1. ¿Cuál es el fundamento para la determinación de las proteínas?
El reactivo de Biuret está compuesto por hidróxido de potasio, sulfato cúprico y tartrato de sodio y de potasio. El hidróxido de sodio se utiliza para alcalinizar el medio, ya que esta condición es indispensable para que se dé la reacción. Este método, se fundamenta en la capacidad que presentan los “enlaces peptídicos” (…-CONH-…) de las proteínas y de los péptidos, para formar complejos con el ión Cu++, en medio alcalino, de color rosa-violeta. La intensidad de la coloración es proporcional al número de enlaces peptídicos, y por tanto a la cantidad de proteína presente en la muestra analizada. 2. ¿Qué métodos existen para determinar proteínas totales y fraccionadas? Los principales métodos empleados para la determinación de proteínas totales son los siguientes: ● Análisis de nitrógeno por el método de Kjendahl ● Método del Biuret ● Método de Lowry Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra. Consiste en dos reacciones: 1. Reacción de Biuret 2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2 , reducen el reactivo de Folin generando un color azul. Está sujeto a muchas interferencias. Se utiliza fundamentalmente en orina. · Turbidimetría: Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas · Absorción en el ultravioleta: Se mide la absorbancia a 270nm originada fundamentalmente por los anillos aromáticos de triptófano y tirosina. · Métodos de unión a colorantes Los procedimientos más utilizados actualmente en el laboratorio clínico para el estudio de las proteínas son los siguientes: 1. Turbidimetría y nefelometría 2. Inmunodifusión 3. Electroforesis 4. Inmunoelectroforesis 5. Inmunoelectroforesis en cohete 6. Inmunofijación 7. Cromatografía 3. ¿Utilizar un standard de proteínas con una concentración por debajo de las cifras normales, lleva a resultados poco exactos? Desde punto practico en análisis de sangre no tendría ninguna relevancia ya que el estándar a utilizar en la determinación de proteínas totales va ser la albumina donde la cantidad de carga neta en la molécula es variable y depende del pH del amortiguador. Además, tendríamos que ver las LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO que se usara plasma como muestra, pero el resultado de la proteinemia estará incrementado en 0,2 g/dl debido a la presencia de fibrinógeno, que no está considerado dentro de la definición de Proteínas Totales. 4. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de las proteínas totales? Primeramente, para hablar de la importancia clínica tenemos que hablar de la determinación de proteínas totales que consiste en medir la concentración de albúmina y globulina en el suero sanguíneo. La albúmina se mide principalmente como indicativo de posibles problemas en el hígado o en los riñones, para diagnosticar déficits nutricionales o para investigar las causas de edemas, incluyendo edema pulmonar. Si los valores de globulinas totales se salen fuera de los rangos normales, se suelen determinar las diferentes fracciones de globulinas por separado (alfa-1, alfa-2, beta y gamma) mediante electroforesis. La concentración exacta de cada tipo de globulinas ofrece información de diagnóstico relevante sobre diversas enfermedades, entre ellas infecciones, trastornos del sistema inmunitario, enfermedades inflamatorias crónicas y algunos tipos de cáncer, como el mieloma múltiple o la macroglobulinemia. Patologías que cursan con aumento o disminución de proteínas:
a) Disminución en la síntesis de albúmina (insuficiencia hepática
malnutrición, malabsorción, reacción de fase aguda).
b) Aumento de su destrucción de sus pérdidas (síndrome nefrótico [pérdidas
por riñón], enteropatía pierde proteínas [pérdidas por el tubo digestivo], quemaduras extensas [pérdidas por la piel]) ● Déficit de α1-antitripsina. Da lugar a una marcada disminución de lasα1- globulinas. Se Trata de un trastorno congénito que cursa con trastorno pulmonares(enfisema)y en ocasiones hepáticos(cirrosis). ● Hipogammaglobulinemia.La disminución en las gammaglobulinas suele deberse a un déficit de IgG. ● Hipergammaglobulinemia.Sus principales causas son:
a) Estímulos mantenidos del sistema inmune (inflamaciones crónicas,
enfermedades autoinmunes, hepatopatías en que antígenos intestinales que deberían haber sido retirados por el hígado alcanzan la circulación general). b) Neoplasias linfoides B
-Inflamaciones crónicas. En los procesos inflamatorios crónicos (infecciones,
enfermedades autoinmunes, etc.), el aumento en las α1y α2 globulinas se acompaña de un incremento policlonal en las gammaglobulinas que guarda relación con la estimulación persistente de las células inmunes.
-Síndrome nefrótico. Hay reducción de la albúmina (debida a pérdida por la orina)
junto con un aumento en las α2y β-globulinas. Puede haber una disminución de las α1y las γ-globulinas.
5. ¿En que casos se solicitan determinación de proteínas en orina?