[I.E.

S MORATALAZ]

PROYECTO FINAL DE LABORATORIO CLÍNICO Y

BIOMÉDICO

“ESTUDIO SOBRE DIAGNÓSTICO Y CRIBADO

PRENATAL DE PATOLOGÍAS
CROMOSÓMICAS”

o Alumno: Sergio Messaoudi Artalejo

o Profesora coordinador del proyecto: Dolores Cabezas
o Convocatoria: Junio
o Curso: 2019-2020

1
ÍNDICE
1.INTRODUCCIÓN………………………………………………………………..…….Pag 1
2. DESARROLLO DEL PROYECTO…………………………………………………Pag
2.1OBJETIVOS ……………………………………………………………………………
2.2 REVISION HISTÓRICA………………………………………………………………
2.2.1 Primeras técnicas y cronología tipos de técnicas de diagnóstico y cribado…
2.3 TIPOS DE PATOLOGÍAS CROMOSÓMICAS………………………………………
2.3.1 Introducción ¿Qué son los cromosomas?..................................................
2.3.2 Tipos de patologías cromosómicas………………………………………….
2.3.2.1 Introducción a las patologías cromosómicas
2.3.2.2 Tipos de patologías cromosómicas
2.3.2.2.1. Patologías numéricas
2.3.2.2.2. Patologías estructurales
2.4 TÉCNICAS EN EL LABORATORIO Y APLICACIÓN………………………Pag.
2.4.1. TÉCNICAS NO INVASIVAS DE CRIBADO
2.4.1.1 ¿Cuándo se realizan las estrategias de cribado?...............
Pag.
2.4.1.2 Tipos de pruebas de cribado…………………………… Pag.
2.4.1.2.1 Tipos de marcadores…………………… Pag.
2.4.1.2.2 La ecografía. Marcadores ecográficos……………
2.4.2 TÉCNICAS INVASIVAS DE DIAGNÓSTICO
2.4.1.2 El cariotipo……………………………………………………… Pag.
2.4.2.1 La amniocentesis…………………………………………. Pag.
2.4.2.2 Biopsia corial (BVC)……………………………………….. Pag.
2.5 PRESENTE Y FUTURO DEL SCREENING PRENATAL
2.5.1Hibridación Fluorescente in situ (FISH) …………………. Pag.
2.5.2 Microarrays (aCGH)……………………….………………….. Pag.
2.5.2ADN fetal (cffDNA)…………………………………….……. Pag.
3. CONCLUSION PERSONAL…………………………………………………………Pag
4. BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………Pag

2
1.INTRODUCCIÓN

El progreso que ha experimentado el diagnóstico prenatal desde sus comienzos a

mediados del siglo XX, hasta la llegada de nuestros días, ha modificado radicalmente el
manejo que hacemos de los embarazos actualmente en los países más industrializados.

Siempre se ha dicho, que un ser vivo tiene tres funciones que son vitales: relación,
nutrición y reproducción. Dentro de esta dimensión, se observa una gran paradoja
biológica, y es “el riesgo al nacer” que hay inherente a la vida. Por ello, uno de los
principales desafíos que surgen, y al que se enfrentan todos los padres - una vez
averiguan la trascendental noticia del embarazo -, es conocer cómo irá el desarrollo de su
bebe durante su larga gestación.

Para controlar la normalidad de este proceso, -o tomar medidas en caso de que se

observase alguna anomalía -, se han desarrollado y estandarizado a nivel mundial una
serie de diferentes metodologías clínicas agrupadas principalmente en dos tipos de
técnicas: de cribado y diagnóstico prenatal.

Por tanto, en el estudio de estas patologías cromosómicas surge, por un lado, el término
“cribado” o “screening prenatal” de la población, que se puede definir como “Aquel
estudio poblacional que utiliza la aplicación sistemática de métodos de detección que
permitan seleccionar entre todos los individuos aparentemente sanos, aquéllos con más
riesgo de padecerlas” 2.

Por el otro, el otro término fundamental que surge es el término «diagnóstico prenatal»
que ha sido definido la OMS como “Todas aquellas acciones diagnósticas encaminadas a
“descubrir durante el embarazo un “defecto congénito”, entendiendo por tal «toda
anomalía del desarrollo morfológico, estructural, funcional o molecular presente al nacer
(aunque puede manifestarse más tarde), externa o interna, familiar o esporádica,
hereditaria o no, única o múltiple»”1.

Las anomalías cromosómicas sexuales son las más

frecuentes al nacimiento, se estima que tienen una
incidencia de 1 en 300-400 embarazos.
Las anomalías cromosómicas sexuales son las más
frecuentes al nacimiento, se estima que tienen una
incidencia de 1 en 300-400 embarazos.
Las anomalías cromosómicas sexuales son las más
frecuentes al nacimiento, se estima que tienen una
incidencia de 1 en 300-400 embarazos.

3
Como se observa, históricamente el cribado prenatal se ha centrado en las técnicas no
invasivas – carecen de riesgo para el feto-, y se hacen habitualmente anteriormente a las
de diagnóstico. Es por ello que cabe señalar, que solo se recurrirá a estas últimas cuando
se vea necesario al utilizar las técnicas de cribado y se observe alguna anomalía que hay
que confirmar.

Para comprender el interés que puede tener el estudio sobre patologías prenatales a
nivel mundial, basta con observar algunas estadísticas generales internacionales, en la
cuales se observa que existe una incidencia de gran cantidad de casos a nivel global. Por
poner un ejemplo, según estudios realizados por Nussbaum et al., aproximadamente
entre el 3 y el 5% de los embarazos se complican por defectos de nacimiento3.

Centrándonos en las anomalías cromosómicas, estas también tienen una gran incidencia,
ya que según diversos estudios estas patologías están presentes en aproximadamente 1
de cada 150 nacimientos vivos. Estas anomalías incluyen diferentes patologías diversas
que explicaré más adelante como, por ejemplo, aneuploidías, translocaciones,
duplicaciones y deleciones 3.

Dentro la detección de estas patologías cromosómicas, hay una que cobra especial
relevancia: la detección precoz del síndrome de Down. Esto se explica, debido a que se
trata de “La aneuploidía más frecuente a nivel mundial en recién nacidos vivos y la causa
más frecuente de retraso mental severo”.4. Esta patología fue estudiada por primera vez a
mediados del siglo XIX por el doctor J. Langdon Down el cual observó que iba asociado a
deficiencia metal y a caracteres anatómicos concretos (microcefalia y baja estatura)5.

Por último, a modo de introducción, es interesante señalar acerca de las patologías

cromosómicas, como es un campo que se podría considerar con unos orígenes de
investigación recientes, que a día de hoy se encuentran, en constante desarrollo y
evolución. Como explicaré en mi trabajo, este estudio comenzó a mediados del siglo XX
con la introducción de las primeras y simples técnicas ecográficas, y ha ido
evolucionando hasta nuestros días, con técnicas mucho más avanzadas, como explicaré
a continuación, por ejemplo, la aparición de la tecnología de microarrays en 1997 (aCGH)
o los fiables test de ADN células fetales libres en sangre materna en el año 2012
(cffDNA).

4
2. DESARROLLO DEL PROYECTO

2.1 OBJETIVOS

1. Ver el desarrollo histórico que ha tenido este campo desde sus inicios hasta
nuestros días.
2. Aprender las diferentes técnicas de screening y diagnóstico prenatal que
existen en la sociedad actual.
3. Conocer los factores principales de riesgo que predisponen a las diferentes
patologías.
4. Conocer cuáles son los principales marcadores que se utilizan para el
diagnóstico prenatal y observar cómo afectan sus variaciones en el neonato.
5. Analizar las ventajas y las desventajas de las diferentes técnicas.
6. Discutir acerca de la utilidad de estas pruebas y en qué medida su aplicación
puede afectar objetivamente al bienestar social.

Como objetivo personal, me propongo estudiar la diversa bibliografía existente, para

adentrarme en el interesante mundo de las patologías cromosómicas. Con ello, trataré de
tener un acercamiento a este tema observando -en la medida de mis limitaciones- sus
vertientes y técnicas, aprendiendo sobre diferentes campos interesantes para un técnico
de laboratorio, como son, por ejemplo, la biología molecular o la bioquímica.

2.2 REVISION HISTÓRICA

2.2.1 Orígenes y Cronología tipos de técnicas de diagnóstico y cribado

Para comenzar, históricamente mediados del siglo XX se señala como el punto de partida
de las técnicas de estudio de patologías cromosómicas. De hecho, la primera técnica

5
efectiva de detección de defectos de nacimiento, la ecografía, se desarrolló en la década
de los 50 mediante ultrasonidos 6. Por otro lado, en esa misma década, en el campo de la
biología molecular, se describió por primera vez la primera técnica diagnóstica prenatal
invasiva: La amniocentesis.6
Una técnica fundamental desde su descubrimiento en 1956, ha sido el cariotipo
-convencional - ya que, como señalan S. Javier et al, pronto se convirtió en “la técnica de
primera elección para el diagnóstico prenatal, en casos de alto riesgo en partos
combinados, malformación ecográfica sugerente de cromosomopatía, antecedentes
familiares y otras indicaciones”7. Este análisis y estudio del cariotipo sirvió para detectar
diversas patologías numéricas y estructurales que explicaré más adelante en los tipos de
patología.

Es importante señalar, como el estudio prenatal se ha centrado principalmente en

detectar casos de un tipo de aneuploidía en especial: la trisomía del cromosoma 21
(síndrome Down). Esto es debido a que esta trisomía, es a día de hoy, la patología
cromosómica más común que afecta a los nacimientos en todo el mundo. Es interesante
observar cómo, pronto se estableció que el riesgo de trisomía 21 aumentaba según la
edad materna de gestación. Esta asociación entre la edad materna y el riesgo de tener un
hijo con síndrome de Down fue descrita por primera vez por Penrose en 19338.

Para que nos hagamos una idea del valor del hallazgo, según estudios posteriores
realizados por Snijders J.M y Sunmberg. K el riesgo de lactante con trisomía 21 aumenta
de 1 de cada 983 a la edad de 20 años, a 1 de cada 62 a la edad de 40 años9. Tabla 1

Aunque como he comentado, inicialmente, los

métodos de detección convencionales se
desarrollaron para identificar fetos con trisomía 21,
pronto otras patologías, como, por ejemplo, la
trisomía 18 (síndrome de Edwards), la trisomía 13
(síndrome de Patau) y la monosomía X (síndrome
de Turner), también se detectaron con el uso
generalizado de estas pruebas de detección10.

Tabla 1 extraída de SnijdersJ.M , Sundberg K. Maternal

age-and gestation-specific risk for trisomy 21. Harris
Birthright Research Centre for Fetal Medicine Medical
School, London. 1999 p 169-170

6
A partir de la década de 1970, se desarrolló la amniocentesis de forma rutinaria a las
mujeres embarazadas de más de 35 años. Sin embargo, el cribado basado únicamente
en la edad materna permitió solo la detección del 30% de los fetos con trisomía 21 al
ofrecer pruebas de diagnóstico a solo un 6% del total de las mujeres embarazadas6 .

La década de los 80 del siglo pasado fue especialmente relevante en cuanto a diversas
investigaciones en el ámbito prenatal. Por un lado, a comienzos de los 80 se introdujo de
manera rutinaria la detección de anomalías cromosómicas en mujeres menores de 35
años. Esto se produjo, cuando se publicaron los primeros informes que vinculaban los
bajos niveles de una hormona en suero materno -la alfafetoproteína- con embarazos con
trisomía 2111 . Este hallazgo lo realizó el investigador Merkatz en el año 1984, y observo,
que cuando esta proteína estaba en niveles más bajos de lo normal, hacía indicar que las
embarazadas sufrían gran posibilidad de ser portadoras de fetos patologías.

Por otro lado, tras el hallazgo de Merkatzen, comenzó a principios de la década una
búsqueda acelerada de marcadores bioquímicos capaces de mejorar la detección con la
menor tasa de error posible. Pronto, se descubrieron otros tres biomarcadores útiles en el
diagnóstico prenatal: la gonadotropina coriónica humana (hCG), el estriol no conjugado
(uE3) y la inhibina A (IA). Por último, al poco tiempo se añadieron otros dos marcadores
asociados al embarazo: la proteína A asociada al embarazo (PAPP-A) y la fracción beta
libre de la gonadotropina coriónica humana (hCG).6

Ya a finales de esa misma década de los 80, Nicolaides et al. demostraron la importancia
de una nueva prueba de screening: la translucencia nucal (TN). Para finalizar esa misma
década tan prolífica, también hay que nombra la introducción de la hibridación in situ
fluorescente (FISH), que fue toda una revolución en la forma que se había estudiado el
cariotipo hasta el momento. Esta tecnología permitió una mejora considerable de la
visualización de las estructuras cromosómicas, al hacerlas mucho más visibles al
marcarlas con fluorescencia y ser vistas a través de un campo oscuro. Antes de la
llegada del nuevo siglo, hubo otra innovación tecnológica reseñable, la aparición de los
microarrays (aCGH) en el año 1997. Esta novedosa técnica revolucionó el campo de la
biología molecular en su momento.

Finalmente, me centraré en un gran avance que se produjo en el ámbito de investigación

de las técnicas no invasivas principios de este siglo XXI. Este descubrimiento fue la
.
llegada de las primeras pruebas de test ADN fetal en sangre materna en el año 2011.
Esta técnica es la principal de las nuevas denominadas pruebas prenatales no invasivas
(NIPT por sus siglas en inglés) y su descubrimiento ha generado un interesante campo
de estudio.

7
2.3 TIPOS DE PATOLOGIAS CROMOSOMICAS

2.3.1 Introducción ¿Qué son los cromosomas?

Antes de abordar los tipos de patología cromosómica que existen, creo que es necesario
definir los cromosomas y una serie de aspectos básicos de biología sobre estos.

Para comenzar, hablaré sobre el genoma. Me gustó mucho la definición dada por el
Instituto Marques. Este centro de investigación explica el genoma humano con una fácil
analogía: “Se podría decir que nuestro genoma es como una “enciclopedia” formada por
23 “tomos” o pares de cromosomas compuestos de ADN. El ADN a su vez, está formado
por la repetición de 4 “letras” llamados nucleótidos, que combinados entre ellos forman
genes o “palabras”12.

Todo esto nos interesa, ya que cuando haya variaciones en esta combinación de letras,
empiezan los problemas. Esta ampliamente demostrado que estas variaciones en la
disposición de las letras, son las responsables de la diversidad humana, pero también
son el origen de las enfermedades genéticas”.

Centrándonos ya en tema de las patologías cromosómicas, me parece fundamental

definir qué son los cromosomas. Una primera aproximación sería que son una parte
fundamental de la célula, y que se hallan en el núcleo de ella - en la cromatina
específicamente -. Estos, poseen una parte vital, la información genética, que es el
mecanismo de transmisión de los caracteres que poseen los progenitores hacia su
descendencia de generación en generación.

Es interesante observar los comienzos sobre el estudio de los cromosomas. Aunque el

primer descubrimiento relacionado con los cromosomas se produjo a mediados del siglo
XIX, hubo que esperar casi un siglo para ver en profundidad los cromosomas humanos,
ya que su evaluación detallada fue ya aparecida la segunda mitad del siglo XX.

8
Estos primeros orígenes se remontan al año 1842, cuando el botánico suizo Karl
Wilhem Von Nägeli observo por primera vez las estructuras teñidas del núcleo en una
célula, aunque su hallazgo fue en el núcleo de células vegetales 13.

Otro aspecto que hay que señalar es observar cómo cada especie tiene un número
determinado de cromosomas. Por poner un ejemplo, los gatos tienen 38 cromosomas en
19 pares. En nuestro caso, poseemos 46 cromosomas divididos en 23 pares. De estos
cromosomas, 22 de ellos se han denominado autosómicos -la mayoría – mientras que el
par 23 restante, son cromosomas sexuales que determinan el sexo. Esto fue descubierto
por los investigadores Joe Tjio y Albert Levan en su trabajo “The chromosome number of
man” publicado en la revista Hereditas el 26 de enero de 1956 con la siguiente foto14:

Foto extraída: Primera foto de cromosomas humanos Tjio, JH, Levan, A, The

chromosome number of man, Hereditas: Genetitiskt Arkiv, (1956), 1-2: pp. 1-6.

De esto se extrae, que las mujeres poseen en el par 23, dos cromosomas iguales X (XX)
mientras que los hombres poseen un cromosoma X y otro Y (XY), esto será importante,
ya que algunas patologías solo podrán ser transmitidas a mujeres y otras a hombres
debido a su cariotipo cromosómico diferente.

Hay que señalar también, que cada cromosoma contiene miles de genes - en diferente
proporción- según el par de cromosomas que sea. Según estudios realizados el genoma
humano está formado por 3.000 millones de pares de bases (Mb) y contiene unos 20.000
genes localizados que se disponen de forma lineal a lo largo de los cromosomas 15.

Hay que señalar también como los cromosomas se estudian mediante el estudio de sus
locus. Esto es una posición fija en el cromosoma que siempre se repite y que permite
determinar, si hay alguna anomalía justamente en ese lugar, que patología nos
enfrentamos

9
Por último, respecto a los cromosomas, otro aspecto que me parece importante comentar
es el del fenotipo y genotipo. El genotipo se define como el conjunto de genes que
conforman a un individuo de una determinada especie. El fenotipo es la expresión
observable – en forma física – de las características de dicho individuo. Estas dos
dimensiones cobran especial relevancia, ya que algunas patologías cromosómicas se
expresan de una forma -fenotípicamente- u otra -genotípicamente-, o combinadas.

2.3 TIPOS DE PATOLOGÍA CROMOSÓMICAS

2.3.1 Introducción a las patologías cromosómicas

Existen muy diversos tipos de patologías cromosómicas, pero se puede observar dos
características básicas. Por un lado, todas estas alteraciones tienen – generalmente - un
origen común en la meiosis -reproducción sexual- y por otro, como detallaré más
adelante, su clasificación se puede subdividir en dos grupos principales: las patologías
numéricas y las patologías estructurales.

Antes de entrar en los tipos de patologías cromosómicas, me parece muy importante

nombrar los dos procesos básicos que existen para la reproducción de las células en
nuestro cuerpo: la mitosis y la meiosis. Como explica la bióloga Roldan L., la principal
diferencia entre los procesos de mitosis y meiosis : “viene determinada por la función que
desempeña cada proceso en nuestro organismo. Mientras que la mitosis, es la división
del núcleo de cualquier célula de un organismo – también llamadas células somáticas-,
es necesaria para el crecimiento y renovación de dichas células; la meiosis la llevan a
cabo exclusivamente las células sexuales, y tiene el objetivo de intercambiar información
genética entre los núcleos de dos células sexuales de diferentes organismos, para
aumentar así la diversidad genética y supervivencia de las especies” 16.

Es importante señalar entonces que, aunque, la meiosis solo se realice en las células
sexuales de los gametos, esta es más larga y tiene más divisiones celulares. Es por esto,
que presumiblemente, aunque también se pueden dar en las células somáticas en
algunos casos, es en esta meiosis donde se producen la mayoría de las anomalías
cromosómicas.

Esta modificación de la meiosis en alguna de sus etapas, provoca que ocurran

alteraciones en la estructura o el número de cromosomas. Este error, se da en alguno de
los pasos del proceso evolutivo que llevan a cabo las células, desde las primeras células
germinales mediante el proceso de gametogénesis, hasta la formación final del cigoto,

10
que es la célula resultante de la fusión de los dos gametos de los progenitores (óvulo y
espermatozoide).

Por último, antes de entrar en el tema central de los dos tipos de patología cromosómica
que existen, me parece importante comentar un aspecto biológico determinante, y es
observar cómo algunas de las patologías que se pueden producir en el feto, son
compatibles con la vida, otras tienen una esperanza de vida extralimitada a los primeros
meses de vida, y otras directamente son directamente incompatibles con esta. Por poner
un ejemplo, pondré uno sobre un tipo de aneuploidía, las trisomías. Según diversas
investigaciones, las únicas que son compatibles con la vida en humanos son las trisomías
de los cromosomas 13, 18,21 y X 17.

2.3.2 TIPOS DE PATOLOGIAS CROMOSÓMICAS

Como he señalado, el patrón normal del cariotipo humano puede verse alterado de
diversas formas en el número y/o en la estructura de los cromosomas, Aunque hay
cientos de anomalías cromosómicas, para su estudio, desde una perspectiva general, las
anomalías cromosómicas se clasifican fundamentalmente en dos tipos:

1. Anomalías numéricas
2. Anomalías estructurales

2.3.2.2.1. PATOLOGIAS NUMERICAS

Por un lado, las anomalías o patologías numéricas se refieren a un defecto en el número

de cromosomas, ya sea con una pérdida - defecto - o una ganancia – exceso - de
material genético. Se observa pues como el cariotipo siempre está desequilibrado en
caso de anomalía numérica. Por ejemplo, un bebe afecto con monosomía del cromosoma
X, tendrá el cariotipo desbalanceado, con 45 cromosomas en lugar de los 46 habituales,
con el cariotipo caracterizado como (45, X).

Dentro de estas anomalías numéricas podemos encontrar dos grandes grupos:

 Aneuploidías
 Poliploidías

Por un lado, las aneuploidías hacen referencia a una variación numérica en el par sexual
23. Estas, pueden ser debidas a un cromosoma de más, - en cuyo caso se llaman
trisomías- aunque también podemos encontrarnos la monosomía, que es provocada por
un cromosoma de menos. La incidencia mundial estimada de las aneuploidías más
comunes que se conocen se muestra en la siguiente tabla 1

11
De esta investigación, se desprende, que las
aneuploidías más comunes que afectan a
humanos son:

 Las trisomías de los cromosomas

21,18,13, X.
 La monosomía del cromosoma sexual
femenino también llamado Síndrome
de Turner (45, X), -que solo afecta a
mujeres-.
 El síndrome de Klinefelter (XXY), -que solo afecta a Tabla Datos extraídos de
Carlson LM, Neeta L. Vora,
hombres-. Prenatal Diagnosis,
Screening and Diagnostic

 El síndrome del “Superhombre”, -que solo afecta a Tools. Department of

Obstetrics and Gynecology,

hombres-. University of North Carolina

School of Medicine;2017
p.10

Como se puede observar, esta incidencia a nivel mundial se podría considerar más que
notable. Ya que, según estos estudios 1 de cada 800 nacimientos tendrá síndrome de
Down. Otras patologías, como la trisomía del 13 – también llamado síndrome de Patau-
tendrán una incidencia menor con aproximadamente solo un nacimiento afectado de cada
15.000 que ocurran.

Es interesante observar un fenómeno que se da con frecuencia en las aneuploidías y es

el del mosaicismo, en el que conviven dos líneas celulares distintas. Este fenómeno se da
en diversas aneuploidías como las trisomías o el síndrome de Klinerfelter e implica la
convivencia de dos líneas celulares con diferente genotipo en una persona.

Por otro lado, dentro de las anomalías cromosómicas numéricas encontramos las
poliploidías. Estas se producen cuando se adquiere un juego o más completo de
cromosomas. Es importante señalar como generalmente no son compatibles con la vida.
Estas poliploidías en la gran mayoría de casos son abortadas entre las semanas 7 y 17
de gestación, y son pocas las que llegan a término.

12
Por poner un ejemplo. En esta imagen referente a un caso clínico real de poliploidía, al
estudiar la ecografía se observó diversos defectos en la formación del feto. Sin embargo,
el detalle que más llamó la atención de los especialistas, fue la clara restricción del
crecimiento del bebé, a pesar de llevar la madre más de 4 meses de embarazo y
encontrarse en la veinteava semana de gestación. En todo caso, aunque llegue a
término, se ha evidenciado que la supervivencia extrauterina a largo plazo la más
prolongada para una poliploidía que existe documentada en la bibliografía clínica es de
11 meses18.

2.3.2.2.1 PATOLOGIAS ESTRUCTURALES

En cuanto al otro grupo general, las anomalías estructurales, como generalidad, estas se
refieren diferentes defectos en los cromosomas, que en cambio son normales en número.
Estas anomalías resultan de diversas causas que alteran su estructura como, por
ejemplo: la rotura, la unión o la inversión incorrecta de segmentos cromosómicos entre sí.
Hay que señalar que estos cambios estructurales se pueden agrupar en desequilibrados
o equilibrados en función de si se pierde o gana material genético con esta alteración.

Hay diferentes defectos estructurales que pueden provocar irregularidades en la

formación del bebe. Desde una duplicación -en la cual se produce exceso de material
genético, ya que una parte específica del cromosoma se copia; una deleción, en la que
se pierde o elimina parte del material genético ; pasando por la translocación, que se
produce cuando una parte de un cromosoma se transfiere a otro; siguiendo por
inversiones que se produce cuando una parte del cromosoma se invierte; e incluso
produciéndose a veces desprendimientos de una parte de un cromosoma produciéndose
que se forme un círculo o un anillo cromosómico. Otra alteración habitual que se puede
dar es el mosaicismo, el cual ocurre da cuando hay dos o más poblaciones de células
con distinto genotipo originadas a partir de un mismo cigoto coexistiendo.

Estas patologías estructurales pueden provocar graves daños en el bebe de la gestante,

como por ejemplo producen las microdelecciones de los denominados Sindromes de
Angelman y Prader-Willi que tienen lugar en el brazo largo del cromosoma 15,
específicamente en la región 11-q13 (15q11-q13). En este caso, es interesante observar

13
cómo en esta patología, si el cromosoma que experimenta la alteración es de origen
paterno, se produce el síndrome de Prader-Willi. En cambio, si este cromosoma es de
origen materno, se produce el síndrome de Angelman.

Estos síndromes y sus patologías observadas son diferentes entre ellos, pero todas ellas
son poco deseables y dificultan la vida de la persona que la posee. Por poner un ejemplo,
los niños afectos con la microdeleción Prader-Willi están asociados a baja estatura y
obesidad, mientras que los que posean el síndrome de Angelman tendrán muchas
posibilidades de padecer trastornos de sueño y microcefalea 19

Por último, dentro de estas patologías estructurales se han examinado muchos tipos de
microduplicaciones. Por poner un ejemplo, se ha estudiado la microduplicación que se
produce en el cromosoma 3 en el brazo largo en la región (3q29-q13). Esta
microduplicación fue descrita por Lisi E.C et al, los cuales observaron la patología en la
totalidad de una familia. Al analizar esta familia en detalle, se observó que esta
20.
microduplicación conllevaba retraso mental leve para todos los miembros de ella

2.4 TÉCNICAS EN EL LABORATORIO Y APLICACIÓN

Estas técnicas tienen diferentes clasificaciones, pero hay una que está muy clara:
Siempre que haya un riesgo para el feto o la madre, se llamará técnica invasiva mientras
que, si no conlleva riesgo alguno será una técnica no invasiva.

A lo largo de este capítulo trataré los distintos tipos de técnicas que hay, así como trataré
de acercarme a las técnicas y los procedimientos de cada una de ellas para así
comprender por qué es útil cada una de ellas en su medida. Trataré de observar las
diferentes ventajas y desventajas que conllevan cada técnica, así como sus limitaciones.

Por último, antes de comenzar con los tipos de técnica creo que es importante señalar
otro punto importante, y es observar cómo mientras las pruebas invasivas son definitivas,
las no invasivas -a excepción de la de ADN fetal- son de presunción y no tiene un valor
diagnóstico definitivo. Por tanto, poseen un tanto por ciento de falsos positivos, y falsos
negativos, por lo que muchas veces se llevan a cabo varias pruebas a la vez, o una de
ellas sirve para confirmar el diagnóstico desprendido por otra de ellas

2.4.1 TECNICAS NO INVASIVAS DE CRIBADO

Las técnicas de cribado son las primeras que se realizan a la madre una vez tiene
constancia de su embarazo. Se podrían definir como de detección, ya que se utilizan
como rastreo rutinario, o como sospecha en grupos de riesgo en la mayoría de países
occidentales.

14
Existen tres tipos de pruebas de cribado fundamentales en la actualidad:

 El ADN libre en células maternas

 El análisis bioquímico (de sustancias presente en la sangre de la madre)
 La ecografía.

En este apartado me centraré en cómo se realiza la técnica de estos los dos últimos,
dejando el ADN fetal en sangre materna para último punto de mi trabajo, sobre el
presente y futuro de la detección de patologías cromosómicas.

Como he comentado, estas técnicas tienen la ventaja fundamental de que no hay riesgo
al realizarlas, pero su valor predictivo es bastante menor que las invasivas, por lo que, en
caso de observarse anomalías, se deben combinar con las estrategias invasivas.

2.4.1.2 Tipos de pruebas de cribado

Como he comentado, los tipos de prueba no invasiva que se han utilizado y existen en el
cribado prenatal de patologías cromosómicas – a excepción de la extracción de ADN
celular fetal en sangre materna - son dos principalmente 21:

 Los marcadores bioquímicos.

 Los marcadores ecográficos.

Dentro de los marcadores bioquímicos que se pueden estudiar, y que están presentes en
la sangre de la madre, hay cuatro que se observan principalmente:

 La Alfa-fetoproteina (PAPP-A) que es una proteína producida por el feto.

 La beta-HCG libre producida por la placenta.
 la inhibina A (IA) producida por el feto.
 El estriol libre (ENC). que es estrógeno producido por el feto y la placenta.

Estos marcadores bioquímicos, son útiles en conjunto con la técnica básica de la

ecografía. Trataré de explicar su procedimiento y qué parámetros se estudian en dicha
técnica, aunque antes, voy a tratar de explicar qué parámetros se usan para realizar las
pruebas de cribado prenatal.

2.4.1.1 ¿Cuándo se realizan las estrategias de cribado?

Las estrategias de cribado tienen un protocolo predeterminado. Como explica Muñoz
Bailón E. en el texto “Situación actual del diagnóstico prenatal”, actualmente las
estrategias de cribado prenatal se pueden dividir en dos espacios temporales
principalmente 21:

15
Por un lado, nos encontramos el cribado del primer trimestre, que se realiza de la de
forma óptima de la semana 9 a las 14 de la gestación, en ella se tiene en cuenta diversos
parámetros:

 Edad materna.
 Pliegue nucal medido mediante translucencia.
 Doble test marcadores bioquímicos: Betagonadrotofina coriónica (BHCG) y de la
proteína A en plasma asociada al embarazo (PAPP-A)

El segundo cribado -que se realiza si el primero no se realizó- que se puede llevar a cabo
comprende el segundo trimestre del embarazo, entre las semanas 15 y 19 de la
gestación, y en este cribado se tienen en cuenta estos parámetros:

 Edad materna.
 Doble test: Betagonadrotofina coriónica (BHCG) y de la proteína A asociada al
embarazo Alfafetoproteína (PAPP-A).
 Se añaden dos nuevos marcadores bioquímicos que mejoran la detección:
Inhibina A y estriol libre (ENC).

Como se puede observar, aunque pruebas no invasivas como translucencia nucal tienen
un porcentaje de predicción cercano al 75%, si se observan anomalías, es con pruebas
diagnósticas invasivas como la biopsia corial o la amniocentesis cuando se consigue
llegar al 100% de índice de predicción y se puede llegar a confirmar un diagnóstico.

2.4.1.2.2 La ecografía
Como he comentado, esta técnica no invasiva es la técnica fundamental en el cribado
prenatal, ya que fue la primera que se utilizó de forma generalizada para detectar
patologías cromosómicas.

Esta técnica se derivada del uso de ultrasonidos, tiene unos marcadores que han sido
ampliamente estudiados, en la ecografía prenatal, son dos principalmente21:

 La translucencia nucal (TN).

 La deficiencia o falta de huesos nasales.

La translucencia nucal (TN) es el marcador ecográfico más eficaz en el cribado de las

aneuploidías más frecuentes en el primer trimestre. Como hemos visto, su medida se
realiza entre las semanas 10 y 14 de gestación.

Para realizarse su procedimiento se mide el espacio situado en la zona posterior de la

nuca del feto, expresando en milímetros el diámetro. Cuando está aumentado, constituye

16
un factor de riesgo asociado a una posible anomalía genética, como la trisomía del
cromosoma 21 o la monosomía del cromosoma X. Según estadísticas, la translucencia
nucal (TN) se ve aumentada en el 37% de las cromosomopatías 21.

El segundo marcador ecográfico importante a estudiar, es la ausencia o defecto del

hueso nasal en feto. Este parámetro se puede observar en el primer trimestre de
gestación, y se produce como consecuencia de un retraso de la osificación por una
alteración de la matriz extracelular. Esta patología se observa ligada al Síndrome de
Down. Según estudios realizados, se estima que se encuentra en un 73% de los fetos
con síndrome de Down y mientras que sólo en un 0,5% de los fetos normales poseen
dicha afección.

Como ventaja de la ecografía se pueden señalar, por un lado, la seguridad de la técnica,

que la convierte su uso en generalizado, y por otro, que las imágenes que se consiguen
son a tiempo real, con lo que el posible examen de screening puede realizarse
rápidamente.

Como desventaja de esta técnica se puede señalar que no detecta la mayoría de los tipos
de patologías existentes, por lo que hace necesario realizarla en conjunto con otras
pruebas complementarias. Otra desventaja que se puede señalar, es el hecho de que no
se puede incluir en el grupo de las pruebas diagnósticas, ya que puede obtenerse
resultados de falso positivo y falso negativo. Esto provoca que, en caso de positivo, sea
preciso llevar a cabo una prueba invasiva de confirmación adicional.

Como curiosidad, comentar que actualmente está en proceso de validación un tercer

parámetro ecográfico21, este es: el estudio del ducto. El ducto es un pequeño vaso que
comunica la aorta con la arteria pulmonar y que normalmente está abierto al feto, pero
que se cierra justo después del nacimiento. El estudio de este ducto puede crear nuevas
metodologías de estudio interesantes.

2.4.2 TÉCNICAS INVASIVAS DE DIAGNÓSTICO

Las técnicas invasivas de diagnóstico se podrían definir como unas pruebas de
confirmación, ya que solo se utilizan cuando es estrictamente necesario -antecedentes
familiares, por ejemplo- o si se produce un resultado positivo en algunas de las pruebas
de cribado descritas anteriormente.

Es importante aclarar como la elección de una u otra técnica dependerá sobretodo, del
momento de la gestación en el que se encuentre la madre. Esto es debido a que cada
técnica tiene un periodo óptimo de realización. Dentro de las diversas técnicas de

17
diagnóstico -invasivas por definición- existentes en la actualidad, hay cuatro que destacan
sobre las demás, estas son:

 El cariotipo.
 La amniocentesis.
 La biopsia corial.
 La cordocentesis.

Por último, me parece importante señalar el hecho de que, debido a las limitaciones de
espacio, he preferido centrarme en estas, pero al investigar, se observan otras técnicas
invasivas relevantes existentes en la actualidad, como la cordocentesis -extracción de
ADN del feto- o la fetoscopia -en la cual se introduce un endoscopio dentro de la madre-.

2.4.1.2 El cariotipo

Es la técnica fundamental en el laboratorio de biología molecular. La he introducido en las

técnicas invasivas, aunque también se puede hacer cariotipo de sangre de los padres
para ver enfermedades genéticas de forma preimplantacional, y entonces se trataría de
una técnica no invasiva.

Esta técnica de laboratorio se basa en la utilización de células del embrión recogidas

mediante diversas técnicas - amniocentesis, vellosidades coriónicas- y de las imágenes
que se desprenden genéticamente por los cromosomas al realizar el cariotipado y
esperar un tiempo. El cariotipo permite analizar los cromosomas de una célula en
metafase, agruparlos por pares idénticos y clasificarlos según su morfología y tamaño.
Esto se consigue generalmente mediante linfocitos sanguíneos que se cultivan en el
laboratorio en un medio adecuado. En cuanto a la técnica, su procedimiento habitual, es
explicado por La Asociación Española de Genética Humana22:

1. Lo primero, habría que hacer un cultivo a 37ºC de la muestra.

2. Seguidamente, se realiza un subcultivo.
3. Posteriormente, habría que exponer a este cultivo a un choque osmótico mediante
el reactivo de la marca KLC.
4. Después, se fija la muestra mediante reactivo marca Carnoy.
5. Se hace la extensión de la muestra y se tiñe.
6. Se deja envejecer alrededor de 2 semanas.
7. Por último, se lleva a cabo el bandeo – o visualización – cromosómico mediante la
utilización de un microscopio óptico.

Si se ha realizado correctamente el cariotipado, se verían unos cariotipos parecidos a

estos, según sea sexo masculino (fig ) o femenino fig .

18
Es importante señalar la aparición que surge al realizar la técnica del cariotipo, de unas
bandas claras o oscuras después de teñir y que hacen luego posible el análisis -bandeo
cromosómico–, y a las cuales se los números. Hay que señalar como es una técnica
básica, pero muy útil, ya que es muy fácil observar a simple vistas algunas patologías con
la realización de un buen cariotipo. Por ejemplo, una monosomía sería fácil de observar.
Un buen ejemplo se vería en esta foto del mismo estudio:

En ella se puede observar la total ausencia de uno de los cromosomas sexuales. Esto se
traduce en que se puede observar a simple vista que falta uno de los cromosomas (45,
X). En este caso, el Síndrome de Turner como he explicado sería una patología que
surge como consecuencia de la ausencia de uno de los cromosomas X que poseen todas
las niñas sanas.

Entre las ventajas de esta técnica, se encuentran su bajo coste, que hace posible su
amplia utilización, así como que puede ser realizada por personal médico menos
cualificado, como los técnicos de laboratorio. Las desventajas de esta técnica son
diversas: desde su tiempo de realización (alrededor de dos semanas), pasando por la
poca resolución que se puede conseguir – en comparación con otras técnicas que
explicaré más adelante-, o que su realización no sirve para analizar patologías más
pequeñas que las estudiadas habitualmente, por ejemplo, microdelecciones.

2.4.2.1 La amniocentesis

La amniocentesis se basa en la punción de la barriga de la madre para extraer líquido

amniótico para su posterior análisis en el laboratorio, en busca de alguna irregularidad en
los parámetros básicos de detección. Este líquido amniótico existente contiene células

19
que se han desprendido de fuera de la membrana interna del embrión - amnios- y del
feto.

Para su análisis, se procede a la extracción de una muestra de aproximadamente 4-5 ml

de líquido amniótico La técnica de la ecografía explicada anteriormente cobra relevancia,
ya que para guiar esta aguja se utiliza esta técnica de ultrasonidos.

Su procedimiento se explica en el texto divulgativo

Revisión: Amniocentesis 23:

1. En primer lugar, se visualiza por

ultrasonidos mediante ecografía
exactamente dónde se encuentra el feto y
se localiza la placenta. También se ve la
cantidad de líquido amniótico, de modo que
el médico escoge el sitio más seguro para
insertar la aguja.
2. Después, se limpia el abdomen y a veces se inyecta anestesia local debajo de la
piel.
3. En tercer lugar, se inserta una aguja delgada por el abdomen que entra en el
útero, por donde se extraen 4-5 mililitros de líquido amniótico.
4. Después se retira la aguja. Una vez tomada la muestra, se usa el ultrasonido para
verificar que el latido del corazón fetal es normal.

Es importante señalar que para comprobar que la técnica se está desarrollando

correctamente sin algún tipo de complicaciones, deben efectuarse varias comprobaciones
del ritmo cardíaco del feto. Las contracciones excesivas o el sangrado serían indicativos
de señal de alarma24

Como ventaja de esta técnica se puede señalar su coste, ya que comparado con otras
técnicas que explicaré más adelante, no se necesitan grandes equipos, solo el uso de
ultrasonidos, una luz y una aguja. Como desventajas, la central es que existe un riesgo
relativo de daño fetal, además tiene que ser realizado por personal médico, por lo que no
es una técnica que pueda ser llevada a cabo por cualquier personal que se pueda
encontrar en un laboratorio.

2.4.2.1 La biopsia corial (BVC)

La biopsia corial o de vellosidades coriónicas es la tercera de las técnicas invasivas -que

llegado el caso- se utilizan en el laboratorio de forma generalizada para el diagnóstico de
patologías cromosómicas. Las vellosidades coriónicas son proyecciones minúsculas que

20
forman parte de la placenta de la madre, y su estudio puede servir para el análisis de
diversas patologías. Para extraer estas proyecciones se ha de llegar al corion, donde se
encuentran.

Estas vellosidades pueden ser obtenidas por dos diferentes métodos -guiados también
por ecografía -, dependiendo de la posición del útero y la ubicación de la placenta. Por un
lado, está el método transcervical que implica insertar una pinza a través de la vagina y el
cuello uterino. Por otro, el método transabdominal consiste en insertar una aguja delgada
a través de un área estéril del abdomen (similar a la amniocentesis).

Como los dos procedimientos son diferentes, a

modo de ejemplo pondré el del método
transcervical. Su procedimiento tiene 3 tiempos
bien definidos. Esto lo explican García-Posada et
al. en su texto científico divulgativo Biopsia corial
transcervical: guía práctica 25:

1. El primero paso de esta BVC, es avanzar la pinza con la que se extraerán las
vellosidades hasta el orificio cervical interno (OCI). El ayudante enfoca todo el
cérvix en la pantalla y el facultativo es guiado y coloca una pinza esterilizada en la
vagina.
2. La segunda fase de la BVC, consiste en avanzar la pinza desde el orificio cervical
interno hasta el corion donde se encuentran las vellosidades coriónicas.
3. Por último, la tercera fase de la esta prueba es la coriocentesis, que es cuando se
procede a la extracción de la muestra. En esta fase, una vez se alcanza el corion,
se avanza la pinza a la zona óptima: la más cercana a la placa corial (cara fetal
del corion) y se abre la pinza avanzando unos 3 cm. Para finalizar, se cierra la
pinza y se inicia una tracción suave hacia el exterior.

Alguna de sus ventajas son que del riesgo algo mayor comprobado de aborto
involuntario, la biopsia de vellosidades coriónicas tiene varias ventajas emocionales y
médicas sobre la amniocentesis. Esto se observa ya que brinda la oportunidad de tomar
decisiones más pronto de un diagnóstico de anomalía cromosómica (casi 6 semanas
antes que la amniocentesis) 26.

Entre sus desventajas observamos el hecho de que la muestra de vellosidades coriónicas

no puede detectar determinadas anomalías congénitas, como por ejemplo un defecto del
tubo neural -de donde luego surgirá el sistema nervioso del bebe-.

21
Por último, entre sus desventajas encontramos el hecho de que es otro procedimiento
invasivo. Este requiere de máxima concentración y un facultativo médico. Su realización
necesita del apoyo de varias personas, empezando por el ayudante que utiliza la pantalla,
para después ser necesario personal facultativo para la extracción de las vellosidades de
la placenta.

2.5 PRESENTE Y FUTURO DEL ESTUDIO PRENATAL

Acercándonos ya a la actualidad, como señalé en la revisión histórica, existen diversas

técnicas -ya desarrolladas algunas y otras en expansión- que han supuesto una
verdadera innovación. En mi caso me voy a centrar en tres, pero podría haber nombrado
otras muchas. Por poner un ejemplo, si se hiciera un estudio exhaustivo sobre anomalías
cromosómicas, habría que nombrar y que estarían con total seguridad: la secuenciación
masiva de segunda generación (NGS), los Multiplex Ligation-dependent Probe
Amplification (MPLA) y la reacción en cadena de la polimerasa fluorescente (PCR-QF).

Generalizando, la clave de la mayoría de estas nuevas técnicas es que proporcionan una

gran herramienta, y se caracterizan por una cosa: permiten aumentar la cantidad de
número de genes que se pueden estudiar en un menor tiempo de espera – comparado
con otras técnicas tradicionales como el cariotipo-.Sin embargo, como dije, a causa de
mis limitaciones, en este trabajo me voy a centrar en investigar tres de ellas que me han
parecido especialmente interesantes, entre todas las existentes, estas son:

 La aparición del FISH.

 Los chips de ADN o microarrays.
 La obtención de ADN fetal en sangre materna.

2.5.1 Hibridación Fluorescente in situ (FISH)

Como he comentado, la llegada de la hibridación fluorescente in situ ( en inglés FISH) en

el año 1980 fue una gran revolución en el ámbito prenatal, ya que su desarrollo agregó
una nueva y poderosa dimensión al agilizar y dar otro enfoque nuevo al campo de las
pruebas de diagnóstico clínico. Según el National Human Genome Research Institute de
los EEUU el FISH, se define como un método utilizado para localizar un fragmento de
ADN específico en el genoma mediante técnicas de laboratorio citogenéticas. Su
característica fundamental es que esta localización se lleva a cabo mediante una tinción
fluorescente27. Como explica MacDonald D. esta tecnología utiliza sondas de ADN

22
marcadas específicamente con un fluoróforo para detectar o confirmar anomalías
cromosómicas y permiten ir más allá de la capacidad de resolución inferior que se tiene
como limitación en la citogenética de rutina28.

Su procedimiento general sería el siguiente: 27:

1. Se obtiene una muestra de ADN (Tienen que ser cromosomas metafásicos o

núcleos en interfase).
2. Se lleva a cabo un proceso de fijación.
3. La muestra de ADN se desnaturaliza. Este proceso separa la estructura
bicatenaria en doble hélice del ADN.
4. A continuación, se lava la muestra para su purificación
5. A esta muestra desnaturalizada se le añade una
sonda. Esta sonda de interés está unida con
fluorocromo que se asociará al ADN de la muestra en
el sitio diana.
6. Esa unión produce el proceso
denominado hibridación, donde se vuelve a formar la
doble hélice.
7. Por último, se visualiza utilizando un microscopio de fluorescencia, siendo positiva
la prueba si esa región específica del cromosoma se ha vuelto fluorescente.

Como he comentado, estas sondas que producen la hibridación son las que emiten
fluorescencia. Con esto se puede clasificar según la presencia o ausencia de la señal, lo
que desvela la presencia o ausencia de la secuencia diana en el ADN cromosómico.

Entre sus ventajas principales podemos encontrar que el FISH, no requiere un cultivo
celular fetal de la muestra obtenida. Esto hace que la obtención de resultado sea
muchísimo más rápida con resultados en alrededor de dos días (48 horas).

23
Entre sus desventajas encontramos el hecho, de que no analiza la totalidad de todos los
cromosomas, ya que se centra casi exclusivamente en los cromosomas sexuales (X e Y)
y los cromosomas 13, 18 y 21. Otras de sus desventajas es el hecho de que el personal
que se necesita es más cualificado que para la realización del cariotipo convencional, ya
que la técnica es complicada y requiere de unos conocimientos previos avanzados. Por
último, señalar que debido a que algunos reactivos son fluorescentes, estos son mucho
más costosos que los reactivos tradicionales para hacer un cariotipo 28 .

2.5.2 Microarrays (aCGH)

Históricamente, el primer estudio médico que utilizó la palabra “microarrays” fue

publicado en 1995, y en este se definía como una técnica que observaba la expresión de
muchos genes que se podría vigilar paralelamente utilizando una colección de
biomoléculas ordenadas en filas y columnas sobre un soporte sólido miniaturizado29.

En el ámbito prenatal, la creación de los microarrays (aCGH) en 1997 constituyó un gran

avance en el diagnóstico prenatal, tanto es así, que ha sido llamado por diversos autores
y es comúnmente aceptado con el sobrenombre de cariotipo molecular.

A grandes rasgos, los microarrays se podrían definir, como una tecnología de

citogenética molecular que nos permite analizar el genoma completo de un individuo, en
busca de alteraciones de ganancia o pérdida de material genético, en un periodo de
tiempo muy corto en relación con otras técnicas diagnósticas. Esta tecnología, se basa en
la detección de lo que se conoce como copy number variations (CNV) -variaciones de
numero de copia-. Estos CNV se definen como segmentos de ADN, mayores de una
kilobase, cuyo número de copia difiere de un genoma de referencia 30.

Como señalan N.Castells-Sarret et al. , esta tecnología permite explorar de manera

simultánea la dosis de ADN en múltiples loci del genoma al comparar las cantidades
relativas de ADN de 2 genomas (control y paciente), marcados con fluorocromos
distintos, que se unen con fragmentos de ADN de secuencia conocida llamados

24
«sondas» que están fijados a un portaobjetos o soporte de vidrio. El color de la
fluorescencia en cada punto del aCGH informa sobre la cantidad relativa de cada ADN y
permite inferir la presencia de ganancias o de pérdidas en regiones concretas del
genoma31.

En cuanto a su procedimiento, 32

1. Se prepara el ADN que se va a analizar. Primero se desnaturalizan el ADN de la

muestra tumoral y la muestra del control.
2. Se procede al marcaje. Lo interesante de este marcaje es que es aleatorio (se
llama Random Priming)
3. Se realiza la preparación del array y se procede a la hibridación con la muestra y
el control. Aquí se pipetea la muestra dentro del array.
4. Se hornea la muestra durante 48-72 horas
5. Se procede al lavado y secado.
6. Se escanean y se analizan los datos, un ejemplo de aparato que existe en el
mercado para este propósito sería la Plataforma MS200 NimbleGen de los
laboratorios Roche.

Es interesante señalar, como existe una gran base de datos públicas sobre genomas
sobre la que se puede apoyar el investigador la hora de la interpretación de los
resultados. Ejemplos de esto serían DGV (Database of Genomic Variants) o DECIPHER
(DatabasE of genomiC varIation and Phenotype in Humans using Ensembl Resources)33

Si se ha realizado correctamente la técnica, debería verse un dibujo parecido a este, en

el cual se comparará el ADN del control con el ADN que pudiera ser patológico. Si se
produce una ganancia aparecerá un punto rojo, en cambio si hay una perdida en ese gen
se verá en verde, por último, si es normal se verá en amarillo (como se observa en la
mayoría de los casos).32

Por lo tanto, su principal ventaja es la posibilidad que da de estudiar simultáneamente

miles de genes. Otra ventaja es que no se requieren células en metafase lo que le

25
permite ser una técnica relativamente rápida (los resultados estarían disponibles en 1-2
semanas)

Sus desventajas A pesar de que la técnica de microarrays tiene grandes ventajas en

cuanto al rendimiento diagnóstico en el ámbito prenatal, existe el riesgo de detección de
alteraciones o variaciones que, si bien no son identificadas como benignas, no tienen por
qué contribuir a la aparición de una enfermedad en un individuo portador. Un grupo de
estas alteraciones es el conocido como variants of uncertain significance (VOUS o VUS,
“variantes de significado incierto”)34

Sin embargo, no están exentos de inconvenientes. Otra limitación de los microarrays es que no
detecta alteraciones presentes en mosaicismo cuando están en proporciones menor del 20-30 %
del total. Tampoco detecta estados de poliploidía. La gran capacidad de detección de los
microarrays cromosómicos tiene como consecuencia problemas de interpretación a la hora de
valorar la implicación de cambios de número de copias no claramente asociados a patología. 35

2.5.3 ADN fetal en sangre materna

Por último, para concluir con mi trabajo, voy a hablar sobre una técnica que surgió hace
relativamente muy poco, en el año 2012, y que supuso un gran avance en el ámbito
prenatal desde el punto de vista de la seguridad y los riesgos que se corrían hasta
entonces a la hora de realizar las diferentes pruebas prenatales 36.

Esta innovación fue la aparición de una nueva prueba, la prueba del test de ADN fetal en
sangre materna (cell free fetal DNA del inglés cffDNA). Esta técnica es la principal de las
denominadas pruebas prenatales no invasivas (NIPT por sus siglas en inglés), que,
siendo muy novedosas, realizan un cribado seguro y sin riesgos. Lo particular y que hace
especial y fácil esta prueba es que el ADN fetal está presente en la circulación de la
madre, y con una simple muestra de sangre materna puede ser analizado.

Esta técnica es posible, gracias a la observación realizada en 1997 por Dennis Lo, quien
descubrió que en el plasma de mujeres embarazadas había fragmentos de ADN fetal.
Estos fragmentos, no están unidos a ninguna estructura celular, sino que están
mezclados con enormes cantidades de ADN materno. Es por ello, interesante señalar
como el término "fetal”, que se le da a esta técnica no es totalmente correcto, ya que la
principal fuente de ADN derivado del embarazo que posterior se analiza proviene de la
placenta. Para su estudio se utilizan mayoritariamente trofoblastos apoptóticos. 36

26
En cuanto a momento óptimo para la realización de la prueba, es detectable a partir de la
cuarta semana de gestación, llegando a constituir el 3-6 % del ADN total presente en
sangre materna a partir de la semana 10 y pudiendo alcanzar niveles hasta de un 20 %.
Es interesante ver como diversos estudios han demostrado que la vida media del cffDNA
en la sangre de la madre, es corta y que se circunscribe a la gestación, por lo que no es
posible confundir el cffDNA de un embarazo anterior.

En cuanto a su procedimiento a esta prueba, tiene dos fases bien delimitadas. Hay una
primera fase de procesamiento y obtención de la muestra, y otra de extracción del ADN
fetal. Las autoras Baños Álvarez E y Llanos Méndez A. explican con detenimiento sus dos
fases37:

Primera fase procesamiento y obtención de la muestra

1. En cuanto al procesamiento de la muestra, lo primero que hay que hacer, es

obtener una muestra de sangre materna extraída de forma periférica
-normalmente en el antebrazo-. Es importante que estos tubos se añadan
anticoagulante (EDTA). El volumen de debe ser de alrededor de 4 ml.
2. En segundo lugar, se centrifuga la muestra dos veces.
a. La primera vez se centrifuga la muestra 10 minutos a 4ºC.
b. Tras esperar 15 min, se vuelve a centrifugar el plasma en las mismas
condiciones. Con este paso lo que se consigue es separar el plasma
-sobrenadante que queda en la parte superior del tubo -, de los restos
celulares - precipitado -.
3. Por último, se almacena el plasma en congeladores a una temperatura de entre
-80 y -30ºC.

En la segunda fase, esta realiza ya en el laboratorio, y se procede a la amplificación del

ADN fetal presente en la muestra mediante la detección e identificación de secuencias
específicas de este ADN fetal libre.

1. Para la extracción del ADN una vez obtenido el plasma, es necesario aislarlo
purificándolo para su enriquecimiento. Para este propósito existen diferentes
kits que se puede comprar de marcas como laboratorios Quiajen, Macherey-
Nagel o laboratorios Roche37.
2. Por último, debido a la baja proporción que como he comentado antes tienes
este ADN fetal en el total que se extrae, una vez purificados los fragmentos de
ADN, hay que amplificarlos. Esto se lleva a cabo mediante diferentes
procesos, como por ejemplo el Fish, aunque la técnica que más se utiliza es la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

27
En cuanto a las ventajas de esta técnica me parecen variadas. En primer lugar, el
personal que puede realizar la extracción y analizar posteriormente la muestra no tiene
por qué se personal facultativo. Además, en comparación con otras técnicas, esta técnica
se identifica por su bajo coste. Esto se observa en que solo se necesita una extracción de
sangre y un kit reutilizable. Por último, al hablar de ventajas, esta técnica tiene una
principal ventaja y es que puede evitar potencialmente complicaciones en el parto que
eran causadas otras pruebas diagnósticas, como por ejemplo la biopsia corial o la
amniocentesis. Estas complicaciones comprendían desde la ansiedad que le generaba a
la madre las pruebas, llegando incluso a el riesgo de pérdida fetal que ocurría en algunas
ocasiones 38

En cuanto a las desventajas de esta técnica existen algunas. Como desventaja de esta
novedosa prueba, se puede señalar que no se puede incluir en el grupo de las pruebas
diagnósticas, ya que puede obtenerse resultados de falso positivo y falso negativo. Esto
provoca que, en caso de positivo, sea preciso llevar a cabo una prueba de confirmación
adicional. Por otro lado, existe una pequeña probabilidad de que la prueba no demuestre
el estado real cromosómico del feto. Esto se produce cuando se producen mosaicismo en
la placenta en la madre (CPM), e interfiere en los resultados.

Por último, en cuanto a desventajas de esta técnica, esta prueba de ADN fetal en sangre
materna, se ha documentado que no sirve en el diagnóstico de uno de los tipos más
importantes de patologías numéricas que a veces se dan: las poliploidías, por lo que
todavía ha de desarrollarse más en profundidad. 39
3. CONCLUSION PERSONAL
https://www.unioviedo.es/A.Roca/anexos/NOMENCLATURA_DE_LA_CITOGENETICA_HUMANA.p
df meter cariotipo

4.BIBLIOGRAFIA

1. (Comités de Trabajo de la OMS, 1970, 1975, 1982).

Disponible en: http /
2. Parga Soler M., Martínez Machuca S., Martín Idoeta O., Diagnóstico prenatal y cribado de
cromosomopatías. Medicina familiar y comunitaria (Medifam) no.10; 2001 p 2-3.
Disponible en: ht
3. Nussbaum, RL., McInnes, RR., Willard, HF., et al. Thompson & Thompson Genetics in
medicine.7th. Philadelphia: Saunders/Elsevier; 2007.
Disponible en: h

28
4. Simón Fernando, Aguado-Gómez Fernando, Lorenzo María, Hernández Benito. Análisis
Bioquímico. Altamar. Barcelona; 2016 p. 221-222.
5. Santesmases MJ. Hacia descendencias saludables: Algunos orígenes del diagnóstico
prenatal. Asclepio. Revista de Historia de la Medicina y de la Ciencia, 2008. p. 141-142.
6. Carlson LM, Neeta L. Vora, Prenatal Diagnosis, Screening and Diagnostic Tools. Department
of Obstetrics and Gynecology, University of North Carolina School of Medicine;2017 p.1-2.
7. Suela J, López-Expósito Recomendaciones para el uso de microarrays en el diagnóstico
prenatal. MedClin (Barcelona). 2017; p328
8. L.S. Penrose. The relative effects of paternal and maternal age in mongolism. 1933. J Genet.,
88; 2009, pp. 9-14
9. SnijdersJ.M , Sundberg K. Maternal age-and gestation-specific risk for trisomy 21. Harris
Birthright Research Centre for Fetal Medicine; 1999 p 169-170
10. Morris JK, Wald NJ, Mutton DE, Alberman E. Comparison of models of maternal age-specific
risk for Down syndrome live births. Prenat Diagn. 2003; 23:252–8. [PubMed: 12627430]
11. I.R. Merkatz, H.M. Nitowsky, J.N. Macri, W.E. Johnson. An association between low maternal
serum alpha-fetoprotein and fetal chromosomal abnormalities.Am J Obstet Gynecol., 148
(1984), pp. 886-894
12. https://institutomarques.com/obstetricia/diagnostico-prenatal-en-el-embarazo/microarrays/
13. Bensante Alcayna I. Historia de los cromosomas. Curiosidades de la Genética. Genotipia.
Disponible en: https://genotipia.com/historia-de-los-cromosomas/
14. Tjio, JH, Levan, A, The chromosome number of man, Hereditas: Genetitiskt Arkiv, ;1956, 1-2:
pp. 1-6.
15. ESTUDIOS GENÉTICOS EN MUESTRAS FETALES Hospital Clínic/ Universitat Barcelona.
Disponible en: https://medicinafetalbarcelona.org/protocolos/es/patologia-
fetal/EstudiosGeneticosEnMuestrasFetales.pdf
16. https://www.ecologiaverde.com/diferencia-entre-mitosis-y-meiosis-2551.html .
17. https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?
bookid=1717&sectionid=114913276#1137919489
18.  http://www.siicsalud.com/des/casiic_profundo_impreso.php/133767
19. https://www.medwave.cl/link.cgi/Medwave/PuestaDia/Cursos/3366
20. https://www.analesdepediatria.org/es-sindrome-microduplicacion-3q29-articulo-
S1695403311004292
21. Situación actual del diagnóstico prenatal”,
22. https://aegh.org/wp-content/uploads/2018/03/1.Introducci%C3%B3n_Alteraciones-cromosomicas.pdf
23. https://www.elsevier.es/es-revista-farmacia-profesional-3-articulo-amniocentesis-revision-13019924
24. https://www.elsevier.es/es-revista-farmacia-profesional-3-pdf-13019924
25. https://www.elsevier.es/es-revista-diagnostico-prenatal-327-articulo-biopsia-corial-transcervical-guia-
practica-S2173412711001089
26. Traditional Prenatal Diagnosis: Past to Present Brynn Levy and Melissa Stosic

29
27. 27 https://www.genome.gov/es/about-genomics/fact-sheets/Hibridacion-fluorescente-in-situ
28. http://www3.uah.es/biomodel/citogene/dynacare/fishinfo.htm
29. https://www.elsevier.es/es-revista-revista-del-laboratorio-clinico-282-pdf-S1888400809000592
30. http://www.aedprenatal.com/sites/default/files/1-s2.0-S0025775317300313-main.pdf bien
seguro
31. https://www.analesdepediatria.org/es-array-cgh-como-primera-opcion-articulo-
S1695403317303065
32. https://www.seap.es/documents/228448/531163/02_Rodriguez.pdf
33. http://www.seqc.es/download/tema/1/2787/57682611/1038071/cms/tema-9-aplicabilidad-de-
los-microarrays-cromosomicos-en-el-diagnostico-de-la-discapacidad-intelectual.pdf
34. http://www.ub.edu/stat/docencia/Biologia/introbioinformatica/MicroArrays/Microarrays_de_DNA
.pdf
35. http://www.seqc.es/download/tema/1/2787/57682611/1038071/cms/tema-9-aplicabilidad-de-
los-microarrays-cromosomicos-en-el-diagnostico-de-la-discapacidad-intelectual.pdf
36. https://www.researchgate.net/publication/273303577_Cell-
free_fetal_DNA_in_maternal_blood_-_An_update_of_the_method_and_clinical_practice
37. e baños blaba
38. https://www.aetsa.org/download/publicaciones/antiguas/AETSA_2011_2_7_Diagnostico_aneu
ploidias.pdf
39. https://www.illumina.com/content/dam/illumina-marketing/documents/clinical/rgh/1570-2017-
018-ESP-web.pdf

Fotos Bibliografía
Amniocentesis:
https://www.msdmanuals.com/es/hogar/multimedia/figure/gyn_detecting_abnormalities_before
_birth_es

v.corionicas:
https://www.msdmanuals.com/es/hogar/multimedia/figure/gyn_detecting_abnormalities_before
_birth_es

foto Fish :
https://www.genome.gov/sites/default/files/tg/es/illustration/___Hibridacio__n_fluorescente_in
_situ__FISH_.jpg

http://www.cialab.com/fish-hematologia/ segunda

foto microarrays https://www.seap.es/documents/228448/531163/02_Rodriguez.pdf

30