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GLICÓSIDO..

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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA CURSO DE FITOQUÍMICA

GLICÓSIDOS
DEFINICION: Son compuestos que al ser hidrolizados dan origen a una porción que es azúcar y otra que no lo es (aglicona o genina). ESTRUCTURA: El enlace glicosídico se forma por la deshidratación del azúcar y de la aglicona. Un grupo hidroxilo de la aglicona se condensa con el hidroxilo del hemiacetal del azúcar, formándose así un acetal interno. Si el grupo OR de la aglicona se encuentra en el mismo sentido estérico que el grupo CH2OH del carbono 5, la configuración se designa beta; si está en sentido estérico opuesto, se designa alfa. Ejemplo:

CH3

Alfa-metil glucósido En la naturaleza se encuentran solo las formas beta. CARACTERISTICAS DE LOS GLICOSIDOS: - Son en general muy ligeramente solubles en agua, y un poco más solubles en etanol, metanol, o mezclas de ellos en agua. - En las plantas, los glicósidos a menudo están acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos, las cuales se localizan en el mismo tejido, aunque en células diferentes. - Los glicósidos son ópticamente activos, por lo que sus rotaciones específicas contribuyen a su caracterización física. FUNCION FISIOLOGICA: Se cree que los glicósidos intervienen en los fenómenos de óxidoreducción, así como en el crecimiento y fecundación de las plantas. Se cree además que los glicósidos flavonoides protegen de la luz y rayos

Glicósidos fenólicos 2. CLASIFICACION: En base a la estructura molecular de las agliconas. 1.1.1 Salicina: Al ser hidrolizada produce saligenina y glucosa. púrpura. pudiendo ser detectados por el intenso color verde. Se extrae de varias especies de los géneros Salix y Populus (Fam. genera vainillina . Glicósidos cianogénicos 3. lo cual permite identificarlos y cuantificarlos. GLICOSIDOS FENOLICOS: Son en general compuestos relativamente polares. los glicósidos se clasifican así: 1. y que debido a sus propiedades fungicidas también protegen a la corteza de los árboles contra el ataque de parásitos. Salicina 1. la cual.2 ultravioleta. Orchidaceae). La salicina tiene propiedades antirreumáticas. Glicósidos cardiotónicos 1. Saponinas: esteroidales y triterpénicas 4. azul o negro que producen cuando se les agrega una solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico.1. mediante hidrólisis enzimática durante la maduración de los frutos.2 Glucovainillina: Se encuentra presente en especies del género Vanilla (Fam. con cierta solubilidad en agua.1 DERIVADOS DEL ACIDO BENZOICO Y SALICILICO: 1. Salicaceae). Debido a su naturaleza aromática muestran intensa absorción en la región ultravioleta del espectro. con actividad semejante a la del ácido salicílico.

las aflatoxinas como hepatotóxicos y carcinogénicos. Las cumarinas están biogenéticamente relacionadas con los flavonoides. esteroides y terpenoides. CHO CHO Glucosa-O OCH3 HOOCH3 Vainillina Glucovainillina 1. Las cumarinas han cobrado gran interés en años recientes debido al amplio rango de actividad biológica que han mostrado. La vainillina es bastante aromática. los progresos hechos en este campo fueron escasos hasta hace aproximadamente treinta y cinco años. 1. de las cuales sólo 35 carecen de oxígeno en posición 7. Cumarina: (Configuración C6C3 ) El nombre cumarina fue asignado originalmente a la estructura anotada arriba: benzo-alfa-pirona. principalmente en las familias Umbeliferaceae y Rutaceae.2 CUMARINAS: Son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas. Hasta hoy se conocen aproximadamente 800 cumarinas. A pesar de haberse conocido desde esa época. Pueden encontrarse en todas las partes de la planta. por lo que se usa como agente sazonante y aromatizante en las industrias farmacéuticas y de alimentos. Ejemplo: el dicumarol como anticoagulante y antibacterial. Dicho compuesto fue aislado por primera vez en 1820 por Vogel de la Coumarona odorata (“árbol de la tonka”). ligninas. pero son más abundantes en los frutos.3 y glucosa. la novobiocina como antibiótico.3 QUINONAS: . algunas se usan como saborizantes y en perfumería.

presente en Amanita muscaria. un glicósido antraquinónico. Benzoquinona 1. Se encuentran ampliamente distribuidos en las .4 FLAVONOIDES Se les llama también antoxantinas. Poligonaceas. Ericaceas y Liliaceas. Pueden ser de color amarillo. que por reducción se convierten en polifenoles. pero si forman sales de hidroquinonas toman color verde. Los derivados antraquinónicos se encuentran en las plantas con acción purgante. ejemplo: la muscarufina.4 Son dicetonas insaturadas. Algunas tienen propiedades antibióticas. que poseen un esqueleto carbonado de 15 átomos (C6C3C6). Se encuentran principalmente en las familias de las Leguminosas. animales marinos y ciertos insectos. Ramnaceas. Hasta hoy se conocen aproximadamente 900 flavonoides naturales. rojo o marrón (castaño). los que fácilmente las regeneran por oxidación. El colorante presente en la cochinilla (insecto nativo de Centro América) es el ácido carmínico.1 Benzoquinonas: Las benzoquinonas se han encontrado con frecuencia en los hongos. azul o violeta. Son pigmentos de plantas superiores. Antraquinona: 1. Rubiaceas. ruibargo. aislados también de hongos. líquenes. hojas de sen y la cáscara sagrada. de color amarillo o blanco.2 Antraquinonas: Son las quinonas más extensamente distribuidas en las plantas.3. Son pigmentos vegetales.3. como por ejemplo en la frángula. 1.

Umbelliferaceae. . ya sea en forma libre o como glicósidos.1 Flavonas y Flavonoles: Las flavonas son abundantes en familias herbáceas. La rotenona se usa como insecticida. Los glicósidos de dihidrochalconas como edulcorantes. antihepatotóxicos. mientras que los flavonoles abundan en las angiospermas leñosas. convirtiéndose en potentes inhibidores de algunos sistemas enzimáticos. . como estrogénicos. También hay flavonoides amargos. unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo. FUNCION FISIOLOGICA EN LAS PLANTAS: Los flavonoides son estructuras ricas en grupos hidroxilo. que pueden proporcionar la manera de repeler los gusanos que se alimentan de las hojas. Es frecuente encontrar diferentes azúcares enlazados a una misma aglicona.En medicina: contra la fragilidad capilar (ejemplo la rutina). coleréticos (que estimulan la secreción biliar). Dan color amarillo a flores y frutos. como espasmolíticos. Ejemplo de flavonas: apigenina (género Apium). que en caso de existir se denomina C. lo que atrae a mariposas y abejas. Núcleo básico de un flavonoide: FLAVONA Tiene dos anillos aromáticos (A y B).4. lo que hace aún mayor el número de glicósidos conocidos.5 plantas. las polihidroxiflavonas se usan para conservar grasa o jugos de frutas (son antioxidantes). diuréticos. antimicrobianos y fungicidas. y en diferentes posiciones. con lo cual ayudan a la polinización. por lo que se unen fácilmente a las proteínas. USOS: . Fam. EJEMPLOS DE FLAVONOIDES: 1. hongos o bacterias. dilatadores de las coronarias (Crataegus y Arnica). tales como las Compuestas.Los flavonoides se utilizan como colorantes de lanas. No se encuentran en algas.

Beta vulgaris. peonidina. A pH bajo. debido al posible rompimiento de uno de sus anillos aromáticos. A un valor de pH mayor (cerca o mayor de 7) aparece un color azul verdoso. que son amarillas o blancas. Son pigmentos rojos y azules. Los flavonoles son las 3-hidroxi-flavonas.5 BETACIANINAS: Son pigmentos rojos aislados de la remolacha. pero luego se encontró que contienen nitrógeno y su estructura básica es distinta. familia Chenopodiaceae. que quiere decir azul. las antocianinas en solución se presentan de color rojo. Al incrementarse el pH el color desaparece. que significa flor. a diferencia de las antoxantinas. delfinidina. Su estructura química es SIMILAR a la de los flavonoides: Antocianidinas: se llama así a las agliconas presentes en las antocianinas. A pH muy alto se rompe la estructura de la antocianina.4. presentes en el género Quercus. Ejemplo de las más comunes en la naturaleza: pelargonidina. Ejemplo: la betanina es el principal pigmento de la remolacha. familia Fagaceae. 1. y kyanos. relacionados con las antocianinas. Antiguamente se les consideraba como flavonoides. Leucoantocianinas o Proantocianidinas: se llaman así las sustancias capaces de convertirse en antocianidinas mediante calentamiento con un ácido mineral. Se ha observado que las . cianidina. de manera irreversible. quenferol y miricetina.6 Ejemplo de flavonoides: quercetina. Apigenina: flavona 1.2 Antocianinas: El nombre antocianina proviene del griego anthos. con la formación de una pseudobase.

La porción azucarada puede ser mono.o di-sacárido. Euphorbiaceae). ya que poseen un grupo nitrilo unido a la aglicona. 2. y otras especies del género Prunus: duraznos. y no se encuentran de manera conjunta en las mismas familias vegetales. incluyendo las semillas de las almendras amargas (Prunus amigdalus. variedad Amara). Ejemplo: la amigdalina. La linamarina es una toxina extraída de la yuca común: Manihot utilissima y Manihot esculenta (Fam. enzimas como la emulsina pueden hidrolizarlo así: amigdalasa Amigdalina + agua mandelonitrilo + 2 glucosas Prunasa Benzaldehído + HCN (gas) . GLICOSIDOS CIANOGENICOS: Muchas plantas contienen glicósidos que al hidrolizarse generan ácido cianhídrico. presente en la familia Rosaceae. Amigdalina Muchos de estos glicósidos son derivados del nitrilo del ácido mandélico. cerezas. ciruelas.7 betacianinas y las antocianinas se excluyen mutuamente. Si es un disacárido. en las semillas de albaricoque (Prunus malus).

Sarsapogenina y smilagenina. hormonas sexuales y anticonceptivos. . Son tóxicas para los peces. . del género Dioscorea. de aceites crudos vegetales. Ambos tipos de saponinas son solubles en agua y etanol e insolubles en éter. En base a la estructura química de la aglicona. Causan hemólisis a bajas concentraciones. Durante muchos años se ha brindado especial importancia al estudio de plantas que contienen saponinas con el objeto de descubrir precursores de la cortisona. También puede sintetizarse a partir de las saponinas esteroidales: vitamina D. del género Smilax.Sarmentogenina.Diosgenina y botogenina. Se ha encontrado que los esteroides aislados de plantas más importantes en la producción de cortisona son: . por lo que algunas plantas que las contienen se utilizan para pescar.Sitosterol. las saponinas pueden ser: esteroidales y triterpenoides. Las saponinas no son fáciles de aislar. del género Strophantus. Esta sustancia fue aislada originalmente de la corteza adrenal y luego sintetizada a partir de los ácidos biliares del ganado. Luego se encontró que las sapogeninas esteroidales podían constituir una fácil más fácil. SAPONINAS: Son poderosos agentes tensioactivos que forman espuma al ser agitados con agua. por lo que muchas veces se prefiere hidrolizar el extracto crudo de la planta y aislar la sapogenina libre del azúcar. Mediante hidrólisis enzimática de las saponinas se obtienen sus agliconas: las sapogeninas. mientras que las saponinas ácidas proceden de los triterpenoides: Acetato C RNúcleo D esteroidal A B Mevalonato O E C D A O B . Biosíntesis de Saponinas: Las llamadas saponinas neutras derivan de los esteroides.8 3. .

GLICOSIDOS CARDIOTONICOS: Se han aislado de las angiospermas principalmente. de altura. Estos últimos se han llamado así debido a que están contenidos en el veneno del sapo común (género Bufus). Liliaceae y Escrofularaceae. raíz de regaliz. Las saponinas triterpenoides se encuentran ampliamente distribuidas y constituyen la mayoría de las encontradas en la naturaleza. que origina esteroides en una dirección. Ejemplo: . Entre las plantas que contienen saponinas triterpenoides se encuentran: la corteza de Quillaja saponaria (árbol de 18 m. sarsapogenina (raíz de sarsaparrilla). y los bufanólidos o bufadienólidos.9 Escualeno Núcleo triterpenoide pentacíclico El proceso principal de biosíntesis que da lugar a las sapogeninas es similar. gitogina (D. el cual puede ser pentagonal o hexagonal. Se caracterizan porque presentan grupos hidroxilo en el carbono 3 y 14. Ejemplo: digitonina (Digitalis purpurea y Digitalis lanata). 4. procedente de Chile. Entre las fuentes ricas de saponinas esteroidales se encuentran especies de las familias Dioscoreaceae. que incluyen anillos lactónicos de 5 miembros y un esqueleto de 23 átomos de carbono. Perú y Bolivia). aunque también se hallan en especies vegetales. e incluye la condensación de subunidades de acetato. que permiten la formación del hidrocarburo triterpenoide escualeno. Purpurea). con anillo lactónico de 6 miembros y un esqueleto de 24 átomos de carbono. y triterpenoides pentacíclicos en la otra. dando así origen a dos tipos de agliconas cardiotónicas: cardenólidos. Tienen un anillo lactónico no saturado en el carbono 17. semillas de soya y el ginseng. debido a su abundancia en este tipo de plantas.

EXTRACCION DE GLICOSIDOS FENOLICOS: Se puede primero separar las materias resinosas. ceras. Tratamiento de la planta con vapor de agua. Sin embargo. . Poniendo el material fresco o seco en agua caliente. Para evitar esto deben inactivarse previamente a la extracción. tratando el material vegetal con éter de petróleo o cloroformo. por lo que los métodos de separación y purificación son también distintos. Con esto quedan los heterósidos cristalizados. sus solubilidades varían. Luego el residuo se macera con alcohol diluido durante varias horas. El macerado se trata con solución de acetato de plomo. o hirviéndolo en alcohol por 15 min. ANALISIS Y CARACTERIZACION DE GLICOSIDOS: Siendo los glicósidos sustancias con núcleo estructural muy diverso. Luego se filtra. Los cristales de glicósidos se obtienen mediante evaporación del filtrado. Realizando la extracción inicial a temperatura muy baja. EXTRACCION GENERAL: El material vegetal se extrae con alcohol en caliente. en frío. y luego se enfría. Tratando el material vegetal con ácido a pH 1 ó 2. y el filtrado (glicósidos más exceso de plomo) se trata con una corriente de ácido sulfhídrico. que precipita el plomo como sulfuro. el cual es removido por filtración.10 Cardenólido Bufadienólido EXTRACCION. INACTIVACION DE ENZIMAS: Los glicósidos se encuentran muchas veces acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos. dejando los glicósidos en solución. b. etc. d. grasas. para precipitar las impurezas. c. por lo general el solvente a emplear para la extracción inicial es etanol o metanol con agua. lo cual se logra mediante: a. Posteriormente puede hidrolizarse para determinar la naturaleza del azúcar y de la aglicona.

en caliente. Para detectar ácidos fenólicos puede utilizarse cromatografía en capa fina. ya que fluorescen bajo luz ultravioleta. Dicha fluorescencia se intensifica por la acción de vapores amoniacales. La hidrólisis ácida se hace con ácido clorhídrico 2 M durante media hora. sobre todo los flavonoides. la clorofila y los carotenoides. Posteriormente el extracto alcohólico de la planta se somete a hidrólisis ácida o alcalina. Posteriormente se continúa extrayendo con acetato de etilo. como por ejemplo el éter o cloroformo. También es útil como revelador el reactivo de “productos . Se debe observar manchas azules. y en ella se pueden caracterizar los azúcares reductores. Estos últimos aíslan los glicósidos.6-dicloroquinonacloroimida al 2% en cloroformo). empleando sucesivamente varios solventes de diferente polaridad.11 La extracción inicial de los glicósidos fenólicos también puede hacerse de manera más eficiente mediante soxhlet. con reactivo de Gibbs como revelador (2. los cuales se someten a recristalización con algún solvente apropiado. A veces la aglicona precipita y se recoge con un solvente más denso que el agua. La fracción acuosa ácida se neutraliza con carbonato de bario. Otras veces se obtiene mediante extracción de la solución acuosa resultante de la hidrólisis. Los glicósidos fenólicos son muy sensibles a la oxidación enzimática. acetona y alcohol. Estos permiten eliminar los lípidos. y luego rociando hidróxido de amonio diluido. pueden identificarse mediante cromatografía en capa fina. Es por ello que generalmente se aíslan mediante hidrólisis. La hidrólisis alcalina se realiza con hidróxido de sodio 2 M a temperatura ambiente. con un solvente no miscible. que luego es evaporado. CUANTIFICACION GENERAL DE GLICOSIDOS: Para valorar los glicósidos se aprovecha la capacidad que tienen los ácidos de liberar los azúcares reductores. Luego se enfría y filtra. cloroformo y éter dietílico. Esto se evita aislándolos de los tejidos con alcohol caliente. Se usa ácido sulfúrico al 2-5% o ácido clorhídrico 1 ó 2 N durante algunas horas. durante 4 hr. así: éter de petróleo. debido a la acción de las fenolasas.DETECCION: Los fenoles rara vez se encuentran en forma libre en las plantas. La mayoría de compuestos fenólicos. ANALISIS DE GLICOSIDOS FENOLICOS: . en baño de María hirviendo. Los fenoles pueden detectarse con solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico al 1% más 1% de ferricianuro de potasio.

y NO los “meta-difenoles”. ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico).1% ó ácido acético al 15%. CUANTIFICACION DE FENOLES TOTALES: El permanganato de potasio oxida los fenoles en frío. y luego polietilenglicol 4000 al 5% en etanol. La mezcla se satura con cloruro de sodio. etc. sales. Luego se observa la fluorescencia bajo luz U. la absorción de los fenoles naturales se ve afectada por muchos factores.. que permite reducir estos ácidos y a la vez oxidar todos los fenoles. agua. PURIFICACION DE EXTRACTOS FENOLICOS: Al prepararse un extracto vegetal que contenga glicósidos fenólicos. Un reactivo que brinda información más específica sobre el tipo de fenoles presentes es el de Folin (tungstato de sodio. con lo que el n-propanol se separa.V. otras sustancias NO FENOLICAS. Pueden detectarse bandas de color amarillo. Para evitar esto puede purificarse calentando varias veces con pequeñas cantidades de agua. azul o verde. CROMATOGRAFIA Y ESPECTROFOTOMETRIA: . pueden hallarse también presentes azúcares. por lo que debe especificarse las condiciones estándar bajo las cuales se trabajó. se ha reportado que éste no es un buen método. Este reactivo colorea de azul o gris los fenoles con núcleo catecólico (tiene 2 grupos OH en posición “orto”) o hidroquinonas al exponer la placa a vapores amoniacales. ya que solo se oxidan los difenoles “orto”y “para”. característica que se aprovecha para valorar los fenoles totales.12 naturales”: difenil-boril-oxietilamina al 1% en metanol. ácidos. Las fracciones acuosas se combinan y agitan con n-propanol. Para las antocianinas se requiere pH ácido. Esto se logra usando metanol conteniendo ácido clorhídrico al 0. obteniéndose .El solvente más usado para elución en cromatografía es el etanol al 70%. quedando en la parte superior. . Este problema se resuelve con el reactivo de Folin-Denis. pero con dobles enlaces. Además. Sin embargo. que podrían interferir en la cromatografía. Sin embargo.La absorción en el ultravioleta se emplea bastante en la determinación de fenoles totales (a 270nm). tales como el tipo de solvente y el pH. la cual contiene la mayoría de glicósidos fenólicos. tales como el ácido cinámico.. sí pueden reaccionar. Otro método de purificación consiste en emplear resinas de intercambio catiónico. como por ejemplo la amberlita IRC-50 y Dower IXII.

Los flavonoides son generalmente solubles en agua y alcohol. CARACTERIZACION: . Para efectuar la cuantificación se toma una alícuota que contenga la sustancia fenólica.13 color azul. y luego de agitar se mide la absorbancia a 730-760 nm. se hace reaccionar con el reactivo de Folin más una solución de carbonato de sodio. Vegetal + etanol Macerar en frío/72 hr. dando . reposar/24hr Precipitado Solución amarilla Rotavapor Fase acuosa Etanol Acetato de etilo. e insolubles en éter. cloroformo y benceno. debido a los óxidos de tungsteno y molibdeno. Extracción y aislamiento de flavonoides: Mat.1 M. filtrar. Extracto alcohólico Filtrar Residuo Concentrar (B. Son solubles en álcali. María) Filtrado Solución homogénea PbOAC 0. concentrar Cromatografiar en columna abierta con gel de sílice.

Ejemplo: las flavonas dan precipitado amarillo o anaranjado. Las flavonas se colorean de naranja. pero puede también emplearse cromatografía en papel. Las isoflavonas y chalconas no se colorean. En decoloran y precipitan. A partir de ellas derivan otras clases. los flavonoles de rojo cerezo y las flavanonas de rojo violáceo. empleando como adsorbentes celulosa.La cromatografía en columna se emplea comúnmente para purificaciones preliminares y para separar grandes cantidades de flavonoides a partir de extractos vegetales.Se utiliza con frecuencia cromatografía en capa fina. indica la presencia de flavonas y flavonoles. Ejemplo: si los pétalos blancos de una flor se exponen a vapores de amoníaco y se tornan amarillos. en base al color observado antes y después de añadir amoníaco.14 soluciones amarillas que se oscurecen al aire. observándose manchas fluorescentes azules. mientras que las chalconas.En algunos casos pueden hacerse pruebas directamente sobre el material vegetal. púrpuras y otras. Las chalconas son el primer tipo de flavonoides que se forman a lo largo de su biosíntesis. hay presencia de chalconas y auronas. La detección de los flavonoides en ambos tipos de cromatografía puede hacerse usando lámpara de luz ultravioleta. rojo obscuro o violeta.Prueba de Marini-Bettolo: con solución de cloruro de antimonio en tetracloruro de carbono. sílica gel y poliamida. o pueden formar precipitados. También puede usarse gel de Sephadex. . . TECNICAS CROMATOGRAFICAS: . . medio ácido se . rosadas. que pueden cambiar tanto de color como de intensidad luego de su exposición a vapores de amoníaco o al reactivo de “Productos Naturales”.La reacción más usual para detectar flavonoides es la de Shinoda: al extracto alcohólico se le añade un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado. Se emplean los mismos adsorbentes que en la cromatografía en capa fina. . anaranjadas. Se cuenta con información que permite deducir la posible estructura del flavonoide. Si viran de amarillo a rojo. los flavonoides dan colores característicos.

. el anillo aromático (entre 1600 a 1500).La cromatografía líquida de alta resolución es muy utilizada para realizar separaciones a pequeña escala. como para establecer el modelo de oxigenación. Esto se hace tanto para identificar el tipo de flavonoide. Es común en este caso también el uso de “reactivos de desplazamiento”.15 . y provocan desplazamiento característico de los picos de absorción. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: El método más usual para analizar la estructura de un flavonoide es la observación en ultravioleta y visible. El complejo formado con grupos ohidroxilos es lábil en presencia de ácido. que permite obtener resultados cuali-cuantitativos en unos pocos minutos. Por el contrario. el complejo formado con grupos hidroxil-cetona es estable. la absorción del grupo carbonilo (entre 1680 y 1640 nm). por lo que desaparece al añadir ácido clorhídrico. lo cual proporciona información adicional sobre la estructura.Infrarrojo: se usa muy poco en el análisis de flavonoides. debido a que los espectros ultravioleta brindan mayor información. .El acetato de sodio ioniza únicamente el grupo hidroxilo más ácido del flavonoide. La identificación del flavonoide y su modelo de oxigenación se facilita empleando “reactivos de desplazamiento”. Ejemplo: . . Sin embargo. Conlleva la ventaja de que es una técnica muy sensible y precisa. El espectro típico consta de dos máximos de absorción en los rangos de 240 a 285 nm y 300 a 550 nm.El cloruro de aluminio forma complejos con grupos orto-hidroxilos y con grupos hidroxilcetona vecinos. . y la de los grupos o-hidroxi-cetona (entre 3500 a 3200 nm) pueden ser útiles. La variación de estos rangos depende del modelo de oxigenación y del grado de sustitución de los hidroxilos. Estos se hacen reaccionar con el flavonoide. lo cual se aprovecha para detectar un grupo OH en posición 7.Resonancia magnética nuclear: los espectros de RMN de flavonoides han cobrado mayor importancia en años recientes para determinación de estructuras. Los espectros de absorción de los flavonoides se determinan comúnmente en solución metanólica.

junto con clorofila y carotenos.Espectrometría de masas: posee la ventaja de que requiere muy poca cantidad de muestra.4).Calentando con ácido clorhídrico 2 M por 5 minutos. Pueden separarse mediante precipitación. 238 para flavonoles. y pueden ser extraídas con alcohol amílico. Ejemplo: 222 para flavonas. lo cual se aprovecha para su . También pueden precipitarse como cloruros mediante ebullición con ácido clorhídrico al 20%. Las betacianinas se decoloran. . . DIFERENCIACION DE BETACIANINAS Y ANTOCIANINAS: . anaranjados o rojos.1-0. y las antocianinas al cátodo. 224 para flavanonas y chalconas. Para el análisis de resultados se toma en cuenta los pesos moleculares de los distintos núcleos básicos de los flavonoides.Haciendo electroforesis en papel. etc. gota a gota. bajo la forma de picratos. mientras que las antocianinas tienen Rf moderados (0. isoflavonas y auronas. dando coloraciones que van desde el anaranjado al rojo o violeta.1). .Añadiendo hidróxido de sodio 2 M. Al hacerse cromatografía en capa fina se diferencian por su Rf.16 . . Las benzoquinonas y naftoquinonas actúan como oxidantes. QUINONAS: Son sólidos cristalinos amarillos. las betacianinas viran a amarillo. a pH ácido (2-4): las betacianinas migran al ánodo. Generalmente el grupo carbonilo de las quinonas no reacciona con los reactivos usuales de la función cetona.Mediante cromatografía. usando como fase móvil butanol-ácido acético-agua. Las betacianinas tienen Rf muy bajos (0-0. ANTOCIANINAS: Son solubles en agua e insolubles en los solventes orgánicos. mientras que las antocianinas no. Es por ello que pueden extraerse con éter de petróleo.El espectro visible en metanol-ácido clorhídrico presenta un rango máximo de 505-535 nm para las antocianinas. a 100 grados centígrados. poco solubles en agua y solubles en solventes orgánicos. Las antocianinas cambian a azul verdoso y luego se decoloran. Las quinonas se solubilizan en álcalis. y 532-554 nm para las betacianinas.

el análisis bajo la luz ultravioleta es más sensible. púrpuras o verdes). se filtra. ceylanicum es la que tiene menos). hojas de tabaco y estramonio contienen 7-hidroxi. belladona. en la región visible. violetas. Con la espectrometría de masas puede reconocerse a las quinonas por la facilidad con que pierden las dos moléculas de carbonilo. sin embargo. Su olor es el característico del heno fresco. además la raíz de avena. El “haba tonka”(Coumarona odorata. Un resultado positivo está indicado por una coloración rosada en la fase alcalina (si hay poca cantidad de antraquinonas. de Jalapa. CUMARINAS: La cumarina y sus glicósidos derivan de la benzo-alfa-pirona. pueden ser detectadas en la región visible. pero puede ser de color anaranjado. por encima de los 430 nm. Para ello se macera el material vegetal con un solvente orgánico inmiscible con el agua (ejemplo: benceno. rojo o violeta si hay alta concentración). cloroformo o éter). y la otra. Las distintas especies de canela contienen cumarina no sustituida (C. con solventes de diferentes polaridades. Las quinonas pueden separarse entre sí. 6-metoxi-cumarina (escopoletina).17 análisis espectrofotométrico. La ruda contiene 10 derivados cumarínicos. EXTRACCION: La extracción de las cumarinas puede realizarse sobre el material vegetal fresco o seco. las semillas de este árbol de Guyana y Brasil se usan en perfumería) contiene 1 a 3% de cumarina. ya que las primeras presentan 4 ó 5 bandas de absorción en el ultravioleta. Así puede diferenciarse a las antraquinonas de otras quinonas. así como de los carotenos y clorofila mediante cromatografía en capa fina o en papel. Por lo menos tres de ellas caen entre 215 y 300 nm. Como reveladores se puede emplear hidróxido de potasio al 10% en metanol (se ven manchas rojas. También puede usarse HPLC para aislar quinonas. y se agita con una solución acuosa alcalina (hidróxido de amonio al 10% (reacción de Bornträger). . En el infrarrojo pueden detectarse las bandas características fuertes de los grupos carbonilo. pertenecientes a más de 30 familias. La cumarina se ha encontrado en unas 150 especies. Puesto que las quinonas son coloreadas.

Amarillo-verdoso: cumarina no sustituída. Para detectar grupos fenólicos se emplea solución acuosa de cloruro férrico al 1%. La adición de reactivo de Benedict a las cumarinas o flavonoides con grupos hidroxilo reactivos hace que la fluorescencia desaparezca total o parcialmente.Fluorescencia celeste: 7-hidroxi-cumarina y 5. Esta es la propiedad física más usual para reconocer una cumarina.Fluorescencia púrpura: característica de 7-alcoxicumarina. También se usa bastante la cromatografía en capa fina. La intensificación de la fluorescencia por tratamiento del cromatograma con vapores de amoníaco es indicio de grupos fenólicos en la cumarina. o en refrigeración.18 dependiendo de las estructuras de las cumarinas. el extracto obtenido se concentra. acetona.V. es . La detección de las cumarinas puede hacerse también con otros reveladores. La extracción se hace con soxhlet. Se pueden recristalizar con una mezcla de etanol-éter y luego se purifican mediante cromatografía. ya que degrada las cumarinas. y pueden extraerse con éter de petróleo. Las cumarinas muestran intensa fluorescencia.Fluorescencia amarillo opaca u ocre: furanocumarina.7-dioxigenadas. etc. empleando como adsorbentes la sílica gel o la alúmina “neutra o ácida”. pero ninguno de ellos es específico. SEPARACION CROMATOGRAFICA Y DETECCION: Se utiliza ampliamente la cromatografía en columna. pero antes es necesario añadir hidróxido de potasio. éter sulfúrico o de petróleo. En base al color que muestren. las furano-cumarinas son por lo general solubles en lípidos. Puede utilizarse solventes diversos. obteniéndose así cristales al dejar en reposo. de 365 nm antes y después de asperjar con hidróxido de potasio al 5 ó 10% en etanol. puede asignarse tentativamente ciertas características a las cumarinas: . Los componentes se detectan bajo luz U. . Puesto que pueden encontrarse a veces formando glicósidos. A diferencia de las hidroxicumarinas. . tales como etanol. . con lo que los grupos hidroxilo dan color azul o verdoso. para lo cual la mezcla sílica gel y celulosa incrementa la sensibilidad y resolución. Se prefiere NO USAR alúmina BASICA.

HPLC: Resulta ventajoso porque las separaciones son más rápidas y efectivas. violetas o cafés. Comúnmente pueden separarse mediante cromatografía en capa fina en sílica gel. Se ha utilizado por ejemplo para separar una mezcla de furano-cumarinas del perejil. que producen cambios espectrales.19 necesario antes hidrolizarlos con ácido. Bandas de absorción U.r. Para obtener información respecto a la orientación de determinados grupos funcionales. ESPECTRO i. Se detectan bajo luz UV como manchas azules. que corresponden a los anillos de benceno y pirona respectivamente. verdes. . amarillas.: Puede encontrarse bandas características de la pirona en la región comprendida entre 1715 y 1745 cm a la -1.V. puede utilizarse “reactivos de desplazamiento”. Ejemplo: se hace reaccionar a las cumarinas con hidróxido de sodio. usando como fase móvil cloroformo.5% etanol o éter-benceno (1:1). RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: También se emplean reactivos de desplazamiento. acetato de sodio. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: Para dilucidar la estructura química de una cumarina nueva se debe 1) identificar primero los diferentes grupos sustituyentes. cloroformo + 1. y un pico base a m/e de 118 (100%) (28 unidades menos por la pérdida de monóxido de carbono del anillo de pirona. Los grupos hidroxilo y carbonilo también muestran bandas características. . sobre todo hidroxilos. Esto toma entre 1 a 2 horas. La intensidad de la fluorescencia aumenta al adicionar hidróxido de potasio al 10%. características de las cumarinas: 274 y 311 nm. ESPECTROMETRIA DE MASAS: Las cumarinas producen un fuerte ion molecular a un valor de m/e de 146 (76%). así como para fraccionar algunas cumarinas de cítricos. ácido bórico o cloruro de aluminio. y 2) determinar su ubicación en el núcleo de la cumarina.

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