Estimación del kLa y coeficiente respiratorio (RQ) para un cultivo batch de

Saccharomyces cerevisiae.

Cárdenas Juan Diego, Delgado Karen Vanessa

Universidad Icesi
Facultad de Ingeniería
Programa de Ingeniería Bioquímica
Laboratorio de Tecnologías de Fermentación
Santiago de Cali, Colombia
Septiembre del 2020

1. Resultados.

Tabla 1. Datos de biomasa seca, glucosa, etanol, temperatura, pH, pO2 en el

tiempo.

Concentracion
tiempo Concentración de Concentración de Temperatura
de glucosa pH pO2 %
[h] biomasa seca [g/L] Etanol [g/L] [C]
[g/L]
0 2,005 29,180 0,002 35 7,1 100,0
0,330 2,326 28,510 0,246 35 7,1 59,9
0,660 2,701 27,730 0,529 35 6,7 59,9
0,991 3,110 26,840 0,854 35 6,4 59,9
1,324 3,620 25,730 1,228 35 6,7 59,9
1,658 4,137 24,430 1,655 35 6,4 59,9
1,991 4,780 23,010 2,122 35 6,3 59,9
2,324 5,436 21,410 2,640 35 6,8 59,9
2,652 6,038 19,760 3,102 35 6,9 59,9
2,985 6,532 18,270 3,648 35 6,9 59,9
3,319 6,967 16,780 3,828 35 7 60,0
3,652 7,443 15,250 4,189 35 6,4 60,0
3,985 7,892 13,810 4,541 35 6,4 60,0
4,319 8,379 12,270 4,909 35 6,5 60,0
4,652 8,802 10,820 5,240 35 6,4 60,0
5,013 9,305 9,306 5,592 35 6,8 60,0
5,319 9,731 7,901 5,921 35 7 60,0
5,652 10,200 6,391 6,306 35 6,5 60,0
5,985 10,700 4,946 6,643 35 6,6 60,0
6,346 11,120 3,422 6,994 35 6,5 60,0
6,652 11,54 2,071 7,292 35 6,8 60,0
6,985 11,93 0,702 7,632 35 6,5 60,0
7,319 12,32 0,000 7,588 35 6,8 60,0
7,652 12,70 0,000 7,075 35 7 60,0
 7,985 13,03 0,000 6,584 35 7 60,0
8,319 13,36 0,000 6,125 35 7 60,0
8,652 13,61 0,000 5,712 35 7 60,1
8,985 13,87 0,000 5,278 35 7 60,1
9,319 14,17 0,000 4,890 35 7 60,1
9,652 14,38 0,000 4,554 35 7 60,1
10,013 14,62 0,000 4,190 35 7 60,1
10,319 14,85 0,000 3,891 35 7 60,1
10,652 15,02 0,000 3,581 35 7 60,0
10,985 15,15 0,000 3,318 35 7 60,1
11,319 15,37 0,000 3,051 35 7 60,1
11,652 15,53 0,000 2,814 35 7 60,1
11,985 15,68 0,000 2,591 35 7 60,0
12,319 15,79 0,000 2,375 35 7 60,0
12,652 15,93 0,000 2,180 35 7 60,0
12,985 16,09 0,000 1,987 35 7 60,0
13,346 16,21 0,000 1,817 35 7 60,0
13,652 16,35 0,000 1,652 35 7 60,0
13,985 16,38 0,000 1,497 35 7 60,0
14,319 16,54 0,000 1,359 35 7 60,0
14,652 16,59 0,000 1,225 35 7 60,0
14,985 16,71 0,000 1,104 35 7 60,0
15,319 16,79 0,000 0,989 35 7 60,0
15,652 16,83 0,000 0,881 35 7 60,0
15,985 16,89 0,000 0,780 35 7 60,0
16,319 16,90 0,000 0,692 35 7 60,0
16,652 17,04 0,000 0,607 35 7 60,0
16,985 17,09 0,000 0,528 35 7 60,0

2. Análisis y procesamiento de datos

2.1 Calcule, empleando sus conocimientos de termodinámica, el valor de concentración de

saturación de oxígeno disuelto en agua bajo las condiciones de temperatura y presión trabajadas en
el laboratorio. Cómo sería el valor de esta concentración de oxigeno si se usara un medio con una
concentración de 110 g/l de glucosa y 30g/l de Nitrato de amonio y 5 g/L de fosfato mono sódico?
Justifique esta última pregunta y muestre los cálculos hechos para los valores reportados.

Partiendo de la la ecucación 1.( E. NARITA*, F. LAWSON and K.N. HAN) Es posible

relacionar la solubilidad del oxígeno con presencia de compuestos ionicos como las sales
(nitrato de amonio), respecto a la solubidad del oxígeno en agua pura.
 log 10 ( SoS )=−∑ Ki∗Ci Ec. 1

Donde:
S: solubilidad del componente i.
So: La solubilidad de saturación del oxígeno en agua pura.
Ki: Constante de solubilidad para las especies i iónicas o moleculares
Ci: Molaridad de la especie i.

Ahora, para calcular la solubilidad del compuesto a una temperatura dada, se relaciona la
constante de Hanry con la ecuación 1 partimos de la constante de equilibrio ecuación 2.

Keq=a A /f A Ec 2.

Donde:
a A y f A son la actividad y la fugacidad de la especie A respectivamente

La fugacidad se puede aproximar a la presion parcial y la actividad se puede escribir como:

a A =γ A∗C A Ec 3.

Donde:
γ A = Coeficiente de actividad de A.
C A= Molaridad de la especie A.

Ahora se reescribe la ecuación ecuación 4.

γA
Keq= ∗C A Ec 5.
PA

Despejamos C A la ecuacióin 5

K eq
C A= ∗P A Ec 6.
γA

K eq
donde esta relacionada con la constante de Hanry si la molaridad de saturación de la
γA
solución electrolítica de A es C As ecuación 7.

K eq
C As= ∗P A Ec 7.
γ As
Debido a esta relcicón de Hanry pordemos reescribir la ecuación 7 como:

103 K eq M A
S= ∗P A Ec 8.
γA

Donde:
S= la solubilidad en saturación de las especies gaseosas en mg/dm^3
M A= Peso molecular de A

Y debido a la relación de hanry podemos escribir la ecuación 8 como:

1
S= Ec 9.
HS

Donde:
H S = Relación de la constante de la Henry para la solución de electrolitos.

Aplicando logaritmos a ambos lados de la ecuación:

log S=log ( H1 )+ log P

S
A Ec 10.

Y al generalizar la ecuación 10 a la temperatura dada obtenemos:

log ST =log ¿ ¿ ¿ Ec 11.

Las ecuaciones 10 y 11 representan la solubilidad de un gas a 298 K a una temperatura T. Estas

pueden convinarse y diferenciarse:

d log ¿ ¿ Ec 12.

Donde:
∆ H|¿|¿= Calor de absorción del gas A en la solución.

A partir de datos experimentales obtenidos en la literatura [colocar referencia], se obtuvo un

valor de -11,1 KJ/mol (-2654 cal/mol) para H abs, por lo tanto, la solubilidad del oxígeno en
soluciones acuosas de electrolitos puede expresarse como:

ST =S298 exp ¿ ¿ Ec. 13.

Simplificando la ecuación 13 obtenemos:

1336
ST =S298 exp ( ¿−4,48) ¿ Ec 14.
T

Ahora se simplifica la ecuación y se presenta el cálculo de la solubilidad del oxígeno con nitrato
de amonio utilizando la ecuación 1.
 S
log ( )
S0
=−¿ ¿] Ec 15.

Donde:
[C NH ¿] = Concentración final de los inoes de amonio.
4 +¿

[C NO ¿] = conocentración final de los inoes de nitrato.

−¿
3

Para el cálculo de estas concentraciones (mg/dm^3) se empleó la ecuación de concentraciones a

partir del pH el cual varia entre 7 y 6 se calcula para 6,5 estableciendo un rango para estos
valores.

pH=−log[NH +¿
4 ]¿ Ec 16.
+¿¿
Despejamos la concentración del NH 4

log ¿ ¿ Ec 17.

10−6,5 =¿

¿
−¿¿
Se realiza el mismo cálculo con el NO 3

log ¿ ¿

10−6 ,=¿

Se reemplazan los valores obtenidos en la ecuación 16 y se procede a calcular la relación de

solubilidad S/So

log ( SS )=−¿ ¿]
0

log ( SS )=−¿ ¿]
0

S
=10−[1,0428 x
−8
+2,08 x 10−8]
S0

S
= 0,99 Ec 18.
S0
 Despejamos de la Ecuación 18 la solubilidad del componente i (nitrato de amonio) donde se
multiplica por la solubilidad de saturación del oxígeno en agua pura el cual es de 40,2 a
temperatura ambiente, obtenido de la literatura.

S=0,99∗40,2 mg/dm3

S=39,79mg /dm3

Por utlimo se emplea la ecuación 14. Para cálcular la solubilidad del oxígeno en la solución de
nitrato de amonio a 308,15 K

1336
S308,15 =S298∗exp ( ¿−4,48)¿
308,15

S308,15 =S298∗exp (−0,144¿) ¿

S308,15 =S298∗0,8654

mg
S308,15 =39,79 ∗0,8654
dm3

S308,15 =34,43 mg/dm 3

Para la segunda parte, es posible relacionar la solubilidad del oxígeno, cuando hay presencia de
solutos disueltos como la glucosa, respecto a la solubilidad del oxígeno en agua pura.

C ¿ ALO
log 10
( )¿
C AL
=0,5 ∑ H i z i2 C iL + ∑ k j C jL
i J
Ec 19.

Donde:
C ¿ ALO : Solubilidad de oxígeno cuando no hay salutos
C ¿ AL: Solubilidad de oxígeno
H i: Constante iónica para el componente i
z i : Valencia ionica para el componente i
C iL: Concentración iónica de i en el líquido
k j : Constante de componente no iónico
C jL : Concentración de componentes no iónicos en el líquido

Se amsume que no hay presencia de solutos iónicos disueltos por lo cual:

0,5 ∑ H i zi2 CiL =0 Ec 20.

i
por lo tanto, la ecuación 20. Se presenta de la siguiente forma:

C ¿ ALO
log 10
( )
C ¿ AL
=∑ k j C jL Ec 21.
J

Ahora bien, con los valores de las constantes determinados por Quicker, Schumpe, König y
Deckwer (1981), sí consideramos sólo el aporte de la glucosa esté en mayor concentración,
entonces tenemos:
C ¿ ALO −4 m
3
log 10
( )(C ¿ AL
= 1,19 ∙ 10 C )
mol jL
Ec 22.

Dada la concentración de glucosa de 30g/L obtenemos:

3 3
m 30 g 10 L 1 mol
C¿ ALO (1,19 ∙10 −4
)( ∙ 3 ∙
)
( )
C ¿ AL
=10
mol L m 180 g

C¿ ALO
( )
C ¿ AL
=1,0467 Ec 23.

Con el aumento de la concentración de glucosa a 110g/L tenemos que:

C¿ ALO
( )
C ¿ AL
=1,1822 Ec 24.

Al aumentar la concentración de glucosa de 30 a 110 g/L, se relacionaron directamente las

relaciones encontradas anteriormente, por lo tanto, obtenemos:

C¿ ALO
C¿ AL110g / L(=
1,1822 )
=0,885
C¿ AL30 g / L C¿ ALO
( 1,0467 )
El resultado anterior indica que la concentración de oxígeno disuelto en saturación, en el reactor con
110 g/L, es el 88,5% de la solubilidad que alcanza el oxígeno en saturación en el reactor con 30g/L
de glucosa. Con lo cual se comprueba que la concentración de saturación del oxígeno disminuye al
aumentar la concentración de glucosa.

Ahora, para el cálculo de la concentración de saturación de oxígeno disuelto en agua, se empleó la

ecuación 25. Que establece la relación de solubilidad para solutos a dilución infinita, que para este
caso específico el soluto corresponde al oxígeno en agua a 32°C y se asumió solución ideal.

P AG=PT ∙ y AG=H ∙ C¿ AL Ec 25.

Donde:
P AG: Presión parcial del componente A en el gas
PT : Presión total del gas
y AG: Fracción molar del componente A en el gas
H : Constante de Henry
C ¿ AL: Concentración de saturación del oxígeno en agua

Se muestra la constante de Henry para el oxígeno en agua a 30°C fue obtenida de literatura, y se
asumió el comportamiento del oxígeno como gas real, más allá de haber asumido la solución como
un sistema ideal, por lo cual se obtuvieron el valor de las constantes a y b de literatura.

nRT n2 a
P AG= − 2 Ec 26.
V −nb V

Donde:
Las constantes de Van der Waals
a :1,36265 atm L2 /mol2
b :0,03186 L/mol
atm ∙ L
(
R :constante de los gases 0,08206
mol K )
T :temperatura 305,15 K
V :volumen del gas :12,2 L , en este caso se asumió un tiempo de 1 min, para obtener el volumen
de aire a partir del flujo.

Se procedió a calcular las moles de oxígeno molecular presentes en el volumen de aire, para ello se
empleó la densidad del oxígeno correspondiente a 1,429 kg/m3 teniendo en cuenta que el aire está
compuesto molecularmente por el 21% de oxígeno.

21 1m 3 kg 1 kmol 103 mol

n=12,2 L ∙ ∙ 3 ∙ 1,429 3 ∙ ∙ =0,114 mol
100 10 L m 32 kg 1 kmol

Resolviendo la ecuación 26, con los datos corresponsientes, obtenemos:

P AG=0,2339 atm

Por ultimos, se reemplazan los datos obtenidos dando una concentración de saturación del oxígeno
en agua

¿ P AG
C =
AL Ec 27.
H

0,2339 atm
C ¿ AL=
atm ∙ m3
27,54
kg
 kg mg mol
C ¿ AL=0,008493 =8,493 =0,2637 3
m 3
L m

Se consideró que la concentración de glucosa en el medio en este caso fue de 110 g/L, que afectan
la saturación del oxígeno disuelto en el reactor, por lo tanto, partiendo de la ecuación 24, y
resolviendo se obtiene que la concentración de saturación de oxígeno disuelto en agua

mol

C ¿ AL=(
¿
C ALO
1,1822
mol
)
= ( m3
1,1822
mg
0,2637
)
C ¿ AL=0,223 3 =7,0688
m L

2.2 Grafique los valores de kLa (h^-1) estimados con el método dinámico en función de los valores
de (nR) velocidad de agitación (rpm) y explique la tendencia de la gráfica en términos de los
patrones de flujos esperados para cada valor de nR.

Para calcular el Kla a través del método dinámico se utilizó la ecuación 28. Desde 20 rpm hasta
1000 rpm.

dC O 2 ¿
=k LA ( C O 2−CO 2 ) Ec 28.
dt

De la ecuación anterior, se procede a despejar k LA

C ¿ O2
(
ln ¿
C O 2−CO 2 ( t ) )
=k LA ∙t Ec 29.

Donde:
C ¿ O 2: Concentración de oxígeno en saturación
CO 2( t): Concentración de oxígeno en cada instante de tiempo t
k LA : Constante volumétrica de transferencia de masa
t : Instante de tiempo t

Se procedió a calcular a partir de la ecuación 29. Los valores de Kla a las diferentes agitaciones
como se presenta en la siguiente tabla.

C ¿ O2
Para la realización de estos cálculos, se graficó ln ¿
(
C O2−CO 2 ( t ) ) vs. t , teniendo en cuenta los

momentos de tiempo a partir de que se empezó a airear el fermentador partiendo de una condición
inicial de concentración de oxígeno disuelto de cero. Luego, por medio de una regresión lineal se
obtuvo la ecuación de la recta que da cuenta del valor del k LA como pendiente, indicando la
transferencia de oxígeno molecular desde la burbuja de gas hasta el líquido en las velocidades de
agitación presentadas.

Tabla 2. Coeficiente volumétrico de transferencia de masa (oxígeno) respecto a la velocidad de

agitación.

Agitación [rpm] Kla [h^-1]

20 0,105
40 0,298
60 0,327
100 0,477
200 0,8033
400 2,0249
600 3,238
1000 4,915

Kla vs Agitación.
6

5
f(x) = − 0 x³ + 0 x² + 0 x + 0.14
4 R² = 1
Kla [h^-1]

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
nR [rpm]

Gráfica 1. Kla con respecto a la agitación.

Gráfica 1. Comportamiento de kLa en función de la velocidad de agitación.

A partir de la gráfica 1., se puede notar que a medida que aumenta la velocidad del agitador, es más
significativa la influencia del caudal de aire suministrado, que fue 1 vvm, por lo que se ve reflejado
en el aumento del kLa. Esto se debe, a que aumenta la coalescencia de las burbujas aumentando así
el área de superficie de transferencia de oxígeno y favoreciendo la difusión del mismo. Además,
indica que la agitación favoreció la homogeneidad del medio con las burbujas que fueron
alimentadas por medio del flujo de aire. Por otro lado, el coeficiente volumétrico de transferencia de
masa también puede verse afectado por la viscosidad del líquido y los agentes antiespumantes,
puesto que los valores de kLa disminuyen conforme aumenta la viscosidad del líquido, al igual que
cuando se adiciona algún antiespumante debido a que afectan el comportamiento de coalescencia en
la fase gaseosa, y a su vez, el kLa.
2.3 Para la segunda parte del experimento calcule el kLa empleando la ecuación (1) para cada punto
de muestreo. Presente en una misma grafica la variación del kLa y de la velocidad de agitación
ajustada por el controlador. Estime el mejor ajuste de correlación (ecuación con R2) entre kLa y la
velocidad de agitación modificada por el controlador.

Empleando la ecuación 30. La cual da cuenta del método del balance de oxígeno para el
cálculo del Kla

V G (CO 2, gentrada −CO2 , gsalida )

k LA = ∙ Ec 30.
V (C ¿ O 2−CO 2)
Donde:

V G: Volumen del gas

V : Volumen del medio líquido
CO 2 ,gentrada : Concentración de oxígeno en el flujo de entrada
CO 2 ,g salida: concentración de oxígeno en el flujo de salida
C ¿ O 2: Concentración de saturación de oxígeno:
mg
CO 2: Concentración de oxígeno disuelto a lo largo del tiempo: 7,0688
L

Para proceder con el cálculo, se establecen la concetracione de aire a la entrada y salida del
reactor, se usó la densidad del oxígeno, la cual se calculó a la temperatura del proceso 35
°C y 1 atm de presión como se presenta a continuación.

PV =nRT Ec 31.

m
Se parte de la ecuación del gas ideal, y se reescribe las moles en terminos de ( ), ya
Mm
que las moles son el cociente entre la masa y la masa molar del gas.

m
PV = ∗RT Ec 32.
Mm

m
Despues se procede a despejar la relacion de masa y volumen ( ¿para así obtener la
V
ecuación que relacione las densidad del gas a las condiciones del proceso.

PVMm=m∗RT Ec 33.

P Mm m
= Ec 34.
RT V

Por último, se relalizan los cualculos para así conocer la el velor de la densidad del oxígeno
a 35 °C y 1 atm de presión.
 32 g/ mol∗1 atm g
=1,264
0,0821 atm∗L ∗305,15 K L
mol∗K

Ya obteniendo la densidad a las condiciones del sistema, podemos calcular la concentración

de oxígeno a la entrada.

LO 2 1 m 3 kg 106 mg mg
0,21 ∙ 3 ∙1 , 264 3 ∙ =265,44
L aire 10 L m 1kg L

Kla [h^-1] experimental

120

110

100

90
Kla [h^-1]

80

70

60

50

40
290 295 300 305 310 315 320 325 330 335 340 345 350

Agitación [rpm]

Gráfica 2. Kla con respecto a la agitación (inoculación).

2.4 Para la segunda parte del experimento calcule el kLa empleando la ecuación (1) para
cada punto de muestreo. Presente en una misma grafica la variación del kLa y de la
velocidad de agitación ajustada por el controlador. Estime el mejor ajuste de correlación
(ecuación con R2 ) entre kLa y la velocidad de agitación modificada por el controlador.
 120

100 Kla [h^-1]

experimental

80 Kla [h^-1] modelo

Kla [h^-1]

60

40

20

0
290 300 310 320 330 340 350
Agitación [rpm]

Gráfica 3. de correlación entre kLa y la velocidad de agitación modificada por el

controlador.

2.5 Calcule el valor de RQ. Discuta los resultados obtenidos con base en lo que usted
entiende del metabolismo del microrganismo.

Tabla 3. Datos del coeficiente de respiración.

Tiempo, t (h) RQ
0,000 1,333
0,330 1,550
0,660 1,571
0,991 1,571
1,324 1,429
1,658 1,429
1,991 1,286
2,324 1,317
2,652 1,317
2,985 1,317
3,319 1,317
3,652 1,317
3,985 1,317
4,319 1,317
4,652 1,333
5,013 1,600
5,319 1,600
5,652 1,600
 5,985 1,600
6,346 1,400
6,652 1,750
6,985 1,000
7,319 0,800
7,652 0,800
7,985 0,800
8,319 0,800
8,652 0,800
8,985 0,800
9,319 1,000
9,652 1,000
10,013 1,000
10,319 1,333
10,652 1,333
10,985 0,750
11,319 0,750
11,652 1,000
11,985 1,000
12,319 0,667
12,652 1,000
12,985 1,000
13,346 1,000
13,652 1,000
13,985 1,000