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Microbiología y taxonomía
microbiana
U1 Taxonomía microbiana
Índice
Presentación.............................................................................................................................. 2
Propósitos ................................................................................................................................. 3
Competencia específica ........................................................................................................... 3
Ruta de aprendizaje .................................................................................................................. 4
1.1. Microbiología ...................................................................................................................... 5
1.1.1. Campo de estudio de la microbiología ............................................................................ 6
1.1.2. Taxonomía ...................................................................................................................... 7
1.1.3. Concepto de especie ..................................................................................................... 17
1.2. Nomenclatura de microorganismos ................................................................................. 18
1.2.1. Caracterización fenética ................................................................................................ 19
1.2.2. Pruebas bioquímicas y tinciones ................................................................................... 20
1.2.3. Caracterización genotípica ............................................................................................ 26
1.2.4. Filogenia microbiana ..................................................................................................... 28
1.2.5. Árboles filogenéticos ..................................................................................................... 29
1.3. Virus ................................................................................................................................. 31
1.3.1. Características y estructura de los virus ....................................................................... 34
1.3.2. Replicación viral ............................................................................................................ 36
1.3.3. Cultivo de virus .............................................................................................................. 39
Actividades .............................................................................................................................. 42
Autorreflexiones....................................................................................................................... 42
Cierre de la unidad .................................................................................................................. 42
Para saber más ....................................................................................................................... 44
Fuentes de consulta ................................................................................................................ 45
Presentación
Propósitos
Competencia específica
1.1. Microbiología
Antes de sumergirnos en el contenido de la asignatura, revisa la infografía que se muestra
en la página anterior y que te permitirá tener un panorama completo de los contenidos que
revisaremos en esta unidad, en caso de que tengas alguna pregunta o inquietud, consúltalo
con tu docente en línea.
Microbiología
Tomado de http://www.vwmin.org/hooke-about-robert-hooke-hooke-laboratories.html y
http://www.history-of-the-microscope.org/anton-van-leeuwenhoek-microscope-history.php
Microorganismos
1.1.2. Taxonomía
Para poder comprender la gran diversidad de organismos existentes es preciso agruparlos
y organizarlos en una estructura jerárquica. De ello se encarga la taxonomía, la cual se
compone de tres partes independientes pero interrelacionadas:
Taxonomía
Clasificación
Es el agrupamiento ordenado de unidades en grupos dentro de unidades
mayores.
Nomenclatura
Es la denominación de las unidades definidas por la clasificación.
Identificación
Hace uso de los criterios establecidos por la clasificación y nomenclatura
mencionados, los microorganismos se identifican comparando las
características de las unidades desconocidas y las conocidas.
Para llevar a cabo la clasificación de las bacterias los taxónomos bacterianos se vieron
forzados a buscar además de las características estructurales, diferentes tipos de
propiedades como las bioquímicas, fisiológicas, ecológicas. Dicha clasificación se basa en
atributos funcionales, la mayor parte de las bacterias sólo pueden identificarse por lo que
hacen y no simplemente por su apariencia. Esto representa un problema adicional para el
taxónomo bacteriano, el estudio de estas propiedades funcionales conlleva a la realización
de experimentos.
Sin embargo, está tomando auge una nueva alternativa biotecnológica que podría resolver
pronto el problema, son las técnicas moleculares para la caracterización genotípica
bacteriana, que proporcionan una posible base objetiva para la definición de especie
bacteriana (Tórtora, 2008).
En el siglo XVII Carlos Linneo desarrollo un sistema de clasificación para nombrar a los
microorganismos como una forma de facilitar la comunicación eficaz entre los
microbiólogos, a Linneo se le conoce como el Padre de la Taxonomía (Solomon et al.,
2008).
Tomado de:
http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:C
arl_von_Linn%C3%A9.jpg
Tipos de clasificaciones
Fenética
Las agrupaciones se realizan en función de la semejanza en sus
características fenotípicas. Se toman en cuenta propiedades bioquímicas,
fisiológicas, ecológicas y estructurales de los microorganismos.
Genotípica
Compara las semejanzas genéticas entre los organismos, ya sea de genes
individuales o de genomas completos y existen múltiples técnicas por las
que pueden ser evaluados.
Filogenética
Los agrupamientos se basan en las relaciones evolutivas que actualmente
pueden determinarse por la similitud entre la secuencia del DNA, RNA y
proteínas.
Numérica
El agrupamiento se realiza empleando métodos numéricos de unidades
taxonómicas basadas en la semejanza general determinada por
comparación de numerosas características, recibiendo cada una de las
cuales el mismo valor. Después de realizado el análisis de caracteres se
calcula un coeficiente de variación entre cada par de cepas del grupo, que
determina la concordancia de los caracteres que presentan ambas
bacterias.
farmacéutica debemos identificar cuáles son los posibles contaminantes presentes en los
productos para poder realizar acciones correctivas y preventivas.
A lo largo de los años han existido distintas clasificaciones de los seres vivos, en el sistema
de clasificación actual basado en la relación evolutiva de la secuencia 16S del rDNA se ha
reconocido una clasificación con tres dominios mayores, de los cuales dos comprenden a
las bacterias y arqueas (procariotes) y el tercer dominio a eucariotes (Sarethy y Danquah,
2014) como se muestra en la figura 4:
- Plásmidos Si Sí Raro
- Sensibilidad de ribosomas a la toxina No Sí Sí
diftérica Sí No No
- Sensibilidad a cloranfenicol,
estreptomicina y kanamicina
- Metanogénesis No Sí No
- Reducción desasimilativa de Sí Sí No
sulfatos y férrico Sí No No
- Nitrificación Sí Sí No
- Desnitrificación
- Fijación de nitrógeno Sí Sí No
- Fotosíntesis oxigénica Sí No Sí (en
- Quimiolitotrofía Sí Sí cloroplastos)
- Vesículas de gas Sí Sí No
- Síntesis de gránulos de reserva de Sí Sí No
carbono (β-hidroxialcanoatos) Sí Sí No
- Crecimiento por encima de 80º No
Todos los procariotas pertenecen al domino Bacteria o Archaea. Dentro de cada dominio,
cada microorganismo está asignado (en orden descendente) a un phylum, clase, orden,
familia, género y especie. Algunos procariotas también tienen una denominación de
subespecie. Los grupos microbianos de cada nivel tienen un sufijo indicativo específico de
ese rango o nivel.
Para poder realizar una identificación microbiana es necesario analizar sus caracteres
morfológicos, fisiológicos, serológicos y químicos, que son los que nos van a dar pauta para
poder diferenciar entre una especie y otra, o bien identificarlos. El estudio de tales
propiedades conlleva a la realización de experimentos, pruebas y técnicas para identificar
a las bacterias.
Método de
Taxonomía Nombre Propiedades
confirmación
Dominio Bacteria Células bacterianas; Microscopía;
secuencias de RNA análisis de la
ribosómico típicas de secuencia de
bacterias RNA
ribosómico
16S; presencia
de
biomarcadores
únicos, por
ejemplo el
peptidoglicano
Filum Proteobacteria Secuencias de RNA Análisis de la
ribosómico típicas de secuencia del
Proteobacterias RNA
ribosómico
16S
Clase Gammaproteobacteria Bacterias gram Tinción de
negativas; secuencias Gram,
de ARN ribosómico microscopia
típicas de
Gammaproteobacteria
Orden Chromatiales Bacterias fotótrofas Pigmentos
purpura característicos
Género Allochromatium Bacterias púrpura del Microscopia
azufre con forma de
bastón
Especie warmingii Células de 3,5-4,0 µm Medida de las
X 5-11 µm; almacenan células en el
azufre principalmente microscopio
en los polos de la usando un
célula micrómetro;
determinando
la posición de
los glóbulos de
S0 dentro de la
célula
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U1 Microbiología y taxonomía microbiana
Taxonomía microbiana
Tomado de:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/taxonomyhome.html/index.cgi?chapter=resources
Especie y cepa
Especie
Es la unidad fundamental de la diversidad biológica que tomando en cuenta
datos fenotípicos, genotípicos y de filogenia conforma una colección de
cepas que presentan un alto grado de similitud en una serie de rasgos
independientes.
Cepa
Se define como una población de organismos que desciende de un único
organismo o de un aislamiento en cultivo puro.
A) Biovariedades
Variantes de cepas bacterianas caracterizadas por diferencias bioquímicas y
fisiológicas.
B) Morfovariedades
Se diferencian desde el punto de vista morfológico.
C) Serovariedades
Presentan propiedades antigénicas diferentes.
D) Patovariedad
Se diferencían por el proceso y grado de patogenicidad.
E) Fagovariedad.
Presentan diferente especificidad por los fagos.
F) Ecotipo.
Se han adaptado a ocupar un mismo nicho ecológico.
Las características morfológicas son importantes debido a que son fáciles de estudiar y
analizar, además, las características estructurales dependen de la expresión de muchos
genes y suelen ser estables desde el punto de vista genético. Este tipo de características
normalmente no varían de forma sustancial con los cambios ambientales, por lo tanto, la
semejanza morfológica a menudo es un buen indicador del parentesco filogenético.
Para la tinción de las preparaciones se emplean colorantes, los cuales son compuestos
orgánicos que tiene afinidad por determinados componentes celulares. Algunos colorantes
presentan moléculas cargadas positivamente, es decir son básicos o catiónicos.
Para poder realizar una tinción es necesario primero realizar un frotis (Figura 7) en un
portaobjetos y fijarlo para posteriormente teñirlo con el proceso específico de cada tinción
y observarlo al microscopio.
Tinción de Gram: este tipo de tinción es el más empleado de forma rutinaria, revela la
forma de la célula bacteriana, su agrupación y grupo taxonómico al que pertenece, ya
sea Gram positivo o Gram negativo. Consiste en teñir primero con cristal violeta, lavar,
agregar lugol, lavar, decolorar con alcohol acetona, teñir con safranina y lavar
nuevamente. Las bacterias que retienen el cristal violeta se llaman Gram positivas
(Gram +) y las que se decoloran y se tiñen en rojo por el colorante de contraste son
Gram negativa (Gram -).
Modificado de http://estudiantesenlaboratoristaquimico.blogspot.mx/2014/12/tincion-de-
gram.html
Tomado de:
http://www.auxiliaresenfermeria.net/201
1/07/la-tincion-para-micobacterias.html
Tinción de cápsula: las capsulas de las bacterias son frágiles, por lo que no se tiñen
con los métodos comunes. Se utiliza una solución de colorante cristal violeta que se
calienta y después se realiza un lavado con sulfato de cobre. La capsula bacteriana se
tiñe de color azul pálido, mientras que la célula y su interior aparecen teñidas de color
azul obscuro.
Tomado de http://bacillus8.blogspot.com/
Tinción de flagelos: los flagelos de las bacterias son invisibles en las preparaciones
comunes, por lo que solo pueden visualizarse con tinciones especiales. Los flagelos se
observan en cultivos bacterianos recientes (12-18 horas) en caldo nutritivo. Se colocan 2 o
3 gotas de la muestra sin extenderlas, se fijan y se deja secar al aire, posteriormente se
agrega una mezcla de agua destilada, fucsina básica, alcohol etílico, ácido tánico y cloruro
de sodio, durante 5 a 15 minutos hasta observar un precipitado y se lava para finalmente
Tomado de http://salmonellathypi.blogspot.mx/
Para realizar estas pruebas es necesario conocer detalladamente qué cambios sufren las
bacterias durante los procesos metabólicos, cómo es que se llevan a cabo las reacciones
bioquímicas, qué enzimas intervienen y cuáles son los productos intermedios que se
generan.
Cuando la secuencia del gen 16S del rDNA tiene una similitud entre organismos ≤ 98.7%
los miembros son de diferentes especies. Los microorganismos no cultivables no pueden
ser asignados a una especie definitiva puesto que su fenotipo no se conoce, pero pueden
ser asignados a una designación “Candidata” provista de la secuencia del gen 16S,
dependiendo de la similitud que presente con otras especies conocidas (Sarethy y
Danquah, 2014).
Los datos filogenéticos se usan cada vez más en la taxonomía bacteriana para
complementar la información fenotípica y genotípica. Además el análisis filogenético
permite encuadrar a los organismos en un sistema de clasificación estructurado conforme
a sus relaciones evolutivas, lo que constituye un objetivo esencial de la sistemática
microbiana.
La taxonomía microbiana está cambiando con rapidez. Esto se debe a los conocimientos
crecientes sobre la biología de los microorganismos, a los avances notables realizados en
el mundo de la informática y al uso de las características moleculares para determinar
relaciones filogenéticas entre microorganismos (Willey et al., 2009).
Algunas de las técnicas que se emplean para estudiar la filogenia microbiana son:
Árbol filogenético
Los árboles filogenéticos pueden tener raíz o estar desprovistos de ella, como se observa
en la siguiente imagen:
Figura 13. Ejemplos de árboles filogenéticos. A) Árbol sin raíz que une cuatro
unidades taxonómicas. B) Árbol con raíz.
Una vez que se han alineado las moléculas, se determina el número de posiciones que
varían en las secuencias. Estos datos se utilizan para calcular una medida de la diferencia
entre las mismas, la cual la podemos expresar en forma de distancia evolutiva (Willey et al.,
2009).
Enlace
1.3. Virus
Los virus son los microorganismos más numerosos de nuestro planeta y sin embargo
todavía no pueden ser introducidos en la clasificación del gran árbol de la vida, debido a
que existe el gran dilema de si clasificarlos como seres vivos o no. Es por ello que vamos
a analizar diferentes características de ellos para intentar responder esta gran interrogante.
Los virus infectan todo tipo de organismos celulares, además de que son herramientas
importantes en el área de la genética microbiana y la ingeniería genética. Estos organismos
son estudiados por la virología.
Virus
Los virus son parásitos intracelulares obligados que tienen que introducirse en una célula
viva adecuada para llevar a cabo su ciclo de replicación, sin embargo, los virus poseen su
propia información genética y una forma extracelular denominada partícula vírica que les
permite existir fuera del hospedador durante largos periodos y que facilita la transmisión
entre una célula y otra (Madigan et al., 2009).
Transfección
Proceso mediante el cual los virus entran en una célula hospedera para
poder replicarse.
Los virus se pueden clasificar con base en los hospedadores que infectan: en virus
bacterianos (bacteriófagos), animales o vegetales; aunque también pueden clasificarse por
el genoma que presentan: si están formados por DNA o RNA, de una o dos cadenas o si
su estructura es lineal o circular (Tabla 6 y figura 15).
Ejemplos
Descripción del genoma y
Clase Virus
estrategia de replicación Virus animales
bacterianos
I Genoma de DNA bicatenario Labda, T4 Herpesvirus,
viruela
II Genoma de DNA monocatenario ϕX174 Virus de anemia
aviar
III Genoma de RNA bicatenario ϕ6 Reovirus
IV Genoma de RNA monocatenario MS2 Poliovirus
positivo
V Genoma de RNA monocatenario Virus de la gripe,
negativo virus de la rabia
VI Genoma de RNA monocatenario Retrovirus
que se replica con un
intermediario de DNA
VII Genoma de DNA monocatenario Virus de la
que se replica con un hepatitis B
intermediario de RNA
Modificado de Madigan et al., 2009.
Cuando los virus se encuentra en su forma extracelular se llaman viriones y son una
partícula microscópica que contiene ácido nucleico rodeado por proteínas y otras
macromoléculas, pero no realizan ninguna actividad metabólica.
Los viriones pueden tener muchos tamaños y formas diferentes. La mayoría de ellos
presentan un tamaño entre los 20 y 300 nm. El ácido nucleico del virión siempre está
localizado en el interior de la partícula, rodeado por una cubierta proteica llamada cápside
(Figura 16).
Esta cubierta está compuesta por una serie de moléculas proteicas individuales llamadas
capsómeros, que siguen un patrón preciso y altamente repetitivo alrededor del ácido
nucleico. Los capsómeros son las unidades morfológicas más pequeñas que se pueden ver
en un microscopio óptico.
Algunos virus están desnudos, mientras que otros poseen una membrana alrededor de la
nucleocápside, que forman lo que se conoce como envoltura. Esta envoltura consiste en
una bicapa lipídica con proteínas, normalmente glicoproteínas, integradas en ella. Los
lípidos de la membrana vírica son derivados de las membranas de la célula hospedadora,
pero las proteínas están codificadas por genes del virus (Madigan et al., 2009).
Figura 17. Principales familias de virus que infectan vertebrados. Del lado
izquierdo se muestran virus sin envoltura con diferente estructura de cápside y DNA
o RNA, del lado derecho se observan virus con envoltura con diferente forma y DNA
o RNA.
Tomado de
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/203016/Modulo_EXE/leccin_2_clasificacin_de_los_vir
us.html
Para que un virus pueda replicarse, debe inducir a una célula hospedadora a sintetizar
todos los componentes esenciales necesarios para producir más viriones. Luego, estos
componentes deberán ensamblarse en nuevos viriones que escaparán de la célula. La
replicación vírica se divide en cinco etapas (Figura 18):
Replicación viral
1. Unión (adsorción)
Es la etapa inicial donde el virión se une a la célula hospedadora susceptible
a través de receptores.
3. Síntesis
Se sintetizan los ácidos nucleicos y las proteínas del virus por el metabolismo
celular redirigido por el virus.
4. Ensamblaje
Se unen las cápsides y los componentes de la membrana del virus (en caso
de que sea envuelto) y se empaquetan junto con el genoma vírico formando
nuevos viriones.
5. Liberación
En esta última fase los viriones maduros son liberados de la célula hospedera.
Tomado de https://eduardosetti.wordpress.com/2014/04/04/sobre-virus-malos-y-buenos/
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U1 Microbiología y taxonomía microbiana
Taxonomía microbiana
Todos los ácidos nucleicos virales, sin importar cuál sea su condición deben ser
transformados a mRNA para poder ser traducidos por la maquinaria celular, y en algunos
casos este proceso es único de los virus, como la retrotranscripción o la transcripción
inversa, donde el RNA monocatenario pasa a DNA por medio de una enzima llamada
transcriptasa inversa o retrotranscriptasa (Ej. Retrovirus).
B) Infección latente, donde existe una demora entre la infección por el virus y los
sucesos de lisis. La etapa latente en la infección vírica de una célula animal se debe
a que los virus existen en un estado relativamente inactivo en el interior de las
células, donde sigue produciéndose la transcripción a un bajo nivel pero el DNA viral
no se replica.
Tomado de
http://biologocalentano.blogspot.mx/2
012/06/91-mecanismos-de-
transferencia-natural.html
Algunos virus son parásitos de otros virus, conocidos como virus auxiliares. Algunos de
estos virus llamados defectivos dependen de virus intactos del mismo tipo para que les
proporcionen las funciones necesarias. Otro tipo de virus auxiliares son los satélite que
dependen de virus que no están emparentados con ellos para que actúen como auxiliares.
Existen otras estructuras muy similares a los virus como los viroides que ocasionan
muchos problemas en plantas y los priones que ocasionan enfermedades en animales
(encefalopatía espongiforme bovina o enfermedad de las vacas locas) y en humano
(enfermedad de Creutzfeldt-Jakob) (Madigan et al., 2009).
Viroides y priones
Viroides
Se definen como moléculas infecciosas de RNA que se diferencian de los
virus en que carecen de cubierta proteica.
Priones
Son partículas cuya forma extracelular diferenciada está formada
únicamente por proteínas y que no contienen material genético.
Como los virus se replican únicamente en el interior de las células vivas, su cultivo requiere
el uso de hospederos adecuados. Para el estudio de los bacteriófagos se utilizan cultivos
puros en medios líquidos o semisólidos. La mayoría de los virus animales y algunos
vegetales pueden crecer en cultivos tisulares o celulares, lo que ha facilitado la
investigación sobre ellos. Los virus vegetales, son los más difíciles de trabajar, porque su
estudio requiere el uso de la planta completa en muchas ocasiones, lo que lo hace un
proceso lento.
Durante muchos años, los investigadores han cultivado virus de animales inoculando
huéspedes animales adecuados o huevos embrionados. Para ello se emplean huevos de
gallina fertilizados incubados durante aproximadamente 6 a 8 días después de la puesta y
posteriormente se sigue el procedimiento que se muestra a continuación (Willey et al., 2009)
(Figura 20):
Tomado de:
http://www.actualidadavipecuaria.com/alfabiol/productos/servicios/analisisdelaborato
rio/diagnostico-virologico.html
Tomado de http://ticotal.cr/boletin-informativo/ticotal-boletin-informativo-n19-
setiembre-2014.html
Las células en la capa de agar superior crecerán formando una capa continua, opaca, o
“césped”. En el lugar donde caiga un virión se producirá la lisis de las células y por lo tanto
una placa o zona clara en el césped en el agar debido a la infección de las células por el
virus (Willey et al., 2009).
Actividades
Autorreflexiones
Cierre de la unidad
En esta primera unidad vimos una introducción al mundo de la microbiología, con el estudio
de la taxonomía, filogenia. Conociste en qué se basan y cuáles son las grandes
clasificaciones de los seres vivos, además de conocer los fundamentos de la nomenclatura
microbiana, que es tan importante para el biotecnólogo.
Fuentes de consulta