Tema 10: Cinética Enzimática

1. Representar en un diagrama el cambio de energía libre contra el curso de una

reacción no catalizada y el efecto producido sobre la misma, en presencia de un
catalizador

Las enzimas modifican solo la velocidad de reacción y no alteran el equilibrio de la

reacción, a pesar de que los enzimas son magníficos catalizadores, ellas no pueden
modificar las leyes de la termodinámica y por tanto no pueden alterar el equilibrio de
una reacción química. Consideremos una reacción de conversión de Sustrato en
producto S-> P catalizada por un enzima. En la gráfica se representa la velocidad de
formación de producto en función del tiempo, en la presencia y en la ausencia del
enzima, obsérvese que la cantidad de sustrato formado es igual, tanto en presencia del
enzima como en su ausencia.

2. lar mediante un gráfico la relación entre la velocidad de una reacción catalizada

enzimáticamente y la temperatura

La teoria cinetica —también llamada la teoria de la coalicion— de cinética química

declara que para que dos moléculas reaccionen, deben: 1) aproximarse dentro de la
distancia formadora de enlace de la otra, o “chocar”, y 2) poseer suficiente energía cinética
para vencer la barrera de energía para alcanzar el estado de transición. Por ende, resulta que
cualquier cosa que aumente la frecuencia o energía de colisión entre sustratos aumentara el
índice de la reacción en la cual participan. El aumento de la temperatura incrementa el
índice de reacciones tanto no catalizadas como catalizadas por enzima al aumentar la
energía y la frecuencia de choque de las moléculas que están reaccionando. Sin embargo, la
energía calorífica también aumenta la energía cinética de la enzima hasta un punto que
excede la barrera de energía para alterar las interacciones no covalentes que mantienen su
estructura tridimensional. La cadena polipeptídica empieza entonces a desdoblarse, o
desnaturalizarse, con una perdida acompañante de la actividad catalítica. El rango de
temperatura en el cual una enzima mantiene una conformación estable, competente desde el
punto de vista catalítico, depende de —y, por lo general, excede de manera moderada— la
temperatura normal de las células en las cuales reside. Las enzimas de seres humanos, por
lo común, muestran estabilidad a temperaturas de hasta 40 a 55°C.

Aumentar la temperatura incrementa la energía cinética de las moléculas. El número total

de moléculas cuya energía cinética excede la barrera de energía Eact (barra vertical) para la
formación de productos aumenta desde temperaturas bajas (A), pasando por intermedias
(B) hasta altas (C) (fig. 8-2). El aumento de la energía cinética de moléculas también
aumenta su rapidez de movimiento y, por ende, la frecuencia con la cual chocan. Esta
combinación de choques más frecuentes y más energéticos y productivos, aumenta el índice
de reacción.

El Q10, o coeficiente de temperatura, es el factor por el cual el índice de un proceso

biológico aumenta para un incremento de 10°C de temperatura. Para las temperaturas en las
cuales las enzimas son estables, los índices de casi todos los procesos biológicos
típicamente se duplican para un aumento de temperatura de 10°C (Q10 = 2). Los cambios
de los índices de reacciones catalizadas por enzima que acompañan a un aumento o
disminución de la temperatura corporal constituyen una característica de supervivencia
prominente para formas de vida “de sangre fría” como lagartos o peces, cuya temperatura
corporal esta dictada por el ambiente externo. Sin embargo, para mamíferos y otros
organismos homeotermicos, los cambios de los índices de reacción de enzimas con la
temperatura solo asumen importancia fisiológica en circunstancias como fiebre o
hipotermia.
3. Señalar mediante un gráfico el efecto del pH sobre la velocidad de una reacción
catalizada enzimáticamente resaltando: A) pH optimo B) Desnaturalización de la
enzima C) Efectos sobre el estado de carga eléctrica de la enzima o el sustrato

El índice de casi todas las reacciones catalizadas por enzima muestra una dependencia
importante de la concentración de ion hidrogeno. Casi todas las enzimas intracelulares
muestran actividad óptima a valores de pH entre 5 y 9. La relación entre actividad y
concentración de ion hidrogeno refleja el equilibrio entre la desnaturalización de enzima a
pH alto o bajo, y los efectos sobre el estado cargado de la enzima, los sustratos o ambos.
Para enzimas cuyo mecanismo comprende catálisis acido básica, los residuos comprendidos
deben estar en el estado de protonación apropiado para que la reacción proceda. La unión y
el reconocimiento de moléculas de sustrato con grupos disociables típicamente también
comprenden la formación de puentes salinos con la enzima. Los grupos cargados más
frecuentes son grupos carboxilato (negativos) y aminas protonadas (positivos). La ganancia
o pérdida de grupos cargados cruciales afecta de manera adversa la unión a sustrato y, así,
retrasara o suprimirá la catálisis.

4. Enuncia la teoría de la cinética de Michaelis Menten, utilizando la ecuación

matemática

Para investigar la velocidad de una reacción el método más sencillo es seguir el

incremento del producto de la reacción en función del tiempo. La cantidad del producto
de la reacción en función del tiempo. La cantidad del producto formado se determina
como una función del tiempo para una serie de concentraciones diferentes de sustrato.
Como se espera, en todos los casos, aumenta la cantidad de producto en función del
tiempo, hasta alcanzar un punto donde no existen cambios netos en la concentración ([])
de So P, el enzima aun activo convierte el sustrato en producto y viceversa. En dicho
tiempo se dice que el enzima ha alcanzado el equilibrio de la reacción, Sin embargo, las
cinéticas enzimáticas son más fácilmente comprendidas si se consideran solamente la
reacción directa. Se puede definir la velocidad de catálisis Vo como el número de moles
de producto formado por segundo cuando la reacción acaba de empezar, esto es, cuando
p= 0, para muchos enzimas, Vo caria con la concentración de sustrato y, luego, a
mayores concentraciones de sustrato comienza a aproximarse al máximo.

En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten propusieron un modelo sencillo que explica
estas características cinéticas, El aspecto critico de su desarrollo es que se necesita un
complejo específico ES intermediario en la catálisis. El modelo que propusieron es el
más sencillo de los que pueden explicar las propiedades cinéticas de muchos enzimas.

Una enzima E se combina con S para formar un complejo ES con una constante de
velocidad K1, el complejo ES tiene dos destinos posibles, puede disociarse hasta E y S
con una constante de velocidad K_1 o bien puede continuar hasta formar un P con una
constante de velocidad K2. El complejo ES también puede ser generado a partir de E y
P mediante la relación inversa en una constante de velocidad de K_2, sin embargo,
como anteriormente, podemos simplificar estas reacciones, considerando la velocidad
de reacción próxima a tiempo 0 (es decir Vo), cuando la formación de producto es
insignificante y de esta forma la reacción no revierte (K_2 [P] = 0)
 Así, para la gráfica de la fig. 8.12 Vo se determina para cada concentración de sustrato
midiendo la velocidad de formación de producto a tiempos previos a la acumulación de
P

Necesitamos una expresión que relacione la velocidad de catálisis con las concentraciones
de sustrato y enzima y la velocidad de las etapas individuales. Sea parte de la base de que la
velocidad catalítica es igual al producto de la concentración del complejo ES por K2:

Ahora necesitamos expresar ES en función de magnitudes conocida, las velocidades de

formación y de destrucción de ES vienen dadas por:

Para simplificar esta materia, en 1924 George Briggs y John Haldane sugirieron el uso del
estado estacionario. En el cual, las [] de los intermediarios, en este caso [ES], permanecen
invariables, mientras que las concentraciones de los materiales de partida y de los productos
van cambiando, Esto ocurre cuando las velocidades, de formación y de destrucción del
complejo ES son iguales, igualando las ecuaciones anteriores, tenemos
Dicha ecuación puede simplificarse definiendo una nueva constante el Km, denominada
constante de Michaelis:

Obsérvese que Km tiene unidades de concentración y es independiente de la concentración

del enzima y la del sustrato, como se ha mencionado, el Km es una característica
importante de las interacciones enzima-sustrato, sustituyendo las ecuaciones anteriores y
despejando [ES], resulta

Ahora examinaremos el numerador de la ecuación, la [S], es casi igual a la concentración

total de S, la [E] es igual a la concentración total de E menos la [ES]. Sustituyendo:

Sustituyendo [ES] por Vo obtenemos

5. Representar gráficamente el afecto que produce la concentración del sustrato
sobre la velocidad de una reacción catalizada enzimática

En lo que sigue, las reacciones enzimáticas se tratan como si solo tuvieran un sustrato único
y un producto único. Para enzimas con múltiples sustratos, los principios que se comentan a
continuación se aplican con igual validez. Los científicos pueden estudiar la dependencia
del índice de reacción en un reactivo individual por medio de la selección apropiada de
sustratos fijos y variables. En otras palabras, en condiciones de seudoprimer orden, la
conducta de una enzima con múltiples sustratos imitara a la de otra que cuenta con un solo
sustrato. Sin embargo, en estas circunstancias, la constante de índice observada estará en
función de la constante de índice de k1 para la reacción, así como la concentración del (o
los) sustrato(s) fijo(s). Para una enzima típica, a medida que la concentración de sustrato
aumenta, Vo se incrementa hasta que alcanza un valor máximo Vmax (Fig. 8-4). Cuando
los aumentos adicionales de la concentración de sustrato no aumentan más la vi, se dice que
la enzima esta “saturada” con sustrato. Note que la forma de la curva que relaciona la
actividad con la concentración de sustrato, es hiperbólica. A cualquier constante dada, solo
las moléculas de sustrato que se combinan con la enzima como un complejo ES pueden
transformarse en producto. En segundo lugar, la constante de equilibrio para la formación
del complejo de enzima-sustrato no es infinitamente grande. Por ende, aun cuando el
sustrato está presente en exceso (puntos A y B de la fig. 8-5), solo una fracción de la
enzima puede estar presente como un complejo ES. Por tanto, de los puntos A o B,
aumentar o disminuir [S] aumentara o disminuirá el número de complejos ES con un
cambio correspondiente de vi. En el punto C (fig. 8-5), en esencia toda la enzima está
presente como el complejo ES. Dado que no queda enzima libre disponible para formar ES,
los aumentos adicionales de [S] no pueden aumentar el índice de la reacción. En estas
condiciones de saturación, la vi depende solo de —y, de este modo, está limitada por— la
rapidez con la cual el producto se disocia de la enzima de modo que logre combinarse con
más sustrato.
6. Definir Km, relacionarlo con la afinidad de la enzima y explicar la importancia
fisiológica

Los valores de los enzimas varían ampliamente, para la mayoría de los enzimas Km
varía entre 10 a la -1 y 10 a la -7 M el valor de Km para un enzima depende de cada
sustrato partículas y también de las condiciones ambientales como pH, temperatura y
fuerza iónica. La Km tiene dos significados, primero Km es la concentración de sustrato
a la cual la mitad de los centros activos están ocupados, así Km proporciona una medida
de la concentración de sustrato necesaria para que tenga lugar una catálisis significativa,
de hecho, para muchos enzimas, las evidencias experimentales sugieren que la Km
proporciona una aproximación en vivo de la concentración de S

Segundo Km se relación con la constante de velocidad de las etapas individuales en el

esquema catalítico representado anteriormente, De acuerdo con la ecuación Km se
define como (K_1 +K2)/K1, consideremos un caso limite en el cual K_1 es mucho
mayor a K2, esto significa que la disociación del complejo ES hacia E y S es mucho
más rápida que la formación de producto, en estas condiciones (K_1 >> K2).

En otras palabras KM, es igual a la constante de disociación del complejo ES, si K2 es

mucho menor que K_1, en estas condiciones Km es la medida de la estabilidad del
complejo ES, una Km baja indica una unión fuerte, debe subrayarse que Km indica la
afinidad del complejo ES solamente cuando K_1 es mucho mayor que K2.

 Características de Km: la constante de Michaelis-Menten es característica de una

enzima y particular para un sustrato. Refleja la afinidad de la enzima por ese
sustrato. Km es numéricamente igual a la concentración de sustrato a la cual la
velocidad de reacción es la mitad de la Vmax (Km= Vmax/2). Este parámetro, Km
no varía con la concentración de enzima.
 Significado de un Km pequeño: un valor numérico pequeño de Km refleja una alta
afinidad de la enzima por su sustrato porque a una baja concentración del mismo, la
enzima ha desarrollado ya la mitad de la velocidad máxima.
  Significado de un Km grande: el valor numérico grande de Km refleja una baja
afinidad de la enzima por su sustrato porque a una concentración elevada del
mismo, la enzima desarrolla la mitad de la velocidad máxima.
7. Comparar los valores de Km de varias reacciones enzimáticas y relacionarlas con
su importancia fisiológica

8. Representar Gráficamente una reacción normal aplicando la ecuación de

Lineweaver Burk y señalar Sus parámetros cinéticos.
9. Representar gráficamente una reacción inhibida competitivamente y no
competitiva, aplicando la ecuación de Lineweaver Burk, señalando en el los
parámetros cinéticos y compararlos con una reacción normal

Inhibidores enzimaticos

existen agentes quimicos que inhiben la accion de las enzimas, algunos de ellos ejercen su accion
uniendose a sitios o grupos funcionales esenciales de la molecula en enzima, esas sustancias son
de gran utilidad para estudiar algunos aspectos de la accion enzimatica, principalmente los grupos
funcionales que participan en la catalisis o son responsables de asegurar los requerimientos
estructurales para la union enzima-sustrato, la inhibicion puede ser reversible o irreversile. El
mecanismo de accion de un inhibidor se estudia mediante determinaciones de actividad
enzimatica a varias concentraciones de sustrato en ausencia y presencia de una concentracion dija
del inhibidor, la epresentacion grafica de los resultados permite establecer el tipo de inhibicion.

inhibidores irreversibles

producen cambios permanentes en la molecula de la enzima, con deterioro definitivo de us

capacidad catalitica, como Ej, tenemos los venenos organofosforados, utilizados como insecticidas,
Producen inhibicion irreversible de acetilcolinesterasa, enzima muy importante en sistema
nervioso, la molecula alterada no recupera su actividad normal. Dentro de este grupo, se incluyen
los llamados inhibidores suicidas, los cuales por sus semenjanzas con el sustrato, pueden ocupar
su sitio activo y ser transformados por la enzima, estos forman uniones covalentes con la enzima y
blouqean irreversiblemente el sitio activo.

inhibidores reversibles:

inhibidores competitivos: aumentan el valor de la constante de michaelis, pero no modifican la

velocidad maxima de la enzima, estos efectos se alcanzan por distintos mecanismos. A) en algunos
casos el inhibidor, presenta similitudes con el S y ambos compiten por el sitio activo del enzima,
como por ejemplo el Succinato DH y el malonato, el cual tiene semejanzas con el succinato. b)
algunas moleculas actuan omo inhibidores competitivos uniendose al sitio activo del enzima a
pesar de no poseer similitud estructural con el sustrato, un ejemplo es el saliciato inhibidor de la
Alcohol DH. C) En otros casos el inhibidor y el sustrato se fijan a diferentes sitios del enzima, pero
por la union de uno de ellos se impide la del otro. Como ambos se exlcuyen mutuamente,
inhibidor y sustrato solo pueden unirse con un E, la enzima fijada a inhibidor (I) es inactivada, en
presencia de I se requieren [] mayores que en ausencia del mismo, hay una aparente disminucion
de afinidad de la enzima por el sustrato (aumento de Km) los inhibidores competitivos tienen
aplicaciones farmacologicas.

Inhibidores no competitivos: se unen a la enzima en un lugar de la molecula diferente del sitio

activo y disminuyen la velocidad maxima sin modificar la Km, este tipo de inhibicion, no es
revertida por aumento de la [S], en prsencia de inhibidor, la curva de velocidad inicial frente a [S],
muestra menor activdad a todas las concentraciones, la union del sustrato con la enzima no está
afectado, el I se une ya sea a la enzima libre o al complejo ES, una vez formado el complejo IES, la
enzima se inactiva.

Inhibidres anticompetitivos: Existe otro tipo de Inhibicion reversible, denominados

anticompetitivos o acompetitivos, las graficas de actividad en funcion de [S] realizadas en
presencia y en ausencia de I muestran reduccion de la velocidad en todas las [S], el inhibidor es
une al complejo ES y forma el complejos inactivo ESI.
10. Definir enzimas Alostericos y explicar las diferencias entre homotropicas y
heterotropicas

Enzimas alostericas, En algunas vías metabólicas, las enzimas que catalizan la primera
etapa de la serie es inhibida por el producto de la última, cuando la cantidad de este
producto final excede las necesidades, se frena el funcionamiento de la vía reduciendo la
actividad de la enzima regulador.

Se habla de inhibición por retroalimentación, por ejemplo la aspartato transcarbamilasa.

En otros casos, la enzima es estimulada por compuestos que se acumulan en el medio. El

activador puede ser el propio sustrato de la enzima. Cuando existe exceso de sustrato, él
mismo promueve su utilización activando la enzima.

Estas acciones, tanto de inhibición como de activación, son reversibles; al descender la

concentración de la sustancia modificadora se normaliza la actividad de la enzima.

El agente modificador actúa uniéndose a la enzima en un lugar distinto al del sitio

catalítico; de allí su nombre alostérico (griego, allo otro, stereo: sitio o lugar)

En enzimas alostericas, además del sitio catalítico, existen otros sitios reguladores a los
cuales se unen específicamente las moléculas que actúan sobre su actividad catalítica, estos
agentes reciben el nombre de moduladores, modificadores o efectores Alostericos. Serán
positivos si estimulan y negativos si deprimen la actividad de la enzima. Cuando el
modulador alostérico es distinto del sustrato, el efecto es denominado heterotropico, si el
agente modificador es el mismo sustrato, es homotropico
11. Comparar, mediante gráficos, la cinética de una enzima Alosterica, con la clásica
cinética de una enzima (no modulada) tipo Michaelis Menten.

Cuando se analiza la actividad en enzimas frente a concentraciones crecientes de sustrato,

generalmente se obtiene una curva hiperbolica, esta es la cinetica enzimatica clasica, pero no es la
correspondiente a enzimas alostericas, con ellas se obtiene una curva sigmoide, demejante a la de
saturacion de hemoglobina con oxigeno.
12. Explicar a qué se le denomina sistema multienzimatico y describir el mecanismo
de auto regulación por retroalimentación negativa, en esos sistemas.

Las enzimas pueden encontrarse libres en el citosol, incluidas en organeras o integradas a

estructuras membranosas, en algunos casos, se forman complejos organizados, constituidos
por varios enzimas diferentes cuyas acciones se complementan, ellos son sistemas
multienzimaticos ordenados de tal modo (generalmente en membranas), que el producto de
la reacción catalizada por la primera enzima es recibido como sustrato en la segunda y así
sucesivamente, las transformaciones se producen según la secuencia fijada por la
disposición espacial de los catalizadores, ejemplo de estos sistemas es el de transporte de
electrones o cadena respiratoria, asociada a membrana interna de la mitocondria, también
existen enzimas multifuncionales, así llamadas por presentar varios sitios catalíticos
distintos en una misma cadena polipeptídica: Ejemplo, ácido graso sintasa, en la mayoría de
los sistemas multienzimaticos, la primera enzima funge como como reguladora de la
velocidad de todo el sistema y se le denomina enzima reguladora o enzima Alosterica,
habitualmente esta enzima es inhibida por el producto final de la secuencia, de tal modo
que cuando se produce acumulación de producto final por sobre cierto límite crucial, este
inhibe a la primera enzima del sistema, interrumpiendo o inhibiendo el sistema entero.

13. Definir isoenzimas: en el organismo y aun en una célula, pueden existir proteínas
diferentes dotadas de la misma actividad enzimática, Esas distintas formas moleculares
de una enzima se denominan Isoenzima o Isozimas, se ha probado la existencia de
formas moleculares múltiples o isozimas en cientos den enzimas, desde este punto de
vista, ha sido muy estudiado la lactado deshidrogenasa (LDH), que presenta cinco
isozimas en la mayoría de los tejidos animales, se numeran de acuerdo con movilidad
electroforética, designando I a la que migra más hacia al ánodo, la distribución relativa
de actividad enzimática entre las cinco formas, es característica de cada tejido, en
extractos de musculo diafragma se revelan las cinco isozimas con intensidad
aproximadamente similar. En cambio, en corazón hay un franco predominio en las
isozimas 1 y 2; en hígado y musculo voluntario, la fracción 5 es la más abundante.
14. Citar ejemplos de isozimas de interés para el diagnóstico clínico:
Enzima Isozima/s

Hexoquinasa Glucoquinasa
Lactato Deshidrogenasa LDH 1, 2,3,4 y 5
Amilasa Amilasa P y Amilasa S
Creatin fosfo quinasa (CPK) CPK M y B
IMPORTANTE:
En la creación de esta guía se ha utilizado material didáctico obtenido de los libros:
 Bioquímica Lehninger 4taEd
 Harper Bioquímica Ilustrada 28Ed
 Bioquímica de Blanco 8ed. Lubert Styer Bioquímica 6ta ed.