Co-cultivos microbianos

Juan Diego Cárdenas, Clara Castellanos, Manuela Londoño, Lina Ospina.

Universidad Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Programa de Ingeniería Bioquímica
Laboratorio de Microbiología Industrial
Santiago de Cali, Colombia
mayo de 2019

1. Resumen
Los co-cultivos son una mezcla de diferentes microorganismos, las cuales forman
comunidades donde hay una competencia y una cooperación entre ellos. En el estudio se
realizo el montaje de un sistema con Pseudomonas sp ,Bacillus sp, Penicillium sp y
Pleurotus para observar que tanto colorante podían degradar estas especies en diferentes
horas, por medio de la cuantificación por unidades de color y por los porcentajes de
remoción a través del tiempo . Además se realizo un recuento de bacterias totales, la
medición del pH y la caracterización morfológica, para observar las colonias presentes, y
cual predominaba en dicha comunidad y por ultimo para observar en que pH se da una
mejor remoción, obteniendo como resultado que la especie predominante fue Pseudomonas
sp con 1.96x109 UFC/mL y el sistema con mayor remoción de colorante se dio en la hora 5
con un pH de 6.5, obteniendo el 61.29%
2. Introducción
Los co-cultivos son comunidades complejas de distintas especies, presentes en la
naturaleza, en las industrias o en medios artificiales. En estas comunidades se desarrollan
competencias y cooperación entre ellos, permitiendo que se den una serie de
comportamientos, los cuales determinan las funciones de dicha comunidad, como por
ejemplo la secreción de metabolitos, los cuales promueven el crecimiento de las especies
vecinas, volviéndose dependientes de estos para sobrevivir.
Los co-cultivos son ampliamente utilizados en la degradación de colorantes, los cuales son
compuestos orgánicos que pueden ser de origen sintético o natural, utilizados en las
industrias textiles, como fibras textiles y también son usados para la impresión de papeles,
análisis de laboratorios entre otro. Estos usos producen residuos o efluentes que son
resistentes a los tratamientos de aguas por medio de técnicas tradicionales, siendo los
colorantes de las pruebas de laboratorio, los de mayor uso y por consiguiente ampliamente
liberados en el medio ambiente, afectando la flora y fauna, debido a la falta de penetración
solar, lo que produce la disminución de la concentración de oxigeno presente en el agua y
por ende su calidad.
Basado en esto, hay que conocer que co-cultivos tienen un alto porcentaje de remoción de
los diferentes colores y su proceso, como trabajan en diferentes pH y que estructuras
morfológicas están presentes en el momento de la remoción.
 3. Materiales y métodos

Recuento de bacterias totales

Se realizaron dilusiones seriadas en base 10, tomando un mL de cultivo y adicionandolo en
9 mL de diluyente, estas dilusiones se realizarón de 10E-01 hasta 10E-06 luego; se sembrño
en superficie 0,1 mL de cada dilusión en agar casoy, y se homogenizó con ayuda de un aza
esteril, se inubaron las cajas durante 48 h a una temperatura de 48 C ± 2 C.
Caracterización de morfologías
Se realizó tinción de Gram de una muestra representativa del cultivo con colorantes.
Medición de pH
Se midió el pH a una muestra representativa del cultivo con colorantes por medio de un
potenciómetro.
Cuantificación de unidades de color
Se midió la absorbancia de una muestra representativa del cultivo de 1 mL a 450nm de
longitud de onda por medio de un espectrofotómetro, posteriormente se realizó el cálculo
de unidades de color por medio de la ecuación 1 y se realizó el porcentaje de remoción,
ecuación 2.
UC=|¿|500 /0,132
Ecuación 1: Cálculo dependiente de la absorbancia a 450nm.

UCini−UCfin
% Remoción= ∗100
UCini
Ecuación 2: Cálculo para obtener el porcentaje de remoción según las Unidades de Color
tomadas.

4. Resultados
Caracterización de morfologías
Según la Fig. 1 se logra evidenciar la presencia de células en forma de bacilos lineales
Gram negativos y Gram positivos, algunos cocos Gram negativos y aglomeraciones no
identificables de Gram positivos y negativos.
 Fig. 1: Tinción de Gram a muestra representativa con colorantes.

Medición de pH y cuantificación de unidades de color

En la tabla 1 se logra observar que el pH se mantuvo constante por un tiempo aproximado
de 3 y 4 días, pese a que logró remover gran parte del colorante, ya que la muestra fue
sometida a una concentración inicial de coloración de Gram visualmente fuerte, logrando
un aproximado del 73% de remoción total del colorante.
Tabla 1: Datos de pH, % de remoción obtenidos de la ecuación 2.

DIAS %REMOCIÓN PH RECUENTO

(UFC/ML)
0 0 4,1 2,2E+02
1 0 4,2 1,6E+07
2 10,75 5,1 5,6E+08
3 25,9 5,4 3,0E+08
4 19,35 5,6 1,96E+09
5 61,29 6,5 2,5E+06
6 47,15 6,8 2,1E+07
7 39,56 5,8 2,0E`08

5. Conclusiones
Los resultados obtenidos del recuento realizado a cada muestra del co-cultivo, permitieron
determinar el número de unidades formadoras de colonias presentadas en los diferentes
tiempos de muestreo. Lo anterior, presentando una cantidad mayor en el día cuarto de
muestreo y una menor en el día cero, cuyos valores fueron 1,6x10^9 UFC/ml y 2,0x10^2
UFC/ml respectivamente, indicaron un crecimiento estadísticamente significativo de los
microorganismos en el cultivo mixto estudiado en la práctica. Por otro lado, el empleo de la
cuantificación de color permitió realizar el cálculo del porcentaje de remoción en cada uno
de los tiempos de muestreo dando como resultado una degradación de más del 20%, lo que
evidencia una remoción efectiva de los diferentes colorantes presentados en el medio de
cultivo y una favorabilidad del empleo del consorcio para su degradación. Por consiguiente,
la distinta información obtenida experimentalmente se considera de gran importancia para
futuras investigaciones y proyectos sobre la remoción de compuestos industriales vertidos a
los diferentes canales acuáticos con los que se busca una opción más ecológica y
económicamente viable para solucionar o disminuir la problemática ambiental generada por
estos compuestos.