determinar la cantidad de concentración en una solución de algún

compuesto utilizando las fórmulas ya mencionadas ayudar en la

determinación de estructuras moleculares la identificación de unidades
estructurales específicas, ya que estas tienen distintos tipos de
absorbancia (grupos funcionales o isomerías) determinar constantes de
disociación de indicadores ácido-base

Esa técnica es una forma de detectar y medir la cantidad de cierta

sustancia que hay en una muestra determinada, utilizando el
espectro de luz reflejado o absorbido por la muestra analizada. Es
una técnica muy sensible y precisa, por tal motivo es utilizada en
laboratorios de todo el mundo para analizar sustancias tales como el
ADN, determinar la cantidad de sustancias químicas, analizar
muestras biológica (ya que la luz utilizada no afecta a la muestra) y
en un sin fin de estudios y análisis dentro de la biotecnología. Es muy
utilizada sobre todo en el desarrollo de nuevos medicamentos, para
determinar exactamente la cantidad de sustancia que hay en una
muestra.

La espectrofotometría UV/Visible nos permite confirmar que contamos con cantidad suficiente de
ácidos nucleícos (DNA/RNA) de calidad adecuada antes de llevar a cabo ensayos de PCR
cuantitativa en tiempo real (QRTPCR), análisis de SNPS (Polimorfismos de nucleótido único) o la
secuenciación automática de muestras de DNA de plásmidos, cósmidos, productos de PCR…

El ADN tiene su absorbancia máxima en 260 nm (al igual que el ARN y

las proteínas tienen un rango de absorción aproximado de 210 nm  a
300 nm). Normalmente para ver si el ADN está bien purificado, podemos
hacer una estimación recurriendo al cociente de absorción A260/A280 y
menos frecuentemente al de A260/A230. Con el primer cociente vemos el
posible contenido en proteínas de la muestra, ya que la absorbancia
máxima de éstas es a 280 nm. Cuanto mayor sea este cociente menor
cantidad de proteínas tiene la muestra. Se consideran puros cuando
tienen un cociente sobre 1,8-2,0. También puede usarse la longitud de
325 nm, en la que se verá posible suciedad de la cubeta2. Esto se resume
en la tabla.

Con el segundo cociente podemos saber la cantidad de

contaminantes que hay en la muestra del tipo: hidratos de
carbono, péptidos, fenoles, compuestos aromáticos, etc, que
absorben a 230 nm. Se considera que las muestras son puras con
un cociente de 2,22.
Los aminoácidos aromáticos tirosina y triptófano confieren a las proteínas su característico
espectro de absorción ultravioleta (UV) a 280 nm. La fenilalanina y los puentes disulfuro
también pueden contribuir a la absorción en esa longitud de onda, aunque ligeramente. Este
método es simple y requiere de un volumen de muestra extremadamente pequeño ya que los
nuevos espectrofotómetros emplean un sistema de retención de muestra durante la medición.
Sin embargo, la muestra proteica debe ser pura y no contener componentes no proteicos con
el mismo espectro de absorción, tales como ácidos nucleicos contaminantes [4]. Se debe
conocer la secuencia exacta de los aminoácidos de la proteína analizada y calcular el
coeficiente de absorción específico de esa proteína previo a la determinación de la
concentración en solución [5, 6]. Este método es el más rápido, pero propenso a errores.