Nefelometría

La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de

la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa
un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas,
se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La
dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la
dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma
en cualquier ángulo. La intensidad depende de: el número de partículas
suspendidas, su tamaño, su forma, los índices refractivos de la partícula y del
medio dispersante, y la longitud de onda de la radiación dispersada.
Cuando la concentración de una suspensión de partícula es baja es preferible
medirla por este método. En este caso la suspensión se coloca en una cubeta
colocada como se muestra en la figura siguiente.

El instrumento permite la medida de la intensidad de la dispersión S, la cual

está relacionada con la concentración. Las fuente de radiación que se utilizan
son de láser helio-neón, lámparas de halógenos y lámparas de xenón, siendo
el más frecuente el primero. Este consiste en un tubo largo y estrecho en el
cual se introduce una mezcla de gas formada por 7 partes de helio y 1 parte de
neón al que se le aplica un voltaje para producir una descarga eléctrica.
La relación matemática entre la intensidad de dispersión, S y la concentración
de partículas suspendidas es raramente utilizada es suficiente con saber que
existe una relación lineal entre ellas a bajas concentraciones. Sin embargo la
relación matemática que cumplen es:

Is =Ks Io C.

donde :
C es la concentración en %
Is es la radiación dispersada
Io es la radiación de fuente incidente
Ks es una constante
Esquemáticamente sería así:

Cc: cubeta(v. superior)

Cr: colector de radiaciones negro
Tf: tubo fotomultiplicador

El valor del ángulo oscila entre 30 y 70,su valor depende de la aplicación

específica seleccionada.

Fuentes de error.

Nefelometría, cubetas sucias, reacciones químicas usadas para preparar la

muestra, o la presencia de sustancias extrañas.

Turbidimetria y Nefelometria

Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión

de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia
se observa turbia La turbidez es la propiedad óptica de una muestra que hace
que la radiación sea dispersada y absorbida mas que transmitida en línea recta
a través de la muestra. La turbidez es ocasionada por la presencia de materia
suspendida en un líquido. Hay dos métodos para medir la turbidez de una
muestra, la turbidimetría y la nefelometría. Son dos técnicas complementarias
que se utilizan para el análisis cuantitativo de disoluciones coloidales,
emulsiones, humos o nieblas.
La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada
la dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma
en cualquier ángulo. En la turbidimetría se compara la intensidad del rayo de
luz que emerge con la del que llega a la disolución. En cambio, en la
nefelometría la medida de la intensidad de luz se hace con un ángulo de 90º
con respecto a la radiación incidente. El instrumento usado en la nefelometría,
el nefelómetro se asemeja al fluorómetro. En cambio en turbidimetría se utiliza
el turbidíemetro que es un fotómetro de filtro.
La elección entre turbidimetría y nefelometría viene dada por dos factores:
- Intensidad de la radiación transmitida o dispersada con la intensidad de la
radiación procedente de la fuente. Cuando la concentración de partículas
dispersantes en la disolución es pequeña, IT será muy similar a IO. Por lo que
la mejor elección cuando la muestra contiene pocas partículas dispersantes es
la nefelometría. La turbidimetría es una buena técnica para cuando las
muestras contienen grandes concentraciones de partículas dispersantes.
- Tamaño de las partículas dispersantes. En la nefelometría la intensidad de la
radiación dispersada a 90ºC es mayor si las partículas son bastante pequeñas
para que se produzca una dispersión Rayleigh. Si las partículas son mayores la
intesidad de la dispersión disminuirá a 90ºC. En turbidimetría la señal consiste
en la disminución relativa de la radiación transmitida, por lo que el tamaño de
las partículas dispersantes es menos importante.

Aplicaciones en bioquimica:
Investigacion de proteínas séricas: inmunoglobulinas y subclases (IgM, IgG,
IgM, IgD, etc), Complemento, globulinas, albúmina, transferrina, haptoglobina,
aplolipoproteina, etc.