Curso: FITOQUÍMICA

TEMA: PRACTICA 10: IDENTIFICACION DE METABOLITOS

SECUNDARIOS: FLAVONOIDES EN ESPECIES VEGETALES
PROFESOR: Mg. Q, F. DANIEL ÑAÑEZ DEL
PINO
Ciclo: VIII

AÑO: 2022

PROFESOR: Mg. Q, F. DANIEL ÑAÑEZ DEL

PINO
IDENTIFICACION DE METABOLITOS SECUNDARIOS: FLAVONOIDES

ALUMNA: BETTY Y. HUAMAN

PURIHUAMAN
EN ESPECIES VEGETALES

I. INTRODUCCIÓN

Los flavonoides se encuentran dentro los compuestos fenólicos y constituyen uno

de los grupos más ampliamente, distribuidos en la naturaleza, también se los
conoce como antoxantinas. Desde el punto de vista químico se caracterizan por
tener 15 átomos, de carbono en su núcleo básico y están estructurados bajo un
sistema de C5-C3-C5 generalmente se encuentran como glicosidos como 1 o 3
unidades de azúcar. Se caracterizan por ser solubles en agua y etanol. Los
 flavonoides son utilizados en la industria como colorantes de lana y actualmente
en la conservación de alimentos. Desde el punto de vista farmacológico, los
flavonoides tienen diferentes acciones como dilatadora de las coronarias,
espasmolítico, coleréticos, estrogena, y diurética además algunos actúan sobre la
fragilidad capilar.

II. MARCO TEORICO

Los flavonoides son compuestos, generalmente amarillos, que se encuentran en

los jugos celulares y en los pétalos de las flores de algunas plantas en forma de
glucósidos de diversos azúcares (glucosa, galactosa, ramnosa o una pentosa) y
cuyos aglucones son derivados del núcleo fundamental de la fenilbenzopirona. La
unión glucosídica del aglucon y el azúcar suele estar sobre grupos fenólicos
situados en la posiciones 7 ó 3.
Estos compuestos son metabolitos secundarios de las plantas, cuyo papel
fisiológico, en ellas, no se conoce bien. Muchos de ellos se hallan en la corteza de
los árboles (roble, nogal, morera, etc.) y se han utilizado como colorantes
 naturales (p.ej. la quercetrina del roble). Otros tienen carácter vitamínico y
aplicaciones terapéuticas.

LOS FLAVONOIDES SE CLASIFICAN A PARTIR DE SUS VARIACIONES

ESTRUCTURALE

PROPIEDADES
Las propiedades físicas dependen de la clase y la forma del flavonoide (libre,
glicósido o sulfatado). Las flavonas, flavonoles y auronas, debido al sistema
conjugado son compuestos sólidos con colores que comprenden desde el
amarillo muy tenue hasta el rojo. Las antocianidinas son de colores rojo intenso,
morado, violeta y azul. Las flavanonas y flavanoles debido al carbono quiral C-2
presentan el fenómeno de la rotación óptica. Los glicósidos son en general sólidos
amorfos, mientras que las agliconas y los altamente metoxilados son cristalinos.

a. Solubilidad: Depende si están como heterósidos o agliconas libres:

b. AGLICONAS: Son insolubles en agua, pero si en solventes apolares
c. HETEROSIDOS: Son solubles en agua e insolubles en sol. apolares.
d. Acidez: Son ionizables en medio básico, por lo que se pueden identificar.
e. Agentes Quelantes: Forman complejos con metales: Fe3+ o el Al3+

TIPOS Y FUENTES DE FLAVONOIDES

Los flavonoides se encuentran en frutas, verduras, semillas y flores, así como en

cerveza,vino, té verde, té negro y soja, los cuales son consumidos en la dieta
humana de formahabitual y también pueden utilizarse en forma de suplementos
nutricionales, junto conciertas vitaminas y minerales.
Otras funciones incluyen un papel antifúngico y bactericida, confieren coloración, lo
que puede contribuir alos fenómenos de polinización y tienen una importante
capacidad para fijar metales como el hierro y el cobre.

Los flavonoides se ubican principalmente en las hojas y en el exterior de las

plantas,apareciendo sólo rastros de ellos en las partes de la planta por encima de la
superficie delsuelo. Una excepción son los tubérculos de cebolla, que contienen una
gran cantidad dequercitina 4'-D-glucósidos.

LAS FUNCIONES DE
LOS FLAVONOIDES

En las plantas se pueden resumir en tres grupos: papel de defensa frente a agentes
agresores externos como es la radiación UV, bacterias, hongos, insectos y frente a
otros plantas; como señal química o marcadores florales que sirven para guiar a las
abejas y otros insectos polinizadores hacia el néctar, facilitando la polinización
además de estimuladores de la oviposición; finalmente presentan su efecto sobre las
enzimas. Recientemente se ha demostrado el efecto de algunos flavonoides en la
inhibición de infecciones de origen viral en las plantas, entre los que se encuentran la
acción contra el virus del mosaico del tabaco y el virus. Estos metabolitos
secundarios son capaces de suprimir la formación de radicales libres por enlaces con
iones de metales pesados, los cuales catalizan muchos procesos conllevando a la
aparición de radicales libre.

APLICACIONES TERAPÉUTICAS DE LOS FLAVONOIDES

El uso de los flavonoides en el tratamiento de las enfermedades ha estado basado en
el empirismo, ya que la práctica es mucho más antigua que la ciencia química de
estos compuestos. Los efectos farmacológicos han llegado a ser conocidos con el
descubrimiento de nuevos flavonoides de origen vegetal, y a través de la variación de
la estructura química de las flavonas y derivados.
Algunas de las propiedades terapéuticas que presentan son las siguientes:
 Actividad contra la fragilidad capilar (Citrus, rutina y derivados).
 Acción antiinflamatoria (taxifolina y bavaquinina).
 Acción antialérgica (baicaleina y sales derivadas de las cromonas).
 Antihepatotóxico (silimarina).
 Antiesclerótica y antiedematosa (rutina).
 Contra la arterioesclerosis.
 Contra la diabetes mellitus (quercetina).
 Expectorante.
 Contra la úlcera al estómago y el duodeno.
 Antiviral.
 Antimicrobiano.
 Acción diurética.

MÉTODOS DE SEPARACIÓN

La extracción de los diferentes flavonoides se realiza a partir del material vegetal

fresco o también se puede realizar con el material vegetal seco (30° C ó 40° C).
Luego debe molerse finamente de esta forma facilitar la extracción de los
compuestos flavonoicos; estos se pueden extraer indistintamente debido a la
solubilidad que presenten en diferentes solventes orgánicos. Generalmente se puede
realizar métodos de identificación cualitativos como:

 Ensayo de Shinoda, donde flavonoides con el núcleo benzopirona producen

coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones acuosas o alcohólicas se les
adiciona magnesio seguido de HCl concentrado.
 Ensayo con Zn/HCl, se producen coloraciones rojo-violeta debido a la
presencia de dihidroflavonoles.
 Ensayo de Pacheco, los dihidroflavonoles producen un color rojo
característico, las flavonas, chalconas, auronas, flavonoles y flavononas dan
negativo.
 Ensayo del estroncio-amoniaco, empleado para distinguir entre flavonas y
flavonoles-3-O-sustituídos.

La etapa del aislamiento y purificación es importante en la separación e

identificación de los flavonoides presentes en el extracto. Se puede emplear
diferentes técnicas, una de ellas son las cromatográficas como es la
 cromatografía de papel, la cromatografía de capa fina, la cromatografía de
columna y especialmente la cromatografía líquida de alta resolución.

Método de cuantificación de Flavonoides Totales

Los flavonoides son compuestos fenólicos ampliamente encontrados en frutas,

vegetales y extractos de plantas. Son importantes debido a los efectos
farmacológicos como vasodilatadores, antiinflamatorio, antiviral y sobre todo por
sus propiedades antioxidantes.

Los flavonoides que poseen un gran número de grupos hidroxilos formando

glicósidos, son polares y se solubilizan en disolventes polares como el metanol,
etanol o agua; los más representativos son el kaemferol, la quercetina y la
miricetina.

Mediante cromatografía de capa fina, cromatografía de gases, cromatografía

líquida de alta eficiencia y espectrofotometría, se cuantifican los flavonoides. Los
métodos por cromatografía de gases y de alta eficiencia aportan información
definitiva en la caracterización de las muestra pero presentan limitaciones
importantes debido a los costos del equipamiento, sin embargo los métodos
espectrofotométricos permiten cuantificar flavonoides con estructuras similares; es
por eso que la cuantificación de flavonoides totales será expresado como
quercetina.

MATERIALES:
Tubos de ensayo, Beaker, Mechero, Fosforo, Gradilla, Embudo, Matraz
Erlenmeyer, Papel de filtro, Bagueta, Cuba cromatográfica pequeña, Goteros,
Asperjador, Bombilla para asperjador, Cromatofolio aluminado de Sílica gel G.

REACTIVOS.
Rvo. Shinoda, NaOH 30%, Ácido Nítrico, Tricloruro de Hierro, HCl concentrado,
Acetato de plomo, Acetato de etilo, Metanol, Agua destilada

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Preparación de extractos
Pesar 1g de muestra seca y pulverizada en un matraz Erlenmeyer de 50mL,
luego agregar 5mL de metanol y calentar durante 10 minutos a 60°C, filtrar
sobre un vial.

A.-DETERMINACIÓN DE HESPERIDÓSIDO EN Citrus sinensis

(Naranja)

PASO 1:
Pesar 5 a 10 g. cascara naranja, calentamos una rejilla de asbesto colocamos la
cascara de naranja y lo deshidratamos, esta muestra que esta seca lo llevamos a
triturar con la ayuda de un mortero, lo agregamos a un biker que debe contener
de 60 a 80 ml de una muestra hidroalcohólica este biker lo llevamos a baño maría
de 15 a 20 minutos, dejamos enfriar y lo llevamos a un embudo con filtro y
pasamos a filtrar la muestra problema y obtenemos el extracto (hesperidina).

Procederemos a analizarlo para la identificación de sus propiedades física, a cada

tubo de ensayo se agregó 1 ml de la muestra problema

 Tubo de ensayo 1: agregamos 1 ml del extracto de hesperidina en un tubo

de ensayo, se le añade 2 a 3 gotas de ácido sulfúrico concentrado, dando
un precipitado color naranja, siendo una reacción positiva, nos permite
identificar la presencia de flavonoides.

 Tubo de ensayo 2: agregamos 1 ml del extracto de hesperidina en un tubo

de ensayo, se le añade 4 a 5 gotas de ácido clorhídrico concentrado,
dando un precipitado color blanco siendo una reacción positiva, nos
permite identificar la presencia de flavonoides.
 Tubo de ensayo 3: agregamos 1 ml del extracto de hesperidina en un tubo
de ensayo, se le añade 1 a 2 gotas de ácido nítrico, dando un precipitado
color pardo rojizo siendo una reacción positiva, nos permite identificar la
presencia de flavonoides.

 Tubo de ensayo 4: agregamos 1 ml del extracto de hesperidina en un tubo

de ensayo, se le añade 5 ml hidróxido de sodio 30 %, dando un precipitado
color naranja siendo una reacción positiva, nos permite identificar la
presencia de flavonoides.

REACCION POSITIVA INTENSIDAD

Coloración naranja
++
Pp blanco
++
Coloración pardo rojizo
+++
Coloración amarillo naranja
+
B.- DETERMINACIÓN DE RUTINÓSIDO EN Ruda ruta (Ruda)

Paso 2:
Pesar 10 g. de hojas y flores de ruda y lo agregamos a un biker que debe
contener con 50 ml de agua destilada y lo hacemos hervir de 15 a 20 minutos,
dejamos enfriar y lo llevamos a un embudo con filtro y pasamos a filtrar la muestra
problema y obtenemos el extracto de ruda.

Procederemos a analizarlo para la identificación de sus propiedades física, a cada tubo

de ensayo se agregó 1 ml de la muestra problema.

1. Tubo de ensayo 1 Reacción de Shinoda: agregamos 1 ml del extracto de ruda

en un tubo de ensayo, y agregamos una pequeña cinta de magnesio metálico 0.1
g. se le añade 3 a 5 gotas de ácido clorhídrico concentrado, observamos un
desprendimiento de gases de hidrogeno, empieza a hervir la muestra nos indica
la presencia de flavonoides de los compuestos del anillo A, B y C este último
reduce al flavonoide (rutina), lo cual se reconoce por la coloración rosada,
siendo una reacción positiva.
2. Tubo de ensayo Reacción Cloruro Férrico: agregamos 1 ml del extracto de
ruda en un tubo de ensayo, y agregamos el cloruro férrico 2 a 3 gotas, se le
añade 2 a 5 gotas de ácido clorhídrico concentrado, observamos un precipitado
color verde nos indica la presencia de compuestos flavonicos siendo una reacción
positiva.

Cromatografía del rutinósido

Sistema de solventes:Acet.Etilo:Metanol:Agua (100:13.5;10)

La cromatografía salió perfecto con Rf de muestra problema igual al patrón
Longitud de onda:366nm Rf=0.6 Para el ST y Mp
C.- QUERCETINÓSIDO EN Allium cepa (Cebolla)

Paso 3:

Pesar 5 g. de cebolla, picar la muestra y lo agregamos a un biker que debe

contener 30 ml de agua destilada mezclar con ayuda de una bagueta y llevar el
biker a baño maría durante 15 a 20 minutos, dejamos enfriar y lo llevamos a un
embudo con filtro y pasamos a filtrar la muestra problema y obtenemos el extracto
de cebolla.

Procederemos a
analizarlo para la identificación de sus propiedades física, a cada tubo de ensayo
se agregó 1 ml de la muestra problema.

1. Tubo de ensayo 1 Reacción Acetato de Plomo: agregamos 1 ml del extracto de

cebolla en un tubo de ensayo, y agregamos 2 a 3 gotas de acetato de plomo,
observamos un precipitado de color amarillo nos indica la presencia de
quercetina, siendo una reacción positiva.
 Formación de un precipitado amarillo

2. Tubo de ensayo Reacción Cloruro Férrico: agregamos 1 ml del extracto de

cebolla en un tubo de ensayo, y agregamos 2 a 3 gotas de cloruro férrico,
observamos un precipitado de color verde cuando esta frio y rojo oscuro cuando
está caliente, siendo una reacción positiva nos indica la presencia de quercetina

D.- DETERMINACIÓN DE ANTOCIANÓSIDO EN Zea maíz (Maíz morado)

Paso 4:

Pesar 10 g. de coronta de maíz morado, se procede a trocear la coronta para

obtener piezas más pequeñas y lo agregamos a un biker que debe contener con
50 ml de agua destilada mezclar con ayuda de una bagueta y llevar a ebullición
15 a 20 minutos, dejamos enfriar y lo llevamos a un embudo con filtro y pasamos
a filtrar la muestra problema y obtenemos el extracto de maíz moardo.
Procederemos a analizarlo para la identificación de sus propiedades física, a cada
tubo de ensayo se agregó 1 ml de la muestra problema.

1. Tubo de ensayo 1 Reacción Acido Sulfúrico: agregamos 1 ml de la

muestra problema en un tubo de ensayo, y agregamos 2 a 3 gotas de ácido
sulfúrico concentrado, observamos un precipitado de color rojo nos indica
la presencia de abundante antocianina, siendo una reacción positiva.

2. Tubo de ensayo
Reacción
Cloruro Férrico: agregamos 1 ml de la muestra problema en un tubo de
ensayo, y agregamos 2 a 5 gotas de hidróxido de sodio 30%, observamos
un precipitado de color verde azulado oscuro, siendo una reacción positiva
nos indica la presencia de abundante antocianina.
 DISCUSIONES
Se realizó un análisis cualitativo para la identificación de heterósidos flavonoides. Para la
determinación de Hesperidósido, se analizó la droga de naranja con tres reacciones en
medio ácido y una en medio básico. Tres reacciones de identificación dieron positivas y
una nos dio un resultado negativo, por lo tanto se trata de hesperidina, solo que el
reactivo de acido clorhídrico podría presentar impurezas.

Para la determinación de Rutina, se tuvo que preparar extracto de ruda, en donde las
hojas frescas fueron estabilizadas por acción del alcohol hirviente que solubiliza los
heterósidos. Esta purificación permite eliminar la clorofila cuya intensa coloración
enmascara ciertas reacciones de caracterización, las dos primeras pruebas de Wilson y
Shinoda, se pudieron observar muy bien. En la reacción de Wilson la florescencia
observada es muy tenue, pero la cromatografía salió muy bien ya que el Rf de la
muestra problema fue igual al patrón. La reacción del extracto de ruda con el reactivo de
Wilson, presentó una coloración amarilla y cuando se llevó la muestra a la lámpara uv,
se tornó color verde fluorescente. En el caso de la reacción de Shinoda, el extracto de
ruda en contacto con ácido clorhídrico con virutas de magnesio metálico se genera
hidrógeno, este último reduce al flavonoide(rutina), lo cual se reconoce por la coloración
rosada. En cuanto a la reacción con el tricloruro de fierro, también la reacción fue
positiva co un color intenso.

En la determinación del quercetinósido en la cebolla, las dos reacciones de identificación

salieron muy notorias y positivas.

En la identificación de antocianinas, sabiendo que son más estables en un medio ácido

que en un medio neutro o alcalino. La muestra problema de antocianina obtenida de la
coronta de maíz cambió a color rojo al agregar ácido sulfúrico concentrado; luego de
agregar una base como el NaOH 30% cambió a color verdeazulado oscuro

CONCLUSIONES

 Se identificó hesperidósidos en muestra de naranja teniendo reacciones intensas y

positivas.
 S e identificó rutinósido en muestra de ruda con reacciones postitivas y un Rf correcto
 Se identificó quercetinósido en muestra de cebolla con dos reacciones muy notorias y
positivas.
  Se encontró antocianinas en muestra de maiz morado, obteniendo coloraciones
positivas y dentro del intervalo correcto.

CUESTIONARIO.
1. DESCRIBA LA IMPORTANCIA DE FLAVONOIDES EN EL CAMPO DE
LA FARMACOLOGÍA.
Esto, tienen un papel importante en la protección frente al daño oxidativo, influyendo
positivamente en la mejora de algunas patologías tales como la cardiopatía isquémica, la
aterosclerosis o el cáncer.

Síntesis, absorción y metabolismo

Los flavonoides se sintetizan en las plantas y participan en la fase dependiente de luz de

la fotosíntesis, durante la cual catalizan el transporte de electrones 27. La conjugación
con el ácido glucurónico, sulfatos, o glicina 31, parecen tener lugar tanto para los
flavonoides como para sus metabolitos procedentes del colon.
 Por ejemplo, existen diferencias de biodisponibilidad entre la quercitina y la catequina
dependientes del metabolismo, habiéndose demostrado que las concentraciones
plasmáticas de los metabolitos de quercitina presentan una vida media más larga que
los metabolitos de la catequina. El creciente interés en los flavonoides se debe a la
apreciación de su amplia actividad farmacológica. 
Los flavonoides retiran oxígeno reactivo especialmente en forma de aniones
superóxidos, radicales hidroxilos, peróxidos lipídicos o hidroperóxidos. Diversos
flavonoides han mostrado su eficiencia para eliminar los procesos de peroxidación
lipídica del ácido linoleico o de los fosfolípidos de las membranas, la peroxidación de los
glóbulos rojos o la auto oxidación de los homogeneizados de cerebro 

De hecho, las poblaciones que consumen productos ricos en flavonoides

estadísticamente presentan menores riesgos de afecciones cardiovasculares

En el hígado se ha descrito que la quercitina es capaz de inhibir la activación de las

células estrelladas así como la producción de óxido nítrico, alterando vías de expresión
de proteínas celulares y en estudios in vitro se ha comprobado que diversos flavonoides
inhiben la expresión de la óxido nítrico sintetasa y la formación de óxido nítrico en
macrófagos estimulados por LPS En ensayos clínicos, se ha comprobado que la
administración profiláctica de flavonoides disminuye la producción de radicales libres en
la re perfusión después del bypas en cirugía de reemplazamiento vascular

2. MENCIONE 100 PLANTAS RICOS EN FLAVONOIDES

1. BRÓCOLI:
Flavonoles: Quercetina, Miricetina 2. TÉ VERDE:
Flavonoles: Catechina

SOYA: Flavonoide 4. Gingko biloba

Flavonoide.
5. Uva: 6. CEREZAS 7.LIMON
Isoflavonoides Flavonoide: Antocianidinas flavonoide: Citroflavonoide

8. NARANJA 9. Remolacha roja 10. ESCUTELARIA

Flavonoide: Citroflavonoide Flavonoides: Kaemferol Flavonas: Apigenina, Crisina
3. Mediante un flujograma, realice la identificación de flavonoides, a
partir de una especie vegetal que conozca
usted.
BIBLIOGRAFIA

https://www.redalyc.org/journal/4577/457754907018/html/

http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2077-99172016000500007

https://1library.co/document/1y91vmlq-evaluacion-actividad-antioxidante-inhibicion-
acetilcolinesterasa-extractos-etanolicos-obtenidos.html

https://ciatej.repositorioinstitucional.mx/jspui/bitstream/1023/213/1/7%20memoria%20en
%20Extenso%20Purificacion%20Hesperidina.pdf

http://www.ehu.es/biomoleculas/hc/sugar33c5.htm#a
http://www.elergonomista.com
http://www.wikipedia.org