UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA N° 7

IDENTIFICACIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS EN ORINA

OBJETIVOS

1. Determinar la presencia de cuerpos cetónicos en orina, mediante pruebas

cualitativas para cada uno de ellos.
2. Familiarizarse con algunos protocolos empleados en laboratorios clínicos para el
reconocimiento de cuerpos cetónicos

TEORÍA RELACIONADA.

Los cuerpos cetónicos son los ácidos acetoacético, la acetona y el ácido -

hidróxibutirico. En la cetósis, hallamos un aumento de estas sustancias en la sangre y en
la orina. Bajo buenas condiciones de salud, los cuerpos cetónicos se forman en el hígado
y son completamente metabolizados, de tal manera que solo cantidades insignificantes
aparecen en la orina. Por el contrario, en casos de diabetes, inanición, vómitos con
deshidratación y después de la exposición al frío y/o ejercicio vigoroso, los cuerpos
cetónicos pueden encontrarse en cantidades apreciables en la orina, lo cual permite su
determinación cualitativa.

La determinación de acetona (Método de Imbert), se fundamenta en la formación de un

ferropentacianuro con el derivado isonitrado de la acetona, la determinación de acido
acetoacético (Método de Gerhrdt), se basa en la aparición de una coloración rojo-vinosa
con el cloruro férrico y en el Método de Hart, el acido - hidróxibutirico es
transformado en acetona, la cual se identifica mediante el reactivo de Imbert.

MATERIALES Y REACTIVOS

2 tubos de ensayo Agua destilada

1 gradilla Orina de diabético (traer)
2 pipetas Acido acético glacial.
1 beaker de 250ml Amoniaco
1 capsula de porcelana Cloruro férrico al 10%
1 pinza para crisol Peroxido de hidrogeno al 10%
1 pinza para tubos de ensayo Nitroprusiato de sodio al 5% en CH3COOH
al 50%

PROCEDIMIENTO

DETERMINACIÓN DE ACETONA:

A 5 ml de orina, agregue 0.5ml de nitroprusiato de sodio disuelto al 5% en acido acético

al 50%, adicione 0.5ml de amoniaco por las paredes del tubo, la aparición de un anillo
rojo violáceo en l contacto de los líquidos, es indicativo de la presencia de acetona.
DETERMINACION DE ACIDO ACETOACÈTICO.

A 5 ml de orina de adicionan unas gotas de cloruro férrico, en presencia de acido

acetoacético se produce una coloración rojo-vinosa.

DETERMINACION DE ACIDO β-HIDROXIBUTIRICO

En una capsula de porcelana se mezclan 10ml de agua y 10 ml de orina, se acidifica con

unas 5 gotas de acido acético y se calienta en una estufa hasta reducir el volumen a la
mitad. Con este calentamiento se eliminan la acetona y el acido acetoacético, al
contenido de la capsula se le agregan 10ml de agua y se transfiere en partes iguales a
dos tubos de ensayo, uno de estos tubos servirá como control, al otro se le adiciona 1ml
de peroxido de hidrogeno al 10% y se calienta en baño de María por 5 min, se deja
enfriar y finalmente se practica la prueba de Imbert a ambos tubos.

PREGUNTAS DE ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA

1. Qué otro tipo de sustancias pueden determinarse en la orina por un metabolismo

anormal de lípidos.
2. Qué es la cetósis y la Cetonuria.

BIBLIOGRAFIA:

PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. Mexico. MaGraw- Hill

Latinoamericana, S.A.

CONN, E y Stumpf, P.K. Bioquímica F.

LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de

ciencias. Universidad Nacional de Colombia sede Bogota