INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BOTÁNICA

BIOTECNOLOGÍA VEGETAL

PRÁCTICA: EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE

FICOBILIPROTEÍNAS.

GRUPO: 4QM1

EQUIPO: 2

INTEGRANTES:
-ALVARADO RIVERO ALEJANDRO
-FLORES ACOLT LUIS ANGEL

FECHA DE ENTREGA: 07/11/2019

Introducción:
Las ficobiliproteínas son proteínas solubles en agua, que funcionan como pigmentos
fotosintéticos accesorios en diferentes organismos tales como las cianobacterias,
las algas rojas y las criptomonadas. La aloficocianina (APC), la C-ficocianina (CPC),
la ficoeritrina (PE) y la ficoeritrocianina (PEC) son las principales ficobiliproteínas
que componen los ficobilisomas (FBS). Los FBS son complejos supramoleculares
que aparecen anclados periféricamente en la superficie externa de la membrana de
los tilacoides de las células de estos organismos.

A diferencia de los carotenoides y clorofilas y, debido a su carácter hidrosoluble, las

ficobiliproteínas no forman parte de las antenas de los fotosistemas (los cuales se
encuentran en la bicapa lipídica), sino que forman una estructura adherida a la
superficie citoplasmática de las membranas de los tilacoides asociada
preferentemente al fotosistema II de las algas, denominada ficobilisoma.

En dicho sistema, las ficobiliproteínas se encuentran organizadas en tres capas

dispuestas en forma tal que se facilita la transferencia de energía lumínica captada
hacia el centro de reacción, localizado en la membrana del tilacoide.

La ficoeritrina y la ficocianina tienen un estado de excitación menos enérgico (se

excita a menores longitudes de onda) y por ello se localizan en la periferia de la
antena; a diferencia de la aloficocianina, que se encuentra localizada próxima al
centro de reacción y cuyo estado excitado es más enérgico (se excita a mayores
longitudes de onda).

Es importante decir que esta estructura solamente está presente en los tilacoides
de las cianobacterias y algas rojas, y es por esto que ha sido poco estudiada. Sin
embargo, observándose por electroforesis que dentro de aquellas tres capas de
pigmentos existen muchas más (pudiendo sumar hasta 100). Además el
ficobilisoma tiene la capacidad de reorganizarse cambiando la configuración de
esas capas, lo cual le ayuda a absorber más eficientemente la energía si el alga es
arrastrada por una corriente a la profundidad, o de disipar convenientemente el
exceso de luz si el alga es arrastrada a la superficie del mar por causa de otra
corriente. También se cree que se trate de una gran transglutaminasa, ya que son
estas enzimas las capaces de cambiar la configuración de sus capas.
Objetivos: Cuantificar la proporción de ficobiliproteínas de un extracto acuoso
obtenido a partir de la biomasa de un cultivo de cianobacterias.
Metodología:

Tomar 50 mL de un cultivo de Filtrar en papel Whatman No. 1;

cianobacterias (Arthrospira recuperar la biomasa y pesarla
máxima) en condiciones de (0.1g).
asepsia.

Guardar en oscuridad y en Colocar en un tubo de centrifuga y

refrigeración por 24 horas. adicionar 10 mL de regulador de
Centrifugar el extracto a 1000 fosfatos; congelar y descongelar la
rpm por 30 minutos y recuperar muestra hasta observar un cambio de
el sobrenadante. color.

Leer el sobrenadante a 650, Leer la absorbancia cada 10

620 y 565 nm; usando nm, en un intervalo de 400 a
regulador de fosfatos como 700 nm y graficar.
blanco.

Sustituir las lecturas de absorbancia en las

formulas:

PC (ficocianina) = {A620nm-0.7(A650nm)}/7.38

AP (aloficocianina)= {A560nm-0.19(A620nm)}/5.65

PE (ficoeritrina)= {A565nm-2.8(PC)-1.34 (AP)}/12.7

Resultados:
Resultados del equipo:
● Absorbancia a 565 nm: 0.314
● Absorbancia a 620 nm: 0.582
● Absorbancia a 650 nm: 0.288
 ⮚ PC (ficocianina)= 0.051544
⮚ AP (aloficocianina)= 0.031401
⮚ PE (ficoeritrina)= 0.007999
Promedio de las absorbancias del grupo:
● Promedio de absorbancia a 565 nm grupal: 0.2223
● Promedio de absorbancia a 620 nm grupal: 0.42
● Promedio de absorbancia a 650 nm grupal: 0.2298

⮚ PC (ficocianina)= 0.03511
⮚ AP (aloficocianina)= 0.026548
⮚ PE (ficoeritrina)= 0.0069611

Chart Title
0.007999

0.031401
0.051544

ficocianina aloficocianina ficoeritrina

Discusión:
Se nos proporcionó una cantidad de cianobacterias para poder obtener algunos
componentes fotosintéticos, como en este caso nuestro tema de investigación son
las ficobiliproteínas. La función de las ficobiliproteínas es atrapar la luz luminosa
entre el intervalo de 495-650nm. Para hacer los cálculos correspondientes se obtuvo
la absorbancia de la cianobacteria a diferentes longitudes de onda, y se multiplicó
por 5, esto se debe a que se trabajó con una dilución 1:5. Se calculó la cantidad de
Fitocianina, Ficoeritrina y Aloficocianina; para ello se utilizaron las formulas descritas
en el manual.
Como se observa en la gráfica, la fitocianina se encuentra en mayor cantidad, esto
se debe a que es la principal biliproteína de las cianobacterias, además que absorbe
la luz junto con las clorofilas, esta tiene una mayor afinidad por la luz anaranjada y
roja.

Conclusión:
Las cianobacterias son bacterias Gram negativas que llevan a cabo fotosíntesis
oxigénica, son las responsables de la conversión de la atmósfera de anóxica a
óxica. Solo poseen la clorofila A, además de pigmentos característicos de
biliproteínas, las ficobilinas, las cuales funcionan como pigmentos accesorios. Las
ficobilinas están unidas covalentemente a proteínas de unión específicas, formando
las ficobiliproteínas, que se asocian en complejos ordenados llamados
ficobilisomas. Estos representan las principales estructuras de captación de luz en
estos microorganismos.
Las ficobiliproteínas son tetrapirroles de cadena abierta rojos o azules acoplados a
proteínas; estas son: Ficoeritrina (PE),Ficocianina (PC) y Aloficocianina (AP).
La energía de los fotones absorbidos por PE o PC es transmitida por AP a la clorofila
A del centro de reacción del fotosistema II mediante un proceso conocido como
transferencia de excitones.

Bibliografía:
⮚ Raven P., Evert R., Eichhorn S. (1992) Biología de las plantas. (Ed. Rev)
Editorial Reverté Barcelona España. Pp.479 y 480.
⮚ Taiz L.,Zeiger E. (2006) Fisiología vegetal. Volumen 1 editorial Universitat.
Pp 843 a 847.