DEMOSTRACION DE LA ACTIVIDAD CATALÍTICA DE

LA PEROXIDASA

I. INTRODUCCION

Los peroxisomas y glioxisomas contienen enzimas que degradan ácidos grasos y aminoácidos. El

producto de estas reacciones es el Peróxido (H2O2); que es una sustancia corrosiva. Los peróxidos

también contienen grandes cantidades de enzimas catalasa, la cual degrada al peróxido de

Hidrógeno:

2H2O2 + CATALASA = 2H2O2 + O2

La catalasa utiliza el H2O2 generado por otras enzimas en el organelo para oxidar a una variedad de

sustratos, tal como formaldehido, fenol, alcohol, por la reacción peroxidativa:

H2O2 + R´H2 R´ + H2O2

Este tipo de reacción oxidativa es particularmente importante en las células hepáticas y renales; para

detoxificar varias sustancias sustancias que entran al torrente sanguíneo. La peroxidasa del rábano es

una Oxido-reductasa (Ec 1,11,1,7). Es una hemoproteina que transfiere hidrógeno desde donadores

de hidrógeno a H202. La peroxidasa del rábano puede ser usada en una amplia gama de aplicaciones

analíticas industriales y clínicas por su estabilidad y disponibilidad.

II. OBJETIVOS

 Diferenciar un de un biocatalizador por el desprendimiento de oxigeno molecular.

 Demostrar cómo se evalúa la actividad catalítica de la peroxidasa.

 Demostrar la presencia de peroxidasas en los diferentes tipos de células.

 Demostrar el efecto oxidante del O2 sobre el alcohol etílico mediante el reactivo de schiff.

III. MARCO TEORICO

La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos aerobios. Cataliza

la disminución del peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno. La mayoría de estas enzimas

son homotetrámeros con un grupo hemo en cada subunidad. Se ha determinado la estructura

cristalográfica de nueve catalasas. Algunas catalasas tienen subunidades pequeñas (masa molecular =
 60 KDa) y otras grandes (masa molecular > 80 KDa). Entre estos dos tipos de catalasas existen

diferencias estructurales importantes. Las catalasas pequeñas son menos resistentes a la

desnaturalización, unen NADPH, tiene hemo b y se inhibe e inactivan por sustrato. En cambio, las

catalasas grandes tienen un dominio extra en el C-terminal que es semejante a la flavodoxina, son

muy resistentes a la desnaturalización, tiene hemo d, presentan enlaces covalentes inusuales cercanos

al sitio activo y son resistentes a concentraciones molares de H2O2.

IV. METODO

Materiales y Reactivos:

 Agua oxigenada 10 Vol.

 Gradillas

 Limaduras de Hierro

 Tubos de ensayo

 Buffer de fosfato pH 7.2

 Reactivos de Schiff

 Papa, rábano, carne o hígado

 Alcohol etílico

Procedimiento experimental:

SISTEMAS
componentes
I II III IV V VI VII
Buffer de fosfato pH 7.2 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL
Agua destilada 4 mL 1 mL
Limaduras de fierro 0,5 g
Trozos de papa o rábano 0,5 g
Trozos de zanahoria o brócoli 0,5 g
Trozos de carne o higado 0,5 g
Levadura de panificación 0,5 g
Agua oxigenada 3 volúmenes 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL
Observar por 15 minutos
Alcohol etílico 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL
Reactivo de schiff 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

V. RESULTADOS

A1 No hay cambio DESPUES DE LOS 15 MINUTOS

A2 No hay cambio B1 Cambio de color (fucsia)
A3 desprendimiento de oxigeno B2 Cambio de color (fucsia)
A4 desprendimiento de oxigeno B3 Cambio de color (fucsia)
A5 el tubo es de color amarillento B4 Cambio de color (fucsia)
A6 el tubo es de color amarillento B5 Cambio de color (fucsia)
A7 el tubo es de color amarillento B6 Cambio de color (fucsia)
B7 Cambio de color (fucsia)
VI. CUESTIONARIO

1. ¿Mencione usted en que organelos se encuentran las peroxidasas?

La peroxidasa está localizada en los tejidos meristemáticos, en las células epidérmicas y

vasculares. En las células vasculares, la peroxidasa puede estar localizada en el xilema y,

secundariamente, en las células del cambium y del floema. En los frutos, la peroxidasa está

fundamentalmente localizada en las células epidérmicas y del xilema; y en las hojas, la

peroxidasa también está compartimentalizada en las células del mesófilo. En todos estos

tejidos, la peroxidasa se encuentra localizada tanto en las paredes celulares como en las

vacuolas. Sin embargo, en las células meristemáticas, cambiales y del mesófilo, las

peroxidasas están principalmente localizadas en la vacuola, bien en forma soluble o bien

firmemente ligadas a la cara interna del tonoplasto.

2. ¿Cuál es la función de la peroxidasa en la célula?

Las funciones en las que se encuentran implicadas las peroxidasas son, entre otras, la

formación de pared celular en procesos de lignificación, suberización y polimerización de

glicoproteínas ricas en hidroxiprolina, regulación de la elongación celular, respuesta a estrés

bióticos como cicatrización de heridas, en la degradación de clorofilas, en la germinación,

crecimiento celular y metabolismo de hormonas.

3. ¿Qué diferencias hay entre peroxidasa y catalasa?

Catalasa
La Catalasa es una enzima que se encuentra
en organismos vivos y cataliza
ladescomposición del peróxido de hidrógeno
(H202) en oxígeno y agua.
catalisa la descomposicion del peróxido de
hidrógeno (H2O2) en oxígeno y agua
Peroxidasa
Las peroxidasas son un tipo de enzimas muy
extendidas en toda la escala
filogenética.Catalizan reacciones bisustrato
de carácter redox, utilizando un peróxido
como oxidante (a loque deben su nombre) y
un segundo sustrato de características
reductoras que es oxidado por el peróxido.
cataliza reacciones de biosustrato de
carácter redox, utilizndo peróxido como
oxidante y un segundo sustrato de
caracteristicas reductoras que es oxidado
por el perxido

4. ¿Explique usted como en la célula se forman los peróxidos (H2O2) y que acción tienen?
 Las células tienen unos complejos enzimáticos llamados PEROXISOMAS, que usan o

crean el peróxido de hidrogeno para poder degradar ácidos grasos de largas cadenas, u otras

moléculas complejas. Cuando se ingiere Etanol (bebidas alcohólicas), este no puede ser

oxidado en la mitocondria, por lo que los Peroxisomas cumplen esa función liberando

peróxido de hidrogeno.

5. ¿Cómo interviene la catalasa en la oxidación del alcohol etílico?

La oxidación del etanol por medio de la catalasa utiliza peróxido de hidrógeno:

Etanol + H2O2 → acetaldehído + H2O

El peróxido de hidrógeno utilizado para esta reacción se deriva principalmente la reacción

mediada por la xantina oxidasa del catabolismo de purinas:

hipoxantina + H2O + O2 → xantina + H2O2

VII. REFERENCIAS

 Guía de laboratorio de bioquímica.P.9-10-11-12.

 Recuperado de: http://covarida.blogspot.com/2011/05/enzima-catalasa-vs-enzima-

peroxidasa.html.

 Recuperado de: https://es.scribd.com/document/100040232/La-Catalasa-y-La-

Peroxidasa.