER PROTENA PRESENTA
VARIOS NIVELES DE COMPLEJIDAD.

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PROTENAS FIBROSAS O ESTRUCTURALES
Son generalmente protenas estticas cuya funcin
principal es la de proporcionar soporte mecnico a las
clulas y organismos , son insolubles en agua debido a su
alto contenido de aminocidos hidrofbicos
Comuestas slo por estructuras terciarias en forma de
cadenas.
Formada por una unidad simple que se repite y ensambla
hasta formar una fibra
Las principales son :
1. a Queratina : es el componente principal de la
epidermis (pelo, uas).
2. Colgeno: compuesta por tres filamentos unidos ,
presente en tejido conjuntivo,seo y cartilaginoso.
3. Elastina : protena que confiere elasticidad a los tejidos
seo, cartilaginoso y conjuntivo.

John McMurry, QUMICA ORGNICA 7a edicin, Biomolculas: aminocidos,


pptidos y protenas, (pp.1016-1059), Cengage Learning Editores S.A., Mxico
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2008.
PROTENAS GLOBULARES

Las cadenas poliptidas se pliegan en


forma esfrica y poseen una estructura ms
compleja que las anteriores, ya que puede
haber ms de una estructura secundaria en
la misma molcula. Son solubles en agua .
Algunas de las ms importantes son:
Mioglobina; interviene en el transporte
y almacenamiento de oxigeno.
Citocromo : es componente de la
cadena respiratoria en las
mitocondrias.
Ribonucleasa: cataliza ciertos enlaces
de ARN
lisozima: cataliza la rotura hidroltica de
los polisacaridos .

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PROTENAS CONJUGADAS

Las protenas conjugadas consisten en protenas


simples combinadas con algn componente no
proteico.
Los grupos no proteicos se llaman grupos
prostticos.

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GRUPOS PROSTTICOS.
Son grupos qumicos diferentes a los aminocidos.
Clase. Grupo prosttico. Ejemplo.

Lipoprotenas Lpidos Lipoprotena beta1 de la


sangre
Glicoprotena Carbohidratos Inmunoglobulina G

Fosfoprotena Grupo(s) Fosfato Caseina de la leche

Hemoprotena Hemo (porfirina de Fe) Hemoglobina

Floavoprotena Flavn nucletidos Succinato deshidrogenasa

Metaloprotenas Fierro (Fe) Ferritina


Zinc (Zn) Alcohol deshidrogenasa
Calcio (Ca) Calmodulina
Molibdeno (Mb) Dinitrogenasa
Cobre (Cu) Plastocianina
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La determinacin de la estructura de una protena
comprende mtodos instrumentales y qumicos.

Las protenas se pueden hidrolizar con soluciones diluidas


de cidos minerales a ebullicin suave; dependiendo de
las condiciones de hidrlisis se pueden realizar hidrlisis
parciales, en las cuales se obtienen fragmentos peptdicos,
as como aminocidos aislados; o hidrolisis totales, donde
se obtienen mezclas de aminocidos.

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Reaccin de cido nitroso= manifiesta la
presencia del grupo amino de
aminocidos o grupos amino libres en una
protena

Los aminocidos reaccionan con cidos y


bases

Reaccin de precipitacin= manifiesta la


presencia de enlaces disulfuros en algunas
protenas

Reaccin de Biuret= manifiesta la


presencia de enlaces peptdicos
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La hidrlisis de protenas es un proceso en el cual se
produce la ruptura de la estructura primaria, es
decir, la ruptura de la secuencia normal de una
protenapara convertirlas en aminocidos.

Rudolph Macy. (1976). Qumica orgnica simplificada. Mxico: Revert


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HIDRLISIS DE GRENETINA (SOLUCION "A")
Cantidad Reactivo GRENETINA
Apariencia: slido
1gr grenetina incoloro traslucido.
10 ml Acido clorhdrico concentrado Soluble en agua caliente
10 ml Agua destilada y se hincha en agua fria
0.5 g Carbn activado

CIDO CLORHDRICO
Solubilidad: soluble en agua,
alcoholes, ter y benceno.
Lquido incoloro o amarillo con
desprendimiento de vapores
"ALTAMENTE CORROSIVO"
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PROCEDIMIENTO

Poner en reflujo y
calentar 35 min.
Agregar carbn
1g de
grenetina y 10
activado y filtrar
ml de HCl y 10
ml de H2O

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SOLUCIN NEUTRALIZADA DE HIDROLIZADO
DE GRENETINA HIDRXIDO DE SODIO
Apariencia: slido
Cantidad Reactivo blanco.
Punto de fusin: 318 C
5ml Solucion "A" Punto de ebullicin: 1390
Lo necesario Hidroxido de sodio 10% C
El necesario Papel ph Soluble en agua y en
alcohol etlico.

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PROCEDIMIENTO
Neutralizar con NaOH
hasta ph 7
Con ayuda de tiras
ph.

5ml de la sol.A o
grenetina
hidrolizada
Filtrar
Y posterior utilizar para
cromatografia

Obteniendo nuestro compuesto llamado


zwitterin que es un aminocido
estabilizado por una carga positiva y una
negativa
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III. Solucin de Grenetina sin hidrolizar (Solucin C).

REACTIVOS:
Cantidad: Reactivo:
0.5 g. Grenetina
20 mL Agua destilada

Colocar 0.5 g. de grenetina Agregar

Agitar

Es incolora y de sabor dulce.


Glicina Es el aminocido ms simple y el nico que no
tiene estereoismeros. 29
IV. Solucin de albmina (Solucin D).

REACTIVOS:
Cantidad: Reactivo:
1 huevo La clara
100 mL Agua destilada
Agitar
Un trozo Manta de cielo

Agregar

Filtrar

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AMINOACIDOS DE ESTUDIO
Aminoacido Formula Caracteristicas Polaridad
Esencial

Tirosina Presenta un anillo aromatico (x)


No presenta grupos amino libres (N) Polar
(grenetina)

Triptofano Presenta un anillo aromatico (X)


No polar
(grenetina)

Cisteina No presenta anillo aromatico (x)


No presenta grupos amino libres (N) Polar
(albumina) Presenta puentes disulfuro (presi.)

Metionina No presenta anillo aromatico (x)


Presenta puentes disulfuro (presip.) No polar
(albumina)
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1) REACCIN XANTOPROTECA

Esta reaccin se debe a la formacin de Nitroderivados


aromticos por reaccin del cido ntrico sobre grupos
bencnicos que poseen algunos aminocidos como la
fenilalanina, la tirosina y el triptfano. Por lo tanto, la dan positiva
todas aquellas protenas que tengan aminocidos aromticos en
su molcula.

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MECANISMO

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REACTIVOS:

CIDO NITRICO
Aspecto: lquido fumante
incoloro, amarillento o rojizo
HIDRXIDO DE SODIO Olor: acre, sofocante.
Apariencia: slido Punto de ebullicin: 83 C
blanco. Punto de fusin: -41,6 C
Punto de fusin: 318 C Densidad relativa (agua = 1):
Punto de ebullicin: 1390 1,4
C Solubilidad en agua: miscible
Soluble en agua y en Acidez: -1.4 pKa.
alcohol etlico. "ALTAMENTE CORROSIVO"
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PROCEDIMIENTO:
Tubo 1: 2mL de
solucin A Agregar a cada
tubo 5mL de
Tubo 2: 2mL de cido ntrico
solucin D

Agregar gota a
Realizar las gota NaOH al
observaciones 10% hasta pH
en cada tubo. bsico

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2) REACCIN DE PRECIPITACIN

Son reacciones en las que se forma un producto insoluble (no se disuelve)


en el medio, normalmente agua. Sirve para identificar los enlaces disulfuro
de los aminocidos.

Precipitado
Tiol

Litwack G. "Bioqumica Experimental". Edicin, 1967. Barcelona. Editorial


Omega 38
36
39
- sin
precipitado
+ precipitado
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3) REACCIN DE BIURET
Este test es sulfato de cobre en medio bsico y sirve para
identificar pptidos y protenas.
Est basado en la capacidad de los pptidos para secuestrar en
medio bsico iones de Cu 2+ y dar como resultado un complejo
de coordinacin color violeta, el cual cambia de intensidad de
acuerdo a la cantidad de protenas presentes.
El complejo se forma a partir de la interaccin de los grupos NH
del pptido (procedentes de los enlaces peptdicos entre los
aminocidos) y los iones Cu (II) presentes en la disolucin.

http://www.ibt.unam.mx
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MECANISMO
R
R R

+2
cuso4
NAOH

R R R

Dr. Guillermo Carvajal Sandoval. (2017). Manual de practicas de Bioqumica.


Ciudad de Mxico: Instituto Politecnico Nacioal, ENCB. 42
40
43
41
44
-
-
+ Color violeta
+ Color violeta

42
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4) REACCIN CON NINHIDRINA.

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LA NINHIDRINA REACCIONA ESPECFICAMENTE
CON EL GRUPO DE -AMINO DE LOS
AMINOCIDOS, YA SEAN LIBRES O BIEN UNIDOS
MEDIANTE ENLACES PEPTDICOS.

SE ESPERA QUE SE PRODUZCA UN CAMBIO DE


COLORACIN, QUE VARA ENTRE EL AZUL Y EL
VIOLETA.

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en Tubo Solucin
Colocar
1. 0.5mL de agua destilada
2. 0.5mL de solucin de
grenetina hidrolizada con
pH neutro
(Solucin B)
3. 0.5mL de solucin de
grenetina sin hidrolizar
Agregar (solucin c)
A cada tubo 4. 0.5mL solucin de
0.5mL de solucin albmina (solucin D)
de ninhidrina al 3% 5. 0.5mL de solucin al 1% de
un aminocido patrn.

observar

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5) REACCIN CON CIDO NITROSOS
Cuando un aminocido es tratado por cido nitroso, forma
hidroxicido y nitrgeno.
La medida del volumen de N2 formado permite determinar
cualitativamente la cantidad de grupos amina "libres" presentes en
la muestra de aminocidos o protenas. (grupos amina lfa no
combinados)

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REACTIVOS
Cantidad Reactivo
3.0 mL HCl concentrado
2.0 mL Solucin "A"
2.0 mL Solucin "C"
2.0 mL Solucin "D"
2.0 mL Agua destilada
CIDO CLORHDRICO
4.0 mL Nitrito de sodio al 5% PM: 36.45 g/mol
Solubilidad: soluble en agua,
NITRITO DE SODIO alcoholes, ter y benceno.
PM: 69 g/mol P. de ebullicin: 50C
Soluble en agua P. de fusin: -66C
P. de ebullicin: <320C Lquido incoloro o amarillo con
P. de fusin: 270C desprendimiento de vapores
Slido granulado "ALTAMENTE CORROSIVO"
cristalino color blanco o
amarillo. 50
PROCEDIMIENTO

En cuatro tubos de ensayo, Enseguida agregar:


agregar 3 mL de HCl
concentrado
TUBO SOLUCIONES
1 2 mL de hidrolizado de grenetina (solucin "A")

2 2 mL de grenetina sin hidrolizar (solucin "C")

3 2 mL de solucin de albmina (solucin "D")

4 Tubo testigo sin protena

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Enfriar y agregar a los 4
tubos 1 mL de solucin
acuosa de nitrito de
sodio al 5%

Se observar
efervescencia en el caso
de las pruebas positivas

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6) REACCIN REGULADORA DE
AMINOCIDOS.
Cantidad Reactivo
4.0 mL Agua destilada
4.0 mL Solucin B En esta reaccin se pone en manifiesto
0.6 mL Solucin como un aminocido acta como
Indicadora Rojo un cido o una base, ya que los
congo aminocidos son anfteros, utilizamos
0.6 mL Fenolftaleina al hidrxido de sodio y cido clorhdrico para
0.1% las diferentes reacciones.
El necesario HCl al 0.1N
El necesario NaOH al 0.1 N

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CON HCI Tubo Solucin

1. 2mL de hidrolizado
de grenetina a pH
Colocar neutro
2. 2mL de agua
destilada
A cada tubo agregar:

primero 6 gotas de rojo


congo.

concluir Despus Gota a gota de


HCl (hasta
observar cambio
de color)
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CON NaOH al 0.1N
Tubo Solucin

1. 2mL de hidrolizado
Colocar de grenetina a pH
neutro
2. 2mL de agua
destilada
A cada tubo agregar:

primero 6 gotas de
Fenolftalena
concluir
Despus Gota a gota de
NaOH(hasta
observar cambio
de color) 55
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CROMATOGRAFA EN PLACA FINA
REACTIVOS
Cantidad Reactivo
0.1mL Solucin B
0.1mL Solucin patrn de
aminocido 1, al 1%
0.1mL Solucin patrn de
aminocido 2, al 1%

3.0mL Solucin alcohol terbutilico


agua 3:1
La necesaria Solucin de ninhidrina para
revelar 57
Aplicar
solucin B
(punto A)
Aminocidos Dejar secar
patrn (B y C)
A. B C

Realizar la
cromatografa en
Deter una mezcla de
Dejar secar
minar Revelar usando alcohol
Rf ninhidrina y calor terbutilico-agua
7:3

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BIBLIOGRAFA

John McMurry, QUMICA ORGNICA 7a edicin, Biomolculas:


aminocidos, pptidos y protenas, (pp.1016-1059), Cengage
Learning Editores S.A., Mxico 2008.
http://www.ibt.unam.mx
Litwack G. "Bioqumica Experimental". Edicin, 1967. Barcelona.
Editorial Omega
Dr. Guillermo Carvajal Sandoval. (2017). Manual de practicas de
Bioqumica. Ciudad de Mxico: Instituto Politecnico Nacioal, ENCB.
Walter W. Linstromberg, QUMICA ORGNICA, Protenas y
aminocidos, Editorial Revert S.A., Espaa 1979.
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GRACIAS

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