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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA CURSO DE FITOQUÍMICA

GLICÓSIDOS
DEFINICION: Son compuestos que al ser hidrolizados dan origen a una porción que es azúcar y otra que no lo es (aglicona o genina). ESTRUCTURA: El enlace glicosídico se forma por la deshidratación del azúcar y de la aglicona. Un grupo hidroxilo de la aglicona se condensa con el hidroxilo del hemiacetal del azúcar, formándose así un acetal interno. Si el grupo OR de la aglicona se encuentra en el mismo sentido estérico que el grupo CH2OH del carbono 5, la configuración se designa beta; si está en sentido estérico opuesto, se designa alfa. Ejemplo:

CH3

Alfa-metil glucósido En la naturaleza se encuentran solo las formas beta. CARACTERISTICAS DE LOS GLICOSIDOS: - Son en general muy ligeramente solubles en agua, y un poco más solubles en etanol, metanol, o mezclas de ellos en agua. - En las plantas, los glicósidos a menudo están acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos, las cuales se localizan en el mismo tejido, aunque en células diferentes. - Los glicósidos son ópticamente activos, por lo que sus rotaciones específicas contribuyen a su caracterización física. FUNCION FISIOLOGICA: Se cree que los glicósidos intervienen en los fenómenos de óxidoreducción, así como en el crecimiento y fecundación de las plantas. Se cree además que los glicósidos flavonoides protegen de la luz y rayos

Salicaceae). Salicina 1. Se extrae de varias especies de los géneros Salix y Populus (Fam. Saponinas: esteroidales y triterpénicas 4.1.2 Glucovainillina: Se encuentra presente en especies del género Vanilla (Fam. Glicósidos fenólicos 2. y que debido a sus propiedades fungicidas también protegen a la corteza de los árboles contra el ataque de parásitos. 1. Orchidaceae). púrpura. Glicósidos cianogénicos 3. CLASIFICACION: En base a la estructura molecular de las agliconas. genera vainillina .1 Salicina: Al ser hidrolizada produce saligenina y glucosa.1. GLICOSIDOS FENOLICOS: Son en general compuestos relativamente polares. Glicósidos cardiotónicos 1. los glicósidos se clasifican así: 1. La salicina tiene propiedades antirreumáticas. con actividad semejante a la del ácido salicílico. azul o negro que producen cuando se les agrega una solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico.1 DERIVADOS DEL ACIDO BENZOICO Y SALICILICO: 1. Debido a su naturaleza aromática muestran intensa absorción en la región ultravioleta del espectro. mediante hidrólisis enzimática durante la maduración de los frutos.2 ultravioleta. la cual. con cierta solubilidad en agua. pudiendo ser detectados por el intenso color verde. lo cual permite identificarlos y cuantificarlos.

1. Las cumarinas están biogenéticamente relacionadas con los flavonoides. Dicho compuesto fue aislado por primera vez en 1820 por Vogel de la Coumarona odorata (“árbol de la tonka”). pero son más abundantes en los frutos. CHO CHO Glucosa-O OCH3 HOOCH3 Vainillina Glucovainillina 1. los progresos hechos en este campo fueron escasos hasta hace aproximadamente treinta y cinco años. por lo que se usa como agente sazonante y aromatizante en las industrias farmacéuticas y de alimentos. A pesar de haberse conocido desde esa época. esteroides y terpenoides. la novobiocina como antibiótico. principalmente en las familias Umbeliferaceae y Rutaceae. Pueden encontrarse en todas las partes de la planta. algunas se usan como saborizantes y en perfumería. La vainillina es bastante aromática.3 QUINONAS: . Hasta hoy se conocen aproximadamente 800 cumarinas. ligninas. las aflatoxinas como hepatotóxicos y carcinogénicos. Las cumarinas han cobrado gran interés en años recientes debido al amplio rango de actividad biológica que han mostrado.3 y glucosa. de las cuales sólo 35 carecen de oxígeno en posición 7. Ejemplo: el dicumarol como anticoagulante y antibacterial. Cumarina: (Configuración C6C3 ) El nombre cumarina fue asignado originalmente a la estructura anotada arriba: benzo-alfa-pirona.2 CUMARINAS: Son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas.

animales marinos y ciertos insectos. 1. líquenes. Son pigmentos vegetales. Pueden ser de color amarillo. Son pigmentos de plantas superiores. Algunas tienen propiedades antibióticas.3. rojo o marrón (castaño). de color amarillo o blanco. Hasta hoy se conocen aproximadamente 900 flavonoides naturales. Se encuentran principalmente en las familias de las Leguminosas.4 FLAVONOIDES Se les llama también antoxantinas. presente en Amanita muscaria. Benzoquinona 1. que por reducción se convierten en polifenoles. hojas de sen y la cáscara sagrada. ruibargo.3. Rubiaceas. un glicósido antraquinónico. los que fácilmente las regeneran por oxidación. como por ejemplo en la frángula. que poseen un esqueleto carbonado de 15 átomos (C6C3C6). Se encuentran ampliamente distribuidos en las . Ramnaceas. Poligonaceas. Antraquinona: 1. azul o violeta. pero si forman sales de hidroquinonas toman color verde. aislados también de hongos. Los derivados antraquinónicos se encuentran en las plantas con acción purgante.4 Son dicetonas insaturadas.2 Antraquinonas: Son las quinonas más extensamente distribuidas en las plantas. Ericaceas y Liliaceas. El colorante presente en la cochinilla (insecto nativo de Centro América) es el ácido carmínico. ejemplo: la muscarufina.1 Benzoquinonas: Las benzoquinonas se han encontrado con frecuencia en los hongos.

por lo que se unen fácilmente a las proteínas. Los glicósidos de dihidrochalconas como edulcorantes. lo que hace aún mayor el número de glicósidos conocidos. las polihidroxiflavonas se usan para conservar grasa o jugos de frutas (son antioxidantes). No se encuentran en algas. También hay flavonoides amargos. que en caso de existir se denomina C. Ejemplo de flavonas: apigenina (género Apium).En medicina: contra la fragilidad capilar (ejemplo la rutina). . ya sea en forma libre o como glicósidos. La rotenona se usa como insecticida.Los flavonoides se utilizan como colorantes de lanas. antimicrobianos y fungicidas. con lo cual ayudan a la polinización. Dan color amarillo a flores y frutos.4. lo que atrae a mariposas y abejas. coleréticos (que estimulan la secreción biliar). unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo. y en diferentes posiciones. tales como las Compuestas. Núcleo básico de un flavonoide: FLAVONA Tiene dos anillos aromáticos (A y B). Umbelliferaceae. . dilatadores de las coronarias (Crataegus y Arnica). FUNCION FISIOLOGICA EN LAS PLANTAS: Los flavonoides son estructuras ricas en grupos hidroxilo. convirtiéndose en potentes inhibidores de algunos sistemas enzimáticos. como estrogénicos. hongos o bacterias. Fam. diuréticos. antihepatotóxicos. EJEMPLOS DE FLAVONOIDES: 1. USOS: . Es frecuente encontrar diferentes azúcares enlazados a una misma aglicona. como espasmolíticos.5 plantas.1 Flavonas y Flavonoles: Las flavonas son abundantes en familias herbáceas. que pueden proporcionar la manera de repeler los gusanos que se alimentan de las hojas. mientras que los flavonoles abundan en las angiospermas leñosas.

1. Se ha observado que las . Apigenina: flavona 1. que quiere decir azul. relacionados con las antocianinas.4. A un valor de pH mayor (cerca o mayor de 7) aparece un color azul verdoso. Ejemplo: la betanina es el principal pigmento de la remolacha. Son pigmentos rojos y azules.6 Ejemplo de flavonoides: quercetina.5 BETACIANINAS: Son pigmentos rojos aislados de la remolacha. peonidina. familia Fagaceae. Leucoantocianinas o Proantocianidinas: se llaman así las sustancias capaces de convertirse en antocianidinas mediante calentamiento con un ácido mineral. Su estructura química es SIMILAR a la de los flavonoides: Antocianidinas: se llama así a las agliconas presentes en las antocianinas. que significa flor.2 Antocianinas: El nombre antocianina proviene del griego anthos. Al incrementarse el pH el color desaparece. pero luego se encontró que contienen nitrógeno y su estructura básica es distinta. familia Chenopodiaceae. delfinidina. que son amarillas o blancas. Antiguamente se les consideraba como flavonoides. Ejemplo de las más comunes en la naturaleza: pelargonidina. A pH muy alto se rompe la estructura de la antocianina. debido al posible rompimiento de uno de sus anillos aromáticos. a diferencia de las antoxantinas. A pH bajo. quenferol y miricetina. las antocianinas en solución se presentan de color rojo. con la formación de una pseudobase. presentes en el género Quercus. Los flavonoles son las 3-hidroxi-flavonas. Beta vulgaris. de manera irreversible. y kyanos. cianidina.

y no se encuentran de manera conjunta en las mismas familias vegetales. ya que poseen un grupo nitrilo unido a la aglicona. cerezas. La linamarina es una toxina extraída de la yuca común: Manihot utilissima y Manihot esculenta (Fam. 2. presente en la familia Rosaceae. Ejemplo: la amigdalina. en las semillas de albaricoque (Prunus malus). Si es un disacárido. variedad Amara). Amigdalina Muchos de estos glicósidos son derivados del nitrilo del ácido mandélico. enzimas como la emulsina pueden hidrolizarlo así: amigdalasa Amigdalina + agua mandelonitrilo + 2 glucosas Prunasa Benzaldehído + HCN (gas) .o di-sacárido.7 betacianinas y las antocianinas se excluyen mutuamente. La porción azucarada puede ser mono. ciruelas. y otras especies del género Prunus: duraznos. incluyendo las semillas de las almendras amargas (Prunus amigdalus. GLICOSIDOS CIANOGENICOS: Muchas plantas contienen glicósidos que al hidrolizarse generan ácido cianhídrico. Euphorbiaceae).

Ambos tipos de saponinas son solubles en agua y etanol e insolubles en éter. Son tóxicas para los peces. . Se ha encontrado que los esteroides aislados de plantas más importantes en la producción de cortisona son: . por lo que muchas veces se prefiere hidrolizar el extracto crudo de la planta y aislar la sapogenina libre del azúcar. de aceites crudos vegetales.Sarmentogenina. las saponinas pueden ser: esteroidales y triterpenoides. Mediante hidrólisis enzimática de las saponinas se obtienen sus agliconas: las sapogeninas. mientras que las saponinas ácidas proceden de los triterpenoides: Acetato C RNúcleo D esteroidal A B Mevalonato O E C D A O B . Biosíntesis de Saponinas: Las llamadas saponinas neutras derivan de los esteroides. . .8 3. del género Smilax. SAPONINAS: Son poderosos agentes tensioactivos que forman espuma al ser agitados con agua.Diosgenina y botogenina. Causan hemólisis a bajas concentraciones. por lo que algunas plantas que las contienen se utilizan para pescar. Las saponinas no son fáciles de aislar. Durante muchos años se ha brindado especial importancia al estudio de plantas que contienen saponinas con el objeto de descubrir precursores de la cortisona. hormonas sexuales y anticonceptivos. Esta sustancia fue aislada originalmente de la corteza adrenal y luego sintetizada a partir de los ácidos biliares del ganado.Sitosterol. del género Dioscorea. También puede sintetizarse a partir de las saponinas esteroidales: vitamina D. Luego se encontró que las sapogeninas esteroidales podían constituir una fácil más fácil. del género Strophantus. En base a la estructura química de la aglicona.Sarsapogenina y smilagenina.

Purpurea). procedente de Chile. que incluyen anillos lactónicos de 5 miembros y un esqueleto de 23 átomos de carbono. con anillo lactónico de 6 miembros y un esqueleto de 24 átomos de carbono. Ejemplo: digitonina (Digitalis purpurea y Digitalis lanata). de altura. Ejemplo: . raíz de regaliz. que permiten la formación del hidrocarburo triterpenoide escualeno. que origina esteroides en una dirección. Tienen un anillo lactónico no saturado en el carbono 17. sarsapogenina (raíz de sarsaparrilla). e incluye la condensación de subunidades de acetato.9 Escualeno Núcleo triterpenoide pentacíclico El proceso principal de biosíntesis que da lugar a las sapogeninas es similar. aunque también se hallan en especies vegetales. Entre las plantas que contienen saponinas triterpenoides se encuentran: la corteza de Quillaja saponaria (árbol de 18 m. y los bufanólidos o bufadienólidos. Estos últimos se han llamado así debido a que están contenidos en el veneno del sapo común (género Bufus). debido a su abundancia en este tipo de plantas. gitogina (D. Las saponinas triterpenoides se encuentran ampliamente distribuidas y constituyen la mayoría de las encontradas en la naturaleza. Entre las fuentes ricas de saponinas esteroidales se encuentran especies de las familias Dioscoreaceae. semillas de soya y el ginseng. el cual puede ser pentagonal o hexagonal. Perú y Bolivia). 4. Liliaceae y Escrofularaceae. dando así origen a dos tipos de agliconas cardiotónicas: cardenólidos. y triterpenoides pentacíclicos en la otra. Se caracterizan porque presentan grupos hidroxilo en el carbono 3 y 14. GLICOSIDOS CARDIOTONICOS: Se han aislado de las angiospermas principalmente.

Con esto quedan los heterósidos cristalizados. Luego se filtra. para precipitar las impurezas. Posteriormente puede hidrolizarse para determinar la naturaleza del azúcar y de la aglicona. INACTIVACION DE ENZIMAS: Los glicósidos se encuentran muchas veces acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos. y el filtrado (glicósidos más exceso de plomo) se trata con una corriente de ácido sulfhídrico. etc. ANALISIS Y CARACTERIZACION DE GLICOSIDOS: Siendo los glicósidos sustancias con núcleo estructural muy diverso. Tratando el material vegetal con ácido a pH 1 ó 2. lo cual se logra mediante: a. El macerado se trata con solución de acetato de plomo. o hirviéndolo en alcohol por 15 min. por lo que los métodos de separación y purificación son también distintos. Sin embargo. en frío. sus solubilidades varían. EXTRACCION GENERAL: El material vegetal se extrae con alcohol en caliente. . Realizando la extracción inicial a temperatura muy baja. por lo general el solvente a emplear para la extracción inicial es etanol o metanol con agua. grasas. tratando el material vegetal con éter de petróleo o cloroformo. b. dejando los glicósidos en solución. Los cristales de glicósidos se obtienen mediante evaporación del filtrado. c. d. Para evitar esto deben inactivarse previamente a la extracción. ceras. Luego el residuo se macera con alcohol diluido durante varias horas. el cual es removido por filtración. y luego se enfría. Poniendo el material fresco o seco en agua caliente. EXTRACCION DE GLICOSIDOS FENOLICOS: Se puede primero separar las materias resinosas. que precipita el plomo como sulfuro. Tratamiento de la planta con vapor de agua.10 Cardenólido Bufadienólido EXTRACCION.

CUANTIFICACION GENERAL DE GLICOSIDOS: Para valorar los glicósidos se aprovecha la capacidad que tienen los ácidos de liberar los azúcares reductores. y en ella se pueden caracterizar los azúcares reductores. ya que fluorescen bajo luz ultravioleta. Se debe observar manchas azules. Otras veces se obtiene mediante extracción de la solución acuosa resultante de la hidrólisis. empleando sucesivamente varios solventes de diferente polaridad. sobre todo los flavonoides. ANALISIS DE GLICOSIDOS FENOLICOS: . Dicha fluorescencia se intensifica por la acción de vapores amoniacales. pueden identificarse mediante cromatografía en capa fina. en caliente. Para detectar ácidos fenólicos puede utilizarse cromatografía en capa fina. debido a la acción de las fenolasas. y luego rociando hidróxido de amonio diluido. Se usa ácido sulfúrico al 2-5% o ácido clorhídrico 1 ó 2 N durante algunas horas. acetona y alcohol.DETECCION: Los fenoles rara vez se encuentran en forma libre en las plantas. en baño de María hirviendo. con un solvente no miscible. Los fenoles pueden detectarse con solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico al 1% más 1% de ferricianuro de potasio. durante 4 hr. que luego es evaporado. Los glicósidos fenólicos son muy sensibles a la oxidación enzimática. Posteriormente se continúa extrayendo con acetato de etilo.11 La extracción inicial de los glicósidos fenólicos también puede hacerse de manera más eficiente mediante soxhlet. los cuales se someten a recristalización con algún solvente apropiado. Es por ello que generalmente se aíslan mediante hidrólisis. Posteriormente el extracto alcohólico de la planta se somete a hidrólisis ácida o alcalina. cloroformo y éter dietílico. Estos últimos aíslan los glicósidos. La hidrólisis ácida se hace con ácido clorhídrico 2 M durante media hora. La hidrólisis alcalina se realiza con hidróxido de sodio 2 M a temperatura ambiente. la clorofila y los carotenoides. así: éter de petróleo. La mayoría de compuestos fenólicos. A veces la aglicona precipita y se recoge con un solvente más denso que el agua. Luego se enfría y filtra. Estos permiten eliminar los lípidos. La fracción acuosa ácida se neutraliza con carbonato de bario. con reactivo de Gibbs como revelador (2. También es útil como revelador el reactivo de “productos . como por ejemplo el éter o cloroformo.6-dicloroquinonacloroimida al 2% en cloroformo). Esto se evita aislándolos de los tejidos con alcohol caliente.

agua. Para evitar esto puede purificarse calentando varias veces con pequeñas cantidades de agua.12 naturales”: difenil-boril-oxietilamina al 1% en metanol. Este reactivo colorea de azul o gris los fenoles con núcleo catecólico (tiene 2 grupos OH en posición “orto”) o hidroquinonas al exponer la placa a vapores amoniacales. . sales. PURIFICACION DE EXTRACTOS FENOLICOS: Al prepararse un extracto vegetal que contenga glicósidos fenólicos. Esto se logra usando metanol conteniendo ácido clorhídrico al 0. pero con dobles enlaces. CUANTIFICACION DE FENOLES TOTALES: El permanganato de potasio oxida los fenoles en frío. Sin embargo. Otro método de purificación consiste en emplear resinas de intercambio catiónico.. azul o verde. Además. y luego polietilenglicol 4000 al 5% en etanol. sí pueden reaccionar. Luego se observa la fluorescencia bajo luz U. que podrían interferir en la cromatografía. y NO los “meta-difenoles”.El solvente más usado para elución en cromatografía es el etanol al 70%. quedando en la parte superior. La mezcla se satura con cloruro de sodio. tales como el ácido cinámico. etc. con lo que el n-propanol se separa. otras sustancias NO FENOLICAS.. Pueden detectarse bandas de color amarillo.V. obteniéndose . la absorción de los fenoles naturales se ve afectada por muchos factores. tales como el tipo de solvente y el pH. la cual contiene la mayoría de glicósidos fenólicos. ácidos.1% ó ácido acético al 15%.La absorción en el ultravioleta se emplea bastante en la determinación de fenoles totales (a 270nm). Las fracciones acuosas se combinan y agitan con n-propanol. ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico). característica que se aprovecha para valorar los fenoles totales. por lo que debe especificarse las condiciones estándar bajo las cuales se trabajó. como por ejemplo la amberlita IRC-50 y Dower IXII. ya que solo se oxidan los difenoles “orto”y “para”. Un reactivo que brinda información más específica sobre el tipo de fenoles presentes es el de Folin (tungstato de sodio. pueden hallarse también presentes azúcares. CROMATOGRAFIA Y ESPECTROFOTOMETRIA: . Sin embargo. que permite reducir estos ácidos y a la vez oxidar todos los fenoles. se ha reportado que éste no es un buen método. Para las antocianinas se requiere pH ácido. Este problema se resuelve con el reactivo de Folin-Denis.

y luego de agitar se mide la absorbancia a 730-760 nm.13 color azul. concentrar Cromatografiar en columna abierta con gel de sílice. Vegetal + etanol Macerar en frío/72 hr. María) Filtrado Solución homogénea PbOAC 0. debido a los óxidos de tungsteno y molibdeno. Extracción y aislamiento de flavonoides: Mat. cloroformo y benceno. reposar/24hr Precipitado Solución amarilla Rotavapor Fase acuosa Etanol Acetato de etilo.Los flavonoides son generalmente solubles en agua y alcohol. dando . CARACTERIZACION: . Extracto alcohólico Filtrar Residuo Concentrar (B. Son solubles en álcali. filtrar. Para efectuar la cuantificación se toma una alícuota que contenga la sustancia fenólica. se hace reaccionar con el reactivo de Folin más una solución de carbonato de sodio. e insolubles en éter.1 M.

Las flavonas se colorean de naranja. También puede usarse gel de Sephadex. Se cuenta con información que permite deducir la posible estructura del flavonoide. TECNICAS CROMATOGRAFICAS: . . en base al color observado antes y después de añadir amoníaco.14 soluciones amarillas que se oscurecen al aire. pero puede también emplearse cromatografía en papel. Las chalconas son el primer tipo de flavonoides que se forman a lo largo de su biosíntesis. hay presencia de chalconas y auronas. que pueden cambiar tanto de color como de intensidad luego de su exposición a vapores de amoníaco o al reactivo de “Productos Naturales”. rojo obscuro o violeta. anaranjadas. . rosadas.Se utiliza con frecuencia cromatografía en capa fina. . En decoloran y precipitan. medio ácido se . Si viran de amarillo a rojo. los flavonoides dan colores característicos. La detección de los flavonoides en ambos tipos de cromatografía puede hacerse usando lámpara de luz ultravioleta. . Se emplean los mismos adsorbentes que en la cromatografía en capa fina. Ejemplo: si los pétalos blancos de una flor se exponen a vapores de amoníaco y se tornan amarillos. A partir de ellas derivan otras clases.Prueba de Marini-Bettolo: con solución de cloruro de antimonio en tetracloruro de carbono.En algunos casos pueden hacerse pruebas directamente sobre el material vegetal. indica la presencia de flavonas y flavonoles. mientras que las chalconas. observándose manchas fluorescentes azules. Las isoflavonas y chalconas no se colorean.La cromatografía en columna se emplea comúnmente para purificaciones preliminares y para separar grandes cantidades de flavonoides a partir de extractos vegetales. los flavonoles de rojo cerezo y las flavanonas de rojo violáceo. sílica gel y poliamida. púrpuras y otras. o pueden formar precipitados.La reacción más usual para detectar flavonoides es la de Shinoda: al extracto alcohólico se le añade un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado. empleando como adsorbentes celulosa. Ejemplo: las flavonas dan precipitado amarillo o anaranjado.

Esto se hace tanto para identificar el tipo de flavonoide. lo cual proporciona información adicional sobre la estructura. . Estos se hacen reaccionar con el flavonoide. Conlleva la ventaja de que es una técnica muy sensible y precisa. como para establecer el modelo de oxigenación. que permite obtener resultados cuali-cuantitativos en unos pocos minutos. La identificación del flavonoide y su modelo de oxigenación se facilita empleando “reactivos de desplazamiento”. por lo que desaparece al añadir ácido clorhídrico.El cloruro de aluminio forma complejos con grupos orto-hidroxilos y con grupos hidroxilcetona vecinos. el anillo aromático (entre 1600 a 1500). TECNICAS ESPECTROMETRICAS: El método más usual para analizar la estructura de un flavonoide es la observación en ultravioleta y visible. . Ejemplo: . lo cual se aprovecha para detectar un grupo OH en posición 7. La variación de estos rangos depende del modelo de oxigenación y del grado de sustitución de los hidroxilos. y la de los grupos o-hidroxi-cetona (entre 3500 a 3200 nm) pueden ser útiles.El acetato de sodio ioniza únicamente el grupo hidroxilo más ácido del flavonoide. debido a que los espectros ultravioleta brindan mayor información. Sin embargo. El espectro típico consta de dos máximos de absorción en los rangos de 240 a 285 nm y 300 a 550 nm. .15 . el complejo formado con grupos hidroxil-cetona es estable. y provocan desplazamiento característico de los picos de absorción. Los espectros de absorción de los flavonoides se determinan comúnmente en solución metanólica.Resonancia magnética nuclear: los espectros de RMN de flavonoides han cobrado mayor importancia en años recientes para determinación de estructuras.Infrarrojo: se usa muy poco en el análisis de flavonoides. . El complejo formado con grupos ohidroxilos es lábil en presencia de ácido. la absorción del grupo carbonilo (entre 1680 y 1640 nm). Es común en este caso también el uso de “reactivos de desplazamiento”.La cromatografía líquida de alta resolución es muy utilizada para realizar separaciones a pequeña escala. Por el contrario.

238 para flavonoles. Para el análisis de resultados se toma en cuenta los pesos moleculares de los distintos núcleos básicos de los flavonoides. lo cual se aprovecha para su .Espectrometría de masas: posee la ventaja de que requiere muy poca cantidad de muestra. .Calentando con ácido clorhídrico 2 M por 5 minutos. y pueden ser extraídas con alcohol amílico. mientras que las antocianinas tienen Rf moderados (0. anaranjados o rojos. Las benzoquinonas y naftoquinonas actúan como oxidantes. las betacianinas viran a amarillo. . gota a gota. y las antocianinas al cátodo. poco solubles en agua y solubles en solventes orgánicos. Generalmente el grupo carbonilo de las quinonas no reacciona con los reactivos usuales de la función cetona. Es por ello que pueden extraerse con éter de petróleo. DIFERENCIACION DE BETACIANINAS Y ANTOCIANINAS: . ANTOCIANINAS: Son solubles en agua e insolubles en los solventes orgánicos. .El espectro visible en metanol-ácido clorhídrico presenta un rango máximo de 505-535 nm para las antocianinas. isoflavonas y auronas. También pueden precipitarse como cloruros mediante ebullición con ácido clorhídrico al 20%. mientras que las antocianinas no. usando como fase móvil butanol-ácido acético-agua.Añadiendo hidróxido de sodio 2 M. Pueden separarse mediante precipitación.1). . Las antocianinas cambian a azul verdoso y luego se decoloran. a 100 grados centígrados. 224 para flavanonas y chalconas.Mediante cromatografía.4). Las betacianinas tienen Rf muy bajos (0-0.16 . etc. junto con clorofila y carotenos. Al hacerse cromatografía en capa fina se diferencian por su Rf. bajo la forma de picratos. Ejemplo: 222 para flavonas. a pH ácido (2-4): las betacianinas migran al ánodo. y 532-554 nm para las betacianinas. Las quinonas se solubilizan en álcalis.1-0. dando coloraciones que van desde el anaranjado al rojo o violeta. Las betacianinas se decoloran. QUINONAS: Son sólidos cristalinos amarillos.Haciendo electroforesis en papel.

Con la espectrometría de masas puede reconocerse a las quinonas por la facilidad con que pierden las dos moléculas de carbonilo. En el infrarrojo pueden detectarse las bandas características fuertes de los grupos carbonilo. La cumarina se ha encontrado en unas 150 especies. Un resultado positivo está indicado por una coloración rosada en la fase alcalina (si hay poca cantidad de antraquinonas. violetas. púrpuras o verdes). hojas de tabaco y estramonio contienen 7-hidroxi. Las distintas especies de canela contienen cumarina no sustituida (C. ceylanicum es la que tiene menos). y se agita con una solución acuosa alcalina (hidróxido de amonio al 10% (reacción de Bornträger). las semillas de este árbol de Guyana y Brasil se usan en perfumería) contiene 1 a 3% de cumarina. El “haba tonka”(Coumarona odorata. de Jalapa. se filtra. Por lo menos tres de ellas caen entre 215 y 300 nm. belladona. ya que las primeras presentan 4 ó 5 bandas de absorción en el ultravioleta. También puede usarse HPLC para aislar quinonas. Así puede diferenciarse a las antraquinonas de otras quinonas. con solventes de diferentes polaridades. cloroformo o éter). el análisis bajo la luz ultravioleta es más sensible. pueden ser detectadas en la región visible. Su olor es el característico del heno fresco. pero puede ser de color anaranjado. Puesto que las quinonas son coloreadas. . 6-metoxi-cumarina (escopoletina). La ruda contiene 10 derivados cumarínicos. pertenecientes a más de 30 familias. por encima de los 430 nm. Para ello se macera el material vegetal con un solvente orgánico inmiscible con el agua (ejemplo: benceno. Las quinonas pueden separarse entre sí. Como reveladores se puede emplear hidróxido de potasio al 10% en metanol (se ven manchas rojas. CUMARINAS: La cumarina y sus glicósidos derivan de la benzo-alfa-pirona. así como de los carotenos y clorofila mediante cromatografía en capa fina o en papel.17 análisis espectrofotométrico. sin embargo. en la región visible. además la raíz de avena. y la otra. EXTRACCION: La extracción de las cumarinas puede realizarse sobre el material vegetal fresco o seco. rojo o violeta si hay alta concentración).

Para detectar grupos fenólicos se emplea solución acuosa de cloruro férrico al 1%. empleando como adsorbentes la sílica gel o la alúmina “neutra o ácida”. de 365 nm antes y después de asperjar con hidróxido de potasio al 5 ó 10% en etanol. La adición de reactivo de Benedict a las cumarinas o flavonoides con grupos hidroxilo reactivos hace que la fluorescencia desaparezca total o parcialmente. para lo cual la mezcla sílica gel y celulosa incrementa la sensibilidad y resolución. y pueden extraerse con éter de petróleo. el extracto obtenido se concentra. SEPARACION CROMATOGRAFICA Y DETECCION: Se utiliza ampliamente la cromatografía en columna. Puesto que pueden encontrarse a veces formando glicósidos. etc.Fluorescencia amarillo opaca u ocre: furanocumarina. pero antes es necesario añadir hidróxido de potasio. . En base al color que muestren. Se prefiere NO USAR alúmina BASICA. Los componentes se detectan bajo luz U. .7-dioxigenadas.V. Esta es la propiedad física más usual para reconocer una cumarina. puede asignarse tentativamente ciertas características a las cumarinas: . También se usa bastante la cromatografía en capa fina. tales como etanol. A diferencia de las hidroxicumarinas. ya que degrada las cumarinas. con lo que los grupos hidroxilo dan color azul o verdoso. las furano-cumarinas son por lo general solubles en lípidos. o en refrigeración. obteniéndose así cristales al dejar en reposo. Puede utilizarse solventes diversos. éter sulfúrico o de petróleo. pero ninguno de ellos es específico. . Las cumarinas muestran intensa fluorescencia. La extracción se hace con soxhlet. acetona. La detección de las cumarinas puede hacerse también con otros reveladores. La intensificación de la fluorescencia por tratamiento del cromatograma con vapores de amoníaco es indicio de grupos fenólicos en la cumarina.18 dependiendo de las estructuras de las cumarinas. Se pueden recristalizar con una mezcla de etanol-éter y luego se purifican mediante cromatografía.Fluorescencia púrpura: característica de 7-alcoxicumarina. es .Fluorescencia celeste: 7-hidroxi-cumarina y 5.Amarillo-verdoso: cumarina no sustituída.

Esto toma entre 1 a 2 horas. y un pico base a m/e de 118 (100%) (28 unidades menos por la pérdida de monóxido de carbono del anillo de pirona. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: Para dilucidar la estructura química de una cumarina nueva se debe 1) identificar primero los diferentes grupos sustituyentes. ESPECTRO i. cloroformo + 1. que producen cambios espectrales. Bandas de absorción U. que corresponden a los anillos de benceno y pirona respectivamente. Se detectan bajo luz UV como manchas azules. ácido bórico o cloruro de aluminio. La intensidad de la fluorescencia aumenta al adicionar hidróxido de potasio al 10%. . sobre todo hidroxilos.19 necesario antes hidrolizarlos con ácido. usando como fase móvil cloroformo.HPLC: Resulta ventajoso porque las separaciones son más rápidas y efectivas. acetato de sodio. Se ha utilizado por ejemplo para separar una mezcla de furano-cumarinas del perejil. .: Puede encontrarse bandas características de la pirona en la región comprendida entre 1715 y 1745 cm a la -1.r. y 2) determinar su ubicación en el núcleo de la cumarina.V. puede utilizarse “reactivos de desplazamiento”. Comúnmente pueden separarse mediante cromatografía en capa fina en sílica gel. violetas o cafés. Ejemplo: se hace reaccionar a las cumarinas con hidróxido de sodio. RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: También se emplean reactivos de desplazamiento. verdes.5% etanol o éter-benceno (1:1). amarillas. ESPECTROMETRIA DE MASAS: Las cumarinas producen un fuerte ion molecular a un valor de m/e de 146 (76%). características de las cumarinas: 274 y 311 nm. así como para fraccionar algunas cumarinas de cítricos. Para obtener información respecto a la orientación de determinados grupos funcionales. Los grupos hidroxilo y carbonilo también muestran bandas características.

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