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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA CURSO DE FITOQUÍMICA

GLICÓSIDOS
DEFINICION: Son compuestos que al ser hidrolizados dan origen a una porción que es azúcar y otra que no lo es (aglicona o genina). ESTRUCTURA: El enlace glicosídico se forma por la deshidratación del azúcar y de la aglicona. Un grupo hidroxilo de la aglicona se condensa con el hidroxilo del hemiacetal del azúcar, formándose así un acetal interno. Si el grupo OR de la aglicona se encuentra en el mismo sentido estérico que el grupo CH2OH del carbono 5, la configuración se designa beta; si está en sentido estérico opuesto, se designa alfa. Ejemplo:

CH3

Alfa-metil glucósido En la naturaleza se encuentran solo las formas beta. CARACTERISTICAS DE LOS GLICOSIDOS: - Son en general muy ligeramente solubles en agua, y un poco más solubles en etanol, metanol, o mezclas de ellos en agua. - En las plantas, los glicósidos a menudo están acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos, las cuales se localizan en el mismo tejido, aunque en células diferentes. - Los glicósidos son ópticamente activos, por lo que sus rotaciones específicas contribuyen a su caracterización física. FUNCION FISIOLOGICA: Se cree que los glicósidos intervienen en los fenómenos de óxidoreducción, así como en el crecimiento y fecundación de las plantas. Se cree además que los glicósidos flavonoides protegen de la luz y rayos

1 DERIVADOS DEL ACIDO BENZOICO Y SALICILICO: 1.2 Glucovainillina: Se encuentra presente en especies del género Vanilla (Fam. mediante hidrólisis enzimática durante la maduración de los frutos. y que debido a sus propiedades fungicidas también protegen a la corteza de los árboles contra el ataque de parásitos. pudiendo ser detectados por el intenso color verde. con actividad semejante a la del ácido salicílico. azul o negro que producen cuando se les agrega una solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico. Orchidaceae). los glicósidos se clasifican así: 1.1. Glicósidos cardiotónicos 1. Glicósidos cianogénicos 3. Saponinas: esteroidales y triterpénicas 4. Salicina 1. Debido a su naturaleza aromática muestran intensa absorción en la región ultravioleta del espectro. Salicaceae). púrpura. Glicósidos fenólicos 2.1 Salicina: Al ser hidrolizada produce saligenina y glucosa. 1. Se extrae de varias especies de los géneros Salix y Populus (Fam. la cual. GLICOSIDOS FENOLICOS: Son en general compuestos relativamente polares. lo cual permite identificarlos y cuantificarlos. CLASIFICACION: En base a la estructura molecular de las agliconas. con cierta solubilidad en agua. La salicina tiene propiedades antirreumáticas. genera vainillina .2 ultravioleta.1.

1.3 QUINONAS: . esteroides y terpenoides. Ejemplo: el dicumarol como anticoagulante y antibacterial. CHO CHO Glucosa-O OCH3 HOOCH3 Vainillina Glucovainillina 1. A pesar de haberse conocido desde esa época. principalmente en las familias Umbeliferaceae y Rutaceae. Dicho compuesto fue aislado por primera vez en 1820 por Vogel de la Coumarona odorata (“árbol de la tonka”). Cumarina: (Configuración C6C3 ) El nombre cumarina fue asignado originalmente a la estructura anotada arriba: benzo-alfa-pirona. Pueden encontrarse en todas las partes de la planta. Las cumarinas han cobrado gran interés en años recientes debido al amplio rango de actividad biológica que han mostrado. pero son más abundantes en los frutos. las aflatoxinas como hepatotóxicos y carcinogénicos. de las cuales sólo 35 carecen de oxígeno en posición 7. ligninas. La vainillina es bastante aromática. algunas se usan como saborizantes y en perfumería. Hasta hoy se conocen aproximadamente 800 cumarinas. la novobiocina como antibiótico.2 CUMARINAS: Son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas. por lo que se usa como agente sazonante y aromatizante en las industrias farmacéuticas y de alimentos. los progresos hechos en este campo fueron escasos hasta hace aproximadamente treinta y cinco años.3 y glucosa. Las cumarinas están biogenéticamente relacionadas con los flavonoides.

presente en Amanita muscaria. rojo o marrón (castaño). un glicósido antraquinónico. que por reducción se convierten en polifenoles. Benzoquinona 1. El colorante presente en la cochinilla (insecto nativo de Centro América) es el ácido carmínico. Algunas tienen propiedades antibióticas. que poseen un esqueleto carbonado de 15 átomos (C6C3C6). Rubiaceas. líquenes. Hasta hoy se conocen aproximadamente 900 flavonoides naturales.3. azul o violeta. Ericaceas y Liliaceas.4 FLAVONOIDES Se les llama también antoxantinas. pero si forman sales de hidroquinonas toman color verde. ruibargo. aislados también de hongos. Pueden ser de color amarillo. ejemplo: la muscarufina. Antraquinona: 1. Se encuentran ampliamente distribuidos en las . de color amarillo o blanco. Son pigmentos de plantas superiores.3.4 Son dicetonas insaturadas.2 Antraquinonas: Son las quinonas más extensamente distribuidas en las plantas. Poligonaceas.1 Benzoquinonas: Las benzoquinonas se han encontrado con frecuencia en los hongos. Son pigmentos vegetales. animales marinos y ciertos insectos. como por ejemplo en la frángula. hojas de sen y la cáscara sagrada. Los derivados antraquinónicos se encuentran en las plantas con acción purgante. los que fácilmente las regeneran por oxidación. Ramnaceas. 1. Se encuentran principalmente en las familias de las Leguminosas.

como espasmolíticos. con lo cual ayudan a la polinización. diuréticos.En medicina: contra la fragilidad capilar (ejemplo la rutina). Dan color amarillo a flores y frutos. unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo. La rotenona se usa como insecticida. EJEMPLOS DE FLAVONOIDES: 1. lo que hace aún mayor el número de glicósidos conocidos.Los flavonoides se utilizan como colorantes de lanas.4. Ejemplo de flavonas: apigenina (género Apium). USOS: . Umbelliferaceae. Los glicósidos de dihidrochalconas como edulcorantes. que pueden proporcionar la manera de repeler los gusanos que se alimentan de las hojas. . antihepatotóxicos. las polihidroxiflavonas se usan para conservar grasa o jugos de frutas (son antioxidantes). tales como las Compuestas. por lo que se unen fácilmente a las proteínas. como estrogénicos. . lo que atrae a mariposas y abejas. antimicrobianos y fungicidas. coleréticos (que estimulan la secreción biliar). ya sea en forma libre o como glicósidos. También hay flavonoides amargos.5 plantas.1 Flavonas y Flavonoles: Las flavonas son abundantes en familias herbáceas. y en diferentes posiciones. Es frecuente encontrar diferentes azúcares enlazados a una misma aglicona. Fam. Núcleo básico de un flavonoide: FLAVONA Tiene dos anillos aromáticos (A y B). mientras que los flavonoles abundan en las angiospermas leñosas. que en caso de existir se denomina C. dilatadores de las coronarias (Crataegus y Arnica). hongos o bacterias. No se encuentran en algas. convirtiéndose en potentes inhibidores de algunos sistemas enzimáticos. FUNCION FISIOLOGICA EN LAS PLANTAS: Los flavonoides son estructuras ricas en grupos hidroxilo.

5 BETACIANINAS: Son pigmentos rojos aislados de la remolacha. peonidina. debido al posible rompimiento de uno de sus anillos aromáticos. quenferol y miricetina. las antocianinas en solución se presentan de color rojo. Son pigmentos rojos y azules. relacionados con las antocianinas. A pH bajo. y kyanos.6 Ejemplo de flavonoides: quercetina. que quiere decir azul. que significa flor. con la formación de una pseudobase. 1. que son amarillas o blancas. familia Chenopodiaceae. Ejemplo: la betanina es el principal pigmento de la remolacha. delfinidina. Su estructura química es SIMILAR a la de los flavonoides: Antocianidinas: se llama así a las agliconas presentes en las antocianinas. Beta vulgaris. Los flavonoles son las 3-hidroxi-flavonas. A pH muy alto se rompe la estructura de la antocianina. cianidina. A un valor de pH mayor (cerca o mayor de 7) aparece un color azul verdoso. Leucoantocianinas o Proantocianidinas: se llaman así las sustancias capaces de convertirse en antocianidinas mediante calentamiento con un ácido mineral. Al incrementarse el pH el color desaparece. Antiguamente se les consideraba como flavonoides. Se ha observado que las .2 Antocianinas: El nombre antocianina proviene del griego anthos. de manera irreversible. a diferencia de las antoxantinas. pero luego se encontró que contienen nitrógeno y su estructura básica es distinta. Ejemplo de las más comunes en la naturaleza: pelargonidina. presentes en el género Quercus. Apigenina: flavona 1. familia Fagaceae.4.

Euphorbiaceae). en las semillas de albaricoque (Prunus malus). ya que poseen un grupo nitrilo unido a la aglicona. variedad Amara).o di-sacárido. La porción azucarada puede ser mono. La linamarina es una toxina extraída de la yuca común: Manihot utilissima y Manihot esculenta (Fam. cerezas. GLICOSIDOS CIANOGENICOS: Muchas plantas contienen glicósidos que al hidrolizarse generan ácido cianhídrico. 2. Ejemplo: la amigdalina. enzimas como la emulsina pueden hidrolizarlo así: amigdalasa Amigdalina + agua mandelonitrilo + 2 glucosas Prunasa Benzaldehído + HCN (gas) . ciruelas. incluyendo las semillas de las almendras amargas (Prunus amigdalus. Si es un disacárido. Amigdalina Muchos de estos glicósidos son derivados del nitrilo del ácido mandélico. y no se encuentran de manera conjunta en las mismas familias vegetales.7 betacianinas y las antocianinas se excluyen mutuamente. presente en la familia Rosaceae. y otras especies del género Prunus: duraznos.

8 3. También puede sintetizarse a partir de las saponinas esteroidales: vitamina D. . del género Dioscorea. hormonas sexuales y anticonceptivos. Durante muchos años se ha brindado especial importancia al estudio de plantas que contienen saponinas con el objeto de descubrir precursores de la cortisona.Sarsapogenina y smilagenina. . Mediante hidrólisis enzimática de las saponinas se obtienen sus agliconas: las sapogeninas. Esta sustancia fue aislada originalmente de la corteza adrenal y luego sintetizada a partir de los ácidos biliares del ganado. por lo que algunas plantas que las contienen se utilizan para pescar. Son tóxicas para los peces.Sarmentogenina.Sitosterol. . Causan hemólisis a bajas concentraciones. Luego se encontró que las sapogeninas esteroidales podían constituir una fácil más fácil. del género Smilax. Se ha encontrado que los esteroides aislados de plantas más importantes en la producción de cortisona son: . por lo que muchas veces se prefiere hidrolizar el extracto crudo de la planta y aislar la sapogenina libre del azúcar. del género Strophantus. SAPONINAS: Son poderosos agentes tensioactivos que forman espuma al ser agitados con agua. Biosíntesis de Saponinas: Las llamadas saponinas neutras derivan de los esteroides. mientras que las saponinas ácidas proceden de los triterpenoides: Acetato C RNúcleo D esteroidal A B Mevalonato O E C D A O B . En base a la estructura química de la aglicona.Diosgenina y botogenina. las saponinas pueden ser: esteroidales y triterpenoides. Las saponinas no son fáciles de aislar. Ambos tipos de saponinas son solubles en agua y etanol e insolubles en éter. de aceites crudos vegetales.

Perú y Bolivia).9 Escualeno Núcleo triterpenoide pentacíclico El proceso principal de biosíntesis que da lugar a las sapogeninas es similar. con anillo lactónico de 6 miembros y un esqueleto de 24 átomos de carbono. Liliaceae y Escrofularaceae. sarsapogenina (raíz de sarsaparrilla). y los bufanólidos o bufadienólidos. procedente de Chile. Se caracterizan porque presentan grupos hidroxilo en el carbono 3 y 14. Estos últimos se han llamado así debido a que están contenidos en el veneno del sapo común (género Bufus). que permiten la formación del hidrocarburo triterpenoide escualeno. 4. de altura. y triterpenoides pentacíclicos en la otra. Las saponinas triterpenoides se encuentran ampliamente distribuidas y constituyen la mayoría de las encontradas en la naturaleza. e incluye la condensación de subunidades de acetato. que origina esteroides en una dirección. Tienen un anillo lactónico no saturado en el carbono 17. Entre las plantas que contienen saponinas triterpenoides se encuentran: la corteza de Quillaja saponaria (árbol de 18 m. dando así origen a dos tipos de agliconas cardiotónicas: cardenólidos. Ejemplo: digitonina (Digitalis purpurea y Digitalis lanata). Purpurea). el cual puede ser pentagonal o hexagonal. aunque también se hallan en especies vegetales. gitogina (D. semillas de soya y el ginseng. Entre las fuentes ricas de saponinas esteroidales se encuentran especies de las familias Dioscoreaceae. GLICOSIDOS CARDIOTONICOS: Se han aislado de las angiospermas principalmente. Ejemplo: . raíz de regaliz. debido a su abundancia en este tipo de plantas. que incluyen anillos lactónicos de 5 miembros y un esqueleto de 23 átomos de carbono.

dejando los glicósidos en solución. ANALISIS Y CARACTERIZACION DE GLICOSIDOS: Siendo los glicósidos sustancias con núcleo estructural muy diverso. d. ceras. c. para precipitar las impurezas. etc. Posteriormente puede hidrolizarse para determinar la naturaleza del azúcar y de la aglicona. tratando el material vegetal con éter de petróleo o cloroformo. Luego se filtra. Con esto quedan los heterósidos cristalizados. y el filtrado (glicósidos más exceso de plomo) se trata con una corriente de ácido sulfhídrico. Los cristales de glicósidos se obtienen mediante evaporación del filtrado. o hirviéndolo en alcohol por 15 min. por lo que los métodos de separación y purificación son también distintos. en frío.10 Cardenólido Bufadienólido EXTRACCION. Tratamiento de la planta con vapor de agua. sus solubilidades varían. y luego se enfría. Luego el residuo se macera con alcohol diluido durante varias horas. Tratando el material vegetal con ácido a pH 1 ó 2. que precipita el plomo como sulfuro. . el cual es removido por filtración. Realizando la extracción inicial a temperatura muy baja. Para evitar esto deben inactivarse previamente a la extracción. lo cual se logra mediante: a. Poniendo el material fresco o seco en agua caliente. b. EXTRACCION GENERAL: El material vegetal se extrae con alcohol en caliente. El macerado se trata con solución de acetato de plomo. grasas. Sin embargo. INACTIVACION DE ENZIMAS: Los glicósidos se encuentran muchas veces acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos. por lo general el solvente a emplear para la extracción inicial es etanol o metanol con agua. EXTRACCION DE GLICOSIDOS FENOLICOS: Se puede primero separar las materias resinosas.

Posteriormente el extracto alcohólico de la planta se somete a hidrólisis ácida o alcalina. Se usa ácido sulfúrico al 2-5% o ácido clorhídrico 1 ó 2 N durante algunas horas. y en ella se pueden caracterizar los azúcares reductores. los cuales se someten a recristalización con algún solvente apropiado.11 La extracción inicial de los glicósidos fenólicos también puede hacerse de manera más eficiente mediante soxhlet. Posteriormente se continúa extrayendo con acetato de etilo. Luego se enfría y filtra. La hidrólisis alcalina se realiza con hidróxido de sodio 2 M a temperatura ambiente. con un solvente no miscible. como por ejemplo el éter o cloroformo. A veces la aglicona precipita y se recoge con un solvente más denso que el agua. La fracción acuosa ácida se neutraliza con carbonato de bario. pueden identificarse mediante cromatografía en capa fina. cloroformo y éter dietílico. Los fenoles pueden detectarse con solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico al 1% más 1% de ferricianuro de potasio. en baño de María hirviendo.DETECCION: Los fenoles rara vez se encuentran en forma libre en las plantas. La mayoría de compuestos fenólicos. que luego es evaporado.6-dicloroquinonacloroimida al 2% en cloroformo). También es útil como revelador el reactivo de “productos . Estos permiten eliminar los lípidos. Otras veces se obtiene mediante extracción de la solución acuosa resultante de la hidrólisis. Se debe observar manchas azules. CUANTIFICACION GENERAL DE GLICOSIDOS: Para valorar los glicósidos se aprovecha la capacidad que tienen los ácidos de liberar los azúcares reductores. con reactivo de Gibbs como revelador (2. Para detectar ácidos fenólicos puede utilizarse cromatografía en capa fina. y luego rociando hidróxido de amonio diluido. debido a la acción de las fenolasas. Los glicósidos fenólicos son muy sensibles a la oxidación enzimática. Dicha fluorescencia se intensifica por la acción de vapores amoniacales. sobre todo los flavonoides. Esto se evita aislándolos de los tejidos con alcohol caliente. empleando sucesivamente varios solventes de diferente polaridad. Estos últimos aíslan los glicósidos. la clorofila y los carotenoides. ya que fluorescen bajo luz ultravioleta. acetona y alcohol. La hidrólisis ácida se hace con ácido clorhídrico 2 M durante media hora. Es por ello que generalmente se aíslan mediante hidrólisis. ANALISIS DE GLICOSIDOS FENOLICOS: . durante 4 hr. en caliente. así: éter de petróleo.

con lo que el n-propanol se separa. Un reactivo que brinda información más específica sobre el tipo de fenoles presentes es el de Folin (tungstato de sodio.El solvente más usado para elución en cromatografía es el etanol al 70%. y luego polietilenglicol 4000 al 5% en etanol.. y NO los “meta-difenoles”.12 naturales”: difenil-boril-oxietilamina al 1% en metanol. Sin embargo. La mezcla se satura con cloruro de sodio. tales como el ácido cinámico.. Para las antocianinas se requiere pH ácido. ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico). como por ejemplo la amberlita IRC-50 y Dower IXII. que podrían interferir en la cromatografía. Este problema se resuelve con el reactivo de Folin-Denis.1% ó ácido acético al 15%. CROMATOGRAFIA Y ESPECTROFOTOMETRIA: . pero con dobles enlaces. sales. ácidos. obteniéndose . Esto se logra usando metanol conteniendo ácido clorhídrico al 0. tales como el tipo de solvente y el pH. quedando en la parte superior. que permite reducir estos ácidos y a la vez oxidar todos los fenoles. la absorción de los fenoles naturales se ve afectada por muchos factores. Pueden detectarse bandas de color amarillo. Este reactivo colorea de azul o gris los fenoles con núcleo catecólico (tiene 2 grupos OH en posición “orto”) o hidroquinonas al exponer la placa a vapores amoniacales. la cual contiene la mayoría de glicósidos fenólicos.La absorción en el ultravioleta se emplea bastante en la determinación de fenoles totales (a 270nm). PURIFICACION DE EXTRACTOS FENOLICOS: Al prepararse un extracto vegetal que contenga glicósidos fenólicos. sí pueden reaccionar. Sin embargo. por lo que debe especificarse las condiciones estándar bajo las cuales se trabajó. Las fracciones acuosas se combinan y agitan con n-propanol. Otro método de purificación consiste en emplear resinas de intercambio catiónico. Luego se observa la fluorescencia bajo luz U. agua. característica que se aprovecha para valorar los fenoles totales. azul o verde. . etc. se ha reportado que éste no es un buen método. otras sustancias NO FENOLICAS. CUANTIFICACION DE FENOLES TOTALES: El permanganato de potasio oxida los fenoles en frío. Además. Para evitar esto puede purificarse calentando varias veces con pequeñas cantidades de agua.V. pueden hallarse también presentes azúcares. ya que solo se oxidan los difenoles “orto”y “para”.

13 color azul. filtrar. cloroformo y benceno. dando . Son solubles en álcali. concentrar Cromatografiar en columna abierta con gel de sílice. Extracción y aislamiento de flavonoides: Mat. Extracto alcohólico Filtrar Residuo Concentrar (B. debido a los óxidos de tungsteno y molibdeno. se hace reaccionar con el reactivo de Folin más una solución de carbonato de sodio. Para efectuar la cuantificación se toma una alícuota que contenga la sustancia fenólica.Los flavonoides son generalmente solubles en agua y alcohol. María) Filtrado Solución homogénea PbOAC 0. e insolubles en éter. y luego de agitar se mide la absorbancia a 730-760 nm. reposar/24hr Precipitado Solución amarilla Rotavapor Fase acuosa Etanol Acetato de etilo. CARACTERIZACION: . Vegetal + etanol Macerar en frío/72 hr.1 M.

Se cuenta con información que permite deducir la posible estructura del flavonoide. Las flavonas se colorean de naranja. En decoloran y precipitan.Se utiliza con frecuencia cromatografía en capa fina. sílica gel y poliamida. Las chalconas son el primer tipo de flavonoides que se forman a lo largo de su biosíntesis. . También puede usarse gel de Sephadex. . TECNICAS CROMATOGRAFICAS: . . Ejemplo: si los pétalos blancos de una flor se exponen a vapores de amoníaco y se tornan amarillos. los flavonoles de rojo cerezo y las flavanonas de rojo violáceo. Si viran de amarillo a rojo. medio ácido se . o pueden formar precipitados.En algunos casos pueden hacerse pruebas directamente sobre el material vegetal.Prueba de Marini-Bettolo: con solución de cloruro de antimonio en tetracloruro de carbono. mientras que las chalconas. A partir de ellas derivan otras clases.14 soluciones amarillas que se oscurecen al aire. La detección de los flavonoides en ambos tipos de cromatografía puede hacerse usando lámpara de luz ultravioleta. púrpuras y otras. en base al color observado antes y después de añadir amoníaco. que pueden cambiar tanto de color como de intensidad luego de su exposición a vapores de amoníaco o al reactivo de “Productos Naturales”. .La reacción más usual para detectar flavonoides es la de Shinoda: al extracto alcohólico se le añade un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado. anaranjadas. rojo obscuro o violeta. rosadas. observándose manchas fluorescentes azules. Las isoflavonas y chalconas no se colorean.La cromatografía en columna se emplea comúnmente para purificaciones preliminares y para separar grandes cantidades de flavonoides a partir de extractos vegetales. empleando como adsorbentes celulosa. pero puede también emplearse cromatografía en papel. los flavonoides dan colores característicos. hay presencia de chalconas y auronas. indica la presencia de flavonas y flavonoles. Ejemplo: las flavonas dan precipitado amarillo o anaranjado. Se emplean los mismos adsorbentes que en la cromatografía en capa fina.

Los espectros de absorción de los flavonoides se determinan comúnmente en solución metanólica. como para establecer el modelo de oxigenación. . la absorción del grupo carbonilo (entre 1680 y 1640 nm). Ejemplo: .Resonancia magnética nuclear: los espectros de RMN de flavonoides han cobrado mayor importancia en años recientes para determinación de estructuras.El acetato de sodio ioniza únicamente el grupo hidroxilo más ácido del flavonoide. . TECNICAS ESPECTROMETRICAS: El método más usual para analizar la estructura de un flavonoide es la observación en ultravioleta y visible. La variación de estos rangos depende del modelo de oxigenación y del grado de sustitución de los hidroxilos. El espectro típico consta de dos máximos de absorción en los rangos de 240 a 285 nm y 300 a 550 nm. y provocan desplazamiento característico de los picos de absorción. lo cual se aprovecha para detectar un grupo OH en posición 7. Por el contrario. .La cromatografía líquida de alta resolución es muy utilizada para realizar separaciones a pequeña escala. Es común en este caso también el uso de “reactivos de desplazamiento”. Estos se hacen reaccionar con el flavonoide. por lo que desaparece al añadir ácido clorhídrico. El complejo formado con grupos ohidroxilos es lábil en presencia de ácido. el anillo aromático (entre 1600 a 1500).El cloruro de aluminio forma complejos con grupos orto-hidroxilos y con grupos hidroxilcetona vecinos. Sin embargo.15 . La identificación del flavonoide y su modelo de oxigenación se facilita empleando “reactivos de desplazamiento”. . que permite obtener resultados cuali-cuantitativos en unos pocos minutos. debido a que los espectros ultravioleta brindan mayor información. Conlleva la ventaja de que es una técnica muy sensible y precisa.Infrarrojo: se usa muy poco en el análisis de flavonoides. lo cual proporciona información adicional sobre la estructura. y la de los grupos o-hidroxi-cetona (entre 3500 a 3200 nm) pueden ser útiles. el complejo formado con grupos hidroxil-cetona es estable. Esto se hace tanto para identificar el tipo de flavonoide.

Haciendo electroforesis en papel. a 100 grados centígrados. 224 para flavanonas y chalconas. También pueden precipitarse como cloruros mediante ebullición con ácido clorhídrico al 20%. Ejemplo: 222 para flavonas. usando como fase móvil butanol-ácido acético-agua. anaranjados o rojos. . Es por ello que pueden extraerse con éter de petróleo. gota a gota. dando coloraciones que van desde el anaranjado al rojo o violeta. Las betacianinas se decoloran. las betacianinas viran a amarillo. . DIFERENCIACION DE BETACIANINAS Y ANTOCIANINAS: . mientras que las antocianinas tienen Rf moderados (0. y las antocianinas al cátodo. Las benzoquinonas y naftoquinonas actúan como oxidantes. . QUINONAS: Son sólidos cristalinos amarillos. lo cual se aprovecha para su . junto con clorofila y carotenos. . Pueden separarse mediante precipitación. bajo la forma de picratos. Las betacianinas tienen Rf muy bajos (0-0. Las quinonas se solubilizan en álcalis. Las antocianinas cambian a azul verdoso y luego se decoloran. etc.Calentando con ácido clorhídrico 2 M por 5 minutos.1).Añadiendo hidróxido de sodio 2 M.16 . a pH ácido (2-4): las betacianinas migran al ánodo.El espectro visible en metanol-ácido clorhídrico presenta un rango máximo de 505-535 nm para las antocianinas. poco solubles en agua y solubles en solventes orgánicos. y pueden ser extraídas con alcohol amílico. isoflavonas y auronas. mientras que las antocianinas no.1-0. Generalmente el grupo carbonilo de las quinonas no reacciona con los reactivos usuales de la función cetona. ANTOCIANINAS: Son solubles en agua e insolubles en los solventes orgánicos.Espectrometría de masas: posee la ventaja de que requiere muy poca cantidad de muestra. Para el análisis de resultados se toma en cuenta los pesos moleculares de los distintos núcleos básicos de los flavonoides.Mediante cromatografía. 238 para flavonoles.4). y 532-554 nm para las betacianinas. Al hacerse cromatografía en capa fina se diferencian por su Rf.

sin embargo. ceylanicum es la que tiene menos). cloroformo o éter). 6-metoxi-cumarina (escopoletina). pueden ser detectadas en la región visible. EXTRACCION: La extracción de las cumarinas puede realizarse sobre el material vegetal fresco o seco. rojo o violeta si hay alta concentración). belladona. Un resultado positivo está indicado por una coloración rosada en la fase alcalina (si hay poca cantidad de antraquinonas. Así puede diferenciarse a las antraquinonas de otras quinonas. La cumarina se ha encontrado en unas 150 especies. por encima de los 430 nm. el análisis bajo la luz ultravioleta es más sensible. y la otra. Por lo menos tres de ellas caen entre 215 y 300 nm.17 análisis espectrofotométrico. hojas de tabaco y estramonio contienen 7-hidroxi. Las distintas especies de canela contienen cumarina no sustituida (C. La ruda contiene 10 derivados cumarínicos. . las semillas de este árbol de Guyana y Brasil se usan en perfumería) contiene 1 a 3% de cumarina. Como reveladores se puede emplear hidróxido de potasio al 10% en metanol (se ven manchas rojas. con solventes de diferentes polaridades. Su olor es el característico del heno fresco. pero puede ser de color anaranjado. El “haba tonka”(Coumarona odorata. Para ello se macera el material vegetal con un solvente orgánico inmiscible con el agua (ejemplo: benceno. ya que las primeras presentan 4 ó 5 bandas de absorción en el ultravioleta. en la región visible. y se agita con una solución acuosa alcalina (hidróxido de amonio al 10% (reacción de Bornträger). Puesto que las quinonas son coloreadas. En el infrarrojo pueden detectarse las bandas características fuertes de los grupos carbonilo. violetas. Las quinonas pueden separarse entre sí. de Jalapa. se filtra. además la raíz de avena. pertenecientes a más de 30 familias. Con la espectrometría de masas puede reconocerse a las quinonas por la facilidad con que pierden las dos moléculas de carbonilo. así como de los carotenos y clorofila mediante cromatografía en capa fina o en papel. También puede usarse HPLC para aislar quinonas. púrpuras o verdes). CUMARINAS: La cumarina y sus glicósidos derivan de la benzo-alfa-pirona.

para lo cual la mezcla sílica gel y celulosa incrementa la sensibilidad y resolución. . También se usa bastante la cromatografía en capa fina. Esta es la propiedad física más usual para reconocer una cumarina. pero antes es necesario añadir hidróxido de potasio. La adición de reactivo de Benedict a las cumarinas o flavonoides con grupos hidroxilo reactivos hace que la fluorescencia desaparezca total o parcialmente. Se prefiere NO USAR alúmina BASICA. de 365 nm antes y después de asperjar con hidróxido de potasio al 5 ó 10% en etanol. Se pueden recristalizar con una mezcla de etanol-éter y luego se purifican mediante cromatografía.18 dependiendo de las estructuras de las cumarinas. éter sulfúrico o de petróleo.Fluorescencia celeste: 7-hidroxi-cumarina y 5. con lo que los grupos hidroxilo dan color azul o verdoso. pero ninguno de ellos es específico. Puede utilizarse solventes diversos. las furano-cumarinas son por lo general solubles en lípidos. o en refrigeración. La detección de las cumarinas puede hacerse también con otros reveladores. acetona.V. etc. Las cumarinas muestran intensa fluorescencia. Para detectar grupos fenólicos se emplea solución acuosa de cloruro férrico al 1%. ya que degrada las cumarinas. Puesto que pueden encontrarse a veces formando glicósidos. . es . En base al color que muestren.7-dioxigenadas. puede asignarse tentativamente ciertas características a las cumarinas: . y pueden extraerse con éter de petróleo. el extracto obtenido se concentra.Amarillo-verdoso: cumarina no sustituída.Fluorescencia amarillo opaca u ocre: furanocumarina. empleando como adsorbentes la sílica gel o la alúmina “neutra o ácida”. Los componentes se detectan bajo luz U. tales como etanol.Fluorescencia púrpura: característica de 7-alcoxicumarina. SEPARACION CROMATOGRAFICA Y DETECCION: Se utiliza ampliamente la cromatografía en columna. La extracción se hace con soxhlet. . A diferencia de las hidroxicumarinas. obteniéndose así cristales al dejar en reposo. La intensificación de la fluorescencia por tratamiento del cromatograma con vapores de amoníaco es indicio de grupos fenólicos en la cumarina.

Se ha utilizado por ejemplo para separar una mezcla de furano-cumarinas del perejil.V. Los grupos hidroxilo y carbonilo también muestran bandas características. ESPECTRO i. Esto toma entre 1 a 2 horas. que producen cambios espectrales. así como para fraccionar algunas cumarinas de cítricos. Para obtener información respecto a la orientación de determinados grupos funcionales. amarillas.: Puede encontrarse bandas características de la pirona en la región comprendida entre 1715 y 1745 cm a la -1. que corresponden a los anillos de benceno y pirona respectivamente. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: Para dilucidar la estructura química de una cumarina nueva se debe 1) identificar primero los diferentes grupos sustituyentes. usando como fase móvil cloroformo. Se detectan bajo luz UV como manchas azules. RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: También se emplean reactivos de desplazamiento. cloroformo + 1. puede utilizarse “reactivos de desplazamiento”. La intensidad de la fluorescencia aumenta al adicionar hidróxido de potasio al 10%. características de las cumarinas: 274 y 311 nm. . Comúnmente pueden separarse mediante cromatografía en capa fina en sílica gel.r. Bandas de absorción U. verdes. ácido bórico o cloruro de aluminio. acetato de sodio.5% etanol o éter-benceno (1:1). y 2) determinar su ubicación en el núcleo de la cumarina. ESPECTROMETRIA DE MASAS: Las cumarinas producen un fuerte ion molecular a un valor de m/e de 146 (76%). sobre todo hidroxilos.19 necesario antes hidrolizarlos con ácido. y un pico base a m/e de 118 (100%) (28 unidades menos por la pérdida de monóxido de carbono del anillo de pirona. Ejemplo: se hace reaccionar a las cumarinas con hidróxido de sodio. . violetas o cafés.HPLC: Resulta ventajoso porque las separaciones son más rápidas y efectivas.

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