Determinación de Cobre y Zinc en cabello por espectrofotometría de absorción

atómica.
Gerson Hernandez (1644131) Isabel Cristina Santiago (1730777); Duvan Ibarguen (1731706.)
Departamento de Química, Universidad del Valle.
Fecha de Realización de la práctica: Julio 27 2019
Fecha de Entrega: Agosto 10 de 2019

Resumen

Se determinó la cantidad de metales pesados: el Cobre y el Zinc, en una muestra de cabello y esto se llevó a cabo por
medio de una reacción oxido-reducción con Ácido Nítrico 3M. Posterior a ello se realizó una curva de calibración
por patrón externo a partir de una solución de 200 ppm de cada metal y se procedió a tomar la absorbancia de las
soluciones patrones y de la muestra por medio de Absorción Atómica de Llama. Obteniendo como resultado que la
cantidad de Cobre presente fue 35,31 ppm y la de Zinc fue 93,57 ppm.

Datos y Cálculos.
Se realizó la determinación de Cu y Zn en una muestra de cabello humano por espectrofotometría de absorción
atómica utilizando el método de patrón externo, a continuación se presentan los cálculos.

1. Cálculos determinación de cobre

Se prepararon 5 estándares en balones volumétricos de 0,01L para la curva de calibración a las siguientes
concentraciones: 0.48, 1.44, 1.92, 2.88 y 3.12 ppm teniendo en cuenta que el rango de dichas soluciones fue 0.4ppm
y 3,2ppm. Para calcular las alícuotas necesarias para obtener estas concentraciones se empleó la ecu 1.

𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2 Ecu 1

Teniendo en cuenta que estas soluciones estándares se prepararon a partir de 25 mL de una solución estándar que
contiene concentración de Cu de 4,8ppm el volumen necesario para la concentración 0,48pppm despejando V1 es:

0,48𝑝𝑝𝑚 ∗ 0,01𝐿
𝑉1 = ∗ 1000𝑚𝐿 = 1 𝑚𝐿
4,8𝑝𝑝𝑚

Se realizó exactamente el mismo cálculo para las concentraciones restantes y los resultados se presentan en la tabla
1.

Tabla 1. Alícuotas calculas para la preparación de 5 soluciones estándar de Cu

Concentración Volumen
(ppm) calculado (mL)
0,48 1
1.44 3
1,92 4
2,88 6
3,12 6,5

1
Se realizó el tratamiento de la muestra realizando un lavado del cabello con un detergente no iónico, luego seco la
muestra en un horno y se pesaron 801,5 mg de la misma que se sometieron a una digestión con 5mL de ácido nítrico
concentrado seguido de esto se diluyo en un balón volumétrico de 10mL realizando constantes lavados con agua
destilada del vaso donde estaba contenida la muestra hasta completar el aforo del balón.

Se preparó un blanco con 5 mL de ácido nítrico se diluyo en un balón volumétrico de 10 mL y se tomó la lectura en el
equipo.

Se realizó una curva de calibración para el experimento utilizando un equipo de absorción atómica para la medida de
los 5 estándares, la muestra y el blanco por triplicado obtenido los resultados:

Tabla 2. Datos para la curva de Calibración del Cobre.

Estándar Concentración Promedio (ABS)

ppm
1 0,48 0,021
2 1,44 0,074
3 1,92 0,1
4 2,88 0,165
5 3,12 0,169
Blanco 0,001
Muestra 0,157

Debido a que se tenía un dato dudoso el cual se aprecia en la tabla 2 y es el correspondiente a la absorbancia del
estándar 4 que se podría decir que es casi que igual a la absorbancia del estándar 3 se hizo una prueba Q para
determinar si se tenía en cuenta o no este dato. La ecuación estadística para esta prueba es:

Ecu 2

Reemplazando la Ecu 2 se obtiene que Q calculado es:

|0,169 − 0,165|
= 0,027
0,169 − 0,021

El valor de Q tabulado para una muestra de 5 mediciones es 0,717 al ser Qcal<Qtab no se rechaza el valor
sospechoso y se tiene en cuenta para la curva de calibración.

Teniendo en cuenta los datos de la tabla 2 la curva de calibración se presenta en la Fig 1.

2
 Curva determinación de Cobre por Absorción
atomica.
0,2
y = 0,058x - 0,0084
0,15 R² = 0,9958
Absorbancia

0,1

0,05

0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5
ppm

Fig 1. Curva de calibración para la determinación de Cobre en cabello.

La ecuación de la recta es:

y = 0,058x − 0,0084 Ecu 3

Los datos estadísticos para la regresión se presentan en la tabla 3

Tabla 3. Estadística de la regresión para la curva de calibración de Cu.

Estadística de la regresión
PENDIENTE (b) 0,058
INTERCEPTO (a) -0,0084
ERRORES ALEATORIOS EN 1,085916167
DIRECCIÓN Y (Sy/x)
DESVIACIÓN ESTANDAR DE 0,503360783
LA PENDIENTE (Sb)
DESVIACIÓN ESTANDAR DEL 1,103249257
INTERCEPTO (Sa)
R2 0,9958
LD 3,301 ppm
LC 11,024 ppm

Teniendo en cuenta la señal de absorbancia y la ecu 3 se encontró que la concentración de Cu en la solución

restando la absorbancia del blanco :

(0,157 − 0,001) + 0,0084 𝑚𝑔 𝐶𝑢

𝑥= = 2,83
0,058 𝐿

Teniendo en cuenta que la muestra se trató con 5 mL de ácido nítrico y posteriormente se diluyo en 10 mL y que
como ya se mencionó el peso de la muestra fue de 801,5mg la concentración de Cu en la muestra es:

3
 mg Cu 0,01L 1 1000 mg 1g mg Cu
2,83 ∗ ∗ ∗ ∗ = 35,31 mg = 35,31 ppm
L 1 801,5 mg cabello 1g 0,001 kg Kg cabello

2. Cálculos determinación de Zinc.

Se prepararon 5 estándares en balones volumétricos de 0,01L para la curva de calibración a las siguientes
concentraciones: 0.12, 0.36, 0,48, 0.72 y 0.78 ppm teniendo en cuenta que el rango de dichas soluciones fue 0.1 ppm
y 0,8 ppm. Se emplearon los mismos volúmenes de 1.0, 3.0, 4.0, 6.0 y 6.5 mL que se usaron para la preparación de la
curva de Cu teniendo en cuenta que dichas alícuotas se tomaron de una solución de Zn a 1.2 ppm con lo
anteriormente dicho se calcularon las concentraciones de la curva ya mencionadas a partir de la Ecu 1 de la misma
manera que se realizó con el cobre.

Para la determinación de Zinc se tomó 1 mL de la muestra ya diluida a 10 mL y se diluyo nuevamente en un balón

volumétrico de 25 mL. Para el blanco se tomó 1 mL del mismo y se diluyo en un balón volumétrico de 25 Ml, se tomó
la lectura de los estandares,la muestra y el blanco en el equipo AA. Los resultados se presentan en la tabla 4.

Tabla 4. Datos para la curva de calibración de Zinc

Estándar Concentración Promedio (ABS)

ppm
1 0,12 0,059
2 0,36 0,090
3 0,48 0,127
4 0,72 0,241
5 0,78 0,279
Blanco 0,008
Muestra 0,100

A partir de los datos de la tabla 4 se construyó la curva de calibración de la Fig 2.

Curva determinación de Zinc por Absorción atomica.

0,3
0,25 y = 0,3436x - 0,0099
R² = 0,9305
Absorbancia

0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
ppm

4
Fig 2. Curva de calibración para la determinación de Zinc en cabello.

La ecuación de la recta es:

y = 0,3436x − 0,0099 Ecu 4

Los datos estadísticos para la regresión se presentan en la tabla 5

Tabla 5. Estadística de la regresión para la curva de calibración de Zn.

Estadística de la regresión
PENDIENTE (b) 0,3436
INTERCEPTO (a) -0,0099
ERRORES ALEATORIOS EN 1,009889847
DIRECCIÓN Y (Sy/x)
DESVIACIÓN ESTANDAR 1,872479516
DE LA PENDIENTE (Sb)
DESVIACIÓN ESTANDAR 1,026009427
DEL INTERCEPTO (Sa)
R2 0,9305
LD 3,068ppm
LC 10,250ppm

Teniendo en cuenta la señal de absorbancia y la ecu 4 se encontró que la concentración de Zn en la solución

restando la absorbancia del blanco:

(0,100 − 0,008) + 0,0099 𝑚𝑔 𝑍𝑛

𝑥= = 0,30
0,3436 𝐿

Teniendo en cuenta que la muestra se trató con 5 mL de ácido nítrico y posteriormente se diluyo en 10 mL y que
como ya se mencionó el peso de la muestra fue de 801,5mg la concentración de Cu en la muestra es:

mg Zn 0,01L 1 1000 mg 1g mg Zn
0,30 ∗ ∗ 0,025L ∗ ∗ ∗ = 93,57 = 93,57ppm
L 0,001L 801,5 mg cabello 1g 0,001 kg Kg cabello

Resultados y discusión

Teniendo como objetivo la determinación de
metales se usó el método de absorción atómica
para la detección Cu y Zn en una muestra de
cabello humano. El análisis de absorción atómica
se basa en que cada elemento tiene un número de
electrones asociado con su núcleo. Cada átomo o
molécula en su estado natural, tiene una
estructura específica de sus niveles de energía, el
nivel de más baja energía es llamado estado
fundamental, que es el estado de energía preferido
naturalmente. Cuando se le aplica cierta energía a
un átomo, esta energía es absorbida provocando
así la promoción de un electrón a un nivel de
energía mayor el cual es conocido como estado
excitado, debido a la inestabilidad de este estado
el átomo volverá a su estado fundamental
5
liberando una energía luminosa; teniendo en
cuenta que cada metal tiene una longitud de onda
característica a la cual se absorbe, en esta técnica
se usan lámparas del elemento que se está
midiendo y esto hace que el método este
relativamente libre de interferencias espectrales.
La cantidad de energía absorbida en la llama es
proporcional a la concentración del elemento en la
muestra sobre un limitado rango de concentración.
El espectrofotómetro de absorción atómica es un
equipo que mide la cantidad de radiación
absorbida cuando esta atraviesa una muestra. Este
equipo está compuesto por cuatro partes
principales las cuales son:
Fuente de radiación la cual emite una radiación
electromagnética discontinua en la zona visible o
en la zona del ultravioleta. La fuente de radiación
puede ser de dos tipos, lámparas de cátodo hueco
y lámparas de descarga sin electrodo; la primera
que fue la que se usó en la práctica consta de un
cátodo hueco (como su nombre lo indica) del
elemento a analizar y un ánodo de wolframio
cerrados herméticamente en un tubo de vidrio
lleno con un gas inerte a una presión de 1 a 5 torr.
Atomizador que se encarga de volatilizar la
muestra y atomiza para producir un vapor atómico.
El tipo de atomizador más usado es la llama, el cual
consiste en la combinación de un combustible y un
oxidante que en este caso fueron acetileno – aire.
Monocromador que selecciona la longitud de onda
de la radiación policromatica que proveniente de la
fuente. Estos constan de una rendija de entrada,
una lente colimadora o espejo, un prisma o red
dispersora, un elemento focalizador y una rendija
de salida que es la encargada de aislar la longitud
de onda deseada.
Detector encargado de transformar la señal óptica
que recibe en una señal eléctrica que permite
medir la radiación absorbida. El detector utilizado
en un instrumento de absorción atómica es un
detector de fotones (también conocidos como
detectores fotoeléctricos), los cuales se encargan
de absorber la radiación incidente y convertirla en
fotocorriente.
Para la cuantificación de cobre (Cu) y zinc (Zn) en
una muestra de cabello, se digesto la muestra con
ácido nítrico (𝐻𝑁𝑂3 ) el cual ayuda a que los iones
de Cu y Zn en la muestra se separen, posterior a
esto se diluyo la muestra y se realizó el análisis de
las concentraciones de estos iones, con la
respectiva curva de calibración (ver fig 1 y 2), se
obtuvo una absorbancia de 0,100 para el contenido
de Zinc (se empleó una lámpara de cátodo hueco
de Zn) y una absorbancia de 0,157 para el
contenido de cobre (se empleó una lámpara de
cátodo hueco de Cobre) y se utilizó como
combustible y oxidante una mezcla de
acetileno/aire el donde la llama alcanza una
temperatura de 2100ºC hasta 2400ºC1 , dando
finalmente como resultado las concentraciones de
35,31 ppm Cu y 93,57 ppm Zn en la muestra de
cabello humano.
La importancia de la cuantificación de estos
elementos en el cabello se debe a que tanto el Cu
como el Zn tienen gran papel en el crecimiento y
desarrollo de los seres vivos, pero también es
importante la concentración en la que se
encuentran en el cuerpo puesto que si estos no se
encuentran en un intervalo determinado pueden
causar deficiencias y alteraciones en el
metabolismo del individuo como también ser
tóxicos para la salud.
Un nivel bajo del zinc mineral en el cabello es uno
de los mejores indicadores de malnutrición
general. Los síntomas asociados clínicamente
incluyen retardo, decrecimiento en niños, lento
desarrollo sexual, mala cicatrización, eczemas,
bajos niveles de testosterona, ceguera nocturna,
impotencia, problemas de la próstata, y pérdida
del gusto. Alimentos ricos en proteínas son
generalmente la mejor fuente de zinc. Infecciones,
lesiones traumáticas, enfermedad gastrointestinal,
6
quemaduras, o cirugía aumentan era válido para adultos con peso aproximado de 70
considerablemente la necesidad de zinc. Kg.

Una alta proporción de zinc sugiere un bajo nivel Uno de los metales cuantificados en la muestra fue
de cobre en el hígado y un reducido metabolismo el Cobre, el cual es un excelente conductor del
de drogas, así como una desintoxicación de calor y electricidad donde su capacidad funcional
estrógeno2. se altera muy poco con la exposición al aire seco5.
Al cuantificar experimentalmente la cantidad de Cu
La concentración de Zn normal en cabello humano
presente en el cabello por medio de una reacción
de acuerdo a la international zinc nutrition
redox como la que se muestra a continuación:
consultative group (IZiNCG) es 200 ppm para un
adulto normal con peso de 70 Kg3, de acuerdo a
REDUCC: 4HNO3 + 2e- = 2NO2 + 2H2O + 2NO3 -
esto el individuo tiene una insuficiencia Zn, lo cual
sugiere una mejor dieta de Cu y Zinc, pero sin
OXIDAC: Cu - 2e = Cu2+
excesos de ambos elementos puesto que estos
tienen una relación donde sí se incrementa mucho __________________________________________
la concentración de Zn puede disminuir la
concentración de Cu y viceversa. Vale la pena 4HNO3 + Cu = Cu(NO3)2 + 2NO2 (gas) + 2H2O
aclarar que este es el valor normal en tejidos
humanos (para este caso cabello) de un adulto de Posterior a ello se llevó a cabo la lectura de la
70 Kg sin embargo se desconoce por completo la absorbancia por medio de absorción atómica de
edad y el peso del individuo donador de la muestra llama, donde se obtuvo que hay aproximadamente
de cabello, lo cual no garantiza que esta asunción 35,31 ppm de Cobre. Siendo este valor aceptable
sea del todo veraz. ya que la cantidad mínima que se podría obtener
de acuerdo al límite de cuantificación es de 11,024
Por otro lado es importante resaltar que el uso de
ppm. Sin embargo en medio de la reacción no se
cabello ha sido justificado por su fácil obtención y
descarta la presencia de interferentes químicos
por reflejar información más antigua en
como la presencia de aniones que forman
comparación con la orina, la sangre y la saliva, por
compuestos de baja volatilidad con el analito y
lo que resulta útil en caso de determinar la
reducen así su velocidad de atomización, lo que
exposición crónica a cierta sustancia; además, el
origina resultados menores a los esperados y
cabello es fácil de transportar y tiene buena
también las interferencias espectrales como el
estabilidad durante el almacenamiento a
traslapamiento de bandas moleculares por matriz
temperatura ambiente. En caso de exposición a
de la muestra que es todo lo que acompaña al
metales pesados, es necesario considerar que,
analito y el entorno en que se encuentra6.
debido a que el cabello crece aproximadamente 10
mm por mes, sirve como muestra para hacer un
Respuesta de las preguntas.
seguimiento a largo plazo de exposiciones pasadas
y recientes, reflejando concentraciones medias de
1. Consulte y resuma sobre la aplicación
exposición en los meses anteriores. Los niveles de
de la espectrometría de absorción
metales presentes en el cabello pueden variar en
atómica en otros análisis clínicos.
virtud de algunos factores como la edad, el sexo, el
color y el cuidado del cabello, el hábito de fumar y
R// A continuación se presentan las aplicaciones en
los factores étnicos4 lo cual se vio reflejado en la
diversos campos7:
comparación de la concentración de Zn pues solo

7
-Ciencia forense: se utiliza tanto para la detección
de trazas de elementos en los casos de
armas de fuego y toxicología (Envenenamiento
por Plomo o Mercurio).
-Ciencias ambientales: análisis de aguas residuales
y potables y análisis de fertilizantes y tierras.
-Farmacéutica: la determinación de
concentraciones de drogas terapéuticas en fluidos
biológicos.
-Alimentos: control de calidad en los alimentos y
determinación de composición cárnica de
embutidos y conservas.
-Ciencias biológicas: su objetivo es confirmar la
necesidad de controlar las impurezas de Hg en
nano diamantes.
-Ciencias médicas: medición de electrolitos.
2. Que métodos alternativos, al usado en
la práctica, se reportan en la literatura
para la determinación de metales en
fluidos biológicos?
R// A continuación se presentan otros métodos
utilizados para la determinación en fluidos
biológicos8:
- Plomo en sangre: la sangre entera anti-
coagulada con EDTA, se diluye once veces con
triton –APDC y se efectúa la lectura en estas
condiciones por absorción atómica-Horno de
grafito
- Mercurio en orina: el mercurio inorgánico
contenido en la muestra es transformado en un
complejo soluble por la L-cisteína, luego es
liberado por reducción y cuantificado
inmediatamente por un detector UV. Los vapores
mercuriales son arrastrados por una corriente de
aire hasta una celda colocada en el paso de un haz
luminoso producido por una lámpara de mercurio.
La concentración es proporcional a la absorbancia
obtenida.
- Arsénico total y combinado con orina: los
compuestos arsenicales presentes en la orina se
transforman a arsénico inorgánico As2O5 por la
acción del persulfato de sodio en medio alcalino.
Luego se extrae con tolueno en medio acido e
ioduro de potasio. A una alícuota de la fase
orgánica se le extrae el arsénico con una solución
de níquel-nitrato para ser determinado por
absorción atómica (horno de grafito
Conclusiones
Se concluyó que la determinación de metales como
el Cu y Zn por absorción atómica de llama es un
técnica eficaz sin embargo los valores aceptados
dependerán del individuo, sexo, edad y otras
variables que ya fueron mencionadas.
Se concluyó que los resultados no están exentos de
interferencias de matriz lo que podría variar el
resultado del valor aceptado.
Referencias.
(1) Skoog, D. A.; West, D. M.; Holler, F. J.;
Berenguer Navarro, V. Fundamentos de
química analítica; Reverté , 1997.
(2) González, F.; Beltrán, G.; García De, A.;
Comet, J.; González Estecha, M.; González
Revaldería, J.; Huerta, H.; Ruiz De Alda, M.;
Virgós, P.; Seijas Martínez-Echevarría, V.
Metodología recomendada para la
medición del contenido de zinc en
especímenes biológicos; 2003; Vol. 22.
(3) López de Romaña, D.; Castillo D, C.;
Diazgranados, D. Rev. Chil. Nutr. 2010, 37
(2), 234–239.
(4) Nd, B. N.; Rosa Tirado Amador, L.; Damián
González-Martínez, F.; José Martínez
Hernández, L.; Odon, E.; Alberto Wilches
Vergara, L.; Nelson Celedón-Suárez, J. .
(5) ¿Qué es el cobre? - Ministerio de Minería
http://www.minmineria.gob.cl/¿que-es-
la-mineria/cobre/¿que-es-el-cobre/
(accessed Aug 10, 2019).
(6) Marcela Uribe, L. R.; Humberto Montoya,
C. CORPORACION AUTONOMA REGIONAL
DE RISARALDA CARDER UNIVERSIDAD
TECNOLOGICA DE PEREIRA FACULTAD DE
TECNOLOGIAS ESCUELA DE TECNOLOGIA
QUIMICA PEREIRA, 2011.
(7) Volkov, D. S.; Proskurnin, M. A.; Korobov,
8
 M. V. Diam. Relat. Mater. 2014, 50, 60–65.
(8) Poglesky Edgar,Ortiz Jaime, D. garcia G.
Determinación de trazas de metales en
muestras biológicas y ambientales.;
Bogota, 1992.