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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA CURSO DE FITOQUÍMICA

GLICÓSIDOS
DEFINICION: Son compuestos que al ser hidrolizados dan origen a una porción que es azúcar y otra que no lo es (aglicona o genina). ESTRUCTURA: El enlace glicosídico se forma por la deshidratación del azúcar y de la aglicona. Un grupo hidroxilo de la aglicona se condensa con el hidroxilo del hemiacetal del azúcar, formándose así un acetal interno. Si el grupo OR de la aglicona se encuentra en el mismo sentido estérico que el grupo CH2OH del carbono 5, la configuración se designa beta; si está en sentido estérico opuesto, se designa alfa. Ejemplo:

CH3

Alfa-metil glucósido En la naturaleza se encuentran solo las formas beta. CARACTERISTICAS DE LOS GLICOSIDOS: - Son en general muy ligeramente solubles en agua, y un poco más solubles en etanol, metanol, o mezclas de ellos en agua. - En las plantas, los glicósidos a menudo están acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos, las cuales se localizan en el mismo tejido, aunque en células diferentes. - Los glicósidos son ópticamente activos, por lo que sus rotaciones específicas contribuyen a su caracterización física. FUNCION FISIOLOGICA: Se cree que los glicósidos intervienen en los fenómenos de óxidoreducción, así como en el crecimiento y fecundación de las plantas. Se cree además que los glicósidos flavonoides protegen de la luz y rayos

Glicósidos cardiotónicos 1. Glicósidos fenólicos 2. mediante hidrólisis enzimática durante la maduración de los frutos. 1. Glicósidos cianogénicos 3. la cual. con actividad semejante a la del ácido salicílico. Se extrae de varias especies de los géneros Salix y Populus (Fam.1. azul o negro que producen cuando se les agrega una solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico. lo cual permite identificarlos y cuantificarlos. Salicaceae). Debido a su naturaleza aromática muestran intensa absorción en la región ultravioleta del espectro. CLASIFICACION: En base a la estructura molecular de las agliconas. Orchidaceae). Salicina 1.2 Glucovainillina: Se encuentra presente en especies del género Vanilla (Fam. y que debido a sus propiedades fungicidas también protegen a la corteza de los árboles contra el ataque de parásitos.1. GLICOSIDOS FENOLICOS: Son en general compuestos relativamente polares. púrpura. genera vainillina . los glicósidos se clasifican así: 1. con cierta solubilidad en agua. Saponinas: esteroidales y triterpénicas 4. La salicina tiene propiedades antirreumáticas. pudiendo ser detectados por el intenso color verde.1 Salicina: Al ser hidrolizada produce saligenina y glucosa.2 ultravioleta.1 DERIVADOS DEL ACIDO BENZOICO Y SALICILICO: 1.

Cumarina: (Configuración C6C3 ) El nombre cumarina fue asignado originalmente a la estructura anotada arriba: benzo-alfa-pirona. principalmente en las familias Umbeliferaceae y Rutaceae.3 y glucosa. Las cumarinas han cobrado gran interés en años recientes debido al amplio rango de actividad biológica que han mostrado.3 QUINONAS: . 1. Hasta hoy se conocen aproximadamente 800 cumarinas. los progresos hechos en este campo fueron escasos hasta hace aproximadamente treinta y cinco años. Pueden encontrarse en todas las partes de la planta. pero son más abundantes en los frutos. las aflatoxinas como hepatotóxicos y carcinogénicos. La vainillina es bastante aromática. esteroides y terpenoides. CHO CHO Glucosa-O OCH3 HOOCH3 Vainillina Glucovainillina 1. Ejemplo: el dicumarol como anticoagulante y antibacterial.2 CUMARINAS: Son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas. algunas se usan como saborizantes y en perfumería. Dicho compuesto fue aislado por primera vez en 1820 por Vogel de la Coumarona odorata (“árbol de la tonka”). Las cumarinas están biogenéticamente relacionadas con los flavonoides. la novobiocina como antibiótico. por lo que se usa como agente sazonante y aromatizante en las industrias farmacéuticas y de alimentos. ligninas. de las cuales sólo 35 carecen de oxígeno en posición 7. A pesar de haberse conocido desde esa época.

un glicósido antraquinónico. Benzoquinona 1.1 Benzoquinonas: Las benzoquinonas se han encontrado con frecuencia en los hongos. ejemplo: la muscarufina. Algunas tienen propiedades antibióticas. Son pigmentos de plantas superiores. Se encuentran ampliamente distribuidos en las . de color amarillo o blanco. ruibargo. Se encuentran principalmente en las familias de las Leguminosas. rojo o marrón (castaño). presente en Amanita muscaria.3. hojas de sen y la cáscara sagrada. Los derivados antraquinónicos se encuentran en las plantas con acción purgante. El colorante presente en la cochinilla (insecto nativo de Centro América) es el ácido carmínico. azul o violeta. los que fácilmente las regeneran por oxidación. animales marinos y ciertos insectos.4 Son dicetonas insaturadas. Ericaceas y Liliaceas. Pueden ser de color amarillo. aislados también de hongos. Hasta hoy se conocen aproximadamente 900 flavonoides naturales.3. 1. que poseen un esqueleto carbonado de 15 átomos (C6C3C6). Antraquinona: 1. Ramnaceas. Poligonaceas.2 Antraquinonas: Son las quinonas más extensamente distribuidas en las plantas. Son pigmentos vegetales.4 FLAVONOIDES Se les llama también antoxantinas. Rubiaceas. como por ejemplo en la frángula. que por reducción se convierten en polifenoles. pero si forman sales de hidroquinonas toman color verde. líquenes.

No se encuentran en algas.En medicina: contra la fragilidad capilar (ejemplo la rutina). Umbelliferaceae. hongos o bacterias. que en caso de existir se denomina C. EJEMPLOS DE FLAVONOIDES: 1. . como estrogénicos. que pueden proporcionar la manera de repeler los gusanos que se alimentan de las hojas. mientras que los flavonoles abundan en las angiospermas leñosas. Fam. como espasmolíticos. USOS: . tales como las Compuestas.1 Flavonas y Flavonoles: Las flavonas son abundantes en familias herbáceas. Dan color amarillo a flores y frutos. . las polihidroxiflavonas se usan para conservar grasa o jugos de frutas (son antioxidantes). Ejemplo de flavonas: apigenina (género Apium). Núcleo básico de un flavonoide: FLAVONA Tiene dos anillos aromáticos (A y B). La rotenona se usa como insecticida. dilatadores de las coronarias (Crataegus y Arnica).5 plantas. unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo. con lo cual ayudan a la polinización. convirtiéndose en potentes inhibidores de algunos sistemas enzimáticos. antihepatotóxicos. lo que hace aún mayor el número de glicósidos conocidos. por lo que se unen fácilmente a las proteínas. Los glicósidos de dihidrochalconas como edulcorantes. También hay flavonoides amargos. y en diferentes posiciones. coleréticos (que estimulan la secreción biliar). FUNCION FISIOLOGICA EN LAS PLANTAS: Los flavonoides son estructuras ricas en grupos hidroxilo. Es frecuente encontrar diferentes azúcares enlazados a una misma aglicona.4. lo que atrae a mariposas y abejas. ya sea en forma libre o como glicósidos. antimicrobianos y fungicidas. diuréticos.Los flavonoides se utilizan como colorantes de lanas.

Ejemplo de las más comunes en la naturaleza: pelargonidina. Antiguamente se les consideraba como flavonoides. 1. relacionados con las antocianinas. delfinidina. peonidina. y kyanos. Los flavonoles son las 3-hidroxi-flavonas.5 BETACIANINAS: Son pigmentos rojos aislados de la remolacha. Al incrementarse el pH el color desaparece.6 Ejemplo de flavonoides: quercetina. que son amarillas o blancas. Beta vulgaris. familia Fagaceae. con la formación de una pseudobase. que significa flor. A un valor de pH mayor (cerca o mayor de 7) aparece un color azul verdoso.4. quenferol y miricetina. A pH bajo. pero luego se encontró que contienen nitrógeno y su estructura básica es distinta. Se ha observado que las . debido al posible rompimiento de uno de sus anillos aromáticos.2 Antocianinas: El nombre antocianina proviene del griego anthos. que quiere decir azul. A pH muy alto se rompe la estructura de la antocianina. cianidina. Ejemplo: la betanina es el principal pigmento de la remolacha. Apigenina: flavona 1. las antocianinas en solución se presentan de color rojo. a diferencia de las antoxantinas. familia Chenopodiaceae. Leucoantocianinas o Proantocianidinas: se llaman así las sustancias capaces de convertirse en antocianidinas mediante calentamiento con un ácido mineral. de manera irreversible. Son pigmentos rojos y azules. Su estructura química es SIMILAR a la de los flavonoides: Antocianidinas: se llama así a las agliconas presentes en las antocianinas. presentes en el género Quercus.

incluyendo las semillas de las almendras amargas (Prunus amigdalus. ya que poseen un grupo nitrilo unido a la aglicona. variedad Amara). GLICOSIDOS CIANOGENICOS: Muchas plantas contienen glicósidos que al hidrolizarse generan ácido cianhídrico. y no se encuentran de manera conjunta en las mismas familias vegetales. Si es un disacárido. en las semillas de albaricoque (Prunus malus). ciruelas. Amigdalina Muchos de estos glicósidos son derivados del nitrilo del ácido mandélico. La porción azucarada puede ser mono. Euphorbiaceae). Ejemplo: la amigdalina.o di-sacárido. 2. enzimas como la emulsina pueden hidrolizarlo así: amigdalasa Amigdalina + agua mandelonitrilo + 2 glucosas Prunasa Benzaldehído + HCN (gas) . presente en la familia Rosaceae. y otras especies del género Prunus: duraznos. cerezas.7 betacianinas y las antocianinas se excluyen mutuamente. La linamarina es una toxina extraída de la yuca común: Manihot utilissima y Manihot esculenta (Fam.

Sarsapogenina y smilagenina. mientras que las saponinas ácidas proceden de los triterpenoides: Acetato C RNúcleo D esteroidal A B Mevalonato O E C D A O B . por lo que algunas plantas que las contienen se utilizan para pescar. Las saponinas no son fáciles de aislar. Son tóxicas para los peces. Esta sustancia fue aislada originalmente de la corteza adrenal y luego sintetizada a partir de los ácidos biliares del ganado. Luego se encontró que las sapogeninas esteroidales podían constituir una fácil más fácil.8 3. También puede sintetizarse a partir de las saponinas esteroidales: vitamina D. del género Dioscorea. del género Strophantus. .Sitosterol. de aceites crudos vegetales.Diosgenina y botogenina. hormonas sexuales y anticonceptivos. Biosíntesis de Saponinas: Las llamadas saponinas neutras derivan de los esteroides. Ambos tipos de saponinas son solubles en agua y etanol e insolubles en éter. En base a la estructura química de la aglicona. del género Smilax. Causan hemólisis a bajas concentraciones. SAPONINAS: Son poderosos agentes tensioactivos que forman espuma al ser agitados con agua. Mediante hidrólisis enzimática de las saponinas se obtienen sus agliconas: las sapogeninas. las saponinas pueden ser: esteroidales y triterpenoides.Sarmentogenina. . . por lo que muchas veces se prefiere hidrolizar el extracto crudo de la planta y aislar la sapogenina libre del azúcar. Durante muchos años se ha brindado especial importancia al estudio de plantas que contienen saponinas con el objeto de descubrir precursores de la cortisona. Se ha encontrado que los esteroides aislados de plantas más importantes en la producción de cortisona son: .

de altura. Liliaceae y Escrofularaceae. GLICOSIDOS CARDIOTONICOS: Se han aislado de las angiospermas principalmente. aunque también se hallan en especies vegetales. sarsapogenina (raíz de sarsaparrilla). que permiten la formación del hidrocarburo triterpenoide escualeno. Tienen un anillo lactónico no saturado en el carbono 17. Ejemplo: . Las saponinas triterpenoides se encuentran ampliamente distribuidas y constituyen la mayoría de las encontradas en la naturaleza. y los bufanólidos o bufadienólidos. Entre las fuentes ricas de saponinas esteroidales se encuentran especies de las familias Dioscoreaceae. gitogina (D. Entre las plantas que contienen saponinas triterpenoides se encuentran: la corteza de Quillaja saponaria (árbol de 18 m.9 Escualeno Núcleo triterpenoide pentacíclico El proceso principal de biosíntesis que da lugar a las sapogeninas es similar. Purpurea). raíz de regaliz. que incluyen anillos lactónicos de 5 miembros y un esqueleto de 23 átomos de carbono. procedente de Chile. con anillo lactónico de 6 miembros y un esqueleto de 24 átomos de carbono. Perú y Bolivia). semillas de soya y el ginseng. debido a su abundancia en este tipo de plantas. Se caracterizan porque presentan grupos hidroxilo en el carbono 3 y 14. Ejemplo: digitonina (Digitalis purpurea y Digitalis lanata). 4. el cual puede ser pentagonal o hexagonal. Estos últimos se han llamado así debido a que están contenidos en el veneno del sapo común (género Bufus). dando así origen a dos tipos de agliconas cardiotónicas: cardenólidos. y triterpenoides pentacíclicos en la otra. e incluye la condensación de subunidades de acetato. que origina esteroides en una dirección.

Luego el residuo se macera con alcohol diluido durante varias horas. tratando el material vegetal con éter de petróleo o cloroformo. EXTRACCION DE GLICOSIDOS FENOLICOS: Se puede primero separar las materias resinosas. El macerado se trata con solución de acetato de plomo. en frío. y luego se enfría. ANALISIS Y CARACTERIZACION DE GLICOSIDOS: Siendo los glicósidos sustancias con núcleo estructural muy diverso. EXTRACCION GENERAL: El material vegetal se extrae con alcohol en caliente. c. o hirviéndolo en alcohol por 15 min. para precipitar las impurezas. por lo general el solvente a emplear para la extracción inicial es etanol o metanol con agua. Posteriormente puede hidrolizarse para determinar la naturaleza del azúcar y de la aglicona. sus solubilidades varían. por lo que los métodos de separación y purificación son también distintos.10 Cardenólido Bufadienólido EXTRACCION. Tratamiento de la planta con vapor de agua. d. grasas. ceras. Realizando la extracción inicial a temperatura muy baja. Para evitar esto deben inactivarse previamente a la extracción. etc. Con esto quedan los heterósidos cristalizados. Los cristales de glicósidos se obtienen mediante evaporación del filtrado. Sin embargo. el cual es removido por filtración. y el filtrado (glicósidos más exceso de plomo) se trata con una corriente de ácido sulfhídrico. b. que precipita el plomo como sulfuro. dejando los glicósidos en solución. Poniendo el material fresco o seco en agua caliente. lo cual se logra mediante: a. Tratando el material vegetal con ácido a pH 1 ó 2. Luego se filtra. . INACTIVACION DE ENZIMAS: Los glicósidos se encuentran muchas veces acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos.

11 La extracción inicial de los glicósidos fenólicos también puede hacerse de manera más eficiente mediante soxhlet. A veces la aglicona precipita y se recoge con un solvente más denso que el agua. como por ejemplo el éter o cloroformo. Luego se enfría y filtra. durante 4 hr. Dicha fluorescencia se intensifica por la acción de vapores amoniacales. Los glicósidos fenólicos son muy sensibles a la oxidación enzimática. La hidrólisis ácida se hace con ácido clorhídrico 2 M durante media hora. así: éter de petróleo. La hidrólisis alcalina se realiza con hidróxido de sodio 2 M a temperatura ambiente. y en ella se pueden caracterizar los azúcares reductores. Esto se evita aislándolos de los tejidos con alcohol caliente. y luego rociando hidróxido de amonio diluido. ya que fluorescen bajo luz ultravioleta. con un solvente no miscible. Otras veces se obtiene mediante extracción de la solución acuosa resultante de la hidrólisis. pueden identificarse mediante cromatografía en capa fina.6-dicloroquinonacloroimida al 2% en cloroformo). La fracción acuosa ácida se neutraliza con carbonato de bario. Estos permiten eliminar los lípidos. sobre todo los flavonoides. en baño de María hirviendo. Los fenoles pueden detectarse con solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico al 1% más 1% de ferricianuro de potasio. Se usa ácido sulfúrico al 2-5% o ácido clorhídrico 1 ó 2 N durante algunas horas. La mayoría de compuestos fenólicos. los cuales se someten a recristalización con algún solvente apropiado. cloroformo y éter dietílico. en caliente. CUANTIFICACION GENERAL DE GLICOSIDOS: Para valorar los glicósidos se aprovecha la capacidad que tienen los ácidos de liberar los azúcares reductores. acetona y alcohol. debido a la acción de las fenolasas.DETECCION: Los fenoles rara vez se encuentran en forma libre en las plantas. También es útil como revelador el reactivo de “productos . la clorofila y los carotenoides. Para detectar ácidos fenólicos puede utilizarse cromatografía en capa fina. ANALISIS DE GLICOSIDOS FENOLICOS: . empleando sucesivamente varios solventes de diferente polaridad. Se debe observar manchas azules. Posteriormente se continúa extrayendo con acetato de etilo. Es por ello que generalmente se aíslan mediante hidrólisis. Posteriormente el extracto alcohólico de la planta se somete a hidrólisis ácida o alcalina. con reactivo de Gibbs como revelador (2. Estos últimos aíslan los glicósidos. que luego es evaporado.

ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico). Un reactivo que brinda información más específica sobre el tipo de fenoles presentes es el de Folin (tungstato de sodio. Además. Otro método de purificación consiste en emplear resinas de intercambio catiónico. . tales como el ácido cinámico.V. se ha reportado que éste no es un buen método. Sin embargo. y luego polietilenglicol 4000 al 5% en etanol. CUANTIFICACION DE FENOLES TOTALES: El permanganato de potasio oxida los fenoles en frío. como por ejemplo la amberlita IRC-50 y Dower IXII. Pueden detectarse bandas de color amarillo. agua. La mezcla se satura con cloruro de sodio. ácidos.. ya que solo se oxidan los difenoles “orto”y “para”. y NO los “meta-difenoles”. sales. Este problema se resuelve con el reactivo de Folin-Denis. Sin embargo. azul o verde. que podrían interferir en la cromatografía. la absorción de los fenoles naturales se ve afectada por muchos factores. etc. PURIFICACION DE EXTRACTOS FENOLICOS: Al prepararse un extracto vegetal que contenga glicósidos fenólicos. Luego se observa la fluorescencia bajo luz U. Las fracciones acuosas se combinan y agitan con n-propanol. la cual contiene la mayoría de glicósidos fenólicos. otras sustancias NO FENOLICAS. obteniéndose . CROMATOGRAFIA Y ESPECTROFOTOMETRIA: . tales como el tipo de solvente y el pH. que permite reducir estos ácidos y a la vez oxidar todos los fenoles.El solvente más usado para elución en cromatografía es el etanol al 70%.. sí pueden reaccionar. Para las antocianinas se requiere pH ácido. quedando en la parte superior. con lo que el n-propanol se separa. Este reactivo colorea de azul o gris los fenoles con núcleo catecólico (tiene 2 grupos OH en posición “orto”) o hidroquinonas al exponer la placa a vapores amoniacales. pero con dobles enlaces. característica que se aprovecha para valorar los fenoles totales.12 naturales”: difenil-boril-oxietilamina al 1% en metanol.La absorción en el ultravioleta se emplea bastante en la determinación de fenoles totales (a 270nm). por lo que debe especificarse las condiciones estándar bajo las cuales se trabajó. Para evitar esto puede purificarse calentando varias veces con pequeñas cantidades de agua. Esto se logra usando metanol conteniendo ácido clorhídrico al 0.1% ó ácido acético al 15%. pueden hallarse también presentes azúcares.

filtrar. reposar/24hr Precipitado Solución amarilla Rotavapor Fase acuosa Etanol Acetato de etilo.Los flavonoides son generalmente solubles en agua y alcohol. concentrar Cromatografiar en columna abierta con gel de sílice. y luego de agitar se mide la absorbancia a 730-760 nm. cloroformo y benceno. Son solubles en álcali.13 color azul. Extracción y aislamiento de flavonoides: Mat. se hace reaccionar con el reactivo de Folin más una solución de carbonato de sodio. CARACTERIZACION: .1 M. e insolubles en éter. Para efectuar la cuantificación se toma una alícuota que contenga la sustancia fenólica. dando . debido a los óxidos de tungsteno y molibdeno. Vegetal + etanol Macerar en frío/72 hr. Extracto alcohólico Filtrar Residuo Concentrar (B. María) Filtrado Solución homogénea PbOAC 0.

Las flavonas se colorean de naranja. . los flavonoles de rojo cerezo y las flavanonas de rojo violáceo. A partir de ellas derivan otras clases. o pueden formar precipitados.14 soluciones amarillas que se oscurecen al aire. . hay presencia de chalconas y auronas. . indica la presencia de flavonas y flavonoles. rojo obscuro o violeta. medio ácido se . Ejemplo: si los pétalos blancos de una flor se exponen a vapores de amoníaco y se tornan amarillos. Las chalconas son el primer tipo de flavonoides que se forman a lo largo de su biosíntesis. empleando como adsorbentes celulosa. púrpuras y otras. que pueden cambiar tanto de color como de intensidad luego de su exposición a vapores de amoníaco o al reactivo de “Productos Naturales”. TECNICAS CROMATOGRAFICAS: . También puede usarse gel de Sephadex. Se emplean los mismos adsorbentes que en la cromatografía en capa fina. sílica gel y poliamida.Se utiliza con frecuencia cromatografía en capa fina.La reacción más usual para detectar flavonoides es la de Shinoda: al extracto alcohólico se le añade un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado. Si viran de amarillo a rojo.Prueba de Marini-Bettolo: con solución de cloruro de antimonio en tetracloruro de carbono.La cromatografía en columna se emplea comúnmente para purificaciones preliminares y para separar grandes cantidades de flavonoides a partir de extractos vegetales. En decoloran y precipitan. los flavonoides dan colores característicos. Ejemplo: las flavonas dan precipitado amarillo o anaranjado. mientras que las chalconas. en base al color observado antes y después de añadir amoníaco. . Las isoflavonas y chalconas no se colorean. pero puede también emplearse cromatografía en papel. rosadas. Se cuenta con información que permite deducir la posible estructura del flavonoide. anaranjadas. La detección de los flavonoides en ambos tipos de cromatografía puede hacerse usando lámpara de luz ultravioleta. observándose manchas fluorescentes azules.En algunos casos pueden hacerse pruebas directamente sobre el material vegetal.

Conlleva la ventaja de que es una técnica muy sensible y precisa. Estos se hacen reaccionar con el flavonoide.Infrarrojo: se usa muy poco en el análisis de flavonoides. y provocan desplazamiento característico de los picos de absorción. Los espectros de absorción de los flavonoides se determinan comúnmente en solución metanólica. el anillo aromático (entre 1600 a 1500). Por el contrario. . y la de los grupos o-hidroxi-cetona (entre 3500 a 3200 nm) pueden ser útiles. por lo que desaparece al añadir ácido clorhídrico.El cloruro de aluminio forma complejos con grupos orto-hidroxilos y con grupos hidroxilcetona vecinos. El espectro típico consta de dos máximos de absorción en los rangos de 240 a 285 nm y 300 a 550 nm. como para establecer el modelo de oxigenación.La cromatografía líquida de alta resolución es muy utilizada para realizar separaciones a pequeña escala. debido a que los espectros ultravioleta brindan mayor información. Sin embargo. que permite obtener resultados cuali-cuantitativos en unos pocos minutos. Esto se hace tanto para identificar el tipo de flavonoide. La variación de estos rangos depende del modelo de oxigenación y del grado de sustitución de los hidroxilos.Resonancia magnética nuclear: los espectros de RMN de flavonoides han cobrado mayor importancia en años recientes para determinación de estructuras. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: El método más usual para analizar la estructura de un flavonoide es la observación en ultravioleta y visible.El acetato de sodio ioniza únicamente el grupo hidroxilo más ácido del flavonoide. . Ejemplo: . lo cual se aprovecha para detectar un grupo OH en posición 7. .15 . el complejo formado con grupos hidroxil-cetona es estable. lo cual proporciona información adicional sobre la estructura. la absorción del grupo carbonilo (entre 1680 y 1640 nm). El complejo formado con grupos ohidroxilos es lábil en presencia de ácido. . Es común en este caso también el uso de “reactivos de desplazamiento”. La identificación del flavonoide y su modelo de oxigenación se facilita empleando “reactivos de desplazamiento”.

.Añadiendo hidróxido de sodio 2 M. Pueden separarse mediante precipitación. mientras que las antocianinas tienen Rf moderados (0. . bajo la forma de picratos.El espectro visible en metanol-ácido clorhídrico presenta un rango máximo de 505-535 nm para las antocianinas. y las antocianinas al cátodo.16 . junto con clorofila y carotenos. lo cual se aprovecha para su . 224 para flavanonas y chalconas. mientras que las antocianinas no. usando como fase móvil butanol-ácido acético-agua. y pueden ser extraídas con alcohol amílico.1). Las betacianinas tienen Rf muy bajos (0-0. poco solubles en agua y solubles en solventes orgánicos. Generalmente el grupo carbonilo de las quinonas no reacciona con los reactivos usuales de la función cetona. Las quinonas se solubilizan en álcalis. a 100 grados centígrados. ANTOCIANINAS: Son solubles en agua e insolubles en los solventes orgánicos.Calentando con ácido clorhídrico 2 M por 5 minutos. gota a gota. También pueden precipitarse como cloruros mediante ebullición con ácido clorhídrico al 20%.Mediante cromatografía.Haciendo electroforesis en papel. isoflavonas y auronas. . anaranjados o rojos. Las betacianinas se decoloran. a pH ácido (2-4): las betacianinas migran al ánodo. QUINONAS: Son sólidos cristalinos amarillos.4). Al hacerse cromatografía en capa fina se diferencian por su Rf. etc. Las benzoquinonas y naftoquinonas actúan como oxidantes.1-0. DIFERENCIACION DE BETACIANINAS Y ANTOCIANINAS: . Es por ello que pueden extraerse con éter de petróleo. dando coloraciones que van desde el anaranjado al rojo o violeta. Para el análisis de resultados se toma en cuenta los pesos moleculares de los distintos núcleos básicos de los flavonoides. . las betacianinas viran a amarillo.Espectrometría de masas: posee la ventaja de que requiere muy poca cantidad de muestra. Ejemplo: 222 para flavonas. 238 para flavonoles. Las antocianinas cambian a azul verdoso y luego se decoloran. y 532-554 nm para las betacianinas.

con solventes de diferentes polaridades. Un resultado positivo está indicado por una coloración rosada en la fase alcalina (si hay poca cantidad de antraquinonas. belladona. en la región visible. Las distintas especies de canela contienen cumarina no sustituida (C. y se agita con una solución acuosa alcalina (hidróxido de amonio al 10% (reacción de Bornträger). pueden ser detectadas en la región visible. Por lo menos tres de ellas caen entre 215 y 300 nm. EXTRACCION: La extracción de las cumarinas puede realizarse sobre el material vegetal fresco o seco. Puesto que las quinonas son coloreadas. pero puede ser de color anaranjado. las semillas de este árbol de Guyana y Brasil se usan en perfumería) contiene 1 a 3% de cumarina. rojo o violeta si hay alta concentración). Las quinonas pueden separarse entre sí. y la otra. Así puede diferenciarse a las antraquinonas de otras quinonas. el análisis bajo la luz ultravioleta es más sensible. La ruda contiene 10 derivados cumarínicos. púrpuras o verdes). hojas de tabaco y estramonio contienen 7-hidroxi. violetas. Con la espectrometría de masas puede reconocerse a las quinonas por la facilidad con que pierden las dos moléculas de carbonilo. se filtra. CUMARINAS: La cumarina y sus glicósidos derivan de la benzo-alfa-pirona. cloroformo o éter). ya que las primeras presentan 4 ó 5 bandas de absorción en el ultravioleta. pertenecientes a más de 30 familias.17 análisis espectrofotométrico. además la raíz de avena. . El “haba tonka”(Coumarona odorata. Su olor es el característico del heno fresco. así como de los carotenos y clorofila mediante cromatografía en capa fina o en papel. sin embargo. También puede usarse HPLC para aislar quinonas. ceylanicum es la que tiene menos). por encima de los 430 nm. En el infrarrojo pueden detectarse las bandas características fuertes de los grupos carbonilo. Como reveladores se puede emplear hidróxido de potasio al 10% en metanol (se ven manchas rojas. 6-metoxi-cumarina (escopoletina). de Jalapa. La cumarina se ha encontrado en unas 150 especies. Para ello se macera el material vegetal con un solvente orgánico inmiscible con el agua (ejemplo: benceno.

es . Puede utilizarse solventes diversos. . pero ninguno de ellos es específico. etc. ya que degrada las cumarinas. Se prefiere NO USAR alúmina BASICA. La adición de reactivo de Benedict a las cumarinas o flavonoides con grupos hidroxilo reactivos hace que la fluorescencia desaparezca total o parcialmente. . o en refrigeración.V. obteniéndose así cristales al dejar en reposo.7-dioxigenadas. Para detectar grupos fenólicos se emplea solución acuosa de cloruro férrico al 1%. Las cumarinas muestran intensa fluorescencia. . SEPARACION CROMATOGRAFICA Y DETECCION: Se utiliza ampliamente la cromatografía en columna.Fluorescencia amarillo opaca u ocre: furanocumarina. de 365 nm antes y después de asperjar con hidróxido de potasio al 5 ó 10% en etanol. También se usa bastante la cromatografía en capa fina. con lo que los grupos hidroxilo dan color azul o verdoso. La intensificación de la fluorescencia por tratamiento del cromatograma con vapores de amoníaco es indicio de grupos fenólicos en la cumarina. La detección de las cumarinas puede hacerse también con otros reveladores. tales como etanol.Fluorescencia celeste: 7-hidroxi-cumarina y 5.Fluorescencia púrpura: característica de 7-alcoxicumarina. Los componentes se detectan bajo luz U. La extracción se hace con soxhlet. En base al color que muestren. Se pueden recristalizar con una mezcla de etanol-éter y luego se purifican mediante cromatografía. A diferencia de las hidroxicumarinas.Amarillo-verdoso: cumarina no sustituída. el extracto obtenido se concentra. Puesto que pueden encontrarse a veces formando glicósidos.18 dependiendo de las estructuras de las cumarinas. empleando como adsorbentes la sílica gel o la alúmina “neutra o ácida”. Esta es la propiedad física más usual para reconocer una cumarina. las furano-cumarinas son por lo general solubles en lípidos. acetona. puede asignarse tentativamente ciertas características a las cumarinas: . y pueden extraerse con éter de petróleo. pero antes es necesario añadir hidróxido de potasio. éter sulfúrico o de petróleo. para lo cual la mezcla sílica gel y celulosa incrementa la sensibilidad y resolución.

acetato de sodio. sobre todo hidroxilos. . ácido bórico o cloruro de aluminio. ESPECTRO i. RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: También se emplean reactivos de desplazamiento. Comúnmente pueden separarse mediante cromatografía en capa fina en sílica gel. y un pico base a m/e de 118 (100%) (28 unidades menos por la pérdida de monóxido de carbono del anillo de pirona. Para obtener información respecto a la orientación de determinados grupos funcionales. Se detectan bajo luz UV como manchas azules. violetas o cafés.V. . y 2) determinar su ubicación en el núcleo de la cumarina. Bandas de absorción U.19 necesario antes hidrolizarlos con ácido. Ejemplo: se hace reaccionar a las cumarinas con hidróxido de sodio.5% etanol o éter-benceno (1:1). puede utilizarse “reactivos de desplazamiento”. que corresponden a los anillos de benceno y pirona respectivamente. Los grupos hidroxilo y carbonilo también muestran bandas características. así como para fraccionar algunas cumarinas de cítricos. verdes. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: Para dilucidar la estructura química de una cumarina nueva se debe 1) identificar primero los diferentes grupos sustituyentes. características de las cumarinas: 274 y 311 nm. La intensidad de la fluorescencia aumenta al adicionar hidróxido de potasio al 10%. Se ha utilizado por ejemplo para separar una mezcla de furano-cumarinas del perejil. ESPECTROMETRIA DE MASAS: Las cumarinas producen un fuerte ion molecular a un valor de m/e de 146 (76%). amarillas. Esto toma entre 1 a 2 horas.: Puede encontrarse bandas características de la pirona en la región comprendida entre 1715 y 1745 cm a la -1.r.HPLC: Resulta ventajoso porque las separaciones son más rápidas y efectivas. usando como fase móvil cloroformo. cloroformo + 1. que producen cambios espectrales.

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