PRCTICA 9 INTEGRACIN Y

REGULACIN DEL METABOLISMO

RELACION DE EXPERIMENTOS
1. Determinacin de glucosa en sangre total
2. Determinacin de glucosa en orina
3. Determinacin de cuerpos cetnicos en orina
4. Curva de tolerancia a la glucosa

INTRODUCCION
El metabolismo intermediario de Carbohidratos, Lpidos, Protenas (aminocidos), as
como de otros compuestos, es por lo general considerado por separado; sin embargo, estos
procesos ocurren en nuestro organismo en forma concertada, esta integracin
exquisitamente regulada, es la que permite a cada clula llevar a cabo sus funciones
bioqumicas y sin duda, de esta ntima y armoniosa organizacin depender la funcin
integrada de todas las clulas que conforman un organismo, caso contrario sobrevendr una
enfermedad.
Un aspecto muy interesante en la regulacin del metabolismo celular corresponde a la
participacin de las hormonas que son sintetizadas en Glndulas, secretadas a la sangre y
luego transportadas hasta alcanzar sus clulas blanco, donde previa interaccin con sus
receptores ejercern sus efectos regulatorios fundamentalmente a travs de:
Activacin y desactivacin de enzimas ya existentes en las clulas blanco, a
travs de segundos mensajeros.
Induccin de la sntesis de enzimas o alguna otra protena.

En esta prctica centraremos nuestra atencin en algunas acciones metablicas de la

insulina usando como modelo experimental el estado diabtico.
La Diabetes Mellitus es una enfermedad producida por la carencia relativa o absoluta de
Insulina en el organismo, se conoce dos tipos de esta enfermedad. La Diabetes tiop I o
Insulina Dependiente y la Diabetes tipo II o Insulino No Dependiente. Hay varias
diferencias en cuanto a la etiopatologa y alteraciones metablicas entre los dos tipos
mencionados; pero, lo que caracteriza a cada una de ellas y les da el nombre es el hecho de
que en la Diabetes tipo I, la causa primaria es un defecto o destruccin de las clulas beta
de los islotes de Langerhans del Pncreas, productores de Insulina, y el paciente slo se
alivia con la administracin de Insulina. En la Diabetes tipo II, la causa primaria es un
defecto en la respuesta a Insulina, aqu el paciente alivia sus sntomas por administracin
de antidiabticos que estimulan la secrecin de Insulina por las clulas Beta del Pncreas
y raramente hacen cetosis, adems este tipo II de diabetes aparece en pocas tardas de la
vida (despus de los cuarenta aos) y la herencia juega un rol importante. En cambio, en la
Diabetes tipo I, la cetosis es comn y aparece en etapas tempranas de la vida niez o
juventud.
La tabla resume las caractersticas ms importantes de ambos tipos de Diabetes.
Hay muchas sustancias que pueden producir los sntomas diabticos, cuando son
administrados al organismo debido a que pueden producir deterioro o destruccin de las
clulas del pncreas con el consiguiente defecto en la sntesis y liberacin de Insulina.
El Aloxano (2.4.5.6 tetraoxipirimidina o pirimidina tetrona), causa dao permanente a las
clulas beta de los islotes de Langerhans, producindose un cuadro de Diabetes Mellitus, a
mayores dosis tambin es hepatotxico.

TABLA I: CARACTERSTICAS DISTINTIVAS ENTRE LA DIABETES MELLITUS INSULINO

DEPENDIENTE (TIPO I) Y LA DIABETES MELLITUS INSULINO NO DEPENDIENTE (TIPO II).

CARACTERISTICAS DIABETES TIPO I DIABETES TIPO II

Edad de inicio Menos de 30 aos Ms de 40 aos
Cetosis Comn Raro
Peso corporal No obeso Obeso (80%)
Prevalencia 0,2 0,3% 24%
Anticuerpos contra islotes Si No
Complicaciones Frecuentes Frecuentes
Secrecin de insulina Casi nula o nula Normal o casi normal
Tratamiento con insulina Impresindible No es necesario
Resistencia a la insulina Ocasional Usual
La estreptozotoxina es un antibitico de amplio espectro, obtenido por el
Streptomyceachromogenes, y que produce necrosis de las clulas beta del pncreas y su
accin es ms selectiva sobre dichas clulas que el aloxano, razn por la cual ahora se usa
ms en Diabetes Experimental.
Otra sustancia con capacidad de producir diabetes por afectar a las clulas beta de los islotes
de Langerhans son el cido dehidroascrbico, la 8-hidroxiquimolina, la ditizona y otras
quimolinas; pero, su accin diabetognica es menos pronunciada y menos especfica que
el aloxano y estreptozotocina.

EXPERIMENTO 1
DETERMINACION DE LA GLICEMIA
OBJETIVO
Determinar la concentracin de glucosa en sangre de un paciente, utilizando el mtodo
colorimtrico (Nelson y Somogy).*
FUNDAMENTO
El filtrado libre de protenas se calienta en presencia de una solucin cprico-alcalina
(Cu++) obtenindose la reduccin del cobre a CuO (Cu+), el cual acta luego sobre
arsenomolibdato producindose un complejo de molibdeno reducido de color azul, cuya
intensidad se mide en el fotocolormetro.
PROCEDIMIENTO
El uso de este mtodo requiere de desproteinizacin de la muestra de sangre total, a fin de
evitar la interferencia en las reacciones que dependen nicamente de glucosa.
Desproteinizado: En un tubo de ensayo medir, cuidadosamente los siguientes componentes
de la mezcla, teniendo cuidado de no carbonizar la muestra, para ello mezclar suavemente
y esperar al menos 30 segundos, antes de agregar el siguiente.
3.0 ml de NaCl 0,9%
0,2 ml de Sangre total
0,4 ml de Sulfato de zinc al 5%
0,4 ml de Hidrxido de Bario al 0,3%
Dejar en reposo por 5 minutos, luego filtrar o centrifugar para recuperar el filtrado libre de
protenas.
Determinacin Colorimtrica: En un tubo Folin Wo, medir lo siguiente:
1. Un mililitro de filtrado libre de protenas
2. Un mililitro de reactivo cprico alcalino
3. Mezclar y calentar en bao mara hirviente por 15 minutos
4. Enfriar en agua corriente y luego aadir: 1 ml de reactivo arseno molibdato
5. Mezclar suavemente y aadir agua destilada hasta la marca 25 ml, mezclar por
inversin, dejar en reposo por 5 minutos y leer en el fotocolormetro con filtro
verde.
6. Prepare un Blanco usando 1 ml de agua destilada en lugar del filtrado (paso 1).
7. Prepare un Estndar de glucosa 50 ug/ ml; proceder como el filtrado libre de
protenas (paso 1).
RESULTADOS

DETERMINACION CUANTITATIVA DE GLUCOSA EN SANGRE RESULTADOS

TOTAL

ABSORBANCIA ABSORBANCIA CONCENTRACIN (***)

BRUTA NETA

BLANCO 0.029

ESTANDAR 0.171 0.142 50 ug/ ml 100%

MUESTRA A 0.227 0.198 50 ug/ ml 139.4

MUESTRA B 0.082 0.053 50 ug/ ml 37.3

MUESTRA C

ESTIMAR EL FACTOR DE CALIBRACIN PORCENTUAL

(***) Anote en Resultados: (A) si el valor esta aumentado, (N) si el valor es normal y (D)
si el valor esta disminuido, comparado con el valor normal para el mtodo y la poblacin.
EXPERIMENTO 2
DETERMINACION DE GLUCOSURIA

OBJETIVO
Determinar la concentracin de glucosa en orina utilizando la prueba de Benedict.

FUNDAMENTO
Agentes reductores como los monosacridos (Glucosa) en presencia de Hidrxido de Cobre
en medio alcalino, generan la reduccin del cobre proporcionalmente a la concentracin
existente del agente.

PROCEDIMIENTO
1. Colocar 5 ml de reactivo de Benedict en un tubo de ensayo.
2. Aadir VIII gotas de muestra de orina, mezclar bien.
3. Incubar en bao maria hirviente durante 3 minutos.
4. Anotar el resultado explicando lo observado.

RESULTADOS
Evale los resultados en cruces:
Azul turquesa (0)-Verde(+)-Amarillo(++)-Naranja(+++)-Precipitado rojo ladrillo(++++)

Evaluacin Observacin
Muestra 1 ( ++++) NORMAL
Muestra 2 ( ++++) NORMAL

En observacin coloque: Orina Normal o Glucosuria.

EXPERIMENTO 3
DETERMINACION CUALITATIVA DE CETONURIA
OBJETIVO
Identificar la Cualitativamente, la presencia de cuerpos cetnicos en orina, a travs de una
reaccin de color.
FUNDAMENTO
El Nitroprusiato de Sodio en medio alcalino, forma un complejo de color violeta morado,
en contacto con Acetoacetato y Acetona, la prueba es positiva si el color aparece en pocos
segundos.
PROCEDIMIENTO
1. En una luna de reloj colocar unos mg de polvos de nitroprusiato sdico, en medio
alcalino.
2. Colocar unas gotas de la orina a estudiar.
3. Esperar un minuto y observar
4. La aparicin de color violeta-morado da positividad a la reaccin, por la presencia de
Cuerpos cetnicos.
 RESULTADOS OBSERVACIN

Muestra 1 (++) NORMAL

Muestra 2 (+++) GLUCOSURIA

EXPERIMENTO 4.
OBJETIVO
Estimar las variaciones de la glicemia luego de la administracin de una descarga de
glucosa.
PROCEDIMIENTO
Seguiremos el procedimiento recomendado por la Asociacin Americana de Diabetes, con
las modificaciones propuestas por el Nacional Diabetes Data Group.
1. Indicar al paciente que en los das previos a la prueba, haga una dieta sin restriccin
alguna, pero que contenga por lo menos 150 g de carbohidratos por da.
2. La prueba se realiza en la maana, despus de 10 a 16 horas de ayuno, al que slo
se le permitir la ingesta de agua.
3. Se obtiene una muestra de sangre en ayunas para hacer la primera determinacin
de glicemia.
4. Se disuelva 75 gramos de glucosa en agua y se administra al paciente por va oral.
5. Se retiran muestras de sangre del paciente cada 30 minutos hasta completar tres
horas.

RESULTADOS

Se practic la prueba en un paciente aparentemente normal (control) y en un paciente que

en una determinacin de glicemia en ayunas se encontr 137mg%. Las determinaciones de
glicemia se hicieron por el mtodo de Somogy Nelson. Luego de practicadas las lecturas
se hicieron los clculos correspondientes de la glucosa plasmtica, obtenindose lo
siguiente
Tiempo Control Paciente
Glucosa mg% Glucosa mg%
Basal 87 148
30 min 115 220
60 min 121 256
90 min 94 297
120 min 76 288
180 min 85 275

Con los resultados mostrados en la Tabla anterior construya en el siguiente espacio de papel
milimetrado las curvas correspondientes, anotando en el eje vertical las concentraciones de
glucosa sangunea y en el horizontal los tiempos respectivos.
INTERPRETACION

Los resultados obtenidos en la primera experiencia de las muestras AyB nos indicant que
la muestra A, sufre hiperglicemia y la muestra B nos da como resultado que sufre de
hipoglicemia.

INTERROGANTES

1. Explique el mecanismo por el que se produce cetonria en el estado diabtico.

La diabetes es una enfermedad metablica relacionada fundamenfalmente con la

insuficiencia insulnica. Esta insuficiencia no responde a un mecanismo patognico
nico conocido y aceptado por todos. En su produccin pueden intervenir distintos
factores etiopatognicos, algunos de los cuales son bien conocidos, pero otros han
escapado a las investigaciones clnicas, biolgicas y experimentales.

2. Qu funcin cumple la insulina?

La insulina es una hormona principal que regula el metabolismo de secretada por

las -clulas de los islotes de Langerhans del pncreas. La principal funcin de la
insulina es contrarrestar la accin concertada de varias hormonas generadoras de
hiperglicemia y para mantener bajos los niveles de glucosa en sangre.

3. Qu clulas dependen de Insulina para ingresar la glucosa?

El ingreso de la glucosa a las clulas se realiza mediante dos tipos de protenas

acarreadoras: los transportadores de glucosa asociados a sodio (SGLT) y los
sistemas facilitadores del transporte de glucosa (GLUT).

Los transportadores de la glucosa SGLT y GLUT participan en el control

hormonal del metabolismo al ser mediadores de la entrada, utilizacin y
almacenamiento de la glucosa. Permiten un transporte de la glucosa altamente
regulado al expresarse de manera diferencial en los tejidos y al depender de
estmulos humorales diversos para regular su funcin
4. Cules vas activa Insulina?

La insulina es sintetizada y almacenada en el cuerpo en forma de un hexmero, es

decir, una unidad compuesta por seis insulinas, mientras que su forma activa es la
de una hormona monomrica, es decir, la molcula de insulina sola.

Insulina Activa
Glucolisis Hexoquinasa
Fosfofructoquinasa 1
Piruvato quinasa
Glucogenogenesis Glucogeno Sintasa
Sintesis De Ac.Grasos Acetil Carboxilasa
Lipasa lipoproteica
Inh. La cetogenesis TG y Ac.Grasos

5. cules vas inactiva Insulina?

Seis molculas de insulina permanecen inactivas por largo tiempo en su forma

hexamrica, como forma de almacenamiento de disponibilidad rpida y proteccin de
la altamente reactiva molcula de insulina. Dentro del aparato de Golgi, la proinsulina
es enviada al interior de vesculas secretoras y de almacenamiento ricas en Zn2+ y Ca2+.

Insulina Inactiva
Gluconeogenesis Piruvato Carboxilasa
Glucogenolisis Glucogeno Fosforilasa
Inh. Lipolisis Lipasa sensible a hormonas

6. Cmo se explica la hiperglicemia y glucosuria que presentan los diabticos tipo II?

La hiperglucemia es el trmino tcnico que utilizamos para referirnos a los altos niveles
de azcar en la sangre. El alto nivel de glucemia aparece cuando el organismo no cuenta
con la suficiente cantidad de insulina o cuando la cantidad de insulina es muy escasa. La
hiperglucemia tambin se presenta cuando el organismo no puede utilizar la insulina
adecuadamente.
La diabetes tipo 2 es la forma ms comn de diabetes Es una enfermedad que dura toda
la vida (crnica) en la cual hay un alto nivel de azcar (glucosa) en la sangre.
7. En qu casos se indica la prueba de tolerancia a la glucosa?

La prueba de tolerancia a la glucosa es un examen para verificar la forma en que el

cuerpo logra introducir la glucosa de la sangre a las clulas. El examen generalmente
se utiliza para probar para la diabetes, resistencia a la insulina e hipoglucemia reactiva
y algunas veces acromegalia, o trastornos raros del metabolismo de carbohidratos.

8. Qu importancia tiene la HEMOGLOBINA GLICASADA, en el estudio de la

Diabetes?
La hemoglobina glucosilada es un parmetro que refleja cmo ha sido el control de
la diabetes los meses anteriores a la realizacin del anlisis. Su determinacin
permite contar con un dato objetivo que con una sola cifra nos informa de
la glucemia media de los 3 meses anteriores. Cuando se mide la fraccin A1c y se
emplea el llamado estndar DCCT, mtodo que utilizan la mayora de los
laboratorios, el rango normal es 4-6 %. En los ltimos tiempos tiende a ofrecerse
tambin la glucemia media equivalente. Por ejemplo, una A1c de 7 %, que muchas
veces se considera el objetivo a alcanzar, representara una glucemia media de 154
mg/dl, mientras que 6 %, el lmite superior del rango normal, equivaldra a 126 mg/dl.
Cada punto de A1c equivale a 28-29 mg/dl. Aunque es verdad que en ciertos
pacientes no existe la misma correlacin y que una cifra determinada de
hemoglobina glucosilada puede equivaler a una glucemia media ms elevada o ms
baja, incluso en estos casos sigue siendo una medida til ya que la monitorizacin de
la evolucin de la glucosilada nos dir si el paciente est mejorando o empeorando.

La importancia de la hemoglobina glucosilada la reconocen todas las principales

sociedades cientficas. La Asociacin Americana de Diabetes recomienda medir la A1c
al menos dos veces al ao en pacientes que cumplen con los objetivos de control y
que estn en situacin estable, ascendiendo a una determinacin trimestral para los
que estn descontrolados o en los que se modifique el tratamiento. Algunas
situaciones, como por ejemplo el embarazo, pueden aconsejar incluso una mayor
frecuencia de determinacin.