¨UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURIMAC¨

FACULTAD DE INGENIERIA

INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

INFORME N°4/ “MANTENIMIENTO DE LÍNEA CELULAR MICROBIANA”

Presentado por:
Saida Karin Gutiérrez Serrano (Cód. 192078)
Docente:

Ing. Luis Fernando Pérez Falcón

Semestre:

2023-1

Asignatura:

Biotecnología agroindustrial

Abancay - Apurímac
2023
 INFORME N°4/ “MANTENIMIENTO DE LÍNEA CELULAR MICROBIANA”

I. INTRODUCCION
Para los microorganismos, el crecimiento es su respuesta más esencial a las condiciones
fisicoquímicas ambientales. El crecimiento es el resultado de la replicación y cambios en el tamaño
de las células. Los microorganismos pueden crecen bajo una variedad de condiciones físicas,
químicas y nutricionales. En un medio nutritivo adecuado, los microorganismos extraen los
nutrientes del medio y los convierten en compuestos. Parte de estos nutrientes se utilizan para la
producción de energía y parte se utilizan para la biosíntesis y la formación del producto.
Línea Celular tiene alta capacidad de multiplicarse in vitro, establecido a partir del primer
subcultivo de un cultivo primario y que tiene las mismas características que el tejido de origen.
El cultivo de células y órganos aislados del organismo constituye una vía para resolver problemas
biológicos. (Madiga, 1999)
Las células fuera del organismo no están reguladas por el sistema nervioso ni endocrino,
comportándose totalmente independientes. En condiciones nutritivas y ambientales adecuadas se
convierten en unidades autónomas, ideales para el estudio de la estructura y comportamiento de las
células vivientes.

II. RESUMEN
En este trabajo se va presentar el procedimiento del mantenimiento de la línea celular microbiana.
Estas operaciones son muy habituales en distintas industrias, entre ellas las alimentarias. Para ello,
nos centraremos en los equipos utilizados del laboratorio de biotecnóloga Agroindustrial. Es
necesario conocer los factores que influyen en el crecimiento microbiano, ya que se necesitan
condiciones apropiadas para el recuento, las fermentaciones o la producción de proteína o masa
celular, sin embarco en el caso de preservación de alimentos estas condiciones deben evitarse.

III. OBJETIVOS
• Prolongar el ciclo de vida de los microorganismos, para que contengan sus características
morfológicas y fisiológicas de su crecimiento y desarrollo, que brinden la producción
adecuada de metabolitos de interés.

IV. FUNDAMENTO TEORICO

4.1. Mantenimiento de la línea celular:

Consiste en cambiar el medio y el recipiente, transfiriendo las células a un recipiente mayor o
diluyéndolas para que pueda continuar el crecimiento. (Crueger, 1980)
4.2. Tipos de Cultivos Celulares
• Cultivos Primarios
• Línea Celular
4.2.1. Cultivos Primarios: Cultivo de células, tejidos u órganos tomados directamente del
organismo y puestos a crecer en un medio artificial.
4.2.2. Línea Celular: Cultivo celular que tiene alta capacidad de multiplicarse in vitro,
establecido a partir del primer subcultivo de un cultivo primario y que tiene las mismas
características que el tejido de origen.
 4.3. Tipos de crecimiento celular
4.3.1. Crecimiento en monocapa: Las células se adhieren al sustrato, creciendo y
dividiéndose en una única capa celular (monocapa). Puede ser:
• Estacionario: Las células incubadas sin agitación, sedimentan y se adhieren al fondo del
envase, usualmente liso. (Toribio, 2001)
• Rotatorio: Envase de cultivo cilíndrico, que gira lentamente de modo que las células se
unen a la superficie interna del frasco.
4.3.2. Crecimiento en suspensión: Las células se multiplican en medio líquido sin adherirse
a ningún sustrato.

4.4. Evolución de una línea celular:

El crecimiento de una línea celular presenta varias fases, caracterizadas especialmente por la
velocidad especifica de crecimiento µ.

Figura 1: Curva de crecimiento celular.

Las células pueden cultivarse en suspensión o como una monocapa bidimensional que se une al
matraz de cultivo o a la placa multipocillos. El método de cultivo viene determinado por el tejido
de procedencia de las células; las células provenientes de la sangre generalmente crecen en
suspensión, mientras que las derivadas de los tejidos sólidos suelen crecer en monocapas.

4.5. Fases del crecimiento celular

Garantizar un crecimiento celular adecuado es fundamental para recopilar datos precisos en los
estudios de cultivo celular. Los recuentos celulares pueden realizarse utilizando un hemocitómetro
o un contador celular automático, que ofrece recuentos celulares más precisos.

El crecimiento celular en el cultivo ocurre en general en cuatro fases:

1. Fase de latencia: las células se están ajustando a las condiciones del cultivo y no se
dividen.
2. Fase de crecimiento logarítmico (log): las células se dividen activamente, por lo que ésta
es la mejor etapa durante la cual evaluar el crecimiento de la población o recopilar datos.
La fase logarítmica tardía es el mejor momento para realizar los pases (subcultivos) de las
células.
3. Fase meseta (estacionaria) : el crecimiento se va ralentizando a medida que las células se
acercan a la confluencia del 100 %, y las células son más sensibles al estrés o las lesiones
conforme se van acumulando los residuos celulares y se agotan los recursos.
4. Fase de descenso: la población de células vivas disminuye ya que predomina la muerte
celular.
Cuadro 1: Etapas de crecimiento celular

Modo de siembra o inoculación: A continuación, se presenta figuras que grafican modos de

siembra:

Figura 2: Procedimiento para remover microorganismo de un caldo nutritivo con asa de

inoculación.
Figura 3: Procedimiento para inocular a un medio de caldo nutritivo.

Figura 4: Procedimiento para inocular una placa de agar nutritivo a partir de una placa de agar.

V. MATERIALES Y METODOS
5.1. Materiales y equipos
• Mechero de bunsen
• Placas Petri
• Cultivos
• Algodón
• Matraz
• Plumón
• Microondas
 • Papel
• Gradillas
• Pinza
• Tamizador eléctrico
• Agua destilada

5.2. Metodología
Se deberá tener en cuenta el siguiente protocolo para realizar el mantenimiento celular
microbiano:
A) Preparación de medio de cultivo (Papa Dextrosa Agar):
Se preparará disolviendo 39g de PDA en un litro de agua destilada, homogeneizarla y después
auto-clavarla a 121°C por 15 minutos. Otra forma de preparación de PDA: Se utiliza un litro
de agua destilada, 250 g de papa, 15g de agar y 15g de miel. Se corta la papa en trozos, se
adiciona en una olla con el litro de agua, se hierve por 45 minutos a fuego medio. Luego, se
cuela, el líquido obtenido se le agrega los 15 g de agar y después los 15 g de miel, disolverla y
homogenizarla; auto-clavarla en un frasco de vidrio o erlemeyer de 500 ml por 15 minutos a
121 °C. Se puede utilizar en caliente sobre placas petri o tubos de ensayos previamente
autoclavados para vertilos en ellas, luego utilizarlas cuando están formadas el medio PDA para
la otra etapa que es la inoculación.
B) Inoculación a partir de una cepa madre:
A partir de una cepa madre (tubos de ensayos con medio de cultivo y Pleurotus ostreatus, se
va a realizar la inoculación del tubo a la placa Petri, para esto se debe tener la esterilizada las
placas petris, el asa de kolle (con el fuego del mechero). Con el asa de kolle se saca una porción
pequeña de micelio del tubo de ensayo y se transfiere a la placa Petri con medio PDA (cerca al
mechero). Luego, se identifica con el nombre del microorganismo y la fecha del sembrado, se
envuelve con papel Kraft y se identifica nuevamente con el plumón y se lleva a la incubadora
a 28°C por 7 días aproximadamente.

VI. RESULTADOS
En el siguiente cuadro se observa los siguientes resultados obtenidos de los cultivos de la
línea celular microbiana en el laboratorio de Biotecnología Agroindustrial.
VII. DISCUSIONES
• Según (Jose, 1850), El cultivo celular es una técnica fundamental utilizada en investigación
en ciencias de la vida para establecer modelos biológicos apropiados o para producir
proteínas recombinantes, partículas víricas o tratamientos biológicos. El crecimiento y el
mantenimiento de células cultivadas, como bacterias, levaduras y células de mamífero, se
realiza en una cabina de bioseguridad (a menudo denominada campana de cultivo celular
o tisular) utilizando una técnica estéril apropiada para evitar la contaminación
microbiológica y química.

• En su investigación, (Fredy, 2000), nos menciona que dos de los enfoques más destacados
para el cultivo de células de mamífero son el cultivo primario y el cultivo continuo. Los
cultivos primarios proceden directamente de los tejidos humanos o animales y su esperanza
de vida en cultivo está limitada por la senescencia celular. Los cultivos continuos se
consideran «inmortales» en cultivo, ya que a menudo derivan de tejidos cancerosos de los
pacientes. Las líneas celulares también pueden crearse inmortalizando las células y pueden
propagarse en serie opasadas durante numerosos ciclos de división celular o
indefinidamente.

VIII. CONCLUSIONES
• Se logro determinar el ciclo de vida de los microorganismos, para que contengan sus
características morfológicas y fisiológicas de su crecimiento y desarrollo, que brinden la
producción adecuada de metabolitos de interés.

• Se reconoció la técnica fundamental utilizada en investigación en ciencias de la vida para

establecer modelos biológicos apropiados o para producir proteínas recombinantes,
partículas víricas o tratamientos biológicos.

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

▪ Crueger, W. (1980). Manual de microbiologia industrial . Zaragoza, España: Acribia.

▪ Fredy, G. (2000). Microbiologia Industrial, crecimiento celular . Peru.
▪ Jose, A. (1850). Biotecnologia: principios bilogicos de la celula microbiana. Zaragosa,
España: acribia.
▪ Madiga, M. (1999). Biologia de microorganizmos . Madrid: Iberia.
▪ Toribio, F. (2001). ciclo regular y crecimiento al crecimiento bacteriano. Peurú: Acribia.

X. ANEXOS
 Secado en microondas
Recepción del cultivo

Mechero de bunsen
Preparar los cultivos

Quemar en el matraz Sacar los demás cultivos del papel

Poner los cultivos en las varillas Introducir en el tamizador eléctrico.