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ANTIOXIDANTE EN FLAVONOIDES
Tovar S. B. A1, Varón P. A. P1
1
Estudiantes programa de Biología, Universidad del Tolima, grupo 2
25 de Septiembre de 2019
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RESUMEN
Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los vegetales y que protegen al
organismo del daño producido por agentes oxidantes, como los rayos ultravioletas, la
polución ambiental, sustancias químicas presentes en los alimentos, etc. [1] En el presente
artículo se exponen los diferentes métodos químicos (como Folin-Ciocalteu, DPPH y ABTS)
para la determinación de la actividad antioxidante en flavonoides.
INTRODUCCIÓN
El término flavonoides denota un grupo muy amplio de compuestos polifenólicos
caracterizados por una estructura benzo-γ-pirano, los cuales están ampliamente distribuidos
en el reino vegetal y se encuentran de forma universal en las plantas vasculares, en forma de
glicósidos. Son muy importantes para el desarrollo y buen funcionamiento de las plantas, ya
que actúan como atrayentes de animales en la ovoposición, como agentes protectores contra
la luz UV o contra la infección por organismos fitopatógenos; además, estos compuestos
presentan propiedades relacionadas con la salud humana, lo cual está basado en su actividad
antioxidante [15]. Las antocianinas son glucósidos de antocianidinas, pertenecientes a la
familia de los flavonoides [14], representan el grupo más importante de pigmentos
hidrosolubles detectables en la región visible por el ojo humano. Estos pigmentos son
responsables de la gama de colores que abarcan desde el rojo hasta el azul en varias frutas,
vegetales y cereales, acumulados en las vacuolas de la célula [15].
El DPPH es un radical nitrogenado orgánico y estable, de un intenso color púrpura utilizado
para determinar la capacidad antioxidante con base en la disminución de color. En cuanto al
método de decoloración del radical ABTS es útil para capturar aniones radicales de larga
vida. Con el método de Folin–Ciocalteu (F–C), siendo el ácido gálico (AG) la molécula de
referencia. El reactivo de F–C es una solución acuosa de color amarillo que contiene
fosfotungstatos-molibdatos capaces de capturar uno o dos electrones en reacciones redox y
formar especies de color azul (por ejemplo, el (PMoW11O40) 4-), con un máximo de
absorción a 760 nm de longitud de onda. En el caso particular de los compuestos fenólicos,
el medio se ajusta con bicarbonato de sodio hasta un pH ≈ 10 para que los fenolatos formados
reduzcan el reactivo de F–C. Las especies coloreadas resultantes son independientes de la
estructura de los compuestos fenólicos [2].
PALABRAS CLAVES
DPPH, ABTS, Folin-Ciocalteu, Flavonoides, Antocianinas, Antociadidinas.
Estructura Química de Flavonoides
Químicamente, estas sustancias son de naturaleza fenólica y se caracterizan por poseer dos
anillos aromáticos bencénicos unidos por un puente de tres átomos de carbono, con la
estructura general C6 -C3 -C6, los cuales pueden formar o no un tercer anillo (Figura 1).
A C
V
B
𝐴𝐵𝑇𝑆 + 𝐾2 𝑆2 𝑂8 → 𝐴𝐵𝑇𝑆 °+
𝜆 𝑀𝑎𝑥 = 754 𝑛𝑚
𝐴𝐵𝑇𝑆 °+ + 𝐴𝑟𝑂𝐻 (𝐴𝑛𝑡𝑖𝑜𝑥) 𝐴𝐵𝑇𝑆 + 𝐴𝑟𝑂° + 𝐻 +
Asimismo, es un método de screening para la evaluación de la capacidad antioxidante de
distintas sustancias hidrofílicas y lipofílicas. El radical monocatiónico 2,2-azinobis-(ácido3-
etilbenzotialzolina–6-sulfónico) (ABTS•+) es producido por la reacción entre 50 mg de
ABTS en H2O y 2.45 mg de persulfato de potasio. Dicha reacción da un compuesto coloreado
que al cabo de 12 a 16 horas es estable, y luego es diluido con metanol hasta llegar a una
absorbancia de 0.7 medida a 754 nm.
Método Folin-Ciocalteu
El ensayo Folin-Ciocalteu se utiliza como medida del contenido en compuestos fenólicos
totales en productos vegetales. Se basa en que los compuestos fenólicos reaccionan con el
reactivo de Folin-Ciocalteu, a pH básico, dando lugar a una coloración azul susceptible de
ser determinada espectrofotométricamente a 765 nm. Este reactivo contiene una mezcla de
wolframato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y reacciona con los compuestos
fenólicos presentes en la muestra. El ácido fosfomolibdotúngstico (formado por las dos sales
en el medio ácido), de color amarillo, al ser reducido por los grupos fenólicos da lugar a un
complejo de color azul intenso, cuya intensidad es la que medimos para evaluar el contenido
en polifenoles.
Actividad antioxidante de antocianinas y polifenoles en cáscara de frutas
En la actualidad hay un interés creciente en los antioxidantes, en particular en aquellos que
previenen los efectos nocivos de los radicales libres en el cuerpo humano, existe preferencia
por los antioxidantes naturales y no de fuentes sintéticas[a].
Se han realizado estudios con el objetivo de determinar el contenido ácido ascórbico,
antocianinas y polifenoles totales de fenoles mediante métodos colorimétricos y
cromatográficos; así como, la actividad anti radical por el método de Folin-Ciocalteu, DPPH,
ABTS y en la cáscara de Hylocereus undatus (pitahaya), Myrciaria dubia (camu-camu).
La extracción de la antocianina en pitahaya se realizó mediante la utilización de metanol
acidificado al 0,01%. El extracto obtenido anteriormente contiene la antocianina de interés.
Para la actividad antioxidante por ensayo ABTS +, que se basa en la reducción de la
coloración verde/azul producida por la reacción de ABTS°+ (3,8 mg/mL) con 88 μL de
persulfato potásico (37.5 mg/mL) incubados a temperatura ambiente (±25ºC) y en la
oscuridad durante 16 h. Una vez formado el radical ABTS•+ se diluye con etanol hasta
obtener un valor de absorbancia comprendido entre 0.70 + 0.1 a 754 nm. Las muestras
filtradas (0.1 mL de extracto) se diluyen con 3.9 mL del radical y se homogeniza por 1
minuto. La absorbancia se mide de forma continua transcurridos 7 minutos.
El porcentaje de capacidad antioxidante se calculó con la siguiente fórmula:
1−(𝐴2 − 𝐴3 )
%ABTS = [ ] × 100
𝐴1
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