Determinación del Coeficiente de Transferencia de Masa Kla para un Biorreactor de

Tanque Agitado. Práctica No. 6

Kelly Johana Santos Mancilla*, Jadith Guevara Moreno*, Lizeth Andrea Montes
Correa*, Yurley Andrea Fonnegra Valencia*, Wilman Alcaraz Zapata**, Alejandro
Acosta**
*Estudiantes de Microbiología Industrial y ambiental, Escuela de Microbiología, Universidad de Antioquia.
**Profesor Biotecnología Industrial

RESUMEN

En bioprocesos la evaluación de los requerimientos de oxígeno por parte de los

microorganismos es de gran importancia, especialmente para suplir las necesidades
relacionadas con el crecimiento celular, la producción de metabolitos de interés y procesos
metabólicos. En la práctica, se determinó el coeficiente de transferencia de oxígeno Kla,
por medio del método dinámico. Los parámetros que influyen en la capacidad de
transferencia de oxígeno y el Kla son; el diseño del fermentador (turbinas, geometría,
difusor), el medio de cultivo (solubilidad O2, viscosidad, presencia agentes tensoactivos), el
microorganismo (morfología, fase de crecimiento, especie, densidad celular) y parámetros
operacionales (temperatura, agitación, caudal de aire, presión parcial de O2). Este
coeficiente es clave, ya que influye directamente en la velocidad de transferencia de
oxígeno (OTR) del bioproceso. En la práctica se determinó el Kla por medio del método
dinámico, evaluando el sistema a una temperatura de 21,3 °C y 1 vvm de aire, pero
variando la agitación a 400 rpm (Grupos 2 y 4) y 600 rpm (Grupos 1 y 3); observándose
valores mayores de Kla cuando se trabaja con una agitación mayor (600 rpm).

Palabras clave: Agitación, coeficiente de transferencia de oxígeno, método dinámico,

velocidad de transferencia de oxígeno.

INTRODUCCIÓN

La concentración residual de oxígeno en un medio de cultivo con microorganismos aerobios

depende de varios factores, como; la tasa de transferencia de oxígeno de la fase gaseosa a
la fase líquida, la velocidad de transporte de oxígeno a las células (OTR) y la tasa de
consumo de oxígeno (OUR) que utilizan los microorganismos para diversos procesos, tales
como; crecimiento y mantenimiento celular, producción de metabolitos y estructuras
celulares. [2]

En cultivos aerobios, el oxígeno disuelto es un nutriente limitante, que se ve afectado por

varios parámetro; la velocidad de crecimiento del microorganismo o microorganismos
cultivados en el bioproceso, la alta producción de biomasa, las propiedades reológicas del
medio de cultivo (las cuales en ocasiones pueden crear resistencia a la transferencia de
masa), las condiciones de operación del bioproceso, las características del biorreactor, y la
baja solubilidad que puede presentar el oxígeno en soluciones acuosas con nutrientes. [6]

La determinación del Kla es de gran importancia para la evaluación de la eficiencia de la

aireación y los efectos de las variables de operación que intervienen en la provisión de
oxígeno disuelto en el bioproceso. Se han desarrollado diferentes métodos para determinar
la tasa de transferencia de oxígeno en los biorreactores, la selección depende de varios
factores: [3]

● Sistemas de aireación y de mezclado utilizados

● El tipo de biorreactor, su diseño y su geometría
● La composición del medio de cultivo
● El efecto de la presencia y características del microorganismo

Dentro de los métodos existentes para la medición del Kla, se encuentra el método
dinámico, que analiza el cambio en la concentración de oxígeno disuelto en el medio
cuando ocurre un cambio drástico y rápido en la concentración del gas de entrada.
Realizando un cambio al dejar de suministrar aire e inyectar nitrógeno, lo que desplaza la
concentración de oxígeno disuelto hasta un mínimo (en cultivos microbianos debe estar por
encima de la concentración crítica), de inmediato se para la inyección de nitrógeno y se
vuelve a suministrar oxígeno al medio hasta llegar a la concentración de saturación. La
determinación del Kla se cuantifica a partir de la variación de la concentración de oxígeno
disuelto medida durante este periodo de tiempo. [1]

Durante la medición del Kla es de gran importancia tener un tiempo de respuesta eficiente
en la medición del oxígeno disuelto por parte del sensor de O2, debido a que esto está
relacionado con la obtención de resultados precisos que afecta a su vez la determinación
del coeficiente de transferencia de oxígeno [1]. Con base en lo anterior, se establece como
objetivo la utilización del método dinámico para la determinación del Kla en un biorreactor
de tanque agitado, y la evaluación de su variación al modificar la velocidad de agitación en
el proceso (rpm).

MATERIALES Y MÉTODOS

Para la determinación de la concentración de oxígeno disuelto en el biorreactor de tanque

agitado con un medio líquido, se utilizó el método dinámico. Este método consiste en un
balance de materia en estado no estacionario para el oxígeno disuelto. Lo primero que se
debe hacer es calibrar el sensor de oxígeno. Después, se debe abrir la válvula del
biorreactor y con esto, permitir el paso de aire. Posteriormente, se debe ajustar el flujo de
gas y la velocidad de agitación (rpm) según las condiciones dadas para cada grupo (Tabla
1). Luego, es necesario inducir una desoxigenación del medio líquido, lo anterior se logra
desconectando el flujo de aire e inyectando nitrógeno. En este periodo se observará una
disminución drástica en la concentración de oxígeno disuelto hasta llegar a una
concentración mínima, aproximadamente 40% (en cultivos microbianos esta concentración
mínima debe estar por encima de la concentración crítica de oxígeno). Inmediatamente, se
bombea nuevamente aire, para re-oxigenar el medio líquido, hasta alcanzar la
concentración de saturación, 90 – 100 %. En todo el proceso se toman las medidas del
oxígeno disuelto en el tiempo, cada 15 segundos.
Tabla 1. Condiciones de operación del biorreactor de tanque agitado

Para la determinación del Kla, se grafican los resultados obtenidos experimentalmente

(concentración de oxígeno disuelto vs tiempo). Posteriormente, se toman dos puntos de la
gráfica y se calcula el valor de Kla, por medio de la siguiente ecuación:

(1)
Otra forma de obtener el valor de Kla es por medio de la pendiente que resulta de graficar
los datos así:

(2)
Teniendo en cuenta que, el oxígeno disuelto será el reflejo del balance entre el suministro
de oxígeno y el consumo en el sistema durante la reoxigenación en un tiempo determinado.

DATOS Y GRÁFICAS

❖ Determinación de Kla

A partir de los valores de porcentaje de OD obtenidos por cada uno de los grupos, bajo las
condiciones especificadas anteriormente (ver Tabla 1) para cada uno de ellos, en intervalos
de 15 segundos; y teniendo en cuenta la solubilidad del O 2 en el agua a la temperatura a la
que se trabajó (aproximadamente 8,635 mg/L a 21,3 °C [4]), se convirtieron estos datos a
una concentración expresada en mg/L de OD, y se graficaron los datos respecto al tiempo
en la Gráfica 1 .

Gráfica 1. Concentración de OD (mg/L) respecto al tiempo, para la determinación KLa mediante el método dinámico (medición
indirecta).
Tabla 2. Datos para realizar los cálculos de KLa utilizando la ecuación 1 y la ecuación 2.

Concentración máxima (C*AL), concentración mínima en t1 (CAL1), concentración en t2 (CAL2).

Para la determinación del Kla se tomaron los datos de concentración máxima (C* AL),
concentración mínima en t1 (CAL1) y tiempo t1 digitados en la Tabla 2; y se tomó la
concentración (CAL2) en cada uno de los tiempos medidos t2 del período de re-oxigenación.
Estos datos se reemplazaron como se reemplazaron y graficaron como se indica en el
numeral (2) de MATERIALES Y MÉTODOS.

Gráfica 2. Variación de la concentración de oxígeno disuelto en el período de re-oxigenación.

Los valores de Kla (coeficiente volumétrico de transferencia de masa (O2) en fase líquida)
las diferentes condiciones evaluadas son igual a las pendientes obtenidas en la Gráfica 2.

Para la determinación de Kla por medio de la ecuación del numeral (1) de MATERIALES Y
MÉTODOS, se escogieron dos concentraciones del período de reoxigenación, visualizado
en la Gráfica 1, CAL1 y CAL2 en t1 y t2 respectivamente (ver Tabla 2).
Grupo 1:

Grupo 2:

Grupo 3:

Grupo 4:

Tabla 3. Valores de KLa obtenidos por diferentes metodologías descritas en materiales y métodos.

❖ Cálculo de los vvm

Para el cálculo de los vvm se asumen los valores teóricos de porcentaje de O 2 y N2 en el

aire (21% y 78,1% respectivamente [5]). El caudal de aire suministrado fue 4 L/min, y el
caudal de N2 fue de 4 L/min. El volumen de agua del biorreactor fue de 4 L.

● vvm de N2
4 L/min / 4 L = 1 vvm en la desoxigenación

● vvm del aire

4 L/min / 4 L = 1 vvm en la re-oxigenación

● vvm de O2 en el aire
(0,21 * 4 L/min) / 4 L = 0,21 vvm en la re-oxigenación

● vvm de N2 en el aire
(0,781 * 4 L/min) / 4 L =0,781 vvm en la re-oxigenación
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Como se ha dicho anteriormente, la variación de la concentración de oxígeno residual en el

medio líquido tiene la influencia de diferentes factores, tales como el caudal de aire, la
temperatura y la agitación. En la Gráfica 1, se logra observar lo esperado en términos del
comportamiento de la concentración de oxígeno por el método empleado (método
dinámico). Puesto que, en un determinado instante, que se tomó como t0, se da el inicio de
la etapa donde el medio es desoxigenado y debido al ingreso de caudal de nitrógeno. Con
el nitrógeno, se tuvo un desplazamiento de oxígeno y ello se vió reflejado en la gráfica con
una disminución considerable de la concentración de oxígeno disuelto desde t0 hasta 105
segundos para el grupo 3, y desde t0 hasta 165 segundos para el grupo 1, observándose
un comportamiento similar, teniendo en cuenta las condiciones a las que fueron evaluadas,
a una velocidad de agitación igual, de 600 rpm (réplicas). Por otro lado, el periodo de
desoxigenación se presentó de t0 hasta hasta 284 segundos para el grupo 4 y de t0 hasta
330 segundos para el grupo 2. Estos últimos, presentaron un comportamiento similar y
fueron evaluados a la misma velocidad, 400 rpm (réplicas). Luego, se desconectó el
conducto de nitrógeno para proporcionar nuevamente aire, etapa conocida como
reoxigenación. Durante esta etapa que va de t1 a t, gráficamente podemos ver un
incremento en la concentración de oxígeno disuelto. La concentración de oxígeno disuelto
es un parámetro de medida indirecta que nos ayuda a determinar los valores del coeficiente
de transferencia de oxígeno en un biorreactor. Según lo observado en la Gráfica 1, se
evidencia que para el grupo 2 y grupo 4, quienes tenían una velocidad de agitación menor
(400 rpm), la velocidad de desoxigenación y la de reoxigenación tomaron más tiempo que
para los grupos 1 y 3, arrojando como resultado una capacidad de absorción de oxígeno
mucho menor que quienes tenían una velocidad de agitación de 600 rpm.

En la Gráfica 2 se observa el comportamiento de la transferencia de oxígeno durante la

etapa de reoxigenación por la ecuación del numeral (2), donde los resultados muestran que,
a menor velocidad de agitación, menores son los valores de la pendiente y con esto
menores los valores de Kla, es decir, que son directamente proporcionales. Los grupos 2 y
4 obtuvieron los valores más bajos de Kla, 0,0077 s-1 y 0,0088 s-1 respectivamente, lo cual
era lo esperado pues estos grupos trabajaron con la velocidad de agitación más baja, 400
rpm. Por otro lado, los grupos 1 y 3 obtuvieron los coeficientes de transferencia de oxígeno
más altos, 0,0178 s-1 y 0,0174 s-1, al trabajar con la velocidad de agitación mayor, 600 rpm.
Lo anterior puede deberse a que, al aumentar la velocidad del rodete, el gas se captura
dentro de las palas del agitador, permitiendo una dispersión homogénea de las burbujas al
interior del biorreactor y permitiendo aumentar su transferencia de masa [7]. En los
fermentadores es de gran importancia conocer los factores que influyen en sus mediciones,
por lo tanto, se debe tener en cuenta que los diferentes grupos trabajaron a la misma
temperatura, por lo que en este caso no fue un factor determinante. Se esperaba que el
comportamiento de los grupos que tenían la misma agitación fuese igual, pero hay
pequeñas variaciones entre sus datos, esto puede deberse a que todo el experimento se
realizó en el mismo biorreactor y con la misma agua como sustancia problema, la cual se
saturó de oxígeno en varias ocasiones además de los periodos de desoxigenación con el
nitrógeno pueden alterar las condiciones del medio.

En cuanto a los valores de Kla obtenidos por medio de la ecuación del numeral (1),
consignados en la Tabla 3, al igual que con la ecuación del numeral (2), se obtuvieron
valores menores del coeficiente de transferencia de oxígeno para el sistema, cuando se
trabajó a la velocidad de agitación menor (400 rpm), aproximadamente 0,0066 s-1 en el
caso del grupo 2 y 0,0071 s-1 en el caso del grupo 4. Al trabajar con la velocidad de
agitación mayor (600 rpm), se obtuvieron valores más altos de Kla, 0,0159 s-1 para el grupo
1 y 0,0146 s-1 para el grupo 3. Este comportamiento era el esperado, y también ha sido
analizado por otros investigadores, quienes encontraron que había un efecto sobre el Kla
cuando se modifica la velocidad de agitación del sistema, al evaluar tres velocidades de
agitación; 60 rpm, 100 rpm y 150 rpm, observando una relación directa entre ambos. Esto
se puede deber a que la agitación se relaciona con el tiempo de residencia de las burbujas
en el medio líquido y su tamaño, lo que permite una mayor difusión y una mayor área de
transferencia, la agitación a su vez disminuye la viscosidad en el medio cuando se trata de
cultivos microbianos que en su mayoría son pseudoplásticos, todos estos factores influyen
en la obtención de valores de Kla más altos. [3]

En el experimento no se puede determinar cuál de los dos métodos utilizados para el

cálculo del Kla es más preciso, usando la ecuación del numeral (1) o la ecuación del
numeral (2), ya que como se dijo anteriormente hay gran variedad en los valores y cálculos
obtenidos para los diferentes grupos, ya que al trabajar en el mismo equipo los diferentes
experimentos, el tiempo de residencia del N2 en el medio pudo ser mayor, desplazando el
oxígeno del medio y permaneciendo en éste. Además, se debe resaltar que estas
correlaciones de la literatura no son del todo recomendables en medios de cultivo
microbianos que por lo general son fluidos del tipo no newtoniano que tienen gran influencia
de la viscosidad, en donde se recomienda hacer mediciones in situ para obtener un valor
más exacto del Kla, debido a que en estos casos la viscosidad del medio líquido puede
afectar el tiempo de residencia del gas y con esto la difusión del mismo. [9]

Por otro lado, aunque la transferencia de oxígeno se vio favorecido a mayor velocidad de
agitación, a las condiciones experimentadas. Se deben garantizar las condiciones para que
esta transferencia de oxígeno no sólo se quede en el medio, sino que logre ser captada por
las células. Como lo describe Juan Carlos Bedoya Pérez, quien evaluó el crecimiento
celular y la producción de azadiractina en cultivos celulares de Azadirachta indica a
diferentes condiciones de aireación y de agitación. En cuanto a la agitación, obtuvo varios
resultados en los cuales a una mayor velocidad de agitación no se evidenció mayor
crecimiento de biomasa ni mayores cantidades del producto. En este caso, la velocidad de
agitación fue un factor influyente en el rendimiento de cultivos celulares de A. indica. Por lo
anterior, el destaca que la fisiología celular juega un papel muy importante en los procesos
biotecnológicos. El encontrarse frente a un alto grado de sensibilidad de las células A.
indica ante los esfuerzos cortantes generados bajo estas condiciones de operación no
permitirían un gran consumo del oxígeno disuelto. Por ende, al aumentar los niveles de
agitación se presentan aumentos considerables en la velocidad de transferencia de oxígeno
al medio de cultivo, pero se deben tener en cuenta otras variables y factores para
determinar si es conveniente o no para el proceso a desarrollar. [8]

CONCLUSIONES

● Los resultados obtenidos mostraron que la velocidad de agitación tiene un efecto positivo
(directamente proporcional) en el Kla, sin embargo, para que esto ocurra es necesario tener
controladas otras variables como: el tiempo de residencia del gas que desplaza el oxígeno
dentro del reactor, el volumen del flujo de este y el número de ensayos (repeticiones).

● El nitrógeno empleado como gas de desplazamiento de oxígeno (gassing out), es una

buena alternativa en el proceso de determinación de Kla, siempre y cuando las variables de
operación estén controladas, según el tipo de biorreactor y su diseño, la composición del
medio, el tipo del microorganismo y el equipo de medición esté equipado con un electrodo
de tiempo de respuesta rápida.

● A una temperatura de 21,3 °C, con una agitación de 600 rpm, hubo mayor transferencia
de oxígeno que a 21,3 °C con una velocidad de agitación de 400 rpm. Por ello, se concluye
que, a mayor agitación, mayor transferencia de oxígeno para el sistema evaluado, bajo las
condiciones descritas.

BIBLIOGRAFÍA

[1] Quirós Fournier, J. P. . Determinación de modelos para la predicción de los coeficientes volumétricos de
transferencia de masa (Kla) oxígeno-medio de cultivo en biorreactores tipo tanque agitado. 2014

[2] Buitrago H., Gustavo, Otálvaro A., Ángela M, & Duarte B., Paola G.. (2013). Evaluación de la transferencia de
oxígeno en un biorreactor convencional con aireador externo. Revista Colombiana de Biotecnología, 15(2), 106-
114. https://dx.doi.org/10.15446/rev.colomb.biote.v15n2.41272

[3] Zabala, M. A., Vanegas, I. A., & Vanegas, F.. Determinación de coeficientes de
transferencia de calor y masa en un agitador rotatorio para utilizarlo en procesos
fermentativos. Revista Colombiana de Biotecnología, 2001, 3 (1), p 63-71.
https://revistas.unal.edu.co/index.php/biotecnologia/article/view/30064

[4] Goyenola G. (2007) Guía para la utilización de las valijas viajeras - oxígeno disuelto. Red MAPSA.
http://imasd.fcien.edu.uy/difusion/educamb/propuestas/red/curso_2007/cartillas/tematicas/OD.pdf

[5] FernádezEditores. Composición del aire puro. Consultado: 05 de marzo de 2019. Disponible en:
https://www.tareasya.com.mx/tareasya/secundaria/ciencias/quimica/1361_composicion-del-aire-puro

[6] Roman Aguilar. Definición de Kla y qO2. Revisado [05 de marzo de 2019]. Disponible en:
https://www.academia.edu/11394379/Definici%C3%B3n_de_kLa_y_qO_2

[7] Doran, P. M. Principios de ingeniería de los bioprocesos. Zaragoza, España: Acribia

SA 1998, p 468

[8] Pérez JC, Sánchez RA. Efecto de la relación agitación-aireación sobre el crecimiento celular y la producción
de Azadiractina en cultivos celulares de Azadirachta indica A. Juss. Revista Facultad Nacional de Agronomía-
Medellín. 2010;63(1):5293-305.

[9] Erazo, R., & Cárdenas, J. L. Determinación experimental del coeficiente de transferencia de oxígeno (KLa) en
un biorreactor Batch. Revista Peruana de Química e Ingeniería Química, 2001, p 22-27.