“Métodos para la determinación de

proteínas totales y albúmina en suero”

DOCENTE: VALDIVIESO IZQUIERDO, LÁZARO RUBEN

ALUMNO: CHÁVEZ SÁNCHEZ, GINO CLAUDIO

GRUPO NºL01

Curso de Bioquímica

Facultad de Medicina – EAP de Nutrición

Universidad Nacional Mayor de San Marcos
INTRODUCCIÓN

Las proteínas son biomoléculas formadas básicamente por carbono, hidrógeno,

oxígeno y nitrógeno. Pueden además contener azufre y en algunos tipos de
proteínas, fósforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Pueden
considerarse polímeros de unas pequeñas moléculas que reciben el nombre de
aminoácidos y serían, por tanto, los monómeros unidad. Los aminoácidos están
unidos mediante enlaces peptídicos.(Ortiz, 2019)

Las funciones que pueden desempeñar las proteínas son muy variadas. Se
señalan algunas de las más importantes: catalizadores biológicos:
as enzimas que llevan a cabo las reacciones biológicas (de hidrólisis,
oxidación, fosforilación, etc.) son proteínas, estas se caracterizan por la
presencia de un sitio activo. Compuestos de defensa: las inmunoglobulinas, por
ejemplo, son proteínas que nos ayudan a combatir enfermedades infecciosas.
Transportadores: la hemoglobina transporta oxígeno, la transferrina transporta
hierro y las lipoproteínas transportan lípidos. Estructural (sostén): proteínas
importantes de la piel, como el colágeno y la elastina, y del cabello, como la
queratina, corresponden a este tipo. De reserva: la albúmina del huevo y la
caseína de la leche son típicas proteínas de reserva. Hormonal: actúan a baja
concentración, pero resultan esenciales. Una proteína muy importante
perteneciente a este grupo es la insulina, que regula los niveles de glucosa
en sangre. Contráctil. Algunas proteínas como la miosina o la actina gobiernan
los movimientos de contracción, por ejemplo, del músculo.(Chara, 2020)
El examen de proteína total mide la cantidad total de dos clases de proteínas
encontradas en la porción líquida de la sangre: albúmina y globulina. Las
proteínas son partes importantes de todas las células y tejidos. La albúmina
ayuda a impedir que se escape líquido fuera de los vasos sanguíneos. Las
globulinas son una parte importante del sistema inmunitario.(MedlinePlus,
2020)

La albúmina es una de las proteínas plasmáticas más importantes producidas

en el hígado. Las concentraciones plasmáticas de esta proteína se utilizan en
el diagnóstico y tratamiento de numerosas enfermedades primarias que afectan
al hígado y a los riñones.(Rodríguez, 2018)

OBJETIVOS

- Interpretar el significado clínico de la prueba de laboratorio.

- Explicar el fundamento de los métodos propuestos.
- Aplicar los procedimientos para su realización
- Conocer los valores de referencia de la prueba.
- Calcular sus valores de concentración.

PROCEDIMIENTOS

Materiales
Se procedió a revisar 6 papers que muestran diferentes formas de abordar y
determinar las concentraciones de proteínas totales y de albúmina en suero o
plasma.
Y también se analizó los términos como las fórmulas a emplear para dicho
objeto, en un cuadro resumen realizado por el docente.

A continuación, se procederá a realizar un resumen:

MÉTODO/CASA CORMERCIAL

1) DETERMINACIÓN CUANTITATIVA IN VITRO DE LA PROTEÍNA

TOTAL EN SUERO O PLASMA EN EQUIPOS FOTOMÉTRICOS.
(PUNTO FINAL) – DIASYS

FUNDAMENTOS DEL METODO

Test fotométrico de acuerdo con el método de biuret.
REACTIVOS PROVISTOS

MUESTRA
Suero o plasma.

PROCEDIMIENTO
CÁLCULOS
ABmp
C Muestra= x Cst
ABst − ABbl

VALORES DE REFERENCIA

LINEALIDAD
De 0,05 – 15 g/dL.

EJERCICIO APLICATIVO Y SU INTERPRETACIÓN

AbBl=0,012
ABmp
AbMP=0,284 C Muestra= x Cst
ABst − ABbl
AbSt=0,300 0,284
C Muestra= x 7,2
0,300−0,012
C Muestra= 7,1 g/dL
Se concluye que: en caso
de una persona adulta se
considera dentro de los valores normales según los rangos de referencia
de esta casa comercial, no obstante, si en caso se tratase de un bebé de
sexo masculino menor a un año, la prueba indicaría que tiene
hiperproteinemia y eso se manifestaría con desordenes inflamatorios
crónicos.
2) DETERMINACIÓN FOTOMÉTRICA DE PROTEÍNA TOTAL EN
SUERO. (PUNTO FINAL) - VALTEK

FUNDAMENTO
Para la determinación de niveles de proteína total se utilizan variados
métodos, entre ellos la densidad, el índice de refracción, absorbancia de
la muestra en el rango ultra-violeta, y por la técnica de Folin-Ciocalteau.
Originalmente se medía por el método de Kjeldahl, que actualmente se
utiliza como método de referencia. El método utilizado por VALTEK® se
basa en la reacción de biuret, en la cual los enlaces peptídicos
reaccionan en medio alcalino con sulfato de cobre para formar un
complejo coloreado azul-violeta. El color formado se mide
colorimétricamente, siendo proporcional a la cantidad de proteína
presente en la muestra.

REACTIVOS

MUESTRAS
Utilizar suero libre de hemólisis. La hemólisis visible puede elevar los
resultados debido a la liberación de hemoglobina.

TÉCNICA
CÁLCULO
ABmp
C Muestra= x Cs
ABst − ABbl

RANGOS DE REFERENCIA
6,0 a 8,0 g/dL

LINEALIDAD
Entre 0,94 y 9,75 g/dL.

EJERCICO DE APLICACIÓN

AbBl=0,014 ABmp
C Muestra= x Cst
ABst − ABbl
AbMP=0,286
0,286
AbSt=0,294 C Muestra= x 7,0
0,294−0,014
C Muestra= 7,15g/dL

Se concluye que: el
paciente se encuentra
dentro de los valores referenciales considerados normales por la casa
comercial, pero sería bueno darle seguimiento para poder descartar a
futuro nefropatías crónicas.
3) MÉTODO COLORIMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN DE
PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO (PUNTO CINÉTICO) – WEINER

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico,
en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de
absorción a 540 nm, cuya intensidad es proporcional a la concentración
de proteínas totales en la muestra.

REACTIVOS
Reactivo: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil aril
poliéter (AAP).

MUESTRA
Suero.

PROCEDIMINENTO

CÁLCULO
 ABmp
C Muestra= x Cst
ABst − ABbl

LINEALIDAD
12 g/dL.

VALORES DE REFERENCIA
Se determinó el contenido de proteínas totales en suero de personas
sanas, de ambos sexos, con alimentación mixta normal y edades entre
17 y 40 años. Se obtuvieron los siguientes rangos: Proteínas totales: 6,1
a 7,9 g/dl.

EJERCICIO DE APLICACIÓN

AbBl=0,022 ABmp
C Muestra= x Cst
AbMP=0,284 ABst − ABbl
AbSt=0,309 0,284
C Muestra= x 7,0
0,309−0,022
C Muestra= 6,93g/dL

Se concluye que: el paciente se encuentra dentro de los valores

referenciales considerados normales.

4) DETERMINACIÓN CUANTITATIVA IN VITRO DE ALBÚMINA EN

SUERO O PLASMA EN EQUIPOS FOTOMÉTRICOS (PUNTO FINAL) -
DIASYS

FUNDAMENTOS DEL MÉTODO

Test fotométrico utilizando verde de bromocresol.

REACTIVOS PROVISTOS
MUESTRA
Suero o plasma heparinizado o con EDTA.

PROCEDIMIENTO

CÁLCULO

ABmp
C Muestra= x Cst
ABst − ABbl

VALORES DE REFERENCIA
Adultos 3,5 – 5,2 g/dL
 LINEALIDAD
Desde 0,2 – 6 g/dL.

EJERCICIO DE APLICACIÓN

AbBl=0,032 ABmp
C Muestra= x Cst
AbMP=0,412 ABst − ABbl
AbSt=0,432 0,412
C Muestra= x5
0,432−0,032
C Muestra= 5,15g/dL

Se concluye que: el paciente está

dentro de los valores considerados normales, sin embargo, está cerca
del límite lo que podría desencadenar, en caso de que no hubiese un
control médico, deshidratación.

5) REACTIVO LÍQUIDO PARA LA DETERMINACIÓN FOTOMÉTRICA DE

ALBÚMINA EN SUERO O PLASMA (PUNTO FINAL) - VALTEK

FUNDAMENTOS DEL MÉTODO

Los métodos más específicos para la determinación de albúmina son
inmunológicos, tales como R.I.A., nefelometría, etc. También es utilizado
como método la electroforesis de proteínas, pero este procedimiento
tiene el inconveniente que la afinidad de los colorantes por la albúmina
difiere de las globulinas. Los métodos comúnmente utilizados se basan
en la unión de albúmina a colorantes o indicadores, siendo el más
común el que utiliza verde de bromo cresol. El método de VALTEK® se
basa en este último, según las recomendaciones de Doumas.

REACTIVOS PROVISTOS
Conservados entre 4° y 25°C. y protegidos de la luz, estables hasta la
fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Composición del Reactivo: Verde de bromocresosl 0.20 mM
Buffer succinato pH 3.8 100 mM
Preservantes y surfactantes c.s
Preparación del Reactivo de Trabajo: El reactivo se provee listo para su
uso.

MUESTRA
Suero o plasma.

PROCEDIMIENTO

CÁLCULO
ABmp
C Muestra= x Cst
ABst − ABbl

VALORES DE REFERENCIA
3,5 a 5,0 g/dL

LINEALIDAD
Hasta 8.0 g/dL

EJERCICIO DE APLICACIÓN

AbBl=0,025 ABmp
C Muestra= x Cst
AbMP=0,425 ABst − ABbl
AbSt=0,445 0,425
C Muestra= x 4,2
0,445−0,025
C Muestra= 4,25g/dL
 Se concluye que: el paciente se encuentra dentro de los valores
normales considerados por esta casa comercial.

6) MÉTODO COLORIMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN DE

ALBÚMINA EN SUERO (PUNTO FINAL) – WIENER

FUNDAMENTOS DEL MÉTODO

La albúmina reacciona específicamente (sin separación previa) con la
forma aniónica de la bromo cresolsulfon ftaleína (BCF), en presencia de
un exceso de colorante, en medio tamponado a pH 3,9. El aumento de
absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a
la cantidad de albúmina presente en la muestra.

REACTIVOS PROVISTOS
Reactivo: solución de bromo cresolsulfon ftaleína 0,3 mmol/l (en
polioxietilén lauril éter).

MUESTRA
Suero.

PROCEDIMIENTO

CÁLCULO
 ABmp
C Muestra= x Cst
ABst − ABbl

VALORES DE REFERENCIA

Se determinó el contenido de albúmina en suero de personas sanas, de

ambos sexos, con alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40
años. Se obtuvieron los siguientes rangos: Albúmina: 3,5 a 4,8 g/dl.

LINEALIDAD
0,5-7,0 g/dl

EJERCICIO DE APLICACIÓN

AbBl=0,034 ABmp
C Muestra= x Cst
AbMP=0,474 ABst − ABbl

AbSt=0,496 0,474
C Muestra= x 4,2
0,496−0,034
C Muestra=4,31g/dL

Se concluye que: el paciente se encuentra dentro de los valores

referenciales que son considerados normales.

CONCLUSIONES
Es necesario el control periódico, puesto que los pacientes podrían estar
pasando un estado de desnutriciòn o de hiperproteinemia lo que
desencadenaría injuria en la salud.
urante el desarrollo de la práctica realizada se procedió aplicar los principales
métodos que se usan en el laboratorio para precipitar y separar proteínas, así
como métodos especiales para cuantificarlas y de esa forma saber en qué
cantidades se encuentran presentes en una solución determinada, en especial
la solución usada en la experiencia de laboratorio, el “plasma o suero humano”
a través del cual se estudiaron sus proteínas más importantes, la albúmina, las
globulinas y la relación que existe entre ellas.

Las causas más frecuentes de hipoproteinemia son la malnutrición, síndromes

de malabsorción, pérdidas renales (síndrome nefrótico, aminoacidurias),
pérdidas intestinales (malabsorción, enfermedad celíaca, colitis ulcerosa,
pancreatitis crónica, etc.) o déficit de síntesis (hepatopatías tipo cirrosis).

El aumento de las proteínas es relativo, cuando el incremento se debe a una

hemoconcentración (Aumento en el número de hematíes) provocada por una
deshidratación; o absoluto, si aumentan las proteínas totales por incremento de
las síntesis de globulinas. Esta elevación de las globulinas en general se
observa, en estados de defensa contra agentes infecciosos, en procesos
inflamatorios crónicos

BIBLIOGRAFIA

Charac. (2020). Proteínas: Definición, funciones, tipos y características.

https://www.caracteristicas.co/proteinas/
MedlinePlus. (2020). Proteína total: MedlinePlus enciclopedia médica.
https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003483.htm
Ortiz, A. (2019). Nutrientes: ¿Qué son las proteínas y para qué sirven?
https://www.alimente.elconfidencial.com/nutricion/2019-06-01/proteinas-
aminoacidos-para-que-sirven_1522540/
Rodríguez, F. (2018, diciembre 9). Determinación cuantitativa de albúmina.
Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico.
https://www.franrzmn.com/determinacion-cuantitativa-de-albumina/