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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA CURSO DE FITOQUÍMICA

GLICÓSIDOS
DEFINICION: Son compuestos que al ser hidrolizados dan origen a una porción que es azúcar y otra que no lo es (aglicona o genina). ESTRUCTURA: El enlace glicosídico se forma por la deshidratación del azúcar y de la aglicona. Un grupo hidroxilo de la aglicona se condensa con el hidroxilo del hemiacetal del azúcar, formándose así un acetal interno. Si el grupo OR de la aglicona se encuentra en el mismo sentido estérico que el grupo CH2OH del carbono 5, la configuración se designa beta; si está en sentido estérico opuesto, se designa alfa. Ejemplo:

CH3

Alfa-metil glucósido En la naturaleza se encuentran solo las formas beta. CARACTERISTICAS DE LOS GLICOSIDOS: - Son en general muy ligeramente solubles en agua, y un poco más solubles en etanol, metanol, o mezclas de ellos en agua. - En las plantas, los glicósidos a menudo están acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos, las cuales se localizan en el mismo tejido, aunque en células diferentes. - Los glicósidos son ópticamente activos, por lo que sus rotaciones específicas contribuyen a su caracterización física. FUNCION FISIOLOGICA: Se cree que los glicósidos intervienen en los fenómenos de óxidoreducción, así como en el crecimiento y fecundación de las plantas. Se cree además que los glicósidos flavonoides protegen de la luz y rayos

los glicósidos se clasifican así: 1. y que debido a sus propiedades fungicidas también protegen a la corteza de los árboles contra el ataque de parásitos. Glicósidos fenólicos 2. pudiendo ser detectados por el intenso color verde. 1. Salicaceae). Se extrae de varias especies de los géneros Salix y Populus (Fam. La salicina tiene propiedades antirreumáticas. CLASIFICACION: En base a la estructura molecular de las agliconas. con actividad semejante a la del ácido salicílico. con cierta solubilidad en agua. Debido a su naturaleza aromática muestran intensa absorción en la región ultravioleta del espectro. lo cual permite identificarlos y cuantificarlos. la cual. púrpura. azul o negro que producen cuando se les agrega una solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico. genera vainillina . Salicina 1.2 Glucovainillina: Se encuentra presente en especies del género Vanilla (Fam. Glicósidos cardiotónicos 1. Saponinas: esteroidales y triterpénicas 4. Orchidaceae).1.1 Salicina: Al ser hidrolizada produce saligenina y glucosa.1. GLICOSIDOS FENOLICOS: Son en general compuestos relativamente polares. Glicósidos cianogénicos 3.1 DERIVADOS DEL ACIDO BENZOICO Y SALICILICO: 1.2 ultravioleta. mediante hidrólisis enzimática durante la maduración de los frutos.

de las cuales sólo 35 carecen de oxígeno en posición 7. los progresos hechos en este campo fueron escasos hasta hace aproximadamente treinta y cinco años. Pueden encontrarse en todas las partes de la planta. 1. Hasta hoy se conocen aproximadamente 800 cumarinas. principalmente en las familias Umbeliferaceae y Rutaceae. por lo que se usa como agente sazonante y aromatizante en las industrias farmacéuticas y de alimentos. A pesar de haberse conocido desde esa época. Dicho compuesto fue aislado por primera vez en 1820 por Vogel de la Coumarona odorata (“árbol de la tonka”). ligninas. Cumarina: (Configuración C6C3 ) El nombre cumarina fue asignado originalmente a la estructura anotada arriba: benzo-alfa-pirona. Las cumarinas están biogenéticamente relacionadas con los flavonoides.3 y glucosa. Ejemplo: el dicumarol como anticoagulante y antibacterial. esteroides y terpenoides. La vainillina es bastante aromática. algunas se usan como saborizantes y en perfumería. CHO CHO Glucosa-O OCH3 HOOCH3 Vainillina Glucovainillina 1.3 QUINONAS: . Las cumarinas han cobrado gran interés en años recientes debido al amplio rango de actividad biológica que han mostrado.2 CUMARINAS: Son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas. la novobiocina como antibiótico. las aflatoxinas como hepatotóxicos y carcinogénicos. pero son más abundantes en los frutos.

un glicósido antraquinónico. Pueden ser de color amarillo. que por reducción se convierten en polifenoles. ruibargo. azul o violeta.4 FLAVONOIDES Se les llama también antoxantinas.1 Benzoquinonas: Las benzoquinonas se han encontrado con frecuencia en los hongos. Los derivados antraquinónicos se encuentran en las plantas con acción purgante. Algunas tienen propiedades antibióticas. Son pigmentos de plantas superiores. Poligonaceas. como por ejemplo en la frángula. Hasta hoy se conocen aproximadamente 900 flavonoides naturales.4 Son dicetonas insaturadas. Antraquinona: 1. rojo o marrón (castaño). líquenes. hojas de sen y la cáscara sagrada. que poseen un esqueleto carbonado de 15 átomos (C6C3C6). Son pigmentos vegetales.3. Benzoquinona 1. de color amarillo o blanco. los que fácilmente las regeneran por oxidación. Rubiaceas. Ramnaceas. 1. El colorante presente en la cochinilla (insecto nativo de Centro América) es el ácido carmínico. pero si forman sales de hidroquinonas toman color verde. Se encuentran ampliamente distribuidos en las .2 Antraquinonas: Son las quinonas más extensamente distribuidas en las plantas. animales marinos y ciertos insectos. ejemplo: la muscarufina. aislados también de hongos. Ericaceas y Liliaceas.3. Se encuentran principalmente en las familias de las Leguminosas. presente en Amanita muscaria.

como espasmolíticos. .Los flavonoides se utilizan como colorantes de lanas. y en diferentes posiciones. Los glicósidos de dihidrochalconas como edulcorantes. EJEMPLOS DE FLAVONOIDES: 1. con lo cual ayudan a la polinización. USOS: . que pueden proporcionar la manera de repeler los gusanos que se alimentan de las hojas. lo que hace aún mayor el número de glicósidos conocidos. Umbelliferaceae. mientras que los flavonoles abundan en las angiospermas leñosas. Es frecuente encontrar diferentes azúcares enlazados a una misma aglicona. Núcleo básico de un flavonoide: FLAVONA Tiene dos anillos aromáticos (A y B). antihepatotóxicos. Ejemplo de flavonas: apigenina (género Apium). Fam. como estrogénicos. convirtiéndose en potentes inhibidores de algunos sistemas enzimáticos. hongos o bacterias. . que en caso de existir se denomina C. dilatadores de las coronarias (Crataegus y Arnica). FUNCION FISIOLOGICA EN LAS PLANTAS: Los flavonoides son estructuras ricas en grupos hidroxilo. antimicrobianos y fungicidas. ya sea en forma libre o como glicósidos. unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo. También hay flavonoides amargos. lo que atrae a mariposas y abejas. Dan color amarillo a flores y frutos. coleréticos (que estimulan la secreción biliar).4.1 Flavonas y Flavonoles: Las flavonas son abundantes en familias herbáceas. No se encuentran en algas. La rotenona se usa como insecticida. tales como las Compuestas. diuréticos.En medicina: contra la fragilidad capilar (ejemplo la rutina). por lo que se unen fácilmente a las proteínas.5 plantas. las polihidroxiflavonas se usan para conservar grasa o jugos de frutas (son antioxidantes).

con la formación de una pseudobase. A pH muy alto se rompe la estructura de la antocianina. presentes en el género Quercus. A un valor de pH mayor (cerca o mayor de 7) aparece un color azul verdoso. Son pigmentos rojos y azules.4.2 Antocianinas: El nombre antocianina proviene del griego anthos. 1. familia Fagaceae. Beta vulgaris. delfinidina. cianidina. que significa flor. Leucoantocianinas o Proantocianidinas: se llaman así las sustancias capaces de convertirse en antocianidinas mediante calentamiento con un ácido mineral. familia Chenopodiaceae. de manera irreversible. que quiere decir azul. debido al posible rompimiento de uno de sus anillos aromáticos. Se ha observado que las . Antiguamente se les consideraba como flavonoides. quenferol y miricetina. a diferencia de las antoxantinas. relacionados con las antocianinas. peonidina. Ejemplo: la betanina es el principal pigmento de la remolacha. Al incrementarse el pH el color desaparece.6 Ejemplo de flavonoides: quercetina. Apigenina: flavona 1. Ejemplo de las más comunes en la naturaleza: pelargonidina. Su estructura química es SIMILAR a la de los flavonoides: Antocianidinas: se llama así a las agliconas presentes en las antocianinas. que son amarillas o blancas. y kyanos. pero luego se encontró que contienen nitrógeno y su estructura básica es distinta. Los flavonoles son las 3-hidroxi-flavonas. A pH bajo. las antocianinas en solución se presentan de color rojo.5 BETACIANINAS: Son pigmentos rojos aislados de la remolacha.

2. presente en la familia Rosaceae. y otras especies del género Prunus: duraznos. ciruelas. y no se encuentran de manera conjunta en las mismas familias vegetales. Amigdalina Muchos de estos glicósidos son derivados del nitrilo del ácido mandélico. La porción azucarada puede ser mono. GLICOSIDOS CIANOGENICOS: Muchas plantas contienen glicósidos que al hidrolizarse generan ácido cianhídrico. cerezas. incluyendo las semillas de las almendras amargas (Prunus amigdalus. Euphorbiaceae). en las semillas de albaricoque (Prunus malus). enzimas como la emulsina pueden hidrolizarlo así: amigdalasa Amigdalina + agua mandelonitrilo + 2 glucosas Prunasa Benzaldehído + HCN (gas) .o di-sacárido. ya que poseen un grupo nitrilo unido a la aglicona. Si es un disacárido. variedad Amara). Ejemplo: la amigdalina. La linamarina es una toxina extraída de la yuca común: Manihot utilissima y Manihot esculenta (Fam.7 betacianinas y las antocianinas se excluyen mutuamente.

de aceites crudos vegetales. Causan hemólisis a bajas concentraciones.Diosgenina y botogenina. por lo que muchas veces se prefiere hidrolizar el extracto crudo de la planta y aislar la sapogenina libre del azúcar.Sarmentogenina. . Esta sustancia fue aislada originalmente de la corteza adrenal y luego sintetizada a partir de los ácidos biliares del ganado. del género Smilax. del género Strophantus. Son tóxicas para los peces. También puede sintetizarse a partir de las saponinas esteroidales: vitamina D.Sitosterol.8 3. . Durante muchos años se ha brindado especial importancia al estudio de plantas que contienen saponinas con el objeto de descubrir precursores de la cortisona.Sarsapogenina y smilagenina. Las saponinas no son fáciles de aislar. Biosíntesis de Saponinas: Las llamadas saponinas neutras derivan de los esteroides. Luego se encontró que las sapogeninas esteroidales podían constituir una fácil más fácil. Mediante hidrólisis enzimática de las saponinas se obtienen sus agliconas: las sapogeninas. Se ha encontrado que los esteroides aislados de plantas más importantes en la producción de cortisona son: . hormonas sexuales y anticonceptivos. del género Dioscorea. las saponinas pueden ser: esteroidales y triterpenoides. SAPONINAS: Son poderosos agentes tensioactivos que forman espuma al ser agitados con agua. . por lo que algunas plantas que las contienen se utilizan para pescar. Ambos tipos de saponinas son solubles en agua y etanol e insolubles en éter. mientras que las saponinas ácidas proceden de los triterpenoides: Acetato C RNúcleo D esteroidal A B Mevalonato O E C D A O B . En base a la estructura química de la aglicona.

procedente de Chile. Entre las plantas que contienen saponinas triterpenoides se encuentran: la corteza de Quillaja saponaria (árbol de 18 m. semillas de soya y el ginseng. y los bufanólidos o bufadienólidos. Las saponinas triterpenoides se encuentran ampliamente distribuidas y constituyen la mayoría de las encontradas en la naturaleza. Liliaceae y Escrofularaceae. Estos últimos se han llamado así debido a que están contenidos en el veneno del sapo común (género Bufus).9 Escualeno Núcleo triterpenoide pentacíclico El proceso principal de biosíntesis que da lugar a las sapogeninas es similar. e incluye la condensación de subunidades de acetato. Perú y Bolivia). Ejemplo: . con anillo lactónico de 6 miembros y un esqueleto de 24 átomos de carbono. GLICOSIDOS CARDIOTONICOS: Se han aislado de las angiospermas principalmente. aunque también se hallan en especies vegetales. que incluyen anillos lactónicos de 5 miembros y un esqueleto de 23 átomos de carbono. el cual puede ser pentagonal o hexagonal. que origina esteroides en una dirección. gitogina (D. y triterpenoides pentacíclicos en la otra. sarsapogenina (raíz de sarsaparrilla). dando así origen a dos tipos de agliconas cardiotónicas: cardenólidos. 4. Tienen un anillo lactónico no saturado en el carbono 17. Purpurea). raíz de regaliz. Entre las fuentes ricas de saponinas esteroidales se encuentran especies de las familias Dioscoreaceae. Ejemplo: digitonina (Digitalis purpurea y Digitalis lanata). debido a su abundancia en este tipo de plantas. Se caracterizan porque presentan grupos hidroxilo en el carbono 3 y 14. que permiten la formación del hidrocarburo triterpenoide escualeno. de altura.

y el filtrado (glicósidos más exceso de plomo) se trata con una corriente de ácido sulfhídrico. . EXTRACCION GENERAL: El material vegetal se extrae con alcohol en caliente. dejando los glicósidos en solución. ceras. etc. que precipita el plomo como sulfuro. d.10 Cardenólido Bufadienólido EXTRACCION. b. c. por lo que los métodos de separación y purificación son también distintos. Posteriormente puede hidrolizarse para determinar la naturaleza del azúcar y de la aglicona. el cual es removido por filtración. Luego el residuo se macera con alcohol diluido durante varias horas. Tratando el material vegetal con ácido a pH 1 ó 2. Para evitar esto deben inactivarse previamente a la extracción. en frío. tratando el material vegetal con éter de petróleo o cloroformo. y luego se enfría. Tratamiento de la planta con vapor de agua. grasas. sus solubilidades varían. Poniendo el material fresco o seco en agua caliente. El macerado se trata con solución de acetato de plomo. o hirviéndolo en alcohol por 15 min. EXTRACCION DE GLICOSIDOS FENOLICOS: Se puede primero separar las materias resinosas. Los cristales de glicósidos se obtienen mediante evaporación del filtrado. Realizando la extracción inicial a temperatura muy baja. Luego se filtra. INACTIVACION DE ENZIMAS: Los glicósidos se encuentran muchas veces acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos. ANALISIS Y CARACTERIZACION DE GLICOSIDOS: Siendo los glicósidos sustancias con núcleo estructural muy diverso. Con esto quedan los heterósidos cristalizados. por lo general el solvente a emplear para la extracción inicial es etanol o metanol con agua. lo cual se logra mediante: a. Sin embargo. para precipitar las impurezas.

durante 4 hr. Luego se enfría y filtra. ANALISIS DE GLICOSIDOS FENOLICOS: . así: éter de petróleo.6-dicloroquinonacloroimida al 2% en cloroformo). Es por ello que generalmente se aíslan mediante hidrólisis. que luego es evaporado. Posteriormente se continúa extrayendo con acetato de etilo. Los fenoles pueden detectarse con solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico al 1% más 1% de ferricianuro de potasio. Se debe observar manchas azules. Posteriormente el extracto alcohólico de la planta se somete a hidrólisis ácida o alcalina. y luego rociando hidróxido de amonio diluido. los cuales se someten a recristalización con algún solvente apropiado. También es útil como revelador el reactivo de “productos .DETECCION: Los fenoles rara vez se encuentran en forma libre en las plantas. La hidrólisis alcalina se realiza con hidróxido de sodio 2 M a temperatura ambiente. con un solvente no miscible. Esto se evita aislándolos de los tejidos con alcohol caliente.11 La extracción inicial de los glicósidos fenólicos también puede hacerse de manera más eficiente mediante soxhlet. Se usa ácido sulfúrico al 2-5% o ácido clorhídrico 1 ó 2 N durante algunas horas. como por ejemplo el éter o cloroformo. CUANTIFICACION GENERAL DE GLICOSIDOS: Para valorar los glicósidos se aprovecha la capacidad que tienen los ácidos de liberar los azúcares reductores. sobre todo los flavonoides. y en ella se pueden caracterizar los azúcares reductores. con reactivo de Gibbs como revelador (2. acetona y alcohol. ya que fluorescen bajo luz ultravioleta. La mayoría de compuestos fenólicos. cloroformo y éter dietílico. Los glicósidos fenólicos son muy sensibles a la oxidación enzimática. en caliente. Estos permiten eliminar los lípidos. Para detectar ácidos fenólicos puede utilizarse cromatografía en capa fina. Estos últimos aíslan los glicósidos. Otras veces se obtiene mediante extracción de la solución acuosa resultante de la hidrólisis. empleando sucesivamente varios solventes de diferente polaridad. la clorofila y los carotenoides. La fracción acuosa ácida se neutraliza con carbonato de bario. La hidrólisis ácida se hace con ácido clorhídrico 2 M durante media hora. Dicha fluorescencia se intensifica por la acción de vapores amoniacales. debido a la acción de las fenolasas. en baño de María hirviendo. pueden identificarse mediante cromatografía en capa fina. A veces la aglicona precipita y se recoge con un solvente más denso que el agua.

agua. Esto se logra usando metanol conteniendo ácido clorhídrico al 0. etc. CROMATOGRAFIA Y ESPECTROFOTOMETRIA: . tales como el tipo de solvente y el pH. como por ejemplo la amberlita IRC-50 y Dower IXII. con lo que el n-propanol se separa. Luego se observa la fluorescencia bajo luz U.12 naturales”: difenil-boril-oxietilamina al 1% en metanol.. obteniéndose . La mezcla se satura con cloruro de sodio. CUANTIFICACION DE FENOLES TOTALES: El permanganato de potasio oxida los fenoles en frío. y luego polietilenglicol 4000 al 5% en etanol. pueden hallarse también presentes azúcares.1% ó ácido acético al 15%. PURIFICACION DE EXTRACTOS FENOLICOS: Al prepararse un extracto vegetal que contenga glicósidos fenólicos. Otro método de purificación consiste en emplear resinas de intercambio catiónico. y NO los “meta-difenoles”. Este problema se resuelve con el reactivo de Folin-Denis. pero con dobles enlaces.V. otras sustancias NO FENOLICAS. Para las antocianinas se requiere pH ácido. Un reactivo que brinda información más específica sobre el tipo de fenoles presentes es el de Folin (tungstato de sodio.. Además.El solvente más usado para elución en cromatografía es el etanol al 70%. tales como el ácido cinámico. se ha reportado que éste no es un buen método.La absorción en el ultravioleta se emplea bastante en la determinación de fenoles totales (a 270nm). que permite reducir estos ácidos y a la vez oxidar todos los fenoles. ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico). Sin embargo. sí pueden reaccionar. que podrían interferir en la cromatografía. sales. Para evitar esto puede purificarse calentando varias veces con pequeñas cantidades de agua. azul o verde. Las fracciones acuosas se combinan y agitan con n-propanol. ya que solo se oxidan los difenoles “orto”y “para”. Este reactivo colorea de azul o gris los fenoles con núcleo catecólico (tiene 2 grupos OH en posición “orto”) o hidroquinonas al exponer la placa a vapores amoniacales. característica que se aprovecha para valorar los fenoles totales. Pueden detectarse bandas de color amarillo. por lo que debe especificarse las condiciones estándar bajo las cuales se trabajó. ácidos. . la absorción de los fenoles naturales se ve afectada por muchos factores. Sin embargo. la cual contiene la mayoría de glicósidos fenólicos. quedando en la parte superior.

Son solubles en álcali.1 M. debido a los óxidos de tungsteno y molibdeno. Para efectuar la cuantificación se toma una alícuota que contenga la sustancia fenólica. Extracción y aislamiento de flavonoides: Mat. se hace reaccionar con el reactivo de Folin más una solución de carbonato de sodio. concentrar Cromatografiar en columna abierta con gel de sílice.Los flavonoides son generalmente solubles en agua y alcohol. dando . María) Filtrado Solución homogénea PbOAC 0. cloroformo y benceno. filtrar. y luego de agitar se mide la absorbancia a 730-760 nm. Extracto alcohólico Filtrar Residuo Concentrar (B. CARACTERIZACION: . Vegetal + etanol Macerar en frío/72 hr.13 color azul. reposar/24hr Precipitado Solución amarilla Rotavapor Fase acuosa Etanol Acetato de etilo. e insolubles en éter.

empleando como adsorbentes celulosa. Se cuenta con información que permite deducir la posible estructura del flavonoide. rosadas. los flavonoides dan colores característicos. La detección de los flavonoides en ambos tipos de cromatografía puede hacerse usando lámpara de luz ultravioleta. También puede usarse gel de Sephadex.14 soluciones amarillas que se oscurecen al aire. A partir de ellas derivan otras clases.En algunos casos pueden hacerse pruebas directamente sobre el material vegetal. Ejemplo: si los pétalos blancos de una flor se exponen a vapores de amoníaco y se tornan amarillos.La cromatografía en columna se emplea comúnmente para purificaciones preliminares y para separar grandes cantidades de flavonoides a partir de extractos vegetales. TECNICAS CROMATOGRAFICAS: . Ejemplo: las flavonas dan precipitado amarillo o anaranjado. que pueden cambiar tanto de color como de intensidad luego de su exposición a vapores de amoníaco o al reactivo de “Productos Naturales”.La reacción más usual para detectar flavonoides es la de Shinoda: al extracto alcohólico se le añade un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado. sílica gel y poliamida. Las isoflavonas y chalconas no se colorean. púrpuras y otras. En decoloran y precipitan. Las flavonas se colorean de naranja. . Si viran de amarillo a rojo. anaranjadas.Se utiliza con frecuencia cromatografía en capa fina. observándose manchas fluorescentes azules. o pueden formar precipitados. mientras que las chalconas.Prueba de Marini-Bettolo: con solución de cloruro de antimonio en tetracloruro de carbono. en base al color observado antes y después de añadir amoníaco. medio ácido se . . Se emplean los mismos adsorbentes que en la cromatografía en capa fina. hay presencia de chalconas y auronas. los flavonoles de rojo cerezo y las flavanonas de rojo violáceo. rojo obscuro o violeta. . . pero puede también emplearse cromatografía en papel. indica la presencia de flavonas y flavonoles. Las chalconas son el primer tipo de flavonoides que se forman a lo largo de su biosíntesis.

el complejo formado con grupos hidroxil-cetona es estable. .Resonancia magnética nuclear: los espectros de RMN de flavonoides han cobrado mayor importancia en años recientes para determinación de estructuras. Es común en este caso también el uso de “reactivos de desplazamiento”. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: El método más usual para analizar la estructura de un flavonoide es la observación en ultravioleta y visible. como para establecer el modelo de oxigenación.El cloruro de aluminio forma complejos con grupos orto-hidroxilos y con grupos hidroxilcetona vecinos. . la absorción del grupo carbonilo (entre 1680 y 1640 nm). por lo que desaparece al añadir ácido clorhídrico. el anillo aromático (entre 1600 a 1500). El complejo formado con grupos ohidroxilos es lábil en presencia de ácido.El acetato de sodio ioniza únicamente el grupo hidroxilo más ácido del flavonoide. Conlleva la ventaja de que es una técnica muy sensible y precisa. El espectro típico consta de dos máximos de absorción en los rangos de 240 a 285 nm y 300 a 550 nm. y provocan desplazamiento característico de los picos de absorción. . que permite obtener resultados cuali-cuantitativos en unos pocos minutos. y la de los grupos o-hidroxi-cetona (entre 3500 a 3200 nm) pueden ser útiles.Infrarrojo: se usa muy poco en el análisis de flavonoides. lo cual se aprovecha para detectar un grupo OH en posición 7. Ejemplo: . Estos se hacen reaccionar con el flavonoide. lo cual proporciona información adicional sobre la estructura.15 . Por el contrario.La cromatografía líquida de alta resolución es muy utilizada para realizar separaciones a pequeña escala. . Esto se hace tanto para identificar el tipo de flavonoide. debido a que los espectros ultravioleta brindan mayor información. La identificación del flavonoide y su modelo de oxigenación se facilita empleando “reactivos de desplazamiento”. Los espectros de absorción de los flavonoides se determinan comúnmente en solución metanólica. La variación de estos rangos depende del modelo de oxigenación y del grado de sustitución de los hidroxilos. Sin embargo.

.El espectro visible en metanol-ácido clorhídrico presenta un rango máximo de 505-535 nm para las antocianinas. Las quinonas se solubilizan en álcalis. Para el análisis de resultados se toma en cuenta los pesos moleculares de los distintos núcleos básicos de los flavonoides. mientras que las antocianinas tienen Rf moderados (0. junto con clorofila y carotenos. Es por ello que pueden extraerse con éter de petróleo. . anaranjados o rojos. 224 para flavanonas y chalconas. mientras que las antocianinas no. usando como fase móvil butanol-ácido acético-agua. Al hacerse cromatografía en capa fina se diferencian por su Rf. .Espectrometría de masas: posee la ventaja de que requiere muy poca cantidad de muestra.Haciendo electroforesis en papel.1-0. dando coloraciones que van desde el anaranjado al rojo o violeta. y 532-554 nm para las betacianinas. a pH ácido (2-4): las betacianinas migran al ánodo. También pueden precipitarse como cloruros mediante ebullición con ácido clorhídrico al 20%. Las benzoquinonas y naftoquinonas actúan como oxidantes. poco solubles en agua y solubles en solventes orgánicos. bajo la forma de picratos. Ejemplo: 222 para flavonas. Generalmente el grupo carbonilo de las quinonas no reacciona con los reactivos usuales de la función cetona. y las antocianinas al cátodo.1). isoflavonas y auronas. Las betacianinas se decoloran.Calentando con ácido clorhídrico 2 M por 5 minutos. y pueden ser extraídas con alcohol amílico. Las antocianinas cambian a azul verdoso y luego se decoloran.16 . gota a gota. Las betacianinas tienen Rf muy bajos (0-0. las betacianinas viran a amarillo.4). QUINONAS: Son sólidos cristalinos amarillos. 238 para flavonoles.Mediante cromatografía. ANTOCIANINAS: Son solubles en agua e insolubles en los solventes orgánicos. DIFERENCIACION DE BETACIANINAS Y ANTOCIANINAS: . lo cual se aprovecha para su . a 100 grados centígrados. . Pueden separarse mediante precipitación.Añadiendo hidróxido de sodio 2 M. etc.

pero puede ser de color anaranjado. Las distintas especies de canela contienen cumarina no sustituida (C. violetas. Puesto que las quinonas son coloreadas. rojo o violeta si hay alta concentración). púrpuras o verdes). El “haba tonka”(Coumarona odorata. 6-metoxi-cumarina (escopoletina). En el infrarrojo pueden detectarse las bandas características fuertes de los grupos carbonilo. CUMARINAS: La cumarina y sus glicósidos derivan de la benzo-alfa-pirona. Por lo menos tres de ellas caen entre 215 y 300 nm. belladona.17 análisis espectrofotométrico. en la región visible. las semillas de este árbol de Guyana y Brasil se usan en perfumería) contiene 1 a 3% de cumarina. el análisis bajo la luz ultravioleta es más sensible. hojas de tabaco y estramonio contienen 7-hidroxi. Las quinonas pueden separarse entre sí. Como reveladores se puede emplear hidróxido de potasio al 10% en metanol (se ven manchas rojas. ceylanicum es la que tiene menos). Su olor es el característico del heno fresco. con solventes de diferentes polaridades. Con la espectrometría de masas puede reconocerse a las quinonas por la facilidad con que pierden las dos moléculas de carbonilo. EXTRACCION: La extracción de las cumarinas puede realizarse sobre el material vegetal fresco o seco. por encima de los 430 nm. También puede usarse HPLC para aislar quinonas. cloroformo o éter). . se filtra. La ruda contiene 10 derivados cumarínicos. y se agita con una solución acuosa alcalina (hidróxido de amonio al 10% (reacción de Bornträger). además la raíz de avena. sin embargo. así como de los carotenos y clorofila mediante cromatografía en capa fina o en papel. de Jalapa. pertenecientes a más de 30 familias. pueden ser detectadas en la región visible. Así puede diferenciarse a las antraquinonas de otras quinonas. y la otra. Para ello se macera el material vegetal con un solvente orgánico inmiscible con el agua (ejemplo: benceno. Un resultado positivo está indicado por una coloración rosada en la fase alcalina (si hay poca cantidad de antraquinonas. La cumarina se ha encontrado en unas 150 especies. ya que las primeras presentan 4 ó 5 bandas de absorción en el ultravioleta.

Se prefiere NO USAR alúmina BASICA. ya que degrada las cumarinas. las furano-cumarinas son por lo general solubles en lípidos. tales como etanol. acetona.18 dependiendo de las estructuras de las cumarinas.Amarillo-verdoso: cumarina no sustituída. empleando como adsorbentes la sílica gel o la alúmina “neutra o ácida”. obteniéndose así cristales al dejar en reposo. con lo que los grupos hidroxilo dan color azul o verdoso. . el extracto obtenido se concentra. En base al color que muestren. Puesto que pueden encontrarse a veces formando glicósidos. puede asignarse tentativamente ciertas características a las cumarinas: . SEPARACION CROMATOGRAFICA Y DETECCION: Se utiliza ampliamente la cromatografía en columna. Se pueden recristalizar con una mezcla de etanol-éter y luego se purifican mediante cromatografía. etc. . Los componentes se detectan bajo luz U. o en refrigeración. A diferencia de las hidroxicumarinas. La adición de reactivo de Benedict a las cumarinas o flavonoides con grupos hidroxilo reactivos hace que la fluorescencia desaparezca total o parcialmente. pero ninguno de ellos es específico. Esta es la propiedad física más usual para reconocer una cumarina. pero antes es necesario añadir hidróxido de potasio.Fluorescencia púrpura: característica de 7-alcoxicumarina. y pueden extraerse con éter de petróleo. Puede utilizarse solventes diversos. de 365 nm antes y después de asperjar con hidróxido de potasio al 5 ó 10% en etanol. éter sulfúrico o de petróleo.V. Para detectar grupos fenólicos se emplea solución acuosa de cloruro férrico al 1%. . La extracción se hace con soxhlet.Fluorescencia celeste: 7-hidroxi-cumarina y 5. La intensificación de la fluorescencia por tratamiento del cromatograma con vapores de amoníaco es indicio de grupos fenólicos en la cumarina.Fluorescencia amarillo opaca u ocre: furanocumarina. es . También se usa bastante la cromatografía en capa fina.7-dioxigenadas. La detección de las cumarinas puede hacerse también con otros reveladores. Las cumarinas muestran intensa fluorescencia. para lo cual la mezcla sílica gel y celulosa incrementa la sensibilidad y resolución.

violetas o cafés. Se ha utilizado por ejemplo para separar una mezcla de furano-cumarinas del perejil.19 necesario antes hidrolizarlos con ácido. RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: También se emplean reactivos de desplazamiento. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: Para dilucidar la estructura química de una cumarina nueva se debe 1) identificar primero los diferentes grupos sustituyentes. sobre todo hidroxilos. ESPECTRO i. Se detectan bajo luz UV como manchas azules. Para obtener información respecto a la orientación de determinados grupos funcionales.5% etanol o éter-benceno (1:1). Bandas de absorción U. Ejemplo: se hace reaccionar a las cumarinas con hidróxido de sodio. Esto toma entre 1 a 2 horas. y un pico base a m/e de 118 (100%) (28 unidades menos por la pérdida de monóxido de carbono del anillo de pirona. acetato de sodio. Comúnmente pueden separarse mediante cromatografía en capa fina en sílica gel. ácido bórico o cloruro de aluminio. verdes.V. . ESPECTROMETRIA DE MASAS: Las cumarinas producen un fuerte ion molecular a un valor de m/e de 146 (76%). características de las cumarinas: 274 y 311 nm. Los grupos hidroxilo y carbonilo también muestran bandas características.: Puede encontrarse bandas características de la pirona en la región comprendida entre 1715 y 1745 cm a la -1.r. puede utilizarse “reactivos de desplazamiento”. así como para fraccionar algunas cumarinas de cítricos. usando como fase móvil cloroformo.HPLC: Resulta ventajoso porque las separaciones son más rápidas y efectivas. . que corresponden a los anillos de benceno y pirona respectivamente. y 2) determinar su ubicación en el núcleo de la cumarina. cloroformo + 1. que producen cambios espectrales. amarillas. La intensidad de la fluorescencia aumenta al adicionar hidróxido de potasio al 10%.

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