LABORATORIO DE INTRODUCCIÓN A LA INGENIERÍA BIOQUÍMICA

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA

DETERMINACIÓN DEL
COEFICIENTE VOLUMETRICO DE
TRANSFERENCIA DE OXIGENO
kLa.

OBJETIVOS

 Aplicar los conceptos de transferencia de masa para interpretar los parámetros que mas
influyen en la transferencia de oxigeno en un biorreactor.
 Determinar el kLa en diferentes condiciones y valor su importancia en el escalado de
los bioprocesos.

ASPECTOS TEÓRICOS

En procesos biológicos es necesario un suministro adecuado de oxígeno mediante la aireación y

agitación para satisfacer la demanda de éste por procesos metabólicos, oxidación de la fuente de
carbono, formación de productos, crecimiento celular entre otros.
A continuación se encuentra una grafica que representa la respuesta del electrodo de oxígeno en
el tiempo, para la determinación del kla mediante una Medición Indirecta.

Figura 1. Gráfica del método indirecto de determinación del Kla.

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Medición del Kla

Debido a la dificultad existente para predecir kla en biorreactores mediante correlaciones

existentes, los coeficientes de transferencia de materia para el oxígeno se determinan
normalmente de manera experimental. En cualquier método que se utilice para medir kla, las
condiciones de medida deben ser lo más similares posibles a las existentes en el fermentador
durante la operación.

• Método dinámico

Este método de medida de kla se basa en un balance de materia en estado no estacionario para el
oxígeno. La principal ventaja del método dinámico sobre la técnica en estado estacionario es el
menor costo del equipo utilizado.

Inicialmente, el fermentador contiene células en un cultivo discontinuo. Como se muestra en la

figura 1, en un determinado instante to el caldo es desoxigenado por introducción de nitrógeno
en el recipiente o parando el flujo de aire, si el cultivo consume oxígeno. La concentración de
oxígeno disuelto CAL disminuye drásticamente durante este período. Posteriormente se bombea
aire en el cultivo con un caudal constante y se observa el aumento de CAL en función del tiempo.
Es importante que la concentración de oxígeno permanezca siempre por encima de Ccrit. Para
que la velocidad de consumo de oxígeno por las células sea independiente del nivel de oxígeno
existente. Suponiendo que la re-oxigenación del caldo es suficientemente rápida para permitir el
crecimiento de las células, el nivel de oxígeno disuelto alcanzará pronto un valor en estado
estacionario CAL que refleja un balance entre el suministro de oxígeno y el consumo existente en
el sistema. CAL1 y CAL2 son dos concentraciones de oxígeno medidas durante la re-oxigenación a
tiempos t1 y t2 respectivamente. De esta manera puede desarrollarse una ecuación para kla en
función de estos datos experimentales. Durante la etapa de re-oxigenación, el sistema se
encuentra en estado estacionario. La velocidad con que varía la concentración de oxígeno
disuelto durante este período es igual a la velocidad de transferencia de oxígeno desde el gas
hasta el líquido menos la velocidad de consumo de oxígeno por las células:

dC AL
dt
 *
k La C AL 
 C AL  q0 x (1)

Donde 𝑞0x es la velocidad de consumo de oxígeno. De esta manera puede determinarse una
expresión para 𝑞0x considerando el estado final de concentración de oxígeno disuelto, CAL
Cuando:

d C AL
C AL  C AL , 0
dt

Porque no existe variación en CAL con el tiempo. Por lo tanto, de la ecuación (1)


q0 x  k La C AL
*
 C AL  (2)

Sustituyendo este resultado en la ecuación (1) se obtiene:

dC AL
dt

 k La C AL  C AL  (3)

Suponiendo kla constante con el tiempo, la ecuación (3) puede integrarse entre t 1 y t2. La
ecuación resultante para kla es:
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 C  C AL ,1 
ln  AL 
C C 
  
AL AL , 2
k La (4)
t2  t1

kla puede calcularse utilizando dos puntos como se muestra en figura 1, o con más precisión,
utilizando varios valores de (CAL1, t1) y (CAL2, t2).
Cuando se representa:

 C  C AL ,1 
ln  AL  frente a t2  t1 (5)
C C 
 AL AL , 2 

Como se muestra en la figura 2, la pendiente de la recta es kla. La ecuación (4) puede aplicarse a
cultivos que presentan una activa respiración o a sistemas sin consumo de oxígeno. En el
segundo caso, 𝐶𝐴L=𝐶*𝐴L, donde:
*
C AL  solubilida d del oxígeno

Figura 2. Cálculo del kLa mediante el método dinámico.

El método del balance de oxígeno en estado estacionario es el procedimiento más fiable para
medir kla además de permitir su determinación con tan solo una medida. Una ventaja importante
es que el método puede aplicarse a los fermentadores durante la operación. Depende sin
embargo, de la precisión en la medida de la composición del gas, del caudal, de la presión y de
la temperatura. Pueden cometerse errores tan altos como del ± 100% si las técnicas de medición
no son adecuadas.

Es importante que el tiempo de respuesta de un electrodo sea el menor posible de tal manera que
permita utilizar esta instrumentación en medidas dinámicas. Generalmente las sondas
esterilizables poseen un tiempo de respuesta de 10 a 100 segundos.

Para tener una idea el tiempo de respuesta de un electrodo debe ser varias veces menor (3-4) que
la inversa del kla determinado para considerar que está haciendo una medición ajustada.
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MATERIALES Y REACTIVOS

Agua destilada
16 gramos de Carboximetil celulosa
Tanque de Nitrógeno
2 beaker de 400 mL
1 espátula
Biorreactor de 5L
Compresor

PROCEDIMIENTO

Volumen de trabajo: 3,5 Litros.

Las condiciones de trabajo para cada experimento serán:

 Experimento 1:
Sustancia: Agua
Agitación: 600 rpm
Aireación: 2 L/min
 Experimento 2:
Sustancia: Agua
Agitación: 300 rpm
Aireación: 2 L/min
 Experimento 3:
Sustancia: Agua
Agitación: 600 rpm
Aireación: 3 L/min
 Experimento 4:
Sustancia: Agua
Agitación: 300 rpm
Aireación: 3 L/min
 Experimento 5:
Sustancia: Carboximetil Celulosa (CMC): 3 g/L
Agitación: 600 rpm
Aireación: 2 L/min
 Experimento 6:
Sustancia: Carboximetil Celulosa (CMC): 3 g/L
Agitación: 300 rpm
Aireación: 2 L/min
 Experimento 7:
Sustancia: Carboximetil Celulosa (CMC): 3 g/L
Agitación: 300 rpm
Aireación: 3 L/min
 Experimento 8:
Sustancia: Carboximetil Celulosa (CMC): 3 g/L
Agitación: 600 rpm
Aireación: 3 L/min
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Recomendaciones:

Debido a que el tiempo para la experimentación es muy corto (30-40 minutos por equipo) es
indispensable antes de la práctica que tenga en cuenta lo siguiente:
 Leer cuidadosamente el fundamento teórico de la practica y tener claro cual es el
procedimiento a seguir durante la experimentación
 Seleccionar un estudiante que se encargue de manipular el Biorreactor
 Seleccionen 2 estudiantes que se encarguen de almacenar los datos, uno observa las lecturas
que va arrojando el sensor de oxigeno para dictar los valores obtenidos y el otro anota
rápidamente dichos valores para que el proceso sea más eficaz.

1. Calibración del sensor de oxigeno

Antes de realizar la práctica se debe calibrar el sensor de oxígeno

a. Encender el biorreactor
b. Observar en el panel de control los valores que registran las variables pO2 y Speed.
c. Prender el compresor ubicado en la parte inferior del biorreactor. Abrir la válvula de paso
de aire del compresor.
d. Ajustar la velocidad del impulsor en el panel Speed.
e. Abrir la válvula de paso de aire ubicada en la parte posterior del biorreactor.
f. Regular el caudal de aire en 2L/min manipulando los dos rotámetros que se encuentran en el
panel (rotámetro A) y junto al biorreactor (rotámetro B)
g. Cuando en el panel pO2 se registre un valor superior en oxigeno disuelto del 99%, ir a
MENU, entrar en la opción CAL + OK, proceder a escoger CAL MEANS + OK, buscar con
las flechas ubicadas en la parte inferior del panel la opción 2. REF ONLY + OK, buscar la
opción CALIBRATE + OK. Aparecerá una pantalla con CALIBRATE DONE, dar OK y
MENU cuantas veces sea necesario para volver al panel principal. Verificar ahora que el
valor del oxigeno disuelto es 100%.

2. Determinación del kLa por el método indirecto.

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2.1. Velocidad de consumo de oxígeno

Luego de la calibración del sensor de oxígeno el medio se encuentra saturado de oxigeno,

por lo cual podemos comenzar con la toma de datos para la construcción de la primera parte
de la curva del método indirecto para la determinación de kLa
a. Cerrar la válvula de aire que se encuentra en la parte posterior del biorreactor.
b. Ubicar la manguera azul que suministra el aire. Desconectarla de la línea de aire (parte
posterior del intercambiador de calor)
c. Conectar la manguera azul en la válvula de color verde que se encuentra en la parte
posterior del reactor

d. Ir al cuarto contiguo y abrir el suministro de nitrógeno. Abrir cuidadosamente la válvula

de la pipeta de nitrógeno hasta que el medidor de presión marque 1 bar.

e. Abrir la válvula verde del suministro del nitrógeno. Regular el caudal con el rotámetro
A, hasta observar en el rotámetro B que se marca el caudal especificado para sus
condiciones.
f. Comenzar a tomar las lecturas reportadas en el sensor pO2 (% de oxigeno disuelto) en el
tiempo (cada 5 o 10 seg). Realizar la toma de datos hasta llegar a un porcentaje de
oxigeno disuelto entre el 20 – 30 %

2.2. Variación de la concentración de oxigeno en el medio liquido

Luego de obtener la parte de la curva que da cuenta de la velocidad de consumo,

procedemos a la re oxigenación con el fin de determinar como es la transferencia de
oxigeno dentro del sistema.
a. Cerrar la válvula verde de suministro de nitrógeno
b. Conectar la manguera azul a la línea de aire
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c. Abrir la válvula de paso de aire

d. Regular el caudal de aire con el rotámetro A, hasta que en el rotámetro B observemos el
valor de caudal especificado para sus condiciones.
e. Comenzar a tomar las lecturas reportadas por el panel pO2 en el tiempo (cada 5 o 10
seg). Realizar la toma de datos hasta llegar a un valor en el oxigeno disuelto por encima
del 95%.

ANÁLISIS DE RESULTADOS Y PREGUNTAS

1. Obtener cada una de las gráficas: Variación de la concentración de oxígeno en el medio

líquido. Determinación de Kla según las ecuaciones (3 y 5).
2. Si en lugar de utilizar nitrógeno para “consumir” (desplazar) el oxígeno se empleara un
microorganismo, como se determinaría el Kla.
3. Qué diferencia existe en la difusión del oxígeno al emplear una solución más viscosa?
4. ¿cómo afecta la velocidad de agitación, la viscosidad y la aireación la difusión del oxígeno?

PRESENTACIÓN DEL INFORME

El informe de laboratorio debe contener los siguientes ítems:

Portada
Introducción 15%
Objetivos
Cálculos 30%
Análisis de resultados y conclusiones 50%
Bibliografía 5%

Al final de la experimentación deben entregarle al profesor la siguiente información:

Integrantes:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

Volumen de control: __________________________________________________________

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Flujo de Aire: ________________________________________________________________

Agitación: ___________________________________________________________________
Caudal de N2 suministrado: ____________________________________________________
KLa (h-1): ____________________________________________________________________