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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA CURSO DE FITOQUÍMICA

GLICÓSIDOS
DEFINICION: Son compuestos que al ser hidrolizados dan origen a una porción que es azúcar y otra que no lo es (aglicona o genina). ESTRUCTURA: El enlace glicosídico se forma por la deshidratación del azúcar y de la aglicona. Un grupo hidroxilo de la aglicona se condensa con el hidroxilo del hemiacetal del azúcar, formándose así un acetal interno. Si el grupo OR de la aglicona se encuentra en el mismo sentido estérico que el grupo CH2OH del carbono 5, la configuración se designa beta; si está en sentido estérico opuesto, se designa alfa. Ejemplo:

CH3

Alfa-metil glucósido En la naturaleza se encuentran solo las formas beta. CARACTERISTICAS DE LOS GLICOSIDOS: - Son en general muy ligeramente solubles en agua, y un poco más solubles en etanol, metanol, o mezclas de ellos en agua. - En las plantas, los glicósidos a menudo están acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos, las cuales se localizan en el mismo tejido, aunque en células diferentes. - Los glicósidos son ópticamente activos, por lo que sus rotaciones específicas contribuyen a su caracterización física. FUNCION FISIOLOGICA: Se cree que los glicósidos intervienen en los fenómenos de óxidoreducción, así como en el crecimiento y fecundación de las plantas. Se cree además que los glicósidos flavonoides protegen de la luz y rayos

con cierta solubilidad en agua.1 Salicina: Al ser hidrolizada produce saligenina y glucosa. Saponinas: esteroidales y triterpénicas 4. GLICOSIDOS FENOLICOS: Son en general compuestos relativamente polares. y que debido a sus propiedades fungicidas también protegen a la corteza de los árboles contra el ataque de parásitos. Se extrae de varias especies de los géneros Salix y Populus (Fam.2 ultravioleta. Salicaceae). mediante hidrólisis enzimática durante la maduración de los frutos.1. con actividad semejante a la del ácido salicílico. Glicósidos fenólicos 2. Glicósidos cianogénicos 3. genera vainillina . azul o negro que producen cuando se les agrega una solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico. Debido a su naturaleza aromática muestran intensa absorción en la región ultravioleta del espectro. Salicina 1. los glicósidos se clasifican así: 1.1. Glicósidos cardiotónicos 1. Orchidaceae). 1. La salicina tiene propiedades antirreumáticas. púrpura. lo cual permite identificarlos y cuantificarlos.2 Glucovainillina: Se encuentra presente en especies del género Vanilla (Fam. CLASIFICACION: En base a la estructura molecular de las agliconas. la cual. pudiendo ser detectados por el intenso color verde.1 DERIVADOS DEL ACIDO BENZOICO Y SALICILICO: 1.

Las cumarinas han cobrado gran interés en años recientes debido al amplio rango de actividad biológica que han mostrado. la novobiocina como antibiótico.2 CUMARINAS: Son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas.3 y glucosa. esteroides y terpenoides. Las cumarinas están biogenéticamente relacionadas con los flavonoides. 1. algunas se usan como saborizantes y en perfumería. Hasta hoy se conocen aproximadamente 800 cumarinas. los progresos hechos en este campo fueron escasos hasta hace aproximadamente treinta y cinco años. Ejemplo: el dicumarol como anticoagulante y antibacterial. Pueden encontrarse en todas las partes de la planta. de las cuales sólo 35 carecen de oxígeno en posición 7. Cumarina: (Configuración C6C3 ) El nombre cumarina fue asignado originalmente a la estructura anotada arriba: benzo-alfa-pirona. las aflatoxinas como hepatotóxicos y carcinogénicos. principalmente en las familias Umbeliferaceae y Rutaceae. por lo que se usa como agente sazonante y aromatizante en las industrias farmacéuticas y de alimentos. La vainillina es bastante aromática. pero son más abundantes en los frutos. Dicho compuesto fue aislado por primera vez en 1820 por Vogel de la Coumarona odorata (“árbol de la tonka”).3 QUINONAS: . CHO CHO Glucosa-O OCH3 HOOCH3 Vainillina Glucovainillina 1. A pesar de haberse conocido desde esa época. ligninas.

El colorante presente en la cochinilla (insecto nativo de Centro América) es el ácido carmínico. presente en Amanita muscaria. Se encuentran principalmente en las familias de las Leguminosas. Rubiaceas. Pueden ser de color amarillo. como por ejemplo en la frángula. Son pigmentos vegetales. los que fácilmente las regeneran por oxidación.4 Son dicetonas insaturadas. un glicósido antraquinónico. que por reducción se convierten en polifenoles. aislados también de hongos. Se encuentran ampliamente distribuidos en las . animales marinos y ciertos insectos. Hasta hoy se conocen aproximadamente 900 flavonoides naturales. hojas de sen y la cáscara sagrada.2 Antraquinonas: Son las quinonas más extensamente distribuidas en las plantas. pero si forman sales de hidroquinonas toman color verde. ruibargo. que poseen un esqueleto carbonado de 15 átomos (C6C3C6).4 FLAVONOIDES Se les llama también antoxantinas. ejemplo: la muscarufina. de color amarillo o blanco. rojo o marrón (castaño). Ramnaceas. Algunas tienen propiedades antibióticas. 1. Benzoquinona 1.3.1 Benzoquinonas: Las benzoquinonas se han encontrado con frecuencia en los hongos. Poligonaceas. Ericaceas y Liliaceas.3. Los derivados antraquinónicos se encuentran en las plantas con acción purgante. líquenes. Antraquinona: 1. azul o violeta. Son pigmentos de plantas superiores.

diuréticos. . tales como las Compuestas. antimicrobianos y fungicidas. hongos o bacterias. las polihidroxiflavonas se usan para conservar grasa o jugos de frutas (son antioxidantes). Es frecuente encontrar diferentes azúcares enlazados a una misma aglicona. También hay flavonoides amargos. EJEMPLOS DE FLAVONOIDES: 1. coleréticos (que estimulan la secreción biliar). Ejemplo de flavonas: apigenina (género Apium). No se encuentran en algas. unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo. que en caso de existir se denomina C.En medicina: contra la fragilidad capilar (ejemplo la rutina). Los glicósidos de dihidrochalconas como edulcorantes. .1 Flavonas y Flavonoles: Las flavonas son abundantes en familias herbáceas. FUNCION FISIOLOGICA EN LAS PLANTAS: Los flavonoides son estructuras ricas en grupos hidroxilo. como espasmolíticos. mientras que los flavonoles abundan en las angiospermas leñosas. ya sea en forma libre o como glicósidos. lo que atrae a mariposas y abejas. La rotenona se usa como insecticida. que pueden proporcionar la manera de repeler los gusanos que se alimentan de las hojas.4. Núcleo básico de un flavonoide: FLAVONA Tiene dos anillos aromáticos (A y B). convirtiéndose en potentes inhibidores de algunos sistemas enzimáticos. USOS: . Umbelliferaceae. lo que hace aún mayor el número de glicósidos conocidos. dilatadores de las coronarias (Crataegus y Arnica). con lo cual ayudan a la polinización. como estrogénicos. Dan color amarillo a flores y frutos. Fam. por lo que se unen fácilmente a las proteínas.5 plantas.Los flavonoides se utilizan como colorantes de lanas. antihepatotóxicos. y en diferentes posiciones.

Apigenina: flavona 1. relacionados con las antocianinas. Su estructura química es SIMILAR a la de los flavonoides: Antocianidinas: se llama así a las agliconas presentes en las antocianinas. Leucoantocianinas o Proantocianidinas: se llaman así las sustancias capaces de convertirse en antocianidinas mediante calentamiento con un ácido mineral. delfinidina. Ejemplo de las más comunes en la naturaleza: pelargonidina. A un valor de pH mayor (cerca o mayor de 7) aparece un color azul verdoso.4. que significa flor.6 Ejemplo de flavonoides: quercetina. familia Chenopodiaceae. Se ha observado que las . A pH bajo. presentes en el género Quercus. Al incrementarse el pH el color desaparece. quenferol y miricetina. pero luego se encontró que contienen nitrógeno y su estructura básica es distinta. a diferencia de las antoxantinas. que quiere decir azul. Antiguamente se les consideraba como flavonoides. familia Fagaceae. que son amarillas o blancas. Beta vulgaris.2 Antocianinas: El nombre antocianina proviene del griego anthos.5 BETACIANINAS: Son pigmentos rojos aislados de la remolacha. Ejemplo: la betanina es el principal pigmento de la remolacha. y kyanos. debido al posible rompimiento de uno de sus anillos aromáticos. A pH muy alto se rompe la estructura de la antocianina. 1. peonidina. cianidina. Los flavonoles son las 3-hidroxi-flavonas. las antocianinas en solución se presentan de color rojo. Son pigmentos rojos y azules. con la formación de una pseudobase. de manera irreversible.

en las semillas de albaricoque (Prunus malus). Amigdalina Muchos de estos glicósidos son derivados del nitrilo del ácido mandélico. GLICOSIDOS CIANOGENICOS: Muchas plantas contienen glicósidos que al hidrolizarse generan ácido cianhídrico. ciruelas. Si es un disacárido. variedad Amara). La porción azucarada puede ser mono. presente en la familia Rosaceae. ya que poseen un grupo nitrilo unido a la aglicona. enzimas como la emulsina pueden hidrolizarlo así: amigdalasa Amigdalina + agua mandelonitrilo + 2 glucosas Prunasa Benzaldehído + HCN (gas) .7 betacianinas y las antocianinas se excluyen mutuamente. Euphorbiaceae). Ejemplo: la amigdalina. 2.o di-sacárido. cerezas. y otras especies del género Prunus: duraznos. La linamarina es una toxina extraída de la yuca común: Manihot utilissima y Manihot esculenta (Fam. y no se encuentran de manera conjunta en las mismas familias vegetales. incluyendo las semillas de las almendras amargas (Prunus amigdalus.

Las saponinas no son fáciles de aislar. También puede sintetizarse a partir de las saponinas esteroidales: vitamina D. por lo que algunas plantas que las contienen se utilizan para pescar. del género Strophantus. del género Smilax. las saponinas pueden ser: esteroidales y triterpenoides. hormonas sexuales y anticonceptivos. del género Dioscorea. En base a la estructura química de la aglicona. mientras que las saponinas ácidas proceden de los triterpenoides: Acetato C RNúcleo D esteroidal A B Mevalonato O E C D A O B . Se ha encontrado que los esteroides aislados de plantas más importantes en la producción de cortisona son: . . Luego se encontró que las sapogeninas esteroidales podían constituir una fácil más fácil.Sitosterol.8 3. Biosíntesis de Saponinas: Las llamadas saponinas neutras derivan de los esteroides. de aceites crudos vegetales. Esta sustancia fue aislada originalmente de la corteza adrenal y luego sintetizada a partir de los ácidos biliares del ganado. por lo que muchas veces se prefiere hidrolizar el extracto crudo de la planta y aislar la sapogenina libre del azúcar. Son tóxicas para los peces. Mediante hidrólisis enzimática de las saponinas se obtienen sus agliconas: las sapogeninas.Sarsapogenina y smilagenina. Durante muchos años se ha brindado especial importancia al estudio de plantas que contienen saponinas con el objeto de descubrir precursores de la cortisona. .Sarmentogenina. SAPONINAS: Son poderosos agentes tensioactivos que forman espuma al ser agitados con agua. Causan hemólisis a bajas concentraciones.Diosgenina y botogenina. . Ambos tipos de saponinas son solubles en agua y etanol e insolubles en éter.

Se caracterizan porque presentan grupos hidroxilo en el carbono 3 y 14. semillas de soya y el ginseng. Ejemplo: . Tienen un anillo lactónico no saturado en el carbono 17. e incluye la condensación de subunidades de acetato. raíz de regaliz. y triterpenoides pentacíclicos en la otra. gitogina (D. Las saponinas triterpenoides se encuentran ampliamente distribuidas y constituyen la mayoría de las encontradas en la naturaleza. 4. procedente de Chile. debido a su abundancia en este tipo de plantas.9 Escualeno Núcleo triterpenoide pentacíclico El proceso principal de biosíntesis que da lugar a las sapogeninas es similar. Perú y Bolivia). y los bufanólidos o bufadienólidos. con anillo lactónico de 6 miembros y un esqueleto de 24 átomos de carbono. Purpurea). aunque también se hallan en especies vegetales. el cual puede ser pentagonal o hexagonal. que permiten la formación del hidrocarburo triterpenoide escualeno. sarsapogenina (raíz de sarsaparrilla). Ejemplo: digitonina (Digitalis purpurea y Digitalis lanata). de altura. Liliaceae y Escrofularaceae. Entre las fuentes ricas de saponinas esteroidales se encuentran especies de las familias Dioscoreaceae. GLICOSIDOS CARDIOTONICOS: Se han aislado de las angiospermas principalmente. que origina esteroides en una dirección. dando así origen a dos tipos de agliconas cardiotónicas: cardenólidos. que incluyen anillos lactónicos de 5 miembros y un esqueleto de 23 átomos de carbono. Estos últimos se han llamado así debido a que están contenidos en el veneno del sapo común (género Bufus). Entre las plantas que contienen saponinas triterpenoides se encuentran: la corteza de Quillaja saponaria (árbol de 18 m.

Luego se filtra. ceras. Sin embargo.10 Cardenólido Bufadienólido EXTRACCION. Realizando la extracción inicial a temperatura muy baja. Tratando el material vegetal con ácido a pH 1 ó 2. por lo que los métodos de separación y purificación son también distintos. d. Posteriormente puede hidrolizarse para determinar la naturaleza del azúcar y de la aglicona. o hirviéndolo en alcohol por 15 min. que precipita el plomo como sulfuro. Tratamiento de la planta con vapor de agua. y el filtrado (glicósidos más exceso de plomo) se trata con una corriente de ácido sulfhídrico. Poniendo el material fresco o seco en agua caliente. sus solubilidades varían. Para evitar esto deben inactivarse previamente a la extracción. tratando el material vegetal con éter de petróleo o cloroformo. EXTRACCION DE GLICOSIDOS FENOLICOS: Se puede primero separar las materias resinosas. el cual es removido por filtración. Con esto quedan los heterósidos cristalizados. en frío. ANALISIS Y CARACTERIZACION DE GLICOSIDOS: Siendo los glicósidos sustancias con núcleo estructural muy diverso. etc. . Los cristales de glicósidos se obtienen mediante evaporación del filtrado. EXTRACCION GENERAL: El material vegetal se extrae con alcohol en caliente. INACTIVACION DE ENZIMAS: Los glicósidos se encuentran muchas veces acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos. El macerado se trata con solución de acetato de plomo. lo cual se logra mediante: a. grasas. c. por lo general el solvente a emplear para la extracción inicial es etanol o metanol con agua. b. para precipitar las impurezas. dejando los glicósidos en solución. y luego se enfría. Luego el residuo se macera con alcohol diluido durante varias horas.

Los glicósidos fenólicos son muy sensibles a la oxidación enzimática. como por ejemplo el éter o cloroformo.6-dicloroquinonacloroimida al 2% en cloroformo). Otras veces se obtiene mediante extracción de la solución acuosa resultante de la hidrólisis. Estos permiten eliminar los lípidos. con reactivo de Gibbs como revelador (2. los cuales se someten a recristalización con algún solvente apropiado. A veces la aglicona precipita y se recoge con un solvente más denso que el agua. Se usa ácido sulfúrico al 2-5% o ácido clorhídrico 1 ó 2 N durante algunas horas. También es útil como revelador el reactivo de “productos . así: éter de petróleo. Se debe observar manchas azules. La hidrólisis ácida se hace con ácido clorhídrico 2 M durante media hora. empleando sucesivamente varios solventes de diferente polaridad. Esto se evita aislándolos de los tejidos con alcohol caliente. La fracción acuosa ácida se neutraliza con carbonato de bario. Estos últimos aíslan los glicósidos. sobre todo los flavonoides. Dicha fluorescencia se intensifica por la acción de vapores amoniacales. CUANTIFICACION GENERAL DE GLICOSIDOS: Para valorar los glicósidos se aprovecha la capacidad que tienen los ácidos de liberar los azúcares reductores. en baño de María hirviendo. en caliente. La hidrólisis alcalina se realiza con hidróxido de sodio 2 M a temperatura ambiente. Es por ello que generalmente se aíslan mediante hidrólisis. y luego rociando hidróxido de amonio diluido. y en ella se pueden caracterizar los azúcares reductores. cloroformo y éter dietílico. Posteriormente se continúa extrayendo con acetato de etilo. Los fenoles pueden detectarse con solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico al 1% más 1% de ferricianuro de potasio. acetona y alcohol. con un solvente no miscible.11 La extracción inicial de los glicósidos fenólicos también puede hacerse de manera más eficiente mediante soxhlet. durante 4 hr. Posteriormente el extracto alcohólico de la planta se somete a hidrólisis ácida o alcalina. ya que fluorescen bajo luz ultravioleta. que luego es evaporado. ANALISIS DE GLICOSIDOS FENOLICOS: . La mayoría de compuestos fenólicos. pueden identificarse mediante cromatografía en capa fina. la clorofila y los carotenoides. Para detectar ácidos fenólicos puede utilizarse cromatografía en capa fina. Luego se enfría y filtra.DETECCION: Los fenoles rara vez se encuentran en forma libre en las plantas. debido a la acción de las fenolasas.

Sin embargo. y NO los “meta-difenoles”. Este reactivo colorea de azul o gris los fenoles con núcleo catecólico (tiene 2 grupos OH en posición “orto”) o hidroquinonas al exponer la placa a vapores amoniacales. Este problema se resuelve con el reactivo de Folin-Denis. . Para las antocianinas se requiere pH ácido. característica que se aprovecha para valorar los fenoles totales.. Pueden detectarse bandas de color amarillo. Las fracciones acuosas se combinan y agitan con n-propanol. Esto se logra usando metanol conteniendo ácido clorhídrico al 0.. Además. CUANTIFICACION DE FENOLES TOTALES: El permanganato de potasio oxida los fenoles en frío. pueden hallarse también presentes azúcares. Un reactivo que brinda información más específica sobre el tipo de fenoles presentes es el de Folin (tungstato de sodio. tales como el tipo de solvente y el pH. pero con dobles enlaces. azul o verde. quedando en la parte superior. La mezcla se satura con cloruro de sodio. agua. PURIFICACION DE EXTRACTOS FENOLICOS: Al prepararse un extracto vegetal que contenga glicósidos fenólicos. y luego polietilenglicol 4000 al 5% en etanol. la cual contiene la mayoría de glicósidos fenólicos. por lo que debe especificarse las condiciones estándar bajo las cuales se trabajó. Otro método de purificación consiste en emplear resinas de intercambio catiónico. Para evitar esto puede purificarse calentando varias veces con pequeñas cantidades de agua. ácidos. con lo que el n-propanol se separa. ya que solo se oxidan los difenoles “orto”y “para”. ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico). como por ejemplo la amberlita IRC-50 y Dower IXII. obteniéndose . etc.La absorción en el ultravioleta se emplea bastante en la determinación de fenoles totales (a 270nm). Luego se observa la fluorescencia bajo luz U.12 naturales”: difenil-boril-oxietilamina al 1% en metanol.V. se ha reportado que éste no es un buen método.El solvente más usado para elución en cromatografía es el etanol al 70%. otras sustancias NO FENOLICAS. la absorción de los fenoles naturales se ve afectada por muchos factores. que podrían interferir en la cromatografía. sí pueden reaccionar. CROMATOGRAFIA Y ESPECTROFOTOMETRIA: . que permite reducir estos ácidos y a la vez oxidar todos los fenoles. tales como el ácido cinámico.1% ó ácido acético al 15%. sales. Sin embargo.

1 M. CARACTERIZACION: . Son solubles en álcali. Extracto alcohólico Filtrar Residuo Concentrar (B. María) Filtrado Solución homogénea PbOAC 0. cloroformo y benceno. Para efectuar la cuantificación se toma una alícuota que contenga la sustancia fenólica. filtrar. reposar/24hr Precipitado Solución amarilla Rotavapor Fase acuosa Etanol Acetato de etilo. dando . y luego de agitar se mide la absorbancia a 730-760 nm. Vegetal + etanol Macerar en frío/72 hr. se hace reaccionar con el reactivo de Folin más una solución de carbonato de sodio. e insolubles en éter.Los flavonoides son generalmente solubles en agua y alcohol.13 color azul. debido a los óxidos de tungsteno y molibdeno. Extracción y aislamiento de flavonoides: Mat. concentrar Cromatografiar en columna abierta con gel de sílice.

Ejemplo: las flavonas dan precipitado amarillo o anaranjado. púrpuras y otras. rosadas. La detección de los flavonoides en ambos tipos de cromatografía puede hacerse usando lámpara de luz ultravioleta.La reacción más usual para detectar flavonoides es la de Shinoda: al extracto alcohólico se le añade un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado. en base al color observado antes y después de añadir amoníaco. Si viran de amarillo a rojo. Las isoflavonas y chalconas no se colorean. rojo obscuro o violeta. . sílica gel y poliamida.14 soluciones amarillas que se oscurecen al aire. Ejemplo: si los pétalos blancos de una flor se exponen a vapores de amoníaco y se tornan amarillos. anaranjadas. . observándose manchas fluorescentes azules. los flavonoles de rojo cerezo y las flavanonas de rojo violáceo. empleando como adsorbentes celulosa. También puede usarse gel de Sephadex. los flavonoides dan colores característicos.En algunos casos pueden hacerse pruebas directamente sobre el material vegetal. Se emplean los mismos adsorbentes que en la cromatografía en capa fina. medio ácido se . pero puede también emplearse cromatografía en papel. Las flavonas se colorean de naranja. A partir de ellas derivan otras clases. .Se utiliza con frecuencia cromatografía en capa fina. . o pueden formar precipitados. hay presencia de chalconas y auronas. mientras que las chalconas. que pueden cambiar tanto de color como de intensidad luego de su exposición a vapores de amoníaco o al reactivo de “Productos Naturales”.Prueba de Marini-Bettolo: con solución de cloruro de antimonio en tetracloruro de carbono. indica la presencia de flavonas y flavonoles. TECNICAS CROMATOGRAFICAS: . Se cuenta con información que permite deducir la posible estructura del flavonoide.La cromatografía en columna se emplea comúnmente para purificaciones preliminares y para separar grandes cantidades de flavonoides a partir de extractos vegetales. En decoloran y precipitan. Las chalconas son el primer tipo de flavonoides que se forman a lo largo de su biosíntesis.

. Por el contrario. la absorción del grupo carbonilo (entre 1680 y 1640 nm). el anillo aromático (entre 1600 a 1500). TECNICAS ESPECTROMETRICAS: El método más usual para analizar la estructura de un flavonoide es la observación en ultravioleta y visible. debido a que los espectros ultravioleta brindan mayor información.Infrarrojo: se usa muy poco en el análisis de flavonoides.Resonancia magnética nuclear: los espectros de RMN de flavonoides han cobrado mayor importancia en años recientes para determinación de estructuras. como para establecer el modelo de oxigenación. . . y provocan desplazamiento característico de los picos de absorción. Es común en este caso también el uso de “reactivos de desplazamiento”.El cloruro de aluminio forma complejos con grupos orto-hidroxilos y con grupos hidroxilcetona vecinos. lo cual se aprovecha para detectar un grupo OH en posición 7. Los espectros de absorción de los flavonoides se determinan comúnmente en solución metanólica. que permite obtener resultados cuali-cuantitativos en unos pocos minutos. El espectro típico consta de dos máximos de absorción en los rangos de 240 a 285 nm y 300 a 550 nm.15 . . por lo que desaparece al añadir ácido clorhídrico. y la de los grupos o-hidroxi-cetona (entre 3500 a 3200 nm) pueden ser útiles.La cromatografía líquida de alta resolución es muy utilizada para realizar separaciones a pequeña escala.El acetato de sodio ioniza únicamente el grupo hidroxilo más ácido del flavonoide. La variación de estos rangos depende del modelo de oxigenación y del grado de sustitución de los hidroxilos. Esto se hace tanto para identificar el tipo de flavonoide. el complejo formado con grupos hidroxil-cetona es estable. Sin embargo. La identificación del flavonoide y su modelo de oxigenación se facilita empleando “reactivos de desplazamiento”. Ejemplo: . Conlleva la ventaja de que es una técnica muy sensible y precisa. lo cual proporciona información adicional sobre la estructura. El complejo formado con grupos ohidroxilos es lábil en presencia de ácido. Estos se hacen reaccionar con el flavonoide.

DIFERENCIACION DE BETACIANINAS Y ANTOCIANINAS: . Para el análisis de resultados se toma en cuenta los pesos moleculares de los distintos núcleos básicos de los flavonoides.Haciendo electroforesis en papel. y pueden ser extraídas con alcohol amílico. y 532-554 nm para las betacianinas. a 100 grados centígrados. Las betacianinas tienen Rf muy bajos (0-0.1). Las quinonas se solubilizan en álcalis. poco solubles en agua y solubles en solventes orgánicos.4). 238 para flavonoles. . . mientras que las antocianinas no. anaranjados o rojos.Añadiendo hidróxido de sodio 2 M. QUINONAS: Son sólidos cristalinos amarillos.El espectro visible en metanol-ácido clorhídrico presenta un rango máximo de 505-535 nm para las antocianinas. las betacianinas viran a amarillo. bajo la forma de picratos. Ejemplo: 222 para flavonas.Calentando con ácido clorhídrico 2 M por 5 minutos. dando coloraciones que van desde el anaranjado al rojo o violeta. Las betacianinas se decoloran. usando como fase móvil butanol-ácido acético-agua. ANTOCIANINAS: Son solubles en agua e insolubles en los solventes orgánicos. mientras que las antocianinas tienen Rf moderados (0. lo cual se aprovecha para su . Es por ello que pueden extraerse con éter de petróleo.Espectrometría de masas: posee la ventaja de que requiere muy poca cantidad de muestra.1-0. 224 para flavanonas y chalconas. Pueden separarse mediante precipitación. . etc. Al hacerse cromatografía en capa fina se diferencian por su Rf. a pH ácido (2-4): las betacianinas migran al ánodo. Generalmente el grupo carbonilo de las quinonas no reacciona con los reactivos usuales de la función cetona. gota a gota.16 . Las benzoquinonas y naftoquinonas actúan como oxidantes. isoflavonas y auronas. .Mediante cromatografía. junto con clorofila y carotenos. También pueden precipitarse como cloruros mediante ebullición con ácido clorhídrico al 20%. Las antocianinas cambian a azul verdoso y luego se decoloran. y las antocianinas al cátodo.

6-metoxi-cumarina (escopoletina). Un resultado positivo está indicado por una coloración rosada en la fase alcalina (si hay poca cantidad de antraquinonas. Las quinonas pueden separarse entre sí. Su olor es el característico del heno fresco. Por lo menos tres de ellas caen entre 215 y 300 nm. y se agita con una solución acuosa alcalina (hidróxido de amonio al 10% (reacción de Bornträger). EXTRACCION: La extracción de las cumarinas puede realizarse sobre el material vegetal fresco o seco. Con la espectrometría de masas puede reconocerse a las quinonas por la facilidad con que pierden las dos moléculas de carbonilo. Así puede diferenciarse a las antraquinonas de otras quinonas. . belladona.17 análisis espectrofotométrico. ya que las primeras presentan 4 ó 5 bandas de absorción en el ultravioleta. El “haba tonka”(Coumarona odorata. ceylanicum es la que tiene menos). se filtra. el análisis bajo la luz ultravioleta es más sensible. rojo o violeta si hay alta concentración). pueden ser detectadas en la región visible. En el infrarrojo pueden detectarse las bandas características fuertes de los grupos carbonilo. por encima de los 430 nm. También puede usarse HPLC para aislar quinonas. cloroformo o éter). sin embargo. con solventes de diferentes polaridades. así como de los carotenos y clorofila mediante cromatografía en capa fina o en papel. La ruda contiene 10 derivados cumarínicos. en la región visible. púrpuras o verdes). pero puede ser de color anaranjado. además la raíz de avena. Las distintas especies de canela contienen cumarina no sustituida (C. CUMARINAS: La cumarina y sus glicósidos derivan de la benzo-alfa-pirona. violetas. La cumarina se ha encontrado en unas 150 especies. las semillas de este árbol de Guyana y Brasil se usan en perfumería) contiene 1 a 3% de cumarina. y la otra. pertenecientes a más de 30 familias. Como reveladores se puede emplear hidróxido de potasio al 10% en metanol (se ven manchas rojas. Puesto que las quinonas son coloreadas. Para ello se macera el material vegetal con un solvente orgánico inmiscible con el agua (ejemplo: benceno. de Jalapa. hojas de tabaco y estramonio contienen 7-hidroxi.

En base al color que muestren. Se prefiere NO USAR alúmina BASICA. A diferencia de las hidroxicumarinas. SEPARACION CROMATOGRAFICA Y DETECCION: Se utiliza ampliamente la cromatografía en columna.V. y pueden extraerse con éter de petróleo. es . para lo cual la mezcla sílica gel y celulosa incrementa la sensibilidad y resolución. pero ninguno de ellos es específico. el extracto obtenido se concentra. ya que degrada las cumarinas.7-dioxigenadas. de 365 nm antes y después de asperjar con hidróxido de potasio al 5 ó 10% en etanol.Amarillo-verdoso: cumarina no sustituída. Puesto que pueden encontrarse a veces formando glicósidos. o en refrigeración. . La extracción se hace con soxhlet. . obteniéndose así cristales al dejar en reposo. las furano-cumarinas son por lo general solubles en lípidos. pero antes es necesario añadir hidróxido de potasio. También se usa bastante la cromatografía en capa fina. Esta es la propiedad física más usual para reconocer una cumarina. tales como etanol. La adición de reactivo de Benedict a las cumarinas o flavonoides con grupos hidroxilo reactivos hace que la fluorescencia desaparezca total o parcialmente.Fluorescencia amarillo opaca u ocre: furanocumarina. Puede utilizarse solventes diversos.Fluorescencia púrpura: característica de 7-alcoxicumarina. Los componentes se detectan bajo luz U. La detección de las cumarinas puede hacerse también con otros reveladores.18 dependiendo de las estructuras de las cumarinas. . éter sulfúrico o de petróleo.Fluorescencia celeste: 7-hidroxi-cumarina y 5. Se pueden recristalizar con una mezcla de etanol-éter y luego se purifican mediante cromatografía. etc. empleando como adsorbentes la sílica gel o la alúmina “neutra o ácida”. acetona. Para detectar grupos fenólicos se emplea solución acuosa de cloruro férrico al 1%. Las cumarinas muestran intensa fluorescencia. con lo que los grupos hidroxilo dan color azul o verdoso. puede asignarse tentativamente ciertas características a las cumarinas: . La intensificación de la fluorescencia por tratamiento del cromatograma con vapores de amoníaco es indicio de grupos fenólicos en la cumarina.

5% etanol o éter-benceno (1:1). La intensidad de la fluorescencia aumenta al adicionar hidróxido de potasio al 10%. Comúnmente pueden separarse mediante cromatografía en capa fina en sílica gel. verdes.HPLC: Resulta ventajoso porque las separaciones son más rápidas y efectivas. . características de las cumarinas: 274 y 311 nm. Los grupos hidroxilo y carbonilo también muestran bandas características. Bandas de absorción U. Para obtener información respecto a la orientación de determinados grupos funcionales. usando como fase móvil cloroformo.: Puede encontrarse bandas características de la pirona en la región comprendida entre 1715 y 1745 cm a la -1. cloroformo + 1. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: Para dilucidar la estructura química de una cumarina nueva se debe 1) identificar primero los diferentes grupos sustituyentes. violetas o cafés. ácido bórico o cloruro de aluminio. puede utilizarse “reactivos de desplazamiento”. ESPECTROMETRIA DE MASAS: Las cumarinas producen un fuerte ion molecular a un valor de m/e de 146 (76%). ESPECTRO i.r. acetato de sodio. RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: También se emplean reactivos de desplazamiento.V. y un pico base a m/e de 118 (100%) (28 unidades menos por la pérdida de monóxido de carbono del anillo de pirona. sobre todo hidroxilos. Esto toma entre 1 a 2 horas. Ejemplo: se hace reaccionar a las cumarinas con hidróxido de sodio. amarillas.19 necesario antes hidrolizarlos con ácido. así como para fraccionar algunas cumarinas de cítricos. y 2) determinar su ubicación en el núcleo de la cumarina. Se ha utilizado por ejemplo para separar una mezcla de furano-cumarinas del perejil. que producen cambios espectrales. que corresponden a los anillos de benceno y pirona respectivamente. Se detectan bajo luz UV como manchas azules. .