Nociones de Criopreservación

Termodinámica Básica
Efectos Coligativos
Shock Térmico

Introducción
Espermatozoide de toro > fácil congelabilidad relativa

Modelo celular de comportamiento frente al congelado

Traslado a otras especies > Fallido

Modelo de membrana > distribución y asimetría de

lípidos
interacciones lípido-lípido
interacciones lípido-proteína
dominios específicos

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 Nociones de
Termodinámica

La Cumbrecita

Temperatura

• Propiedad que indica el estado térmico de un cuerpo

• Si se espera un tiempo suficiente, finalmente el cuerpo

estará en equilibrio térmico, quedando todas sus partes a la
misma temperatura

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 Sistema Termodinámico

• Cualquier sistema macroscópico

• Variables de estado: ciertas magnitudes físicas (T, V, P)

que permiten caracterizar su estado termodinámico

• Si éstas permanecen constantes, el sistema está en

equilibrio termodinámico

Transformaciones
termodinámicas
Modificación del estado de equilibrio de un sistema

Pueden ser:
1. Mecánica: cualquier cambio directo del volumen del
sistema sin que ello implique intercambio de calor

1. Térmica: el sistema termodinámico interactúa con otro a

distinta temperatura, con intercambio de calor, y sin que
ello signifique trabajo mecánico

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 Trabajo

Magnitud física que permite calcular el intercambio de

energía (mecánica) en las interacciones

dW = Fg . ds
siendo Fg componente de la fuerza en la dirección del
movimiento
ds desplazamiento elemental (diferencial)

W=F.d

Calor

• Q: Cantidad de calor intercambiada entre dos sistemas a

distinta temperatura

• Para que haya calor intercambiado es necesario que

por lo menos dos cuerpos o partes de un sistema estén a
distinta temperatura simultáneamente

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 Calorimetría

Relación fundamental de la calorimetría :

Q = ce . m . (Tf -Ti)

siendo m: masa
T: temperatura final menos temperatura inicial
Cuando hay cambio de estado la T permanece constante
Q = ce . m . (Tf - Ti) + m . cl

Siendo Cl: Calor latente

Nociones de efectos
coligativos

Cataratas del Iguazú

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 Propiedades de las Soluciones

•Disolución: mezcla homogénea de dos o más componentes

•Homogénea: constituida por una sola sustancia

•Disoluciones diluidas: contienen una pequeña cantidad de

soluto en un volumen de solvente
•Disolvente: se encuentra en mayor proporción

•Soluto: se halla en menor proporción

Diagrama de Fases

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 Propiedades Coligativas

Dependen de la cantidad y no del tipo de partículas

1. Presión de Vapor
2. Descenso Crioscópico
3. Ascenso Ebulloscópico
4. Presión Osmótica

Descenso Crioscópico

7
 Descenso Crioscópico

Tc = Cte . Xst

Tc = Kc . mol

Tc = Kc . osm

Coeficiente i de van’t Hoff

i=g.
Donde:
g = coeficiente osmótico
 = factor de disociación

osmol = mol . i

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 “Shock térmico”

San Clemente

“Shock térmico”

Shock Térmico > se origina en un punto

es un proceso extensivo
en un medio isótropo homogéneo fluido
este fenómeno no aparece
Mecanismo:
1. importante gradiente térmico (T/x) en un punto
2. modificación mecánica violenta
3. ruptura como la fractura en un cristal
4. onda mecánica esférica (onda de choque)
5. propagación a la velocidad del sonido en medio líquido

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 “Shock térmico”

6. deformación de estructuras adyacentes (otras células)

7. aumento local de la temperatura (reversible)
8. propagación a todo el volumen

Gradiente térmico > Δ pocos grados entre dos puntos muy

cercanos inician el proceso
Posibilidad de ocurrencia > aumenta en las interfases

Usos

1. pinza (no puntiaguda) se introduce en el N2L y debería

estar revestida de un mal conductor térmico

2. dilución de los eyaculados disminuye la probabilidad de

ocurrencia

3. el proceso puede ocurrir tanto durante el enfriamiento

como en el descongelado

4. tomar precauciones en el manejo: evitar las diferencias

de temperatura entre el tubo colector y el semen

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 Congelamiento Celular

Cumbre del Champaquí

Efectos del
congelamiento celular
1. adición de crioprotectores
2. cambios volumétricos
3. encogimiento y estiramiento frente a soluciones
hiperosmóticas
4. deshidratación
5. transiciones de fase termotróficas y lipotróficas
6. efecto "solución“
7. formación de hielo intracelular

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Cambios durante la dilución
y el enfriado

Modificaciones del
volumen celular y tipo
de cristalización a
distintas velocidades de
congelado

Hammerstedt y col. 1990

Modificación
del volumen
Se observan los cambios
profundos de volumen a
medida que se suceden
los cambios de
temperatura.

Hammerstedt y col. 1990

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 Formación de hielo
Efectos de la cristalización extracelular:
> cambio de fase del solvente externo
> aumento de la concentración de los solutos remanentes
> poco tiempo de adaptación
Probabilidad de formación de núcleos de hielo:
> inversamente proporcional a la viscosidad
> función directa del volumen
> para obtener un buen proceso:
> la viscosidad debe aumentar
> el volumen de la dosis a congelar debe disminuir

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Criofractura de una pajuela

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Cabeza del espermatozoide
congelado

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Mal congelamiento

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Congelamiento muy rápido

Buen congelamiento

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 (a) Bajo aumento de una sección
transversal de un MiniFlat-
Pack (MFP). Los “lagos” son similares
en toda la imagen (b) Bajo aumento de
una sección transversal de una pajuela
mediana (MS). Los “lagos” en las
zonas intermedias son más marcados
(flechas).

Ekwall y col., 2007

(a) Detalle de una MiniFlatPack (MFP) fractuada y usada para

calcular “lagos” y “venas” , (b) Idem pajuela mediana. Bar = 10 mm

Ekwall y col., 2007

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(c) Detalle de una “vena” con cabezas
individuales (h) y colas (*) dentro del Ekwall y col., 2007

diluyente (ext). Bar = 1 mm.

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