Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Laboratorio de Microbiología Básica II
Semestre lectivo 2021-2

Práctica 3.
Colecta y tinción de
parásitos
Equipo 3
Asesora: Martinez Flores Maria Galia
Alumnos:
● Castillo Geraldo Michelle Andrea
● Castillo Hernández Oswaldo Antonio
● Castillo Rodríguez Axel Giovany
● Cruz Albarrán Angélica
 Objetivos

● Aprender a colectar material parasitario de animales de

experimentación y domésticos
● Conocer y utilizar las diferentes técnicas de tinción,
utilizadas en parasitología.
 Fundamento
teórico
Un Parásito es una especie
que amplía su capacidad de
supervivencia utilizando a
Entamoeba histolytica otras especies para que Cisticercos de Taenia
en intestino humano cubran sus necesidades solium en encéfalo
básicas y vitales

Larvas enquistadas de Ctenocephalides canis, en la

Trichinella spiralis en músculo superficie de un perro
 Ectoparásito
Los ectoparásitos son parásitos
que generalmente infectan sólo
las capas superficiales de la
Ácaros de la piel
piel.

Mosquito transmisor del Dengue

 Endoparásitos
Los parásitos que viven
dentro del huésped se
denominan endoparásitos
Este tipo de parásitos, en
base al órgano que afectan, Figura. Hemoparasito
Babesia bovis
comúnmente se encuentran
en la sangre
(hemoparásitos) y en el
tubo digestivo (parásitos
intestinales ).
Ascaris
copepodos de la lumbricoides
familia
pennellidae
(Mesoparasitos)
Clasificación de los parásitos según el órgano
que afectan
Aves de corral
Órgano afectado Parásito Ejemplos

Nematodo Ascaridia galli

Heterakis gallinae
Syngamus trachea

Cestodo Railletina sp
Intestino Davainea proglottina

Protozoarios Eimeria acervulina

Eimeria maxima
(localización subepitelial)
Órgano afectado Parásito Ejemplos

Protozoarios Eimeria mitis

Duodeno
Eimeria praecox

Protozoarios Eimeria tenella

Ciegos Histomonas meleagridis

Nematodos Familia Filarioidea

(microfilarias)

Protozoarios Atoxoplasma sp
Sangre
Babesia sp
Haemoproteus sp
Hepatozoon sp
Leucocytozoon sp
Trypanosoma sp
Plasmodium sp
Peces
Órgano afectado Parásito Ejemplo

Intestino Nematodo Anisakis sp

Pseudoterranova sp
Phocascaris sp
Contracaecum sp

Trematodo Heterophydae sp (fase

adulta)
Echinostomatidae sp

Hígado Platelmintos Opisthorchiidae sp

Musculatura Trematodo Diphyllobothrium sp (larvas

jóvenes)
Clonorchis sp (quiste en
animal)
Órgano afectado Parásito Ejemplo

Sangre Protozoarios Babesiosoma sp

Trypanosoma sp

Piel Protozoarios Ichthyophthirius multifilis

Branquias Protozoarios Ichthyobodo necatrix

Ratas y ratones
Órgano afectado Parásito Ejemplo

Pulmón Nematodo Angiostrongylus

cantonensis (arterias
pulmonares)

Vejiga Nematodo Trichosomoides crassicauda

Intestino Nematodo Syphacia muris

Heterakis spumosa
Nippostrongylus Brasiliense
Strongyloides sp
Órgano afectado Parásito Ejemplo

Intestino Cestodo Hymenolepsis sp

Trematodo Plagiorchis muris

Notocotylus imbricatus

Hígado Nematodo Angiostrongylus

costaricensis

Sangre Protozoarios Babesia sp

Trypanosoma sp

Piel Artrópodos Nosopsyllus fasciatus

Pulex irritants
Ctenocephalides canis
 Colecta de ectoparásitos en aves

Revisión del plumaje

Parásitos bucales
Levantar las plumas de las diferentes
Utilizar un hisopo, colocándolo
zonas del cuerpo. Los parásitos se
inmediatamente en suero tibio o en un
colectan con pinzas entomológicas. Otra
medio de cultivo. La muestra sólo puede
alternativa es buscar directamente en
ser colectada de un animal vivo.
los nidos
Imagen:https://www.diagnosticoveterinario.com/lesiones-orales-en-aves-rapaces/4555
Gallina o gallo
Aves (gallo o gallina)

Figura Piojo en Figura Pinzas

Figura Gallinas gallina especiales
 Colecta de ectoparásitos en peces

Extracción de
Colecta de la branquias
superficie corporal
1. Sostener con una pinza y, colocando por 1. Extraer branquias y colocarlas en
debajo un recipiente, raspar superficie. frascos.
2. Bañar a los peces con agua a 65° C 2. Adicionar agua caliente a 65° C .
utilizando una pipeta. 3. Tapar y agitar vigorosamente
3. Dejar reposar y colectar los parásitos del 4. Adicionar formol 4% o etanol 96%
sedimento.
Colecta de ectoparásitos
en conejos

Se realiza una inspección minuciosa en el

pelaje del animal, así como dentro de sus
orejas. Si hay ácaros presentes, estos deben
ser en colectados directamente del animal
utilizando pinzas entomológicas
Colecta de ectoparasitos
en Ratas o ratones

Figura. Ratas Figura. Ratas

conjunto y piojos
 Sacrificio humanitario de los animales

Fuentes:
- NORMA Oficial Mexicana NOM-033-ZOO-1995, Sacrificio humanitario de los animales domésticos y silvestres
- NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de
los animales de laboratorio.
- 2021 OIE - Código Sanitario para los Animales Acuáticos - 7/09/2021
 Colecta de endoparásitos en aves

Heces fecales Toma de sangre

Usualmente son, tomadas del suelo Utilizando agujas 26G 3/8
en los recintos de las aves. Deben intradermal, se pincha la vena
ser almacenadas en recipientes de ulnar, Después se coloca un capilar,
plásticos y bolsas de nylon, con el cual se colecta la sangre.
debidamente identificadas,
 Disección de Peces para
colecta de endoparásitos

Observar detenidamente en la
búsqueda de ectoparásitos.
Cortar desde el ano hasta la
intersección branquial.

Retirar trozo de musculatura

para dejar expuestas las
vísceras.

Imagen:https://www.mclibre.org/otros/daniel_tomas/laboratorio/Pez/pez.html
Colecta de endoparásitos en
peces

Se recomienda uso de pinzas blandas para la manipulación de los

parásitos. En el caso de parásitos diminutos, se recomienda que se
colecten usando una pipeta de vidrio con pera de goma, para así no
dañar a los helmintos.
Colecta de endoparásitos
en ratas

Figura. Venopunción de la safena media;

Figura. Disección de ratón recuadro, punción de la vena lateral del
tarso. Forma de restringir a un perico
 Impronta
● La impronta se realiza
aplicando una porción del
tejido obtenido por biopsia
sobre un portaobjetos;
parte de las células del
tejido quedarán adheridas
al vidrio y podrán, tras la
fijación y tinción,
estudiarse como si se
tratase de un frotis
1) Poner papel estraza
2) Colocar el órgano
enzima de un
sobre el portaobjetos
portaobjetos
con papel
3) colocar un
portaobjetos Limpio
enzima del órgano
presionando
ligeramente, dejarlo
secar y realizar las
tinciones
correspondientes
 Técnicas de preparación de muestras para
En fresco ser teñidas y observadas
● Soltar cuidadosamente el
● Colocar unas gotas de ● Sujetando el
cubreobjetos, de modo
solución salina cubreobjetos por dos de
isotónica sobre el que quede colocado sobre
sus lados, apoyar otro de
portaobjetos y a el líquido que hemos
sus lados sobre el
continuación un depositado anteriormente.
portaobjetos, formando
fragmento de la un ángulo de
muestra. aproximadamente 45°.
 Frotis de gota gruesa

● Colocar una gota pequeña de sangre al

centro del portaobjetos y con la arista
de otro portaobjetos hacer movimientos
circulares para desfibrinar
● Después se hace el lacado o lisado de
los eritrocitos con agua destilada o
corriente, hasta que la muestra esté
totalmente blanca
 Frotis o extensión fina de sangre

● Colocar otro portaobjetos en un ● Presionar el

● Colocar cerca de la parte ángulo de 30-45° arriba de la portaobjetos superior
esmerilada del portaobjetos gota, permitiendo que la sangre se hacia la porción final del
una gota pequeña de distribuya a lo largo del punto de portaobjetos de abajo, al
sangre. contacto extremo sin esmerilar.
Zonas de un frotis sanguíneo
Montaje El medio de montaje por
excelencia es el bálsamo de
canadá que se diluye comúnmente
en solvente como el xilol, tolueno
o benceno
Existen resinas sintéticas útiles
como medios de montaje para
microscopia, pero su durabilidad es
Montaje Humedo cuestionable
Fijadores y Conservadores
Fijador Conservador

Inmoviliza y estabiliza los elementos Se divide en fenómenos físicos o

celulares, bien sea por precipitación de las
proteínas y demás sustancias celulares
activas, ya sea mediante un bloqueo químico
de su actividad, siendo estos fenómenos
permanentes.
sustancias químicas que evita la autolisis,
pero una vez terminada su acción la
muestra comienza su descomposición.

● Gelatina
● Formalina
● PVA
● Shaudinn
● PAF Figura . Refrigerador de
Figura . Laboratorio
Formalina
 Fijador Mecanismo Ejemplos

Gelatina Adherencia Nemátodos

Figura . Ascardia galli en aves

Gelatina-Fenol-Glicerol Evitan la deshidratación Nemátodos

de la gelatina
Figura . Hetwrakis gallinae
Formalina Reticularización de las Céstodes (tenias),
proteínas protozoos y huevos de
helmintos, tremátodos,
nemátodos
Figura . Tremátodo

Alcohol Polivinílico (PVA) Gelifica con la formación Trofozoítos y quistes de

de una red espacial protozoarios
no-covalentes,
modificando los enlaces
(-OH) de cadenas de
polímero vecinas.

Shaudinn Precipitación de las Trofozoítos y quistes de

proteínas protozoarios Figura .Trofozoito y quiste
 Fijador Mecanismo Ejemplos

Merthiolate-iodo-formald -- Tiñe y preserva todos los

ehído (MIF) trofozoitos y estadios de
parásitos intestinales, se
Figura . Trfozoíto de ameba
utiliza en frotis directos.

Fenol-alcohol-formol -- quistes y trofozoítos de

(PAF) protozoos, huevos y
larvas de helmintos.
Larva de helminto
 Conservación de muestras
Tipo de muestra Obtención Conservación

Fecal Braceo rectal, toma del suelo Físico. Refrigeración (4-10°C)

Sanguínea Venopunción de la vena Física. Refrigeración

cefálica, safena y yugular
Química. Anticoagulantes

Raspado de piel Raspar el área donde se Físico. A temperatura

encuentre el ácaro en ambiente, la muestra se queda
cuestión entre porta y el cubre ( Ej:
Sarcoptes spp.) y en tubos con
hisopo (Ej. Otodectes spp).

Orina En frascos con taparosca Física. Refrigeración

 Tinciones
Una tinción utiliza colorantes que tienen la
capacidad de unirse a estructuras celulares y
brindar color

La leccion de la técnica está en función del

objetivo que se persiga y de la estructura
parasitaria por observar sar
Figura. Trofozoitos de Blastocystis
hominis teñidos con lugol
 Lugol
Es un contrastante que tiene la afinidad para
combinarse con las estructuras que contienen
glucógeno

Contrasta las formas quísticas y trofozoicas de

algunos endoparásitos y se recomienda
emplearlo en preparaciones húmedas o examen
en fresco de heces fecales
Tinción de Giemsa
Se utiliza para contrastar protozoarios hemáticos e
intestinales. Con esta tincion los nucleos de los
parasitos se tiñen de rojo brillante y el citoplasma
de color azul
Esta tinción sirve para teñir a: Babesia,
tripomastigotes sanguíneos de trypanosoma,
microfilarias de Onchocerca, Trichomonas, Giardia,
Pneumocystis
Figura. Parásitos intraeritrocitarios de Plasmodium
vivax, teñidos con Giemsa
Hematoxilina
Férrica
Tinción excelente para las heces frescas y sin
conservante, y para los frotis conservados en
SAF (acetato sódico-ácido acético-formol) y
formol

Se usa para describir la morfología de Figura. Entamoeba histolytica. Quistes

protozoarios intestinales inmaduros, mononucleados con vacuola
de glucógeno. Tinción de hematoxilina
férrica
 Tinción de Wright

Es una técnica que se emplea

generalmente para la diferenciación de
elementos celulares de la sangre
Se emplea en la búsqueda de
hematozoarios como Plasmodium ssp
y Plasmodium falciparum

Figura. Parásitos Plasmodium falciparum en

sangre teñidos con Wright
Tricrómica de Gomori

Se usa para la coloración de

trofozoitos y quistes de protozoarios
presentes en muestras de materia
fecal fresca o fijada con PVA (Alcohol
polivinilico) o preservadas con
solución de sodio acetato- ácido
acético- formol (SAF)
Figura. Ooquistes de Cryptosporidium spp
presentes en heces fecales, teñidos con
Tricrómica de Gomori
Gomori - Wheatley
Es útil para diferenciar protozoarios
intestinales en donde se pueden ver
algunos detalles del citoplasma y el
núcleo
La tinción se puede hacer en frotis de
muestras previamente preservadas en
PVA o en frotis con muestras frescas o
fijadas con Schadinn
Figura. Arenillas hidatídicas teñidas eon
Gomori-Wheatley
Ziehl - Neelsen
Se emplea para teñir parásitos
oportunistas resistentes al ácido y
al alcohol del género
Cryptosporidium, Cyclospora y
otros más del grupo de
microsporidios
Figura. Ooquistes de Cyclospora
cayetanensis teñidos con Ziehl-Neelsen
 Negro de
clorazol Acetocarmin
Esta técnica fija y tiñe estructuras de Semichón
parasitarias, por lo que se recomienda
utilizarla con muestras de materia
Se utiliza para teñir trematodos y cestodos
fecal sin fijador
La observación se realiza
utilizando un objetivo de 10x
Observacion
aumento y ante un elemento
sospechoso se examina con
40x aumento

Realizar la observación
pertinente de las
características morfológicas
de los parásitos para su Figura. Observación al microscopio
posterior identificación
Identificacion ● Ciliados,
flagelados
Morfología al hacer ● Quiste o
observaciones en el Trofozoito
Para la identificacion de microscopio
parasitos en el
microscopio se debe de
tener en cuenta las El tipo de muestra que
siguientes se está procesando
características
El tipo de tinción que se
realizó
Metodología
Metodología

Link del vídeo: https://www.youtube.com/watch?v=l9S7xmKORio

 Obtención de
protozoarios y
Con unas tijeras ¿Presenta
Helmintos Observar al
protozoarios y
abrir los órganos microscopio
huecos y los helmintos?
Si
esponjosos se
desmenuzan para
Sacrificar un animal de encontrar No
laboratorio con el protozoarios y Retirar
mínimo dolor necesario helmintos moca y
Descartar resto de
tejido

No
Realizar una incisión a Si Extraer y
lo largo de la línea
colocar en
ventral con los
placas con
instrumentos Una vez abierto el solución salina
adecuados animal buscar en la
superficie de los
Realizar una
órganos internos y ¿Presenta
Conservar impronta de los
membranas quistes?
en AFA y órganos
serosas la
fijar extraídos y
presencia de
teñirlos
quistes
Link del vídeo: https://youtu.be/uJwTV6V7l5w
Link del vídeo: https://www.youtube.com/watch?v=X6uLtAVyR_0
Metodología
Link del vídeo: https://youtu.be/S4ma1QA4kHA
Tinción indica para segmentos de
cestodos
Manejo de residuos
La disposición y eliminación de
los residuos biológicos como
tejidos, animales de
experimentación, recipientes,
desechos sólidos o líquidos,
jeringas y agujas, se hará de
acuerdo a los dispuesto en la
norma oficial NOM-087-
SEMARNAT-SSA1-2002,
 Aplicación de la práctica en las
diferentes orientaciones de la carrera

Bioquímica clínica:
La colecta e identificación de endo y ectoparásitos a través de las diversas técnicas de
laboratorio son útiles para ayudar en el diagnóstico de enfermedades derivadas de
estos parásitos.

Farmacia hospitalaria y farmacia industrial:

Es importante saber identificar los diversos tipos de parásitos, así como sus huéspedes,
para poder detectar una posible fuente de contaminación biológica en alguna de las
fases de fabricación de los medicamentos.
Resultados esperados
Resultados esperados
Ectoparásitos:

Figura . garrapatas Rhipicephalus sanguineus en microscopio, tomado de:

http://www.actauniversitaria.ugto.mx/index.php/acta/article/view/2134/html
 Para microfiliarias

Figura . Microfiliaria tomada del Manual de

Figura . Microfiliaria tomada de
Microbiología General II https://www.researchgate.net/publication/50818878_Interrelaciones_
entre_estres_inmunidad_y_parasitismo_en_el_herrerillo_comun_Parus
_caeruleus/figures?lo=1
Proglótidos de Taenia:
 Protozoarios:
Figura . Giardia lamblia en
Giemsa, tomado de
https://www.researchgate.net/pu
blication/293011839_Muerte_cel
ular_programada_en_protozoario
s_el_caso_de_Giardia_intestinali
s/figures?lo=1
Figura . Protozoarios, tomado del Manual de
Figura . Trofozoítos de Dientamoeba fragilis en
Microbiología General.
giemsa, tomado de
https://www.researchgate.net/publication/22476831
1_Pigs_as_Natural_Hosts_of_Dientamoeba_fragilis_
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