Post-Laboratorio 5

Alumno:

Jeisson Estiven Micelly Moreno

Docente:

María Fernanda Garcés Gutiérrez

Genética Humana

Grupo: C

Bacteriología y Laboratorio Clínico

Facultad de Ciencias de la Salud

Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca

Bogotá, 2021

1. ¿Qué es el bandeo de alta resolución y cómo se realiza?

Bandeo de Alta resolución
-También se conoce como estudios de Bandeo extendido o cariotipo de alta
resolución, este permite evaluar los cromosomas con una resolución más alta que la
del análisis cromosómico estándar, los cromosomas están dispuestos de manera tal
que se alargan un poco, por lo que se pueden ver más bandas. Esto permite observar
partes más reducidas del cromosoma e identificar, de este modo, anomalías
cromosómicas estructurales más pequeñas que no pueden ser vistas en un análisis de
rutina.

De esta manera, al producirse una elongación de los cromosomas es posible la

detección de alteraciones estructurales más pequeñas como microdeleciones,
duplicaciones y sutiles translocaciones.

Tomado de:

Técnica:
Se debe realizar un cultivo para cualquier caso en donde, las células son sembradas en
medios comunes como MEM o RPMI 1640 + SFB al 20% y se estimulan con
fitohemaglutinina.
Las preparaciones sobre los cromosomas para alta resolución se obtienen
incrementando el número de células prometafásicas y profásicas, no en metafásicos.
Para lograrlo se sincronizan las células en división bloqueando la síntesis de ADN con
un inhibidor, el metotrexato. Así después de ser cultivada la muestra por 70 h a 37°C
se adiciona metotrexato MTX. Al pasar 15 a 18 horas más se libera el ciclo celular
timidina o BrdU, esto se deja actuar durante 5 a 5 h y media y así se obtienen
cromosomas más largos, bandas que se desdoblan en subbandas. Se detectan
alteraciones del orden de 3 a 4 Mb.
Esta técnica es indicada también en pacientes con retraso mental “idiopático”, retraso
no explicado de crecimiento o baja estatura. En este último caso, las deleciones del
brazo corto de X o Y, llevan genes importantes en determinación de altura. En casos
de infertilidad se han observado reorganizaciones cromosómicas. La técnica implica
una sincronización de linfocitos con Timidina y exposición mínima al colcemid y
permite el análisis de los cromosomas detenidos en fases precoces de la mitosis.

Tomado de:
 Cariotipo de alta resolución de Médula ósea (Resolución banda 600-800)

Tomado de:

2. Complete el siguiente cuadro:

TIPO DE PRINCIPAL REACTIVO Y UTILIDAD EJEMPLO VISUAL

BANDA OBTENCIÓN

GIEMSA Tinción con Giemsa, azul de -Observación de puntos

metileno fosfatado y buffer frágiles sobre los cromosomas
fosfatado gota gruesa Giemsa e incluso el análisis de la
(una mezcla de tintes de tiazina y heterocromatina.
eosina). No se trata solo se utiliza
reactivo Giemsa. -Permite detectar
aneuploidías, aberraciones
estructurales mediante la
representación fotográfica de
todo el complemento
cromosómico.

-Detecta regiones
fluorescentes con alto
predominio de A-T, Las
bandas Q brillantes coinciden
con las bandas G oscuras.
 -Permite detectar regiones
centroméricas de alto
contenido de heterocromatina
centromérica y que tiende a
apuntar a trastornos
genéticos. que resultan de
mutaciones que involucran la
heterocromatina constitutiva.

-Tiñe los genes de RNA

ribosómico situados cerca de
las regiones tallo y satélite de
los cromosomas acrocéntricos.

BANDA G Tinción con Giemsa, azul de -Identifica cromosomas o

metileno fosfatado y buffer regiones cromosómicas
fosfatado gota gruesa Giemsa implicadas en rearreglos.
(una mezcla de tintes de tiazina y
eosina), después de tratar la -Detectar aberraciones
muestra con tripsina (Digestión) estructurales.
produciendo bandas claras y
oscuras. -Permite hacer correlación
Bandas G+ (Oscuras) cariotipo fenotipo y así
Bandas G- (Claras) delinear nuevos síndromes
cromosomicos.

-Localización y mapeo de
genes específicos.

-Referencia

BANDA Q Tinción con mostaza de -Excelente para investigación

quinacrina o acridina. Se analiza de polimorfismos en regiones
con microscopía fluorescente y se ricas heterocromatina.
ven bandas brillantes .
-Identificación del origen
parental de cromosomas
acrocéntricos.

-Identificación específica de ,
pruebas de paternidad y
trastornos como trisomía
13,14,15,21 y 22.
 BANDA C Extracción de ADN/proteínas Tiñe la heterocromatina
teñidas con Giemsa o estructural, que se encuentra
fluorocromos (actinomicina D o normalmente cerca del
cromomicina) y se trata centrómero.
previamente con calor o álcali
moderadamente fuerte (NaOH, -Polimorfismos o
Ba(OH)2) con el objetivo de heteromorfismos en bandas C
desnaturalizar el DNA (sirven como marcadores
genéticos poblacionales).

-Pruebas de paternidad y
visualización de roturas
cercanas a la región
centromérica o traslocaciones
que implican inactivación por
efecto a posición contigua a
otra.

-Determinar el orígen de las

trisomías.

BANDA NOR Tinción con Plata Resalta los satélites y los

0.2uL de solución de nitrato de
plata al 50% filtrada a la
preparación, luego adicionar 6 a
8 gotas de formaldehído al 0.3%
(acelera la tinción) e incubar a
37°C durante 24h protegido de la
luz.
brazos de los cromosomas
acrocéntricos.
-Determinan puntos de rotura
en rearreglos que implican
cromosomas acrocéntricos.
-Estudio de la actividad de
genes ribosomales en
condiciones normales y en
presencia de mutágenos, así
como en diferentes tipos y
estadios celulares.

FPG Fluorescencia más Giemsa -Permite la fácil visualización

Las células se cultivan en BrdU de los intercambios de
durante dos ciclos celulares cromátidas hermanas (SCE).
completos.
Un par de cromosomas en -Se utilizan comúnmente
metafase sin intercambios tendrá como un indicador de efectos
una hermana con ambas cadenas genotóxicos en las células.
marcadas con BrdU y la otra
hermana con solo una de las dos -Se consideran actualmente
cadenas marcadas. más un biomarcador de
exposición y reparación que
Utilizar reactivo Solución un indicador de efecto
 Hoechst 33342 (colorante mutagénico .
fluorescente de ADN empleado
en la microscopía de
fluorescencia y en la separación
celular por citometría de flujo).

Alternativamente se puede
realizar con Naranja de acridina.

3. Describa la técnica de hibridación genómica comparativa y de un ejemplo de su

utilidad. Opcional en una hoja aparte entregue este punto y tendrá un adicional
para el parcial).

Hibridación Genómica Comparativa (HGC / CGH)

- Corresponde a un método citogenético que permite analizar las variaciones en el
número de copias en relación con el nivel de juegos completos de cromosomas
(ploidía), es decir, se realiza un análisis de una muestra de ADN Control (Cianina 3)
(marcada con una sonda fluorescente verde) con una muestra de ADN Paciente
(Cianina 5)(marcada con una sonda fluorescente roja) para ver si en el embrión hay
alguna desviación con respecto a la muestra de referencia. sin necesidad de montar un
cultivo celular.

Amarillo: Si el ADN de ambas muestras coincide, en la placa del array se observa

fluorescencia amarilla, fruto de la combinación de las moléculas fluorescentes verdes
y rojas.

Verde: Si falta información genética en el ADN del embrión, se observará

fluorescencia roja.
Roja: Si el ADN embrionario está duplicado, es decir, se encuentra en una cantidad
mayor de lo normal, la fluorescencia emitida será verde.

Tomado de:

El objetivo de esta técnica es comparar de manera rápida y eficiente dos muestras de

ADN genómico derivado de dos organismos diferentes, que a menudo se relacionan
pues se sospecha que tienen diferencias ya sea en la ganancia o pérdida de
cromosomas completos o regiones sub cromosomales (una porción del cromosoma).

Esto se logra con el uso de la hibridación competitiva fluorescente in situ, es decir,

microarrays.

Aplicaciones:
-Investigación contra el cáncer
-Diagnóstico de enfermedades raras
-Diagnóstico prenatal y preimplantatorio

Ejemplo:
 CONSIDERACIONES FINALES

1. ¿Qué es la citogenética molecular?

En forma general, agrupa un conjunto de técnicas que aplican diferentes métodos de

la biología molecular directamente sobre preparaciones citológicas tales como tejidos,
células, cromosomas y fibras de ADN.

Actualmente, la mayoría de las técnicas de citogenética molecular se basan en la

tecnología de la hibridación in situ fluorescente o FISH ( hibridación fluorescente in
situ). Esta tecnología abrió la posibilidad de estudiar regiones específicas de la
cromatina directamente sobre los cromosomas, gracias a la información derivada de la
secuencia misma del ADN, y no solamente por simples características morfológicas.

Se basa en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridarse entre sí,
permitiendo la detección de y localización de secuencias específicas de ADN.

Se utilizan técnicas como:

- FISH (Hibridación fluorescente in situ): Utiliza nucleótidos marcados con

sustancias fluorescentes puede observarse la señal inmediatamente después del
FISH al microscopio de fluorescencia.
Con el FISH se obtienen diagnósticos rápidos y precisos en anomalías
cromosómicas totales y parciales y en alteraciones específicas, tales como:
-Síndrome de Down
-Sindrome de Patau
-Síndrome Prader-Willi
-SíndromeWilliams
-Cáncer y leucemias.
- CGH (Hibridación Genómica Comparativa): Al igual que el cariotipo,
estudia globalmente el genoma. Tiene más resolución que el cariotipo. No
necesita cultivo, es de alta especificidad y sensibilidad.
- SKY o M-FISH: Utiliza sondas marcadas fluorescentemente hechas para
marcar DNA específico de cada cromosoma. Permite el estudio y
visualización de los 23 pares de cromosomas en forma simultánea. Identifica
aberraciones estructurales cromosómicas en células cancerígenas.

2. ¿Qué reactivo se usa en el bandeo funcional y para qué sirve?

-Mayormente conocido como Bandeo R, corresponde al bandeo reverso al
bandeo G para ello se debe pretratar con calor y luego teñir con colorante de
Giemsa.

La banda inversa es una técnica de bandas descrita por primera vez por
Dutrillaux y Lejeune. Observaron que si los cromosomas se trataron con
tampón fosfato 0,02 M (pH 6,5) a 87 ° durante diez minutos y luego se tiñeron
con Giemsa, el patrón de bandas era el opuesto al de bandas G. El
calentamiento provoca la desnaturalización del ADN.

Es utilizado para teñir los extremos de los cromosomas que contienen

Eucromatina es decir regiones ricas en GC (Guanina y Citosina) donde se
produce la transcripción.

La técnica es útil para analizar deleciones genéticas o translocaciones

cromosómicas que involucran los telómeros de los cromosomas.
 En algunos casos, las bandas R son un complemento útil para las bandas G
porque algunas pequeñas G ligeras así la banda se puede detectar más
fácilmente cuando se tiñen con bandas R.

Cariotipo del paciente. (A) Giemsa (GTG) y (B) bandas inversas (RBG). La flecha es un
cromosoma 4 anormal, que tiene un material adicional de origen desconocido en la región
terminal del brazo corto (4p). Tomado de: https://www.researchgate.net/figure/Karyotype-of-
the-patient-A-Giemsa-GTG-and-B-reverse-RBG-banding-The-arrow-is-an_fig1_221883045
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