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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA CURSO DE FITOQUÍMICA

GLICÓSIDOS
DEFINICION: Son compuestos que al ser hidrolizados dan origen a una porción que es azúcar y otra que no lo es (aglicona o genina). ESTRUCTURA: El enlace glicosídico se forma por la deshidratación del azúcar y de la aglicona. Un grupo hidroxilo de la aglicona se condensa con el hidroxilo del hemiacetal del azúcar, formándose así un acetal interno. Si el grupo OR de la aglicona se encuentra en el mismo sentido estérico que el grupo CH2OH del carbono 5, la configuración se designa beta; si está en sentido estérico opuesto, se designa alfa. Ejemplo:

CH3

Alfa-metil glucósido En la naturaleza se encuentran solo las formas beta. CARACTERISTICAS DE LOS GLICOSIDOS: - Son en general muy ligeramente solubles en agua, y un poco más solubles en etanol, metanol, o mezclas de ellos en agua. - En las plantas, los glicósidos a menudo están acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos, las cuales se localizan en el mismo tejido, aunque en células diferentes. - Los glicósidos son ópticamente activos, por lo que sus rotaciones específicas contribuyen a su caracterización física. FUNCION FISIOLOGICA: Se cree que los glicósidos intervienen en los fenómenos de óxidoreducción, así como en el crecimiento y fecundación de las plantas. Se cree además que los glicósidos flavonoides protegen de la luz y rayos

Salicina 1. GLICOSIDOS FENOLICOS: Son en general compuestos relativamente polares.1 Salicina: Al ser hidrolizada produce saligenina y glucosa. Saponinas: esteroidales y triterpénicas 4. con cierta solubilidad en agua. la cual.2 ultravioleta. Glicósidos fenólicos 2. con actividad semejante a la del ácido salicílico. Glicósidos cianogénicos 3. Debido a su naturaleza aromática muestran intensa absorción en la región ultravioleta del espectro. azul o negro que producen cuando se les agrega una solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico. Orchidaceae). los glicósidos se clasifican así: 1. CLASIFICACION: En base a la estructura molecular de las agliconas. Se extrae de varias especies de los géneros Salix y Populus (Fam. genera vainillina . púrpura. y que debido a sus propiedades fungicidas también protegen a la corteza de los árboles contra el ataque de parásitos. mediante hidrólisis enzimática durante la maduración de los frutos.1. pudiendo ser detectados por el intenso color verde.2 Glucovainillina: Se encuentra presente en especies del género Vanilla (Fam. Salicaceae).1. La salicina tiene propiedades antirreumáticas. lo cual permite identificarlos y cuantificarlos. Glicósidos cardiotónicos 1. 1.1 DERIVADOS DEL ACIDO BENZOICO Y SALICILICO: 1.

A pesar de haberse conocido desde esa época. Las cumarinas están biogenéticamente relacionadas con los flavonoides. por lo que se usa como agente sazonante y aromatizante en las industrias farmacéuticas y de alimentos.3 QUINONAS: . la novobiocina como antibiótico. La vainillina es bastante aromática. principalmente en las familias Umbeliferaceae y Rutaceae. de las cuales sólo 35 carecen de oxígeno en posición 7.2 CUMARINAS: Son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas. Hasta hoy se conocen aproximadamente 800 cumarinas. 1. CHO CHO Glucosa-O OCH3 HOOCH3 Vainillina Glucovainillina 1. Pueden encontrarse en todas las partes de la planta. las aflatoxinas como hepatotóxicos y carcinogénicos. Las cumarinas han cobrado gran interés en años recientes debido al amplio rango de actividad biológica que han mostrado. algunas se usan como saborizantes y en perfumería.3 y glucosa. Cumarina: (Configuración C6C3 ) El nombre cumarina fue asignado originalmente a la estructura anotada arriba: benzo-alfa-pirona. Ejemplo: el dicumarol como anticoagulante y antibacterial. Dicho compuesto fue aislado por primera vez en 1820 por Vogel de la Coumarona odorata (“árbol de la tonka”). los progresos hechos en este campo fueron escasos hasta hace aproximadamente treinta y cinco años. pero son más abundantes en los frutos. esteroides y terpenoides. ligninas.

Hasta hoy se conocen aproximadamente 900 flavonoides naturales.1 Benzoquinonas: Las benzoquinonas se han encontrado con frecuencia en los hongos. aislados también de hongos. Pueden ser de color amarillo.4 FLAVONOIDES Se les llama también antoxantinas. Se encuentran ampliamente distribuidos en las . El colorante presente en la cochinilla (insecto nativo de Centro América) es el ácido carmínico. Ramnaceas. que por reducción se convierten en polifenoles. rojo o marrón (castaño). Antraquinona: 1. Benzoquinona 1. Son pigmentos vegetales. hojas de sen y la cáscara sagrada. Se encuentran principalmente en las familias de las Leguminosas.3. Ericaceas y Liliaceas. Los derivados antraquinónicos se encuentran en las plantas con acción purgante. animales marinos y ciertos insectos.2 Antraquinonas: Son las quinonas más extensamente distribuidas en las plantas. ejemplo: la muscarufina. de color amarillo o blanco. Son pigmentos de plantas superiores. un glicósido antraquinónico. como por ejemplo en la frángula. pero si forman sales de hidroquinonas toman color verde. Poligonaceas.4 Son dicetonas insaturadas. Rubiaceas.3. presente en Amanita muscaria. que poseen un esqueleto carbonado de 15 átomos (C6C3C6). líquenes. ruibargo. 1. azul o violeta. los que fácilmente las regeneran por oxidación. Algunas tienen propiedades antibióticas.

coleréticos (que estimulan la secreción biliar). No se encuentran en algas.1 Flavonas y Flavonoles: Las flavonas son abundantes en familias herbáceas. FUNCION FISIOLOGICA EN LAS PLANTAS: Los flavonoides son estructuras ricas en grupos hidroxilo. hongos o bacterias. con lo cual ayudan a la polinización. convirtiéndose en potentes inhibidores de algunos sistemas enzimáticos. Umbelliferaceae. Fam. mientras que los flavonoles abundan en las angiospermas leñosas. que pueden proporcionar la manera de repeler los gusanos que se alimentan de las hojas. Es frecuente encontrar diferentes azúcares enlazados a una misma aglicona. Núcleo básico de un flavonoide: FLAVONA Tiene dos anillos aromáticos (A y B). por lo que se unen fácilmente a las proteínas. Ejemplo de flavonas: apigenina (género Apium). y en diferentes posiciones.Los flavonoides se utilizan como colorantes de lanas. . que en caso de existir se denomina C. También hay flavonoides amargos. las polihidroxiflavonas se usan para conservar grasa o jugos de frutas (son antioxidantes). lo que hace aún mayor el número de glicósidos conocidos. antihepatotóxicos.5 plantas. unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo. . diuréticos. tales como las Compuestas. La rotenona se usa como insecticida. como estrogénicos. lo que atrae a mariposas y abejas. EJEMPLOS DE FLAVONOIDES: 1. Dan color amarillo a flores y frutos. dilatadores de las coronarias (Crataegus y Arnica).4. Los glicósidos de dihidrochalconas como edulcorantes. USOS: .En medicina: contra la fragilidad capilar (ejemplo la rutina). como espasmolíticos. antimicrobianos y fungicidas. ya sea en forma libre o como glicósidos.

Antiguamente se les consideraba como flavonoides. presentes en el género Quercus. con la formación de una pseudobase. Se ha observado que las . a diferencia de las antoxantinas. A un valor de pH mayor (cerca o mayor de 7) aparece un color azul verdoso. pero luego se encontró que contienen nitrógeno y su estructura básica es distinta. cianidina. A pH muy alto se rompe la estructura de la antocianina. que son amarillas o blancas. que significa flor. y kyanos. Ejemplo de las más comunes en la naturaleza: pelargonidina. Ejemplo: la betanina es el principal pigmento de la remolacha. de manera irreversible. Al incrementarse el pH el color desaparece. Leucoantocianinas o Proantocianidinas: se llaman así las sustancias capaces de convertirse en antocianidinas mediante calentamiento con un ácido mineral. Beta vulgaris. relacionados con las antocianinas.5 BETACIANINAS: Son pigmentos rojos aislados de la remolacha. debido al posible rompimiento de uno de sus anillos aromáticos. delfinidina.6 Ejemplo de flavonoides: quercetina. Son pigmentos rojos y azules. las antocianinas en solución se presentan de color rojo. Los flavonoles son las 3-hidroxi-flavonas. quenferol y miricetina. Apigenina: flavona 1. Su estructura química es SIMILAR a la de los flavonoides: Antocianidinas: se llama así a las agliconas presentes en las antocianinas. A pH bajo. familia Chenopodiaceae. peonidina. 1. familia Fagaceae.4.2 Antocianinas: El nombre antocianina proviene del griego anthos. que quiere decir azul.

variedad Amara). presente en la familia Rosaceae.o di-sacárido. enzimas como la emulsina pueden hidrolizarlo así: amigdalasa Amigdalina + agua mandelonitrilo + 2 glucosas Prunasa Benzaldehído + HCN (gas) . incluyendo las semillas de las almendras amargas (Prunus amigdalus. Amigdalina Muchos de estos glicósidos son derivados del nitrilo del ácido mandélico. cerezas. y otras especies del género Prunus: duraznos. 2. Si es un disacárido.7 betacianinas y las antocianinas se excluyen mutuamente. GLICOSIDOS CIANOGENICOS: Muchas plantas contienen glicósidos que al hidrolizarse generan ácido cianhídrico. La porción azucarada puede ser mono. ya que poseen un grupo nitrilo unido a la aglicona. La linamarina es una toxina extraída de la yuca común: Manihot utilissima y Manihot esculenta (Fam. Ejemplo: la amigdalina. y no se encuentran de manera conjunta en las mismas familias vegetales. Euphorbiaceae). en las semillas de albaricoque (Prunus malus). ciruelas.

Biosíntesis de Saponinas: Las llamadas saponinas neutras derivan de los esteroides. Las saponinas no son fáciles de aislar. Se ha encontrado que los esteroides aislados de plantas más importantes en la producción de cortisona son: . por lo que algunas plantas que las contienen se utilizan para pescar.Sitosterol. SAPONINAS: Son poderosos agentes tensioactivos que forman espuma al ser agitados con agua. Durante muchos años se ha brindado especial importancia al estudio de plantas que contienen saponinas con el objeto de descubrir precursores de la cortisona. del género Dioscorea. hormonas sexuales y anticonceptivos.Sarmentogenina. del género Strophantus.Sarsapogenina y smilagenina. . de aceites crudos vegetales. Son tóxicas para los peces. También puede sintetizarse a partir de las saponinas esteroidales: vitamina D. mientras que las saponinas ácidas proceden de los triterpenoides: Acetato C RNúcleo D esteroidal A B Mevalonato O E C D A O B . las saponinas pueden ser: esteroidales y triterpenoides. . Esta sustancia fue aislada originalmente de la corteza adrenal y luego sintetizada a partir de los ácidos biliares del ganado.Diosgenina y botogenina. Ambos tipos de saponinas son solubles en agua y etanol e insolubles en éter. por lo que muchas veces se prefiere hidrolizar el extracto crudo de la planta y aislar la sapogenina libre del azúcar. Luego se encontró que las sapogeninas esteroidales podían constituir una fácil más fácil. Causan hemólisis a bajas concentraciones. En base a la estructura química de la aglicona. . Mediante hidrólisis enzimática de las saponinas se obtienen sus agliconas: las sapogeninas. del género Smilax.8 3.

con anillo lactónico de 6 miembros y un esqueleto de 24 átomos de carbono. sarsapogenina (raíz de sarsaparrilla). dando así origen a dos tipos de agliconas cardiotónicas: cardenólidos. el cual puede ser pentagonal o hexagonal. raíz de regaliz. procedente de Chile. Estos últimos se han llamado así debido a que están contenidos en el veneno del sapo común (género Bufus). de altura. y triterpenoides pentacíclicos en la otra. que origina esteroides en una dirección. Se caracterizan porque presentan grupos hidroxilo en el carbono 3 y 14. Ejemplo: . debido a su abundancia en este tipo de plantas. Ejemplo: digitonina (Digitalis purpurea y Digitalis lanata). que incluyen anillos lactónicos de 5 miembros y un esqueleto de 23 átomos de carbono. Liliaceae y Escrofularaceae. Entre las fuentes ricas de saponinas esteroidales se encuentran especies de las familias Dioscoreaceae. e incluye la condensación de subunidades de acetato. gitogina (D. Las saponinas triterpenoides se encuentran ampliamente distribuidas y constituyen la mayoría de las encontradas en la naturaleza. GLICOSIDOS CARDIOTONICOS: Se han aislado de las angiospermas principalmente. semillas de soya y el ginseng. 4. aunque también se hallan en especies vegetales. Perú y Bolivia). y los bufanólidos o bufadienólidos.9 Escualeno Núcleo triterpenoide pentacíclico El proceso principal de biosíntesis que da lugar a las sapogeninas es similar. Purpurea). que permiten la formación del hidrocarburo triterpenoide escualeno. Entre las plantas que contienen saponinas triterpenoides se encuentran: la corteza de Quillaja saponaria (árbol de 18 m. Tienen un anillo lactónico no saturado en el carbono 17.

que precipita el plomo como sulfuro. El macerado se trata con solución de acetato de plomo. dejando los glicósidos en solución. Realizando la extracción inicial a temperatura muy baja. . tratando el material vegetal con éter de petróleo o cloroformo. grasas. ceras. Para evitar esto deben inactivarse previamente a la extracción. c. lo cual se logra mediante: a. Tratando el material vegetal con ácido a pH 1 ó 2. el cual es removido por filtración. Luego el residuo se macera con alcohol diluido durante varias horas. Poniendo el material fresco o seco en agua caliente. EXTRACCION DE GLICOSIDOS FENOLICOS: Se puede primero separar las materias resinosas. Posteriormente puede hidrolizarse para determinar la naturaleza del azúcar y de la aglicona. Luego se filtra. EXTRACCION GENERAL: El material vegetal se extrae con alcohol en caliente. y el filtrado (glicósidos más exceso de plomo) se trata con una corriente de ácido sulfhídrico. d. Con esto quedan los heterósidos cristalizados. para precipitar las impurezas. b. ANALISIS Y CARACTERIZACION DE GLICOSIDOS: Siendo los glicósidos sustancias con núcleo estructural muy diverso. en frío. y luego se enfría. por lo que los métodos de separación y purificación son también distintos. por lo general el solvente a emplear para la extracción inicial es etanol o metanol con agua. Los cristales de glicósidos se obtienen mediante evaporación del filtrado. INACTIVACION DE ENZIMAS: Los glicósidos se encuentran muchas veces acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos. etc.10 Cardenólido Bufadienólido EXTRACCION. sus solubilidades varían. o hirviéndolo en alcohol por 15 min. Sin embargo. Tratamiento de la planta con vapor de agua.

Esto se evita aislándolos de los tejidos con alcohol caliente. Los fenoles pueden detectarse con solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico al 1% más 1% de ferricianuro de potasio. La hidrólisis alcalina se realiza con hidróxido de sodio 2 M a temperatura ambiente.11 La extracción inicial de los glicósidos fenólicos también puede hacerse de manera más eficiente mediante soxhlet. CUANTIFICACION GENERAL DE GLICOSIDOS: Para valorar los glicósidos se aprovecha la capacidad que tienen los ácidos de liberar los azúcares reductores. la clorofila y los carotenoides.DETECCION: Los fenoles rara vez se encuentran en forma libre en las plantas. También es útil como revelador el reactivo de “productos . cloroformo y éter dietílico. en baño de María hirviendo. y en ella se pueden caracterizar los azúcares reductores.6-dicloroquinonacloroimida al 2% en cloroformo). Estos permiten eliminar los lípidos. empleando sucesivamente varios solventes de diferente polaridad. como por ejemplo el éter o cloroformo. pueden identificarse mediante cromatografía en capa fina. Se usa ácido sulfúrico al 2-5% o ácido clorhídrico 1 ó 2 N durante algunas horas. Para detectar ácidos fenólicos puede utilizarse cromatografía en capa fina. sobre todo los flavonoides. Estos últimos aíslan los glicósidos. Posteriormente se continúa extrayendo con acetato de etilo. ya que fluorescen bajo luz ultravioleta. que luego es evaporado. y luego rociando hidróxido de amonio diluido. La fracción acuosa ácida se neutraliza con carbonato de bario. durante 4 hr. Se debe observar manchas azules. Otras veces se obtiene mediante extracción de la solución acuosa resultante de la hidrólisis. en caliente. Los glicósidos fenólicos son muy sensibles a la oxidación enzimática. La mayoría de compuestos fenólicos. ANALISIS DE GLICOSIDOS FENOLICOS: . La hidrólisis ácida se hace con ácido clorhídrico 2 M durante media hora. debido a la acción de las fenolasas. acetona y alcohol. con reactivo de Gibbs como revelador (2. A veces la aglicona precipita y se recoge con un solvente más denso que el agua. Es por ello que generalmente se aíslan mediante hidrólisis. con un solvente no miscible. así: éter de petróleo. Posteriormente el extracto alcohólico de la planta se somete a hidrólisis ácida o alcalina. los cuales se someten a recristalización con algún solvente apropiado. Dicha fluorescencia se intensifica por la acción de vapores amoniacales. Luego se enfría y filtra.

La absorción en el ultravioleta se emplea bastante en la determinación de fenoles totales (a 270nm). Este reactivo colorea de azul o gris los fenoles con núcleo catecólico (tiene 2 grupos OH en posición “orto”) o hidroquinonas al exponer la placa a vapores amoniacales. La mezcla se satura con cloruro de sodio. azul o verde. sales. ya que solo se oxidan los difenoles “orto”y “para”. ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico). que permite reducir estos ácidos y a la vez oxidar todos los fenoles.El solvente más usado para elución en cromatografía es el etanol al 70%. Sin embargo. CUANTIFICACION DE FENOLES TOTALES: El permanganato de potasio oxida los fenoles en frío. tales como el ácido cinámico.1% ó ácido acético al 15%. Las fracciones acuosas se combinan y agitan con n-propanol. se ha reportado que éste no es un buen método. agua. característica que se aprovecha para valorar los fenoles totales. PURIFICACION DE EXTRACTOS FENOLICOS: Al prepararse un extracto vegetal que contenga glicósidos fenólicos. tales como el tipo de solvente y el pH. por lo que debe especificarse las condiciones estándar bajo las cuales se trabajó. otras sustancias NO FENOLICAS. como por ejemplo la amberlita IRC-50 y Dower IXII. con lo que el n-propanol se separa. pueden hallarse también presentes azúcares. quedando en la parte superior. Pueden detectarse bandas de color amarillo. Para evitar esto puede purificarse calentando varias veces con pequeñas cantidades de agua.12 naturales”: difenil-boril-oxietilamina al 1% en metanol. Un reactivo que brinda información más específica sobre el tipo de fenoles presentes es el de Folin (tungstato de sodio. la absorción de los fenoles naturales se ve afectada por muchos factores. Luego se observa la fluorescencia bajo luz U. la cual contiene la mayoría de glicósidos fenólicos. Otro método de purificación consiste en emplear resinas de intercambio catiónico. etc. Esto se logra usando metanol conteniendo ácido clorhídrico al 0. sí pueden reaccionar. CROMATOGRAFIA Y ESPECTROFOTOMETRIA: . obteniéndose .V. ácidos. que podrían interferir en la cromatografía.. Para las antocianinas se requiere pH ácido. Además. Sin embargo. y luego polietilenglicol 4000 al 5% en etanol.. pero con dobles enlaces. . Este problema se resuelve con el reactivo de Folin-Denis. y NO los “meta-difenoles”.

Son solubles en álcali. María) Filtrado Solución homogénea PbOAC 0.1 M.Los flavonoides son generalmente solubles en agua y alcohol. concentrar Cromatografiar en columna abierta con gel de sílice. debido a los óxidos de tungsteno y molibdeno. dando . se hace reaccionar con el reactivo de Folin más una solución de carbonato de sodio. Extracto alcohólico Filtrar Residuo Concentrar (B. Para efectuar la cuantificación se toma una alícuota que contenga la sustancia fenólica. cloroformo y benceno.13 color azul. reposar/24hr Precipitado Solución amarilla Rotavapor Fase acuosa Etanol Acetato de etilo. Vegetal + etanol Macerar en frío/72 hr. e insolubles en éter. filtrar. CARACTERIZACION: . y luego de agitar se mide la absorbancia a 730-760 nm. Extracción y aislamiento de flavonoides: Mat.

Se emplean los mismos adsorbentes que en la cromatografía en capa fina. La detección de los flavonoides en ambos tipos de cromatografía puede hacerse usando lámpara de luz ultravioleta. mientras que las chalconas. Ejemplo: las flavonas dan precipitado amarillo o anaranjado. los flavonoles de rojo cerezo y las flavanonas de rojo violáceo. púrpuras y otras. Las isoflavonas y chalconas no se colorean. que pueden cambiar tanto de color como de intensidad luego de su exposición a vapores de amoníaco o al reactivo de “Productos Naturales”. . También puede usarse gel de Sephadex. .Se utiliza con frecuencia cromatografía en capa fina. pero puede también emplearse cromatografía en papel. Las chalconas son el primer tipo de flavonoides que se forman a lo largo de su biosíntesis. observándose manchas fluorescentes azules. rosadas. los flavonoides dan colores característicos. anaranjadas. Las flavonas se colorean de naranja.14 soluciones amarillas que se oscurecen al aire.La reacción más usual para detectar flavonoides es la de Shinoda: al extracto alcohólico se le añade un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado. Se cuenta con información que permite deducir la posible estructura del flavonoide. empleando como adsorbentes celulosa. .Prueba de Marini-Bettolo: con solución de cloruro de antimonio en tetracloruro de carbono. sílica gel y poliamida. o pueden formar precipitados. Ejemplo: si los pétalos blancos de una flor se exponen a vapores de amoníaco y se tornan amarillos. medio ácido se .En algunos casos pueden hacerse pruebas directamente sobre el material vegetal.La cromatografía en columna se emplea comúnmente para purificaciones preliminares y para separar grandes cantidades de flavonoides a partir de extractos vegetales. hay presencia de chalconas y auronas. A partir de ellas derivan otras clases. . En decoloran y precipitan. rojo obscuro o violeta. Si viran de amarillo a rojo. indica la presencia de flavonas y flavonoles. en base al color observado antes y después de añadir amoníaco. TECNICAS CROMATOGRAFICAS: .

15 . La identificación del flavonoide y su modelo de oxigenación se facilita empleando “reactivos de desplazamiento”. lo cual proporciona información adicional sobre la estructura. .Infrarrojo: se usa muy poco en el análisis de flavonoides. por lo que desaparece al añadir ácido clorhídrico.El acetato de sodio ioniza únicamente el grupo hidroxilo más ácido del flavonoide. Ejemplo: .Resonancia magnética nuclear: los espectros de RMN de flavonoides han cobrado mayor importancia en años recientes para determinación de estructuras. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: El método más usual para analizar la estructura de un flavonoide es la observación en ultravioleta y visible. que permite obtener resultados cuali-cuantitativos en unos pocos minutos. Los espectros de absorción de los flavonoides se determinan comúnmente en solución metanólica. el complejo formado con grupos hidroxil-cetona es estable. debido a que los espectros ultravioleta brindan mayor información. El espectro típico consta de dos máximos de absorción en los rangos de 240 a 285 nm y 300 a 550 nm. Esto se hace tanto para identificar el tipo de flavonoide. . como para establecer el modelo de oxigenación. Es común en este caso también el uso de “reactivos de desplazamiento”.La cromatografía líquida de alta resolución es muy utilizada para realizar separaciones a pequeña escala.El cloruro de aluminio forma complejos con grupos orto-hidroxilos y con grupos hidroxilcetona vecinos. Por el contrario. y la de los grupos o-hidroxi-cetona (entre 3500 a 3200 nm) pueden ser útiles. . la absorción del grupo carbonilo (entre 1680 y 1640 nm). La variación de estos rangos depende del modelo de oxigenación y del grado de sustitución de los hidroxilos. y provocan desplazamiento característico de los picos de absorción. Estos se hacen reaccionar con el flavonoide. El complejo formado con grupos ohidroxilos es lábil en presencia de ácido. Conlleva la ventaja de que es una técnica muy sensible y precisa. el anillo aromático (entre 1600 a 1500). lo cual se aprovecha para detectar un grupo OH en posición 7. Sin embargo. .

Mediante cromatografía. Las betacianinas se decoloran. a pH ácido (2-4): las betacianinas migran al ánodo. poco solubles en agua y solubles en solventes orgánicos.Añadiendo hidróxido de sodio 2 M. junto con clorofila y carotenos.1-0.El espectro visible en metanol-ácido clorhídrico presenta un rango máximo de 505-535 nm para las antocianinas. gota a gota. y pueden ser extraídas con alcohol amílico. bajo la forma de picratos.Haciendo electroforesis en papel. mientras que las antocianinas tienen Rf moderados (0. Las benzoquinonas y naftoquinonas actúan como oxidantes. lo cual se aprovecha para su . Las quinonas se solubilizan en álcalis.1). . También pueden precipitarse como cloruros mediante ebullición con ácido clorhídrico al 20%.Calentando con ácido clorhídrico 2 M por 5 minutos. 238 para flavonoles. . Las betacianinas tienen Rf muy bajos (0-0. QUINONAS: Son sólidos cristalinos amarillos. las betacianinas viran a amarillo. y 532-554 nm para las betacianinas.16 . etc. a 100 grados centígrados. Pueden separarse mediante precipitación.Espectrometría de masas: posee la ventaja de que requiere muy poca cantidad de muestra. y las antocianinas al cátodo. 224 para flavanonas y chalconas. Para el análisis de resultados se toma en cuenta los pesos moleculares de los distintos núcleos básicos de los flavonoides. usando como fase móvil butanol-ácido acético-agua. isoflavonas y auronas. Las antocianinas cambian a azul verdoso y luego se decoloran. dando coloraciones que van desde el anaranjado al rojo o violeta. Es por ello que pueden extraerse con éter de petróleo. Ejemplo: 222 para flavonas. . Al hacerse cromatografía en capa fina se diferencian por su Rf. . Generalmente el grupo carbonilo de las quinonas no reacciona con los reactivos usuales de la función cetona. DIFERENCIACION DE BETACIANINAS Y ANTOCIANINAS: .4). ANTOCIANINAS: Son solubles en agua e insolubles en los solventes orgánicos. anaranjados o rojos. mientras que las antocianinas no.

pero puede ser de color anaranjado. de Jalapa. 6-metoxi-cumarina (escopoletina). Un resultado positivo está indicado por una coloración rosada en la fase alcalina (si hay poca cantidad de antraquinonas. Para ello se macera el material vegetal con un solvente orgánico inmiscible con el agua (ejemplo: benceno. CUMARINAS: La cumarina y sus glicósidos derivan de la benzo-alfa-pirona. rojo o violeta si hay alta concentración). en la región visible. las semillas de este árbol de Guyana y Brasil se usan en perfumería) contiene 1 a 3% de cumarina. La ruda contiene 10 derivados cumarínicos. se filtra. pertenecientes a más de 30 familias. así como de los carotenos y clorofila mediante cromatografía en capa fina o en papel. hojas de tabaco y estramonio contienen 7-hidroxi. por encima de los 430 nm. además la raíz de avena. EXTRACCION: La extracción de las cumarinas puede realizarse sobre el material vegetal fresco o seco. . púrpuras o verdes). sin embargo. Las quinonas pueden separarse entre sí. Como reveladores se puede emplear hidróxido de potasio al 10% en metanol (se ven manchas rojas. pueden ser detectadas en la región visible. También puede usarse HPLC para aislar quinonas. El “haba tonka”(Coumarona odorata. y la otra. ya que las primeras presentan 4 ó 5 bandas de absorción en el ultravioleta. La cumarina se ha encontrado en unas 150 especies. Su olor es el característico del heno fresco. con solventes de diferentes polaridades. ceylanicum es la que tiene menos). belladona.17 análisis espectrofotométrico. y se agita con una solución acuosa alcalina (hidróxido de amonio al 10% (reacción de Bornträger). Así puede diferenciarse a las antraquinonas de otras quinonas. En el infrarrojo pueden detectarse las bandas características fuertes de los grupos carbonilo. Las distintas especies de canela contienen cumarina no sustituida (C. violetas. cloroformo o éter). Por lo menos tres de ellas caen entre 215 y 300 nm. Puesto que las quinonas son coloreadas. el análisis bajo la luz ultravioleta es más sensible. Con la espectrometría de masas puede reconocerse a las quinonas por la facilidad con que pierden las dos moléculas de carbonilo.

Fluorescencia amarillo opaca u ocre: furanocumarina.V. Se prefiere NO USAR alúmina BASICA. . A diferencia de las hidroxicumarinas. Esta es la propiedad física más usual para reconocer una cumarina. empleando como adsorbentes la sílica gel o la alúmina “neutra o ácida”. obteniéndose así cristales al dejar en reposo.7-dioxigenadas. La detección de las cumarinas puede hacerse también con otros reveladores. pero antes es necesario añadir hidróxido de potasio. También se usa bastante la cromatografía en capa fina. para lo cual la mezcla sílica gel y celulosa incrementa la sensibilidad y resolución. Los componentes se detectan bajo luz U. pero ninguno de ellos es específico. tales como etanol. . En base al color que muestren. La intensificación de la fluorescencia por tratamiento del cromatograma con vapores de amoníaco es indicio de grupos fenólicos en la cumarina. las furano-cumarinas son por lo general solubles en lípidos. Puede utilizarse solventes diversos. etc. puede asignarse tentativamente ciertas características a las cumarinas: . Se pueden recristalizar con una mezcla de etanol-éter y luego se purifican mediante cromatografía. ya que degrada las cumarinas. SEPARACION CROMATOGRAFICA Y DETECCION: Se utiliza ampliamente la cromatografía en columna. es . el extracto obtenido se concentra.Fluorescencia celeste: 7-hidroxi-cumarina y 5.18 dependiendo de las estructuras de las cumarinas. Las cumarinas muestran intensa fluorescencia. La extracción se hace con soxhlet.Amarillo-verdoso: cumarina no sustituída. acetona. y pueden extraerse con éter de petróleo. con lo que los grupos hidroxilo dan color azul o verdoso. La adición de reactivo de Benedict a las cumarinas o flavonoides con grupos hidroxilo reactivos hace que la fluorescencia desaparezca total o parcialmente. Para detectar grupos fenólicos se emplea solución acuosa de cloruro férrico al 1%. . Puesto que pueden encontrarse a veces formando glicósidos. o en refrigeración.Fluorescencia púrpura: característica de 7-alcoxicumarina. de 365 nm antes y después de asperjar con hidróxido de potasio al 5 ó 10% en etanol. éter sulfúrico o de petróleo.

r.5% etanol o éter-benceno (1:1). Bandas de absorción U. cloroformo + 1. características de las cumarinas: 274 y 311 nm. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: Para dilucidar la estructura química de una cumarina nueva se debe 1) identificar primero los diferentes grupos sustituyentes.19 necesario antes hidrolizarlos con ácido. Comúnmente pueden separarse mediante cromatografía en capa fina en sílica gel. RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: También se emplean reactivos de desplazamiento.HPLC: Resulta ventajoso porque las separaciones son más rápidas y efectivas. ácido bórico o cloruro de aluminio.: Puede encontrarse bandas características de la pirona en la región comprendida entre 1715 y 1745 cm a la -1. violetas o cafés. así como para fraccionar algunas cumarinas de cítricos. y 2) determinar su ubicación en el núcleo de la cumarina. amarillas. sobre todo hidroxilos. y un pico base a m/e de 118 (100%) (28 unidades menos por la pérdida de monóxido de carbono del anillo de pirona. puede utilizarse “reactivos de desplazamiento”. Ejemplo: se hace reaccionar a las cumarinas con hidróxido de sodio. Esto toma entre 1 a 2 horas. Los grupos hidroxilo y carbonilo también muestran bandas características. verdes.V. Para obtener información respecto a la orientación de determinados grupos funcionales. ESPECTROMETRIA DE MASAS: Las cumarinas producen un fuerte ion molecular a un valor de m/e de 146 (76%). Se ha utilizado por ejemplo para separar una mezcla de furano-cumarinas del perejil. . acetato de sodio. que corresponden a los anillos de benceno y pirona respectivamente. usando como fase móvil cloroformo. . Se detectan bajo luz UV como manchas azules. La intensidad de la fluorescencia aumenta al adicionar hidróxido de potasio al 10%. ESPECTRO i. que producen cambios espectrales.

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