TALLER VIRTUAL LABORATORIO BIOQUIMICA I

TEMA: ACTIVIDAD CATALASA

(el presente taller no debe superar 5 páginas)

INTEGRANTES Laura A. Aranguren, Cristian F. González, Diana A.

1. Introducción al tema, nomenclatura de la Enzyme Comission (números EC) para la catalasa indicando el por qué de cada uno de sus números,
funcionalidad enzima catalasa (incluya ecuación química general), cuáles son los efectos adversos en caso de ausencia o deficiencia de esta
enzima (no olvide incluir bibliografía):

La catalasa es una de las enzimas más abundantes en la naturaleza y se encuentra ampliamente distribuida en el organismo humano, aunque su
actividad varía en dependencia del tejido; ésta resulta más elevada en el hígado y los riñones, más baja en el tejido conectivo y los epitelios, y
prácticamente nula en el tejido nervioso. La catalasa (peróxido de hidrógeno oxidorreductasa) presenta una clasificación E.C: 1. 11. 1. 6, lo que indica
que esta pertenece a las oxidorreductasas, que son las enzimas capaces de transferir átomos de hidrógeno, oxígeno o electrones entre dos moléculas.
Dentro de las oxidorreductasas (un grupo muy extenso con más de 90 subcategorías) se incluye en el apartado 11 las peroxidasas, un tipo enzimático
presente en todos los grupos de seres vivos capaces de reaccionar con el peróxido de hidrógeno (H 2O2). Entre las peroxidasas encontramos aquellas
que emplean el H2O2 como aceptor del oxígeno, el grupo 2. Mientras que el grupo 1, al que pertenece la catalasa, actúa con el H 2O2 como donador del
oxígeno. De las 21 enzimas dentro del EC 1.11.1 la catalasa es la número 6. A nivel celular se localiza en las mitocondrias y los peroxisomas, excepto en
los eritrocitos, donde se encuentra en el citosol 2. Esta enzima es una metaloproteína tetramérica, cuyo peso molecular se encuentra en el rango de
210-280 kD. Consta de 4 subunidades idénticas que se mantienen unidas por interacciones no covalentes. Cada subunidad contiene un grupo prostético
de protoporfirina IX y el contenido protohémico y el de hierro representan un 1,1 % y 0,09 % respectivamente del peso molecular total de la enzima .

La catalasa como parte del sistema antioxidante está involucrada en la destrucción del H 2O2 generado durante el metabolismo celular. Esta enzima se
caracteriza por su alta capacidad de reacción pero relativamente poca afinidad por el sustrato. Presenta 2 funciones: la catalítica y la peroxidativa.
Ambas se pueden representar por la ecuación

H2O2 + H2R ---------- 2H2O + R

La ausencia de catalasa en el organismo , causa la acatalasemia que esta es causada sobre todo por mutaciones en el gen del CAT que
codifica la catalasa. Una deficiencia en la actividad de la catalasa da lugar a la acumulación excesiva de peróxido de hidrógeno debido a
la descomposición escasa. Aunque el peróxido de hidrógeno en los niveles bajos actúe como molécula de la transmisión de señales, es
altamente tóxico en concentraciones más altas.

2. Resultados
2.1. Presencia de la enzima catalasa. Observe el siguiente video (desde el minuto 3 al 6): https://www.youtube.com/watch?v=5_H9rtxUs3Q y el
video: https://www.facebook.com/bioesosfera/videos/hoyenpracticas-c%C3%B3mo-funcionan-las-enzimas-probamos-con-una-de-ellas-la-
catalasa-/2082538688646766/. Ahora resuelve:

Muestra Efecto físico y químico observado

 se observa como la catalasa que protege al higado, al añadir el agua oxigenada
Hígado
hace un reaacion oxido-reduccion, es decir se descompone el H2O2

al añadir peroxido de hidrogeno a la papa sin la corteza, se observa que hay

Papa
efervecensia, que es la liberacion de oxigeno, por parte de la ruptura del H2O2

2.2. ¿Qué sucedería si nuestra muestra, de hígado, por ejemplo, es hervida? y posterior a ello se le adiciona el peróxido de hidrógeno; o si por
el contrario; sometemos a ebullición el peróxido de hidrógeno previa su adición a la muestra de hígado?. Sustente física y químicamente,
cada caso.

Muestra Efecto físico/químico observado

No se observaría ninguna reacción, esto se debe porque la catalasa se

Hígado hervido + peróxido desnaturaliza fácilmente al someterse a aumentos de temperatura, por lo cual, al
de hidrógeno adicionar peróxido de hidrógeno no habrá presencia de enzimas con la que el
peróxido pudiese reaccionar.

El peróxido de hidrógeno se descompone a temperaturas altas, por lo que al

adicionarse al hígado posterior al alcanzar su punto de ebullición, no generaría
Hígado + peróxido de
ninguna reacción ya que solamente se estaría agregando agua (El peróxido se
hidrógeno post-ebullición
descompone en agua y oxígeno, por lo que en su punto de ebullición estaría
presente una gran cantidad de oxígeno y vapor de agua)

2.3. Cinética Enzimática (leer práctica, numeral 3.2) y a partir de la comprensión del procedimiento, desarrolle:
2 H 2 O 2 catalasa →2 H 2 O ❑ +O 2
Tubos 1 2 3 4 5 6

Reactivos mL mL mL mL mL mL

H2O2 0,1 M 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 2.5

Agua destilada 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.5

Enzima sin hervir 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 ---

Enzima hervida --- --- --- --- --- 1.0

5 H 2 O2 +2 KMnO 4 → 5 H 2 O❑
El permanganato titula el peróxido que no fue descompuesto por la catalasa

0.00018*0.01=1.8um

de acuerdo a esa relacion tengo que:4.0um*kmno4*(5um h2o2/2um kmno4)=4.5um

Tubo 1 2 3 4 5 6

Moles o μmoles iniciales de 50 100 150 200 250 250

H2O2 0,1 M

KMnO4 0.01M utilizado (mL) 0,18 0,40 1.30 1.90 3.60 9.78
 H2O2 4.5 10 32.5 47.5 90.0 244.5

No descompuesto en 5 minutos,
peróxido que se tituló con
permanganato (μmoles)

H2O2 45.5 90 117.5 152.5 160 5.5

descompuesto por 1.0 mL de

enzima en 5 minutos (µmoles)

Actividad específica de la enzima 9.1 18 23.5 30.5 32 1.1

catalasa

(cantidad de H2O2 0,1M

descompuesto por 1mL de
catalasa en 1 minuto)

2.4. Cuál es el fundamento del empleo del permanganato de potasio una vez finalizada la cinética enzimática

Constituye la titulación de oxidación-reducción en donde permite determinar la concentración de la solución .Representa la medida del peróxido
remanente después que la enzima ha actuado sobre el sustrato Cabe destacar que a pesar de que el peróxido de hidrógeno sea oxidante, al
reaccionar con un compuesto con mayor poder oxidante que él, como el KMnO4, se comporta como reductor oxidándose.

2 KMnO4 + 3 H2SO4 + 5 H2O2 ---> K2SO4 + 2 MnSO4 + 8 H2O + 5 O2

2.5. A partir de los resultados de la tabla anterior, TUBOS 1 AL 5, realice un paralelo entre las representaciones gráficas de: Michaelis-Menten,
Lineweaver-Burk

Grafico Michaelis-Menten Gráfico Lineweaver-Burk

Parámetro cinético Grafico Michaelis-Menten Gráfico Lineweaver-Burk

Vmax 0.68 588.24

Km 3.33 117.17

2.6. A qué se debe el comportamiento sigmoidal del gráfico cinético según el modelo michaeliano?

presenta una forma sigmoidea porque la enzima a medida que pasa el tiempo, la concentración del sustrato aumenta lo que hace que llegue
al punto de que alcanza su velocidad máxima, y la enzima se satura, es decir que todas sus moléculas ya están copadas procesando
sustratos,la velocidad del sustrato está limitada por la concentración de la enzima.
2.7. A qué se debe el comportamiento del tubo número 6?

en el caso del tubo número 6, ya su velocidad es de 1.1, a comparación del tubo 5 que es 32, en el caso del tubo 5, alcanza su nivel máximo
de concentración de la enzima, ya para el tubo 6 queda sobresaturada esta concentración, hace que haya un declive en la grafica (si la
hubiera), por otra parte la cantidad de H2O2, es consumida casi en su totalidad

2.8. Enzimáticamente y/o biológicamente, de qué da cuenta el valor de Vmax, cuál es la importancia de dicho parámetro?

La velocidad máxima(Vmax) es independiente de la concentración del sustrato y por tanto, la reacción es un proceso cinético de orden cero.
Además, nos permite definir un nuevo parámetro, la velocidad máxima de la reacción, que es la velocidad que se alcanzaría cuando todo el enzima
disponible se encuentra unido al sustrato

2.9. Enzimáticamente y/o biológicamente, de qué da cuenta el valor de Km, cuál es la importancia de dicho parámetro?

La Km es una constante característica de cada enzima , también es una medida de la afinidad de una enzima por su sustrato (la tendencia a unirse a
él). Una Km más baja corresponde a una mayor afinidad por el sustrato, mientras que una Km más alta corresponde a una menor afinidad por el
sustrato, este valor varía mucho de una enzima a otra

2.10. ¿Qué diferencias encuentra entre los cálculos de Vmax y Km en los dos tipos de representaciones gráficas?, cuál es más exacta?

Según la gráfica de Michaelis – Menten los valores de Vmax y Km son bastante grandes Entonces A baja [S], es decir si Km > [S], el término Km+[S]
podemos aproximarlo a la Km, quedando un expresión del tipo: V = k’ [S] Esta es una cinética de primer orden, que se caracteriza por una variación
lineal de la V respecto al tiempo; en la gráfica de Lineweaver – Burk los valores de Vmax y son bastante pequeños, A altas [S], es decir, Km<[S],
despreciaríamos Km frente a [S], con lo que V = Vmax (que sería constante); la cinética es de orden cero y se habría alcanzado la saturación por
sustrato, como ocurre en la fase final. Entre más reducido sea el valor de Vmax y Km se tendrá más afinidad de la enzima por su sustrato, y a
desarrollado la mitad de su velocidad máxima. Entonces la gráfica más exacta será la de Lieneweaver – Burk .

3. Conclusiones (presentadas a partir de los objetivos planteados por cada uno, incluir los resultados generales obtenidos en el taller. El límite
inferior de conclusiones es 3).

Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reacción hasta cierta temperatura óptima, si se sobresale del límite se comienza
a producir la desnaturalización térmica de la catalasa es decir la enzima empieza a activarse se tal forma que el cambio en el pH de la catalasa así afecta
la actividad enzimática.

Los valores de Km constante de Michaelis-Menten es la característica que presenta la enzima referente a su sustrato, estos valores denotan que tan
afín es la relación enzima-sustrato; pues entre más pequeño sea el valor Km mejor afinidad se presentará, a diferencia de un valor grande de Km.

Si la enzima sufre algún cambio brusco en sus propiedades, como lo es el aumento de la temperatura causará una desnaturalización, por lo cual no
podrá reaccionar con sustancias, por ejemplo el peróxido de hidrógeno
4. Bibliografía e Infografía (Normas Icontec o APA)

Bibliografía

[1] UNIVERSIDAD DEL VASCO “cinética enzimática” [En línea]. Disponible en: http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#mm Citado :
25 de ago. de 20

[2] REVISTA EUBACTERIA “Los cuatro mosqueteros de la cinética enzimática” [En línea]. Disponible en:
https://www.um.es/eubacteria/Los_cuatro_mosqueteros_de_la_cinetica_enzimatica_Eubacteria34.pdf Citado : 25 de ago. de 20

[3] GONZÁLEZ “Cinética Enzimática” [En línea]. Disponible en: http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CineticaEnzimatica-

EnriqueRivera_32548.pdf Citado : 25de ago. de 20

[4] J. PEREZ, M. NORIEGA “Enzimas” [En línea] Disponible en: https://ocw.unican.es/pluginfile.php/879/course/section/967/Tema%25202B-Bloque

%2520I-Enzimas.pdf Citado: 25 de Ago. 2020

[5] J. VALENZUELA “Factores que afectan la actividad de las enzimas”[En línea] Disponible en:
https://www.academia.edu/15310442/Factores_que_afectan_la_actividad_de_las_enzimas Citado: 25 de Ago. 2020

[6] E. BATTANER “Introducción a la bioquímica” [En línea] Disponible en: https://gredos.usal.es/bitstream/handle/10366/119453/Enzimologia.pdf?

sequence=1&isAllowed=y Citado: 25 de Ago. 2020

[7] S. NURIAREAZA “Clasificación y nomenclatura de enzimas” [En línea] Disponible en: https://es.slideshare.net/nuriareza/clasificacion-y-
nomenclatura-enzimas Citado: 25 de Ago.2020