UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTIN

FACULTAD DE INGENIERIA CIVIL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

SANITARIA

INFORME DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE

BIOQUÍMICA

DEMOSTRACION DE LA LEY DE BEER Y

CONSTRUCCION DE CURVAS DE CALIBRACION

ALUMNO
CASTILLO FLORES JAMIL ALEXANDER (20173472)

DOCENTES
Dr. Ronald Demetrio Navarro Oviedo
Dr. Frey Francisco Romero Vargas

FECHA DE ENTREGA
12/04/19

AREQUIPA – PERU
2019
 DEMOSTRACION DE LA LEY DE BEER Y CONSTRUCCION
DE CURVAS DE CALIBRACION

INTRODUCCIÓN

LEYES DE ABSORCION

En Química Biológica se emplea la fotometría principalmente para regular o controlar la

concentración de diversas especies en mezclas de reacción. La absorción de luz a una
longitud de onda dada, está relacionada con la concentración de especi es
absorbentes por medio de dos leyes.

Para este experimento usaremos ambas, conocida como la ley de lamber y beer para
demostrar la existencia de una curva de calibración en función de la absorbancia

OBJETIVOS

Poner en evidencia la ley de Beer-Lambert haciendo uso de concentraciones

progresivas del rojo de fenol.

Adquirir los conocimientos básicos sobre espectrofotometría de absorción visible,

incluyendo la Ley de Lambert-Beer y sus aplicaciones en Química. Para ello se realizará
un experimento en el laboratorio que muestre cómo utilizar un espectrofotómetro para
llevar a cabo la determinación cuantitativa de un compuesto

FUNDAMENTO TEÓRICO

Espectrofotometría ultravioleta visible. Ley de Lambert -Beer. Los métodos

espectroscópicos de análisis están basados en la medida de la radiación
electromagnética que es absorbida o emitida por una sustancia. En función de ello se
clasifican fundamentalmente en:

Métodos de absorción: Se basan en la disminución de la potencia de un haz de radiación

electromagnética al interaccionar con una sustancia.

Métodos de emisión: Se basan en la radiación que emite una sustancia cuando es

excitada previamente por medio de otro tipo de energía (térmica, eléctrica… ).

Métodos de fluorescencia: Se basan en la radiación que emite la sustancia cuando es

excitada previamente por un haz de radiación electromagnética.

Otras clasificaciones de los métodos espectroscópicos se establecen en función de la

región del espectro electromagnético que interviene en la técnica. Así, pueden utilizarse
regiones como rayos X, ultravioleta, visible, infrarrojo, microondas, etc.

En la Figura 1 pueden verse las regiones del espectro electromagnét ico, en función de
los valores de la longitud de onda (λ) de cada radiación:
PARTE EXPERIMENTAL

FUNDAMENTO

Si se mantiene constante la longitud de onda de máxima absorción, la absorbanci a

dependerá de la concentración

MATERIALES
Espectrofotómetro.

Tubos de ensayo

Gradillas

Pipetas

Rojo de fenol 1x10-4 M

Buffer borato 0.1 M, pH 9.8

Agua destilada

METODO DE TRABAJO

a) Curva de calibración para el rojo de fenol.

Para obtener la cura de calibración realizamos los siguientes pasos :

1. Preparar un sistema de tubos como se indica a continuación

TUBO N° Bl 1 2 3 4 5 6
Buffer borato 0.1 M, pH 9.8 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
Rojo de fenol 1 x 10-4 M -- 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
Agua destilada 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 --

2. Para obtener el punto más alto de la absorbancia se introdujo primero el tubo

con mayor concentración y se realizó un escaneo en parámetros de longitudes
de onda desde los 800 hasta los 270 nm

3. Este procedimiento nos arroja que a 558 nm se alcanza la mayor absorbancia

4. Sabiendo ya esto podremos descubrir la concentración de una muestra

problema

5. Para ello lleva las muestras al espectrofotómetro y hacemos la medición de

absorbancia en función a concentración
Este debe ser calibrado a cero con ayuda de nuestra muestra blanco
DATOS EXPERIMENTALES

Concentración
Tubo N° de Rojo de Ab Fc
Fenol (M)
Bl -- 0.001
1 0.1 0.122 2 x 10-6
2 0.2 0.204 4 x 10-6
3 0.4 0.426 8 x 10-6
4 0.6 0.649 1.2 x 10-5
5 0.8 0.836 1.6 x 10-5
6 1.0 1.001 2.0 x 10-5
Muestra 0.522
problema

Para los cálculos en Fc.

𝟏 × 𝟏𝟎−𝟒 × 𝟎. 𝟏𝒎𝒍 = 𝟓𝒎𝒍 × 𝑴

𝟏 × 𝟏𝟎−𝟒 × 𝟎. 𝟏 𝒎𝒍
𝑴 =
𝟓𝒎𝒍

𝑴 = 𝟐 × 𝟏𝟎−𝟔

RESULTADOS

La longitud de onda donde se alcanza la mayor absorbancia es a

558nm, aquí marca 0.968 de absorbancia
La muestra problema nos da 0.000010de concentración de rojo de fenol
al tener 0.522 de absorbancia

CU R VA DE CA L I B R A CION
0.000025

0.00002 0.00002

0.000016
0.000015
Muestra
FC

problema 0.000012
0.00001 0.00001
0.000008
0.000005
0.000004
0.000002
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
ABSORBANCIA
DISCUSIÓN

La grafica muestra un error pues debería ser una línea recta, para corregir esto se puede
aplicar regresión lineal para una mejor visión de la recta

La absorbancia y la concentración son proporcionales es por ello debio salir una recta

RECOMENDACIONES

No dejar huellas en las paredes de la cubeta espectrofotométrica.

Enjuagar cuidadosamente la cubeta espectrofotométrica con la disolución que va a ser

medida, antes de llenarla definitivamente.

Realizar las medidas empezando por la disolución más diluida y acabando por la más
concentrada.

BIBLIOGRAFIA

● Harris, D. C. Análisis Químico Cuantitativo. 3ª ed. Capítulo 18. Ed. Reverté, 2007.

● Higson, S. P. J. Química Analítica. 1ª ed. Capítulo 5. Ed. Mc Graw Hill. 2007.

● Hernández-Hernández, L.; González-Pérez, C. Introducción al análisis instrumental.

Capítulo 3. Ed. Ariel Ciencia, 2002.