UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

COLIMETRIA

ASIGNATURA: Microbiología Ambiental

DOCENTE: Msc.

INTEGRANTES:

Camaticona, Marco Uriel 2017-1780

Juli, Ronald 2017-1780

Paucar Jove, Jesenia Fatima 2017-178028

SEMESTRE: V

TACNA- PERÚ

2019
METODO DE RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES

OBJETIVO:
 .

MARCO TEORICO:

La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del Número más

Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la
lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos a 35°C  1C durante 48 h., utilizando
un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta determinación consta de dos fases, la
fase presuntiva y la fase confirmativa.

En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio el
cual permite la recuperación de los microorganismos dañados que se encuentren presentes
en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa como fuente de carbono. Durante la
fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el
cual es selectivo y solo permite el desarrollo de aquellos microorganismos capaces de
tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante.

La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se

realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la
capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son incubados a
una temperatura de 44.5  0.1C por un periodo de 24 a 48 h.

Finalmente, la búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de

caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales
(Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las pruebas
bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas.[CITATION Cam09 \l 10250 ]
 Tabla 1: Tabla de Número Más Probable (NMP/100ml)

Número de tubos que dan reacción positiva en las

series de tres tubos inoculados con: NMP/100ml
10ml 1ml 0.1ml
0 0 1 3
0 1 0 3
1 0 0 4
1 0 1 7
1 1 0 7
1 1 1 11
1 2 0 11
2 0 0 9
2 0 1 14
2 1 0 15
2 1 1 20
2 2 0 21
2 2 1 28
3 0 0 23
3 0 1 39
3 0 2 64
3 1 0 43
3 1 1 75
3 1 2 120
3 2 0 93
3 2 1 150
3 2 2 210
3 3 0 240
3 3 1 460
3 3 2 1100
METODOLOGÍA
La siguiente practica de laboratorio se realizó en el Laboratorio de Microbiología de la
Universidad Nacional Jorge Basadre de Grohmann, en el que se realizó el método de
Colimetría para Coliformes fecales.
Fecha de Realización de la Practica: 23/05/19
Hora de Realización de la Practica: 4:20pm- 6pm
A. Materiales:
- Pipetas Esterilizadas
- Tubos de Ensayos esterilizado
- Muestra de Agua estancada
- Algodón
- Succionador
- Papel Craft
- Pavilo
- Caldo McConkey

Figura1. Materiales Utilizados

Fuente: Propia

B. Procedimientos:
1. Recolectar las muestras de agua estancada
2. Preparar solución concentrada en tubos de ensayo con medio caldo MacConkey,
para 9 tubos de ensayos, en diferentes concentraciones.
a) Tres tubos de 10 ml de MacConkey doble concentrado.
b) Tres tubos de 9 ml de MacConkey de concentración normal.
c) Tres tubos de 9.9 ml de MacConkey de concentración normal.

3. Colocar en cada tubo de ensayo una campana de Durham, que se encargara de

poder visualizar la cantidad de producción de gases de los Microorganismos.
 4. Colocar Algodón para que no se puedan escapar los gases producidos
5. Añadir la muestra recolectada para cada solución concentrada.
a) Para la concentración doblemente concentrada se le añadirá 10ml de la
muestra recolectada.
b) Para la concentración de 9ml se le agregará 1ml de muestra recolectada.
c) Para la concentración de 9.9ml se le agregara 0.1ml

6. Preparar los tubos de ensayo, en un frasco para colocarlos en la incubadora,

taparlo con papel craft
7. Ajustar el frasco con un pavilo.
8. Rotular con nombre, fecha y hora el frasco
9. Colocar el frasco debidamente rotulado en la incubadora a una temperatura de
35°C, y esperar durante 48horas para anotar los resultados obtenidos.

C. Diagrama de Flujos de Procedimientos

1. Recolectar las
2. Preparar solución concentrada ensayo de
muestras de agua
medio caldo MacConkey, para 9 tubos de
estancada ensayos, en diferentes concentraciones.

3. Colocar en cada tubo de

ensayo una campana de Durham

4. Colocar Algodón a
cada tubo de ensayo.

Figura2. Muestra de Agua

Fuente: Propia
5. Añadir la muestra
recolectada para cada Figura 3. Añadido de muestra
solución concentrada Fuente: Propia

6. Preparar los tubos de 7. Rotular el Frasco

ensayo, en un frasco, y con la Fecha y Hora
ajustar en un pavilo. realizada.

Figura 4. Muestra en la Incubadora

8. Colocar el frasco en la
Fuente: Propia
incubadora a 35°C durante
48 horas.
Figura 5. Añadido de muestra Figura6. Añadido de muestra
Fuente: Propia Fuente: Propia

Figura7. Muestras y frascos Figura8. Rotulado de frascos

Fuente: Propia Fuente: Propia

Figura 9. Muestras en la Incubadora Figura 10. Incuabadora Utilizada

Fuente: Propia Fuente: Propia

BIBLIOGRAFÍA
Camacho, A., Giles, M., Ortegón, A., & Palao, M. (2009). Método para la determinación de
bacterias coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli por la técnica de diluciones en
tubo múltiple (Número más Probable o NMP). Técnicas Para El Análisis Microbiológico
de Alimentos.