UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Facultad de Ciencias Biológicas

BIOQUÍMICA DE LOS RECURSOS

VEGETALES

DETERMINACIÓN
DE PROTEÍNAS
SEGUN LOWRY
Fundamento, explicación y obtención
MICHAEL N. CASAS JAVIER 15100004
CARACTERISTICAS DEL ENSAYO DE LOWRY

• Oliver H. Lowry (1951)

• Ensayo bioquímico para la identificación de proteínas
• Método colorimétrico de valoración cuantitativa

Pedro Armijo
• Sigue la Ley de Lambert-Beer
• Hay modificaciones subsecuentes del método original: BCA y
Hartree

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FUNDAMENTO DEL METODO
Primera Fase
Reactivos NaOH CuSO4.5H2O Tartrato de
Sodio y Potasio

Pedro Armijo
Método
Mecanismo de Biuret

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PRINCIPIO DEL METODO
Segunda Fase
Acido fosfotúngstico
Reactivo de
Reactivo
Folin- Ciocalteu Acido fosfomolíbdico

Pedro Armijo
Reacción de
Mecanismo Oxidación y
Reducción

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Absorbancia color Azul de
Cu +1 Proteínas
(750 nm) azul heteropolimolíbdeno

Pedro Armijo
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 OBTENCIÓN DE PROTEÍNA
Calibración de la curva
Muestra patrón Muestra
Reactivo BSA (Albumina de problema
Suero Bovino)

Pedro Armijo
Tubo Agua Patrón Problema Reactivo C Folin A (740nm) proteinas/
(mL) (1000mg/L) (mL) (Lowry) mL diluido tubo
0,4 y = 0,0009x + 0,0432
0 1.0 - - 5 0,5
R2 = 0,999
1 0,95 0,05 - 5 0,5

Absorbancia (A)
0,3
2 0,9 0,1 - 5 0,5
3 0,8 0,2 - 5 0,5 0,2
4 0,7 0,3 - 5 0,5
5 0,6 0,4 - 5 0,5 0,1
6 muestra - - 1 5 0,5
7 +100 - 0,1 1 5 0,5 0,0
0 100 200 300 400 500
8 +200 - 0,2 1 5 0,5
9 +300 - 0,3 1 5 0,5 Concentración (mg/L)

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VENTAJAS DEL MÉTODO DE LOWRY

• Muy sensible
• Menos afectado por la turbidez de la muestra
• Mas especifico que la mayoría de los otros métodos

Pedro Armijo
• Relativamente simple

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DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LOWRY

• Se puede completar en 1 a 2 horas

• El color varía con diferentes proteínas (más que el método de Biuret).
• El color no es estrictamente proporcional a la concentración de proteínas.

Pedro Armijo
• La sacarosa, lípidos, buffers fosfato, monosacáridos y hexoaminas interfieren con la reacción.
• Las altas concentraciones de azucares reductores, sulfato de amonio y compuestos con
sulfhidrilo interfieren con la reacción.

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DATO CURIOSO …

Pedro Armijo
S/. 617.36

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BIBLIOGRAFÍA
• Lowry, O. H., N. J. Rosebrough, A.L. Farr and R. J. Randall, 1951. Protein measurement with
the Folin-Phenol reagents. J. Biol. Chem. 193: 265-275.
• Dunn, M. J., 1992. Protein determination of total protein concentration. Harris, E. L.V.,
Angal, S., [Eds], Protein Purification Methods, Oxford: IRL Press
• Peterson G.L. 1977. A simplification of the protein assay of Lowry which is more generally

Pedro Armijo
applicable. Anal. Biochem., 83: 346-351.

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Gracias Casas Javier, Michael N.
michael.casas@unmsm.edu.pe