Conceptos básicos de cinética química

Las reacciones químicas se clasifican en:

Monomoleculares, bimoleculares y trimoleculares según el
número de reaccionantes sea uno, dos o tres.
A  P
A+B  P
A+B+C  P

Las reacciones químicas también se clasifican en: reacciones de

orden cero, primer orden, segundo orden y tercer orden
dependiendo de cómo la velocidad de reacción es influenciada
por la concentración de los reaccionantes.

V = -d[S] = d[P]
dt dt
 Conceptos básicos de cinética química
En una reacción de orden cero, la velocidad de formación del
producto es independiente de la concentración de sustrato:
v=k
En una reacción de primer orden la velocidad de formación de
los productos es directamente proporcional a la concentración
del sustrato:
v = k [A]
Una reacción de segundo orden es aquella en la que la
velocidad de formación del producto depende
•de la concentración de dos sustratos (reacción de
condensación): v = k [A1] [A2]
• del cuadrado de la concentración de un único sustrato
(reacción de dimerización): v = k [A]2
3
Centro
activo

4
5
E + S [ES] E + P
 Enzimas

• Proteínas con actividad catalítica de los seres vivos.

• Unidades del Metabolismo
• Regulan la velocidad de las reacciones químicas
espontáneas (DG-).
• No promueven reacciones no-espontáneas (DG +).
• Incrementan la Vel. De reacción 103 a 1012 veces sin
afectar el sentido de la reacción.
• No forman parte del producto de la reacción.
9
10
11
• Se unen a los reactivos (sustratos)
reduciendo la energía de activación

• Cada enzima tiene una forma única con

un sitio o centro activo en el que se une al
sustrato

• Después de la reacción, enzimas y

productos se separan.

• Las moléculas enzimáticas no han

cambiado después de participar en la
reacción
Factores que afectan la velocidad de una
reacción enzimática

1. Concentración de Enzima
2. Concentración de sustrato
3. pH
4. Temperatura
PROPIEDADES GENERALES
• AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
• De 106 to 1012 veces vs sin enzima.
• Aún más rápido que los catalizadores químicos.

• CONDICIONES DE REACCIÓN
• Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
• pH neutro (5-9), la mayoría 6.5 – 7.5
• Presión atmosférica normal

• CAPACIDAD DE REGULACIÓN
• Por concentración de sustrato
• Por concentración de enzima
• Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato)
• Por inhibidores no competitivos (modificación covalente de la enzima)
• Por regulación alostérica

• ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIÓN

• Interacción estéreo-específica con el sustrato
• No hay productos colaterales
Las enzimas cumplen su papel catalítico gracias a:

• Fijación estereoquímicamente complementaria del

substrato

• Transformación catalítica del mismo

En ambas funciones participan:

• Cadenas laterales de los aminoácidos

• Grupos o moléculas no proteicas:
❖ Grupos prostéticos
❖ Iones metálicos
❖ Cofactores
Los siguientes hechos:

• Especificidad de la reacción enzimática

• Carácter heterogéneo de la catálisis enzimática

Nos llevan a postular la existencia de un Centro Activo en la molécula

de enzima, capaz de:

• Fijar específicamente al substrato

• Transformarlo catalíticamente.
La unión del sustrato es muy específica
• Complementariedad geométrica
• Complementariedad de cargas, uniones iónicas
• Modelos:
➢ Encaje inducido
➢ Llave – cerradura.
➢ Estado de transición
 Teorías de la acción enzimática, 1
Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer)

Substrato y enzima se acoplan de forma

estereospecífica, de la misma manera que una
llave se ajusta a su cerradura.

Modelo aceptado durante mucho tiempo; hoy

se considera insuficiente al no explicar algunos
fenómenos de la inhibición enzimática.

Estructuras rígidas complementarias.

 Teorías de la acción enzimática, 2
Modelo de Ajuste Inducido (Koshland)

Tanto la enzima como el substrato sufren una alteración

en su estructura por el hecho físico de la unión.

Está mucho más de acuerdo con todos los datos

experimentales conocidos hasta el momento.
 Teorías de la acción enzimática, 3
Estabilización del Estado de Transición

En la actualidad la teoría del Ajuste Inducido se amplía

definiendo la acción enzimática como:

“El Centro Activo enzimático es en realidad

complementario no al substrato o al producto,
sino al estado de transición entre ambos”
21
Una enzima puede unir dos sustratos en su sitio activo
 Cinética Enzimática
➢ La cinética enzimática es el análisis cuantitativo del efecto de
cada uno de los factores que intervienen en la actividad
enzimática, que se evalúa a través de la velocidad de la reacción
catalizada.
➢ Las variables más importantes son:
• Concentración de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
• pH
• Temperatura
• Velocidad de reacción
• Concepto y medida
• Ecuación de velocidad (o ecuación cinética) de una reacción
• Orden de reacción; constante de velocidad; determinación experimental
• Relaciones concentración-tiempo: ecuaciones de velocidad integradas
• Cinéticas de orden cero, de primer orden y de segundo orden
• Vida media
• Energía de activación
• Variación de la constante de velocidad con la temperatura
• Mecanismos de reacción
• Procesos elementales
• Molecularidad
• Catálisis

24
Mecanismo de Michaelis-Menten

La E cataliza
selectivamente
ciertos S

Teoría cerradura
(sitio activo de la
E) – llave (S): alta
especificidad
26
Mecanismo de Michaelis-Menten
28
29
Curva de Evolución de los componentes de
la reacción
 v1
E +S ES v3
E +P
v2
 •Reacciones catalizadas por enzimas

Reversible

Irreversible simplificada
33
Mecanismo de Michaelis-Menten

El mecanismo de la catálisis enzimática propuesto por

Michaelis y Menten se basa en considerar la formación
del complejo enzima-sustrato (ES)

k1 k3
E + S k2
ES P+E

La velocidad de una reacción catalizada por enzimas en

la que el sustrato S se convierte en producto P,
depende de la concentración de enzima E (aunque esta
no sufra ningún cambio neto)
La derivación de la ecuación se basa en:

1) que la concentración de S es mayor que la

concentración de E

2) La concentración de Producto al inicio de la

reacción es insignificante

3) el paso limitante de la velocidad es la

transformación de ES a E+P
 En la reacción, k1, k2 y k3 son las constantes cinéticas individuales
de cada proceso y también reciben el nombre de constantes de
velocidad. Según esto, podemos afirmar que:

v1 = k1 [E] [S]
v2 = k2 [ES]
v3 = k3 [ES]

Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al

sustrato (ES), de forma que la concentración total de enzima,
[ET], (que es constante a lo largo de la reacción) es:

[ET] = [E] + [ES]

Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]
36
• Este modelo cinético adopta la hipótesis del estado
estacionario, según la cual la concentración del
complejo enzima-sustrato es pequeña y constante a lo
largo de la reacción. Por tanto, la velocidad de formación
del complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la de su
disociación (v2+ v3):
v1 = v 2 + v 3
• Además, como [ES] es constante, la velocidad de
formación de los productos es constante:
v = v3 = k3 [ES] = constante.

• Como v1=v2+v3, podemos decir que:

k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]
37
Despejando [ES], queda

que: , siendo , en donde la

expresión (k2+k3)/k1 se ha sustituído por KM, o constante de Michaelis-

Menten.

Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formación del producto

es:

v = v3 = k3 [ES] =

38
• A concentraciones de sustrato pequeñas
([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]
Como los términos entre paréntesis son constantes, pueden englobarse en
una nueva constante, kobs, de forma que la expresión queda reducida a:
v = kobs [S]
con lo cual la reacción es un proceso cinético de primer orden.

• A concentraciones de sustrato elevadas

([S] >> KM), v = k3 [ET]
La velocidad de reacción es independiente de la concentración del
sustrato, y por tanto, la reacción es un proceso cinético de orden cero.
Además, tanto k3 como [ET] son constantes, y nos permite definir un
nuevo parámetro, la velocidad máxima de la reacción
(Vmax): Vmax = k3 [ET]
que es la velocidad que se alcanzaría cuando todo la enzima disponible se
encuentra unido al sustrato.
39
Si introducimos el parámetro Vmax en la ecuación general
de la velocidad, (la fórmula recuadrada anteriormente),
obtenemos la expresión más conocida de la ecuación
de Michaelis-Menten:

40
Biochemistry

41
42
43
44
Mecanismo de Michaelis-Menten

k1
E+S ES
k-1

ES
k2
E+P
V0 = k2 ES 

Aplicando el enfoque del estado estacionario al

intermediario ES

d ES 
= k1 E S  − k−1 ES  − k2 ES  = 0
dt
46
Mecanismo de Michaelis-Menten

k1 E S 
ES =
k −1 + k 2

Si [Et] es la concentración total de enzima

Et  = E  + ES 
k1 (Et  − ES )S 
ES =
k −1 + k 2
Reordenando
k1 Et S 
ES  =
k−1 + k2 + k1 S 
 Mecanismo de Michaelis-Menten

ES  = E0 S 

(k −1 + k2 ) / k1 + S 
Constante de Michaelis-Menten (KM)
Parámetro
de actividad

ES  = E0 S  enzimática:

valor grande
K M + S  de KM indica
baja
actividad
Recordando V0 = k2 ES 
que V =
k E S 
K + S 
0
2

M
0
Mecanismo de Michaelis-Menten

k 2 E0 S 
V0 = •
K M + S 
Vo= Vmax todos los sitios
activos están ocupados y no hay
moléculas de E libre.
• KM= [S] cuando V = ½ Vmax

V0=Vmax
cuando [S] >>> KM
V0
V0 = k 2 E0 = VMAX

KM representa la cantidad de
sustrato necesaria para fijarse a
cuando [S] <<< KM
la mitad de la E disponible y
producir la mitad de la Vmax
V0 =
k2
E0 S 
KM

Ecuación de Michaelis-Menten
 Paramétros cinéticos

Son las constantes que aparecen en la

ecuaciones de velocidad

Están compuestos por las constantes de

velocidad de los pasos que constituyen la
reacción catalizada
Unidades
Velocidad máxima
Constante catlítica (kcat)
55
56
Constante de Michaelis-Menten (Km)
58
Constante de especificidad
60
¿Por qué determinar Km?

Km es una medida de la afinidad de la enzima

por el sustrato cuando k3<k2. Km=(k 2+k3)/k1

Km establece un valor aprox. para el valor

intracelular de sustrato

Km es constante para una enzima dada,

permite comparar enzimas de diferentes
organismos o tejidos o entre distintas
proteínas

Un cambio en el valor de Km es un modo de

regular la enzima
63
64
Cuando:

Vo= Vmax Todos los sitios activos están

ocupados y no hay moléculas de E libre.

KM= [S] Sí... ½ Vmax

KM representa la cantidad de sustrato

necesaria para fijarse a la mitad de la E
disponible y producir la mitad de la Vmax

KM representa la concentración del sustrato en

una célula
Problema 1

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68
69
70