UNIVERSIDAD NACIONAL DE

CAJAMARCA
.
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO CIENCIAS
BIOLÓGICAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL: OBSTETRICIA

CICLO/GRUPO/SUBGRUPO: I- GRUPO B

DOCENTE: CARBAJAL CABALLERO NESTOR ESTUARDO

ESTUDIANTE: DIANA LIZBETH CRUZADO VASQUEZ.

CURSO: BIOLOGÍA GENERAL

TEMA: TÉCNICAS MICROSCÓPICAS, COLORANTES

Y COLORACIONES.

2021
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FACULTAD CIENCIES DE LA SALUD
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL OBSTETRICIA.

PRÁCTICA N° 2: TÉCNICAS MICROSCÓPICAS, COLORANTES Y

COLORACIONES.
I. MÉTODOS
1. El procedimiento para visualizar una muestra de epidermis de cebolla

Existen dos técnicas para observar la epidermis de la cebolla con un microscopio

óptico: la primera es realizando preparaciones al fresco (es decir, sin colorante) y
la segunda tiñendo la muestra con azul de metileno, verde de metilo acetato o
lugol.

Técnica

Toma de la muestra

Se toma una cebolla mediana, se pica con un bisturí y se extrae la capa más
interna. Con una pinza se retira cuidadosamente la película que recubre la parte
cóncava del bulbo de la cebolla.

Montaje al fresco

Se coloca la membrana en un portaobjeto y se extiende cuidadosamente. Se

agregan unas gotas de agua destilada y se coloca un cubre objeto encima para
ser observado al microscopio.

Montaje coloreado

1. Se coloca en un vidrio de reloj o en una placa de Petri, se hidrata con

agua y se extiende lo más posible sin dañar.
2. Se cubre con algún colorante; para ello se puede usar azul de metileno,
verde de metilo acetato o lugol. El colorante mejorará la visualización de
las estructuras celulares.
3. se lleva la película teñida a un portaobjeto y se estira cuidadosamente para
colocar encima el cubreobjetos. Por último, el portaobjeto se coloca en el
microscopio para su observación.

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Visualización al microscopio:

 las preparaciones deben enfocarse a 4X para tener una amplia

visualización de gran parte de la muestra.
 En dicha muestra se elige una zona para pasar al objetivo de 10X. En este
aumento se logra observar la disposición de las células, pero para mayores
detalles es preciso pasar al objetivo de 40X. A 40X se pueden ver la pared
celular y el núcleo, y en ocasiones es posible distinguir vacuolas que se
encuentran en el citoplasma. En cambio, con el objetivo de inmersión
(100X) es posible ver granulaciones dentro del núcleo, que corresponden a
los nucléolos.

En este caso es recomendable hacer preparaciones con epidermis de

cebolla obtenidas de las capas intermedias del bulbo; es decir, de la parte
central entre las más externas y las más internas.

2. Esquematiza las observaciones microscópicas mostradas en el video A, es

decir: células de la tiroides, células de cebolla, corcho y polen, indicando el
aumento que representa.

Muestra de la célula de una

cebolla:
Tomamos la muestra de la
cebolla y la cortando la dermis,
Esta capa delgada lo colocamos
en el portaobjetos agregando una
gota de agua destilada.
Luego se observa en un
microscopio.

Muestra de la célula del corcho:

Cortar una capa muy fina con la
ayuda de un bisturí. Esta lo
colocamos en un portaobjetos
agregando siempre agua destilada.
Cubrimos con el cubreobjetos y pág. 2
dejamos caer para que no forme
burbujas. Luego obsérvanos al
microscopio.
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Muestra de la célula del polen:

Cubrimos con el cubreobjetos y
dejamos caer para que no forme
burbujas. Luego obsérvanos al
microscopio a 100x.

Muestra celular de la tiroides:

Cortar una capa muy fina con la
ayuda de un bisturí. Esta lo
colocamos en un portaobjetos
agregando siempre agua
destilada. Cubrimos con el
cubreobjetos y dejamos caer
para que no forme burbujas.
Luego obsérvanos al
microscopio.

1) Colorantes:
a) ¿Qué es un colorante?
Son sustancias que pueden conferir color a los cuerpos. En histología, los
colorantes son sales neutras que tienen radicales tanto acidas como
básicas.

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b) Tipos de colorante según el radical colorante y los ejemplos dados.

 Tipos de colorantes:
- Colorantes ácidos: Son sales cuya propiedad colorante está en el
radical ácido tienen carga negativa .Tiñen las estructuras de color rojo o
rosado y estas estructuras son llamadas acidófilas. son colorantes
ácidos: eosina, el ácido pícrico, etc.
- Colorantes básicos: son sales neutras cuya propiedad colorante está
en el radical básico; tiene carga positiva. Tiñen las estructuras de azul o
morado y estas estructuras son llamadas basófilas. Ej: el núcleo. Son
colorantes básicos: hematoxilina, anilina, etc.
- Colorantes neutros: Sales cuya propiedad colorante están tanto en el
radical ácido como básico por lo que tienen carga positiva como
negativa, tiñen estructuras tanto ácidas como básicas. Ej: el rojo neutro.
c) Tipos de colorante según los componentes que tiñen y los ejemplos
dados.
- Colorantes generales: Tiñen todos los elementos. ej.: hematoxilina y
eusina.
- Colorantes específicos: Tiñen componentes particulares. Ej.: el sudan
negro para proteínas, etc.

d) Tipos de colorante según el color que transmiten y los ejemplos dados.

- Ortocromáticos: tiñen el tejido del mismo color de la solución
colorante. Ej: eosina tiene la estructura del mismo color del líquido que
es el rojo.
- Meta cromáticos: Tiñen al tejido de un color diferente al de la solución
colorante. Ej: azul de toluidina que es azul pero los tejidos se tiñen de
color.

e) Tipos de colorante según su inocuidad y los ejemplos dados.

Colorantes inocuos: son inofensivos para el organismo.

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a) Vitales: ej: El azul de tripano específico para teñir los macrófagos.

b) Supra vitales: Ej: El verde de janus b que sirve para teñir las
mitocondrias y el rojo neutro que tiñe los lisosomas.

2) Coloración Gram:
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción
diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre
todo en muestras clínicas. Considerándose bacterias Gram positivas a las que se
visualizan de color morado, y bacterias gram negativas  a las que se visualizan de
color rosado y rojo.

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II. RESULTADOS
1) Procedimiento para visualizar una muestra de epidermis de cebolla.
Preparación de placas de microscopia: Epidermis de cebolla
Tomamos la muestra de la cebolla y la cortamos levantando la dermis con
ayuda de una pinza de cejas.
Esta capa delgada la colocamos en un objeto agregando siempre una
gota de agua destilada .la cubrimos con el cubre objetos haciendo un
ángulo de 45 ° y dejando caer para evitar la formación de burbujas .Luego
se observa en el microscopio.

Si hay excesos de líquido en la placa, podemos absorberlo usando una

pipeta Pasteur o una servilleta.
Observaciones

2) Células de cebolla
Clasificación, a aumento 40y Xejemplos de colorantes.
descripción

Clasificación de colorantes:

1. Según los componentes que tiñen

 Generales : Tiñen todos los elementos
 Específicos : Tiñen componentes particulares
2. Por el radical colorante
 Básicos
 Ácidos
 Neutros
3. Por el color que transmite

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 Ortocromáticos: tiñen el tejido del mismo color de la solución colorante

ejemplo : la Eosina
 Metacromáticos : tienen el tejido de diferente color al de la solución
colorante ejemplo : azul de toleidina , azul de metileno ,
4. Inocuos
 Vitales : el azul de tripeno
 supravitales : el verde de llanos

Algunos colorantes específicos

Mitocondrias Verde janus.

Aparato de Golgi sales de plata y ácido ósmico
Células adiposas colorantes de Sudán
Neurofibrillas sales de plata, oro y azul de Metileno
Cuerpos de Nissl Azul de toluidina
Lamina basal Sales de plata y Ácido Peryódico de Schiff (PAS)
Sangre Método de Romanovsky : Leishman y Giemsa
Glucógeno carmín de Best, PAS
Proteoglicanos PAS
Moco Musicarmin y PAS
ADN Reacción de Feulgen .
Fibras elásticas Orceina (café ) y Fucsina Resorcina
Fibras reticulares Sales de plata
Fibras colágenos Eusina (rojo)
3) Procedimiento para realizar la coloración Gram

Dos tipos de coloración Gram positiva y coloración Gram negativa

1. Primer paso haremos dos preparaciones , con una bacteria Gram

positiva y otra con otro Bacteria Gram Negativa

- Haremos un frotis con las bacterias que vamos a teñir para ello
pondremos una gota de agua en un portaobjetos y sobre ella haremos
una extensión de una pequeña muestra tomada de un cultivo sólido.
- Dejamos secar podemos hacer con la ayuda del mechero, fijaremos las
bacterias con calor, para ello pasaremos el portaobjetos por encima de
llama con la muestra mirando hacia arriba, añadiremos cristal violeta

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dejaremos de actuar el colorante durante 1 minuto para que tiña a todas

las bacterias Gram positivas y Gram negativas.
- Lavaremos suave mente con agua añadiremos lugol y dejaremos actuar
30 segundos luego volvemos a lavar con abundante agua y hacemos un
tratamiento con alcohol de 96 °C durante 15 segundos luego lavamos
nuevamente con agua.
- Añadiremos safranina y dejaremos actuar el colorante durante uno y
dos minutos para teñir las bacterias Gram negativas finalmente lavamos
con abundante agua y dejamos secar la preparación.

Observaremos la tinción el microscopio óptico con el objetivo de 100X con una

gota de aceite de inmersión .En la tensión de Gram finalmente bacterias de Gram
negativa se tienen de rosa o rojo por la safranina y las Gram positivas violeta por
el cristal violeta.

Observaciones

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AUMENTA 100X

III. CUESTIONARIO
1. ¿Qué es un preparado en fresco y cómo se visualiza? Da algunos
ejemplos.

Consiste en colocar una gota de líquido con los microorganismos sobre un

portaobjetos y a continuación cubrirla con un cubreobjetos. [ CITATION Rey15 \l 10250 ]

Observaciones entre portaobjetos y el cubreobjetos

Colocación de una gota de cultivo sobre un cubreobjetos

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Observación gota pendiente

2. ¿Qué es un preparado en seco y cómo se prepara? Da algunos

ejemplos.

Según [ CITATION Paz17 \l 10250 ] no dice que la preparación en seco es ideal para
muestras que no necesitan hidratación. Esto incluye, por ejemplo, un cabello,
granos de polen, esporas, muestras de plantas, insectos, etc.
1. Si la muestra es totalmente opaca el primer paso consistirá en cortar
primero una sección muy fina de la muestra. Esto permitirá observarla en el
microscopio mediante luz transmitida.
2. Colocamos la sección que hemos cortado en el centro del portaobjetos con
la ayuda de unas pinzas. Si la muestra tiene un cierto volumen es
recomendable utilizar un portaobjetos con una cavidad cóncava.
3. Para mantener la muestra fija en su sitio la cubrimos con un cubreobjetos.
Esto evita también que el objetivo llegue a tocar la muestra en caso de
cometer algún error durante la manipulación del microscopio.
La ventaja de las muestras en seco es que no tienen problemas de deshidratación
y pueden mantenerse preparadas para una observación posterior.

3. ¿Qué consideraciones se debe tomar en cuenta para una buena

observación microscópica?

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Para poder obtener una buena observación microscópica, hay que tener

principalmente en cuenta 3 factores imprescindibles: 

a) El adecuado aumento de la imagen,

b) El contraste 
c) La resolución.

Los objetos deben tener siempre algo de contraste con el medio circundante para
de esta manera ser bien percibidos por medio del microscopio.

El poder de resolución es muy importante también, para poder observar

separados 2 objetos muy próximos entre ellos depende más que nada de las
características que tenga el sistema de lentes del microscopio y está limitado  solo
a la longitud de onda de la luz que se emplee, también del índice de refracción por
el medio en que se da la visualización y la apertura numérica del objeto a
observar.

IV. COMENTARIO FINAL

En este informe hemos conocido las partes del microscopio, pigmentación gram y
las vistas de las células de cebolla, tiroides y corcho; que nos servirá a tener una
visión más amplia de la célula.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Paz, L. A. (2017). Estudio microscópico de microorganismos. Obtenido de
https://core.ac.uk/download/pdf/154797545.pdf

Reynoso, M., & Demo, M. (2015). Metodos de prepardos fresco y seco. Manual
de microbiología general, 53- 54. Obtenido de
https://www.unrc.edu.ar/unrc/comunicacion/editorial/repositorio/978-987-
688-124-1.pdf

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