Tecnicas de Hematologia y Coagulación

Cbtis 92
Técnicas de Hematología y
Coagulación
José Ramón Espinosa Molina
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José Ramón Espinosa Molina Cbtis 92
Toma de muestra sanguínea y Frotis
Objetivo: Realizar la toma sanguíneo y un frotis con el cual se puede hacer un

diferencial de leucocitos para saber de un trastorno medico que esté sufriendo
el paciente.
Fundamento: En la toma de muestra se obtiene sangre venosa la cual ha
estado circulando por el cuerpo humano del paciente. El frotis sanguíneo es
una técnica en la cual en el extendido los glóbulos blancos que dan a la vista
para poder ser un conteo de su proporción en la sangre que al médico le
permite saber qué tipo de glóbulo blanco se está elevando y así saber de qué
enfermedad se trata.
En la sangre a demás de frotis sanguíneo se puede realizar múltiples
estudios como una Biometría hemática que nos arroja varios resultado que le
sirven al médico para ser un diagnostico presuntivo o apoyar su diagnostico.
Con la sangre se puede múltiples estudios pruebas de química clínica,

inmunológicas, tiempos etc.
Material:
 Algodón.
 Alcohol al 70%.
 Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo.
 Jeringas de 5 mL.
 Viales con anticoagulante EDTA.
Procedimiento:
1. Verificar que los elementos por utilizar estén listos, y que el paciente se
sienta cómodo.
2. Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la
flexión del codo o a 10 cm del codo, sujetar con un medio nudo
3. Limpiar la zona con alcohol al 70% o alcohol yodado, en un área de 2
pulgadas
4. El paciente deberá abrir y cerrar la mano durante unos segundos y
después la mantendrá cerrada, esto ayudará a visualizar las venas
superficiales
2
5. Se retira el estuche protector de la aguja y se coge la jeringa de tal

manera que el bisel se encuentre hacia arriba
6. Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena, se perfora la piel
haciendo avanzar la aguja 0,5-1 cm en el tejido subcutáneo, luego se
perfora la vena Se aspira la jeringa hasta el volumen requerido.
7. Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje de hacer puño. Se
coloca el algodón seco encima de la punción y se retira la aguja.
8. Retirar la aguja de la jeringa. Verter la muestra lentamente por las
paredes del vial con anticoagulante. No olvidar colocar una gota en la
lámina portaobjeto para realizar el frotis.
9. Agitar el vial en círculos sobre la mesa para homogeneizar la muestra
con el anticoagulante.
Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro

dedos por encima de la flexión del codo o a 10 cm
del codo, sujetar con un medio
Limpiar la zona con alcohol al 70% o alcohol

yodado, en un área de 2 pulgadas
El paciente deberá abrir y cerrar la mano durante

unos segundos y después la mantendrá cerrada,
esto ayudará a visualizar las venas superficiales
Se retira el estuche protector de la aguja y se coge

la jeringa de tal manera que el bisel se encuentre
hacia arriba
Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena, se

perfora la piel haciendo avanzar la aguja 0,5-1 cm
en el tejido subcutáneo, luego se perfora la vena Se
aspira la jeringa hasta el volumen requerido.
Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje

de hacer puño. Se coloca el algodón seco encima de
la punción y se retira la aguja
Fuentes de Error:
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 Mala localización de la vena

 No haber apretado el embolo
 Mala asepcia
 Mala colocación del bisel
Procedimiento para frotis:

1. Una vez extraída la sangre con cualquiera de las metodologías, se
coloca una pequeña gota de sangre (5mL) (aprox. 3 mm de diámetro)
sobre un portaobjeto a 2 cm aproximadamente de uno de los extremos.
2. Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del
primer portaobjeto (en la que se encuentra la gota de sangre) formando
un ángulo de 45º.
3. Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro
en sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien
extendida sobre la superficie del primer portaobjeto. El grosor del frotis
sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen entre sí ambos
portaobjetos. Así, si es superior a 45º, la extensión obtenida será gruesa
y corta, si es inferior a 45º será larga y fina. El secado del frotis es a
temperatura ambiente y en posición horizontal.
4
Una vez extraída la sangre con cualquiera de las

metodologías, secoloca una pequeña gota de sangre
(5mL) (aprox. 3 mm de diámetro) sobre un portaobjeto a
2 cm aproximadamente de uno de los extremos
Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la

superficie del primer portaobjeto (en la que se
encuentra la gota de sangre) formando un ángulo de
45º.
Deslizar suavemente y a velocidad moderada el

portaobjeto sobre el otro en sentido longitudinal, hasta
que la gota de sangre quede bien extendida sobre la
superficie del primer portaobjeto. El grosor del frotis
sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen
entre sí ambos portaobjetos. Así, si es superior a 45º, la
extensión obtenida será gruesa y corta, si es inferior a
45º será larga y fina. El secado del frotis es a
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Fuentes de Error:
 Mala limpieza de los portaobjetos
 Mal realizado del extendido
 Mal secado
Conclusión: La obtención de la sangre venosa correctamente es importante

para evitar márgenes de error, de la sangre podemos realizar múltiples
estudios como un conteo de eritrocitos de leucocitos, un diferencial etc.
Bibliografía
Manual de procesamiento de laboratorio en técnicas básicas de
hematología; Ministerio de la Salud: Lima Perú; 2005; pág. 34 a 35
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Hematocrito
Objetivo: Realizar la técnica de hematocrito para la determinación del volumen

globular eritrocitario y para poder conocer si el paciente se encuentra sufriendo
de una anemia y poder hacer un diagnostico presuntivo de qué tipo de anemia
se trata.
Fundamento: Mide la fracción que comprende a los glóbulos rojos (masa

globular), respecto al volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar.
Puede expresarse en porcentaje o como valor decimal.
Este volumen nos permite conocer la concentración de lo hematíes dentro

de la sangre mas el conteo de eritrocitos poder saber el volumen cospular
medio (VCM).
Los valores de estos nos darán a conocer de qué tipo de anemia se trata
anemia microcitica, anemia nomocitica, anemia macrocitica. Y pertece al
grupo para diagnostico de una anemia.
Sus valores Normales son: Hombre: 40-54%

Mujeres: 38-48%
Material:
-Tubo de Wintrobe
-Pipeta Pasteur
- Tapón o papel parafina
Equipo:
Centrifuga
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Procesamiento:
1. Llenar el tubo con sangre previamente tomada con anticoagulante EDTA

utilizando la pipeta Pasteur comenzando desde el fondo hasta la marca
de 100 mm. Teniendo cuidado de no generar burbujas ni espuma.
2. Tapar para evitar la evaporación de la sangre o salpicones
3. Centrifugar a 3000 rpm por el tiempo de 30 minutos
4. Observar la escala
Llenar el tubo con sangre previamente

tomada con anticoagulante EDTA
utilizando la pipeta Pasteur
comenzando desde el fondo hasta la
marca de 100 mm. Teniendo cuidado
de no generar burbujas ni espuma
Tapar para evitar la evaporación de la

sangre o salpicones
Centrifugar a 3000 rpm por el tiempo

de 30 minutos
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Fuentes de Error:
 Mal llenado del tubo de Wintrobe
 Burbujas en el tubo
 Mal manejo de la centrifuga
 Tiempo distinto al de 30 minutos de centrifugación
Conclusiones: es uno de los métodos más usado que ha venido siendo

remplazado su utilización manual por la automatizada ya que ha sido dejado de
hacer por el tiempo que conlleva y hecho por medio de maquinas que dan un
resultado en 2 minutos este examen nos arroja valores para poder diagnosticar
una posible anemia envase a todos los otros valores que se ven en una
biometría Hematica.
Bibliografía
Resultado
51%
VALORES DE REFERENCIA:
Hombres: 40% - 54%
Mujeres: 38% - 48%
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Recuento eritrocitario
Objetivo: Realizar un conteo eritrocitario para conocer el numero de eritrocitos

en el cuerpo humano y poder saber si el paciente está sufriendo una anemia o
si la medula ósea no está produciendo sufriendo eritrocitos.
Fundamento: La sangre se diluye en un líquido que nos permite observar

claramente los hematíes, luego esta dilución se coloca en una cámara de
Neubauer con la ayuda de una pipeta automática o pipeta Pasteur y se cuentan
en el microscopio a un objetivo de 40x para calcular el número de glóbulos
rojos por mm3.
La anemia más que ser un enfermedad es un síntoma el numero bajo de
eritrocitos nos permite saber que una anemia está sucediendo dentro del
cuerpo y que el oxigeno no se está entregando con normalidad.
Resultados:
10
Valores de referencia
(Unidades tradicionales millones de células/mm3).
Hombres 4 500 000 - 5 500 000
Mujeres 4 000 000 - 5 000 000
Niños (4 años) 4 200 000 - 5 200 000
Lactantes (1 - 6 meses) 3 800 000 - 5 200 000
Recién nacidos 5 000 000 - 6 000 000
Estos valores nos sirven para calcular índice eritrocitarios como VCM Y HCM
Equipos:
- Microscopio.
- Hemocitómetro (cámara de Neubauer).
Material:
 Pipeta de glóbulos rojos (De Thoma)
 Diluyente de Hayem
 Contador manual
 Papel filtro.
1. Procedimiento:
2. Mezclar la sangre obtenida con el anticoagulante o tomar sangre capilar.
3. Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca de 0,5 para
realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será
1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente.
4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo diluyente (Hayem)
y llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101.
5. Se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2 a
3 minutos.
6. Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una
gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por
capilaridad se llene exactamente.
7. Hacer el recuento con objetivo de 40x.
8. Dejar en reposo por 3 minutos
9. Enfocar la cuadrícula a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre el
cuadrado grande central de la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños:
uno central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total).
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10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o
por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadrado
pequeño de recuento y no se consideran los correspondientes a los
límites inferior y derecho. Se hace el recuento en los puntos ABCD y E y
se sigue los mismos parámetros del recuento de leucocitos.
Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta

la marca de 0,5 para realizar una dilución de
1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será 1/100.
Limpiar la punta con gasa o papel absorbente
Introducir la pipeta en el tubo o frasquito

conteniendo diluyente (Hayem) y llenar de líquido
de dilución hasta la marca de 101.
Se coloca en un rotador automático o se hace

rotar manualmente de 2 a 3 minutos.
Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del

tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un
extremo de la cámara para que por capilaridad se
llene exactamente.
Hacer el recuento con objetivo de 40x
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Fuentes de Error:
 Mal Dilución
 Mal conteo en la cámara
 Borrado de la cuadricula
Conclusión: Este método ha venido siendo remplazando por el automático ya

que su tiempo de realización es más corto que este pero al final de cuentas los
dos tiene el mismo objetivo conocer el número total de eritrocitos en la sangre y
dar una idea de cómo está la transmisión de oxigeno al resto del cuerpo
Bibliografía
Resultado:
4.6x106/mm3
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Recuento Leucocitario
 Objetivo: Realizar un conteo eritrocitario para conocer el número de
leucocitos presentes en la sangre ya que esto nos da conocimientos si el

paciente está sufriendo una enfermedad debido al número alto de estos o si
no se encuentra con una defensa adecuada debido a sus números bajos.
 Fundamento: La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que
permite evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los

eritrocitos son hemolizados. El recuento del número de leucocitos o glóbulos
blancos se expresa por mm3 (milímetro cúbico).
Un bajo número de glóbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse

a:
 Insuficiencia de la médula ósea (por ejemplo: debido a infección, tumor o

cicatrización anormal)
 Enfermedades vasculares del colágeno (como el lupus eritematoso)
 Enfermedad del hígado o el bazo
 Radioterapia o exposición a la radiación
Un alto número de glóbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse

a:
 Anemia
 Enfermedades infecciosas
 Enfermedad inflamatoria (como artritis reumatoide o alergia)
 Leucemia
 Estrés emocional o físico severos
 Daño tisular (como, por ejemplo, quemaduras)
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Resultados
N° de leucocitos:
5000 - 10 000 leucocitos / mm3
Valores elevados
El aumento del número total de leucocitos circulantes se llama Leucocitosis. Se

observa en el curso de algunas infecciones bacterianas piógenas.
Valores reducidos
La disminución del número total de leucocitos circulantes se denomina

Leucopenia. Se observa en algunas infecciones con la tifoidea y el paludismo, y
después de usar ciertos tiempo algunos medicamentos.
 Equipo:
 - Microscopio.
 - Hemocitómetro (cámara de Neubauer).
 Equipo
 Contador manual
 Solución de Turk al 1%.
 Papel filtro.
 Pipeta de glóbulos Blancos (De Thoma)
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 Procedimiento:
1. Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del
dedo, se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos
hasta la marca de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente.
2. Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber
hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas).
3. Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un
rotador automático por 2 ó 3 minutos.
4. Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar
limpia y seca.
5. Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar
una gota pequeña de esta solución en la cámara.
6. Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se
sedimenten.
7. Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.
Cuando se usa la pipeta automática, se toma 20 mL (0,02 mL) de sangre
total con anticoagulante o sangre capilar con anticoagulante y se diluye
en un tubo que contenga 380 mL de solución de Turk (aquí tenemos una
dilución 1:20).
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se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos

blancos hasta la marca de 0,5
y a limpiar la punta con papel absorbente
Introducir la pipeta en el tubo que

contenga solución de Turk y absorber
hasta la marca de 11
Monte la laminilla de vidrio en la cámara

para recuento que debe estar
limpia y seca.
Agitar la pipeta y descartar las cuatro

primeras gotas para luego colocar una gota
pequeña de esta solución en la cámara
Deje reposar por espacio de 3 minutos

para que las células se sedimenten.
Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4

cuadrados grandes angulares
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Fuentes de error:
 Mala toma de sangre
 Mala preparación de las dilución
 Cámara con cuadricula borrada o mala limpieza
 Mal conteo del número de leucocitos.
Conclusión: Este método ha venido siendo remplazando por el automático ya

que su tiempo de realización es más corto que este pero al final de cuentas los
dos tiene el mismo objetivo conocer el número total de Leucocitos en la sangre
y dar una idea está el sistema inmunes en ese momento o si esta produciendo
una infección.
Bibliografía
Resultados:
5050 leucocitos / mm3
VALORES DE REFERENCIA
5000 - 10 000 leucocitos / mm3
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Diferencial de Leucocitos
 Objetivo: Determinar los porcentajes de las distintas clases de

leucocitos normales y anormales en la sangre y poder conocer su presencia
en el resto del cuerpo.
Fundamento: La práctica del frotis sanguíneo, también llamado
extendido, es de gran importancia en hematología ya que el diagnóstico de

muchas enfermedades hematológicas puede realizarse con sólo observar las
características morfológicas de las células sanguíneas, de manera que éste no
debe ser excesivamente grueso ni excesivamente fino. Todas las láminas por
usar, sobre todo nuevas, deben ser limpiadas con algodón y alcohol al 70%
para eliminar la grasa que viene adherida.
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la

sangre y determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y
tamaño de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de
coloración. La información obtenida de un frotis de sangre periférica depende
en gran parte de la calidad del extendido y la coloración.
La fórmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las

distintas clases de leucocitos normales y anormales en la sangre. A partir de
los porcentajes puede incluso calcularse el número real de cada clase de
leucocitos por mm3 de sangre (valor absoluto), conociéndose el total de
leucocitos.
Por ejemplo:
Si se tiene 60% de neutrófilos segmentados y el recuento total de leucocitos
total es de 20 000, entonces la cifra absoluta de neutrófilos segmentados sería:
60/100 x 20 000 = 12 000 (valor absoluto)
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Cualquier infección o estrés agudo ocasiona un aumento en la producción de

GB. Los conteos altos de glóbulos blancos pueden deberse a inflamación, una
respuesta inmunitaria o hemopatías como la leucemia.
Es importante saber que el aumento anormal de un tipo de leucocito puede

causar una disminución en los porcentajes de otros tipos de glóbulos blancos.
Un aumento del porcentaje de neutrófilos puede deberse a:
 Infección aguda
 Eclampsia
 Gota
 Leucemia mielógena
 Artritis reumatoidea
 Fiebre reumática
 Estrés agudo
 Tiroiditis
 Traumatismo
Una disminución en el porcentaje de neutrófilos puede deberse a:
 Anemia aplásica
 Quimioterapia
 Gripe
 Infección bacteriana generalizada
Un aumento en el porcentaje de linfocitos puede deberse a:
 Infección bacteriana crónica

 Hepatitis infecciosa
 Mononucleosis infecciosa
 Leucemia linfocítica
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 Mieloma múltiple
 Infección viral (como mononucleosis infecciosa, paperas, sarampión)
 Recuperación de una infección bacteriana
Una disminución en el porcentaje de linfocitos puede deberse a:
 Quimioterapia
 Infección por VIH
 Leucemia
 Sepsis
Un aumento del porcentaje de monocitos puede deberse a:
 Enfermedad inflamatoria crónica

 Infección parasitaria
 Tuberculosis
 Infección viral (por ejemplo, mononucleosis infecciosa, paperas,
sarampión)
Un aumento en el porcentaje de eosinófilos puede deberse a:
 Reacción alérgica
 Cáncer
 Infección parasitaria
 Enfermedad de Hodgkin
Una disminución en el porcentaje de basófilos puede deberse a:
 Reacción alérgica aguda.
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Valores de Referencia:
Procedimiento para el frotis
Material:
 2 Porta objetos
Procedimiento para frotis:

4. Una vez extraída la sangre con cualquiera de las metodologías, se
coloca una pequeña gota de sangre (5mL) (aprox. 3 mm de diámetro)
sobre un portaobjeto a 2 cm aproximadamente de uno de los extremos.
5. Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del
primer portaobjeto (en la que se encuentra la gota de sangre) formando
un ángulo de 45º.
6. Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro
en sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien
extendida sobre la superficie del primer portaobjeto. El grosor del frotis
sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen entre sí ambos
portaobjetos. Así, si es superior a 45º, la extensión obtenida será gruesa
y corta, si es inferior a 45º será larga y fina. El secado del frotis es a
22
Una vez extraída la sangre con cualquiera de las metodologías, se coloca una
pequeña gota de sangre (5mL) (aprox. 3 mm de diámetro) sobre un portaobjeto
a 2 cm aproximadamente de uno de los extremos.
Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del primer

portaobjeto (en la que se encuentra la gota de sangre) formando un ángulo de
45º
Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro en

sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien extendida sobre la
superficie del primer portaobjeto. El grosor del frotis sanguíneo puede variar
según sea el ángulo que formen entre sí ambos portaobjetos. Así, si es superior
a 45º, la extensión obtenida será gruesa y corta, si es inferior a 45º será larga y
fina. El secado del frotis es a temperatura ambiente y en posición horizontal.
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Procedimiento para la Tinción de Wright
Material:
 Colorante de Wright
 Solución amortiguada tamponada
Procedimiento:
1. Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 15 y 20

minutos.
2. Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el
colorante de Wright, dejándolo por espacio de 5 minutos.
3. Posteriormente se añade solución amortiguada tamponada en partes
iguales hasta obtener un brillo metálico, dejando 6 minutos adicionales.
4. Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
5. Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento, se revisa la
calidad de la coloración, la cantidad aproximada de glóbulos blancos y
se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se coloca una gota de aceite
de inmersión y se enfoca a un aumento de 100x
24
Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará

secar entre 15 y 20 minutos.
Luego se coloca la preparación en un soporte y se

cubre con el colorante de Wright, dejándolo por
espacio de 5 minutos.
Posteriormente se añade solución amortiguada

tamponada en partes iguales hasta obtener un brillo
metálico, dejando 6 minutos adicionales
Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento,

se revisa la calidad de la coloración, la cantidad
aproximada de glóbulos blancos y se escoge el sitio
para iniciar el recuento. Se coloca una gota de aceite
de inmersión y se enfoca a un aumento de 100x
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Procedimiento para Diferencial

1. Se examina la lámina a pequeño aumento para comprobar si los
elementos celulares están bien distribuidos.
2. Si es favorable se examina con el objetivo de inmersión. La parte ideal
para visualizar células para la fórmula leucocitaria es en la parte final del
cuerpo y comienzos de la cola, recorriendo la lámina de izquierda a
derecha o de arriba hacia abajo hasta contar 100 leucocitos incluidos los
agranulocitos y granulocitos. Aquí no se incluyen los elementos
inmaduros de sangre roja.
3. A medida que se va contando, se va anotando el número de cada una
de las clases de glóbulos blancos observados.
4. Se determina luego los porcentajes de cada uno de ellos para luego
comparar con los porcentajes normales.
Diferentes Tipos de Células:
Neutrófilos Eosinofilo
Basofilo Linfocito
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Monocito
Fuentes de Error:
 Frotis mal elaborando
 Tinción con tiempo de espera largo provoca que las células se
quemen
 Mala diferenciación de las células ente los diferentes Tipos
Conclusión: Los valores relativos sólo nos sirven cuando los valores totales de
leucocitos se encuentran dentro del valor normal. En caso contrario
(leucocitosis o leucopenia) se debe emplear la fórmula para obtener el valor
real, y así determinar que elemento celular se encuentra fuera del rango
normal, sea elevado o disminuido.
Bibliografía
Resultados:
Neutrófilos Cayados: 4%
Neutrófilos segmentados: 68%
Eosinófilos: 3%
Basófilos:2%
Linfocitos: 19%
Monocitos: 4%
27
VALORES DE REFERENCIA
Neutrófilos Cayados: 3-5%

Neutrófilos segmentados: 35-65 %
Eosinófilos: 1-4%
Basófilos: 0-1%
Linfocitos: 22-40%
Monocitos: 4-8%
28
Técnica de Determinación de
Hemoglobina
 Generalidades:
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro y que le otorga el
color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del
transporte de oxígeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.
La hemoglobina también transporta el dióxido de carbono, que es el

producto de desecho del proceso de producción de energía.
La forman cuatro cadenas polipeptídicas (globinas) a cada una de las

cuales se une un grupo hemo, cuyo átomo de hierro es capaz de unirse de
forma reversible al oxígeno. El grupo hemo se forma por:
1. Unión de la Succinil CoA (formado en ciclo de Krebs o ciclo del ácido

cítrico) a un aminoácido glicina formando un grupo pirrol.
2. Cuatro grupos pirrol se unen formando la Protoporfirina IX.
3. La protoporfirina IX se une a una molécula de hierro ferroso (Fe2+)
formando el grupo hemo.
Cuando la hemoglobina está unida al oxígeno, se denomina

oxihemoglobina o hemoglobina oxigenada, dando el aspecto rojo o escarlata
intenso característico de la sangre arterial. Cuando pierde el oxígeno, se
denomina hemoglobina reducida, y presenta el color rojo oscuro o bordó de la
sangre venosa (se manifiesta clínicamente por cianosis).
Oxihemoglobina (HbO 2): Hb unida al oxígeno.

Desoxihemoglobina: Desoxigenada (Hb reducida)
Carboxihemoglobina: Hb unida a CO2. Letal en grandes concentraciones.
Carbaminohemoglobina o carbohemoglobina: ciertos aminoácidos de la Hb
se asocian al CO2.
Metahemoglobina: Hb con Fe3 (oxidado), así no se une al oxígeno.
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Hemoglobina glucosilada (HbA 1c ): Glucosa unida a valina terminal de

cadena Beta. Aumenta en diabetes mal controlada.
 Material:
1. Boquilla con ligadura
2. tubos de ensayo
3. Pipetas de sally
4. colorímetro
5. Espectrofotómetro
6. Reactivo de cianometaglobulina
7. Estándar equivalente a 20 mg de hemoglobina/dl.
8. Sangre total anticoagulada con EDTA
 Procedimiento:
1. En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de
Drabkin.
2. La sangre que puede utilizarse es de punción del dedo (sangre capilar) o
de sangre venosa recién extraída.
3. Con una pipeta automática o pipeta de Salhi se toma exactamente 0,02
mL (20 mL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta y se vierte
en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se
mezcla.
4. Dejar en reposo por espacio de 5 a 15 minutos.
5. Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el
fotómetro con agua destilada / Drabkin.
Operación.
Valores de referencia:
Niños al nacer 13,6 - 19,6 g/dL
Niños de 1 año 11,3 - 13,0 g/dL
Niños de 10 -12 años 11,5 - 14,8 g/dL
Mujeres 11,5 - 16,5 g/dL
Hombres 14,0 - 18,0 g/dL
Fuente: Manual de técnicas básicas para un laboratorio de salud. OPS, Nº 2.
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Velocidad de Sedimentación Globular
Generalidades:
La velocidad de sedimentación es un examen hematológico que no está
incluido en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy
importante por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades
funcionales, así como en los procesos inactivos o estrictamente locales.
Utilizada frecuentemente en medicina. Consiste en medir la velocidad con

la que sedimentan (decantan, caen) los glóbulos rojos o eritrocitos de la
sangre, provenientes de una muestra sanguínea anticoagulada con citrato
sódico, en un periodo determinado de tiempo, habitualmente una hora.
La velocidad de sedimentación globular, también conocida como

"velocidad en la sangre" o velocidad de eritrosedimentación, es una prueba
inespecífica, o lo que es lo mismo, una prueba no concluyente ni $definitiva de
ninguna enfermedad o lesión determinada. Se solicita como apoyo al
diagnostico de procesos inflamatorios, neoplásicos, e infecciosos. No obstante,
esta prueba puede usarse para averiguar enfermedades no sospechadas,
usándose en la valoración rutinaria y en
la evolución de la enfermedad, pudiendo controlar el resultado del
tratamiento.
La VSG se encuentra elevada en:

· Todas las enfermedades de la colágena,SLE.
· Infecciones, neumonía, sífilis.
· Enfermedades inflamatorias.
· Carcinoma, linfoma, neoplasias.
· Intoxicación aguda por metales pesados.
· Destrucción de células o tejidos.
· Toxemia.
· Macroglobulinemia de Waldenstrom.
· Nefritis, nefrosis.
· Endocarditis bacteriana subaguda.
· Anemia.
· Artritis reumatóide, gota.
La sedimentación globular es normal en:
· Policitemia vera.
· Eritrocitosis.
· Anemia de células falciformes.
· Enfermedad de La hemoglobina C.
· Insuficiencia cardiaca congestiva.
31
· Hipofibrinogenemia (por cualquier causa).

· Deficiencia de cinasa piruvato.
· Esferocitosis hereditaria.
La sedimentación globular es normal o variable en:
Enfermedades agudas: la VSG cambia entre 6 y 24 hrs después de que
se eleva la temperatura y existe leucocitosis, y así alcanza su máximo
valor días después.
Convalecencia: el aumento de la sedimentación tiene a persistir durante
más tiempo que la hipernatremia o la leucocitosis.
Apendicitis aguda no perforada (primera etapas):
· Incluso si es supurativa o gangrenosa, la velocidad de sedimentación
normal, pero si existe
absceso o peritonitis, la velocidad de sedimentación aumenta
rápidamente.
Trastornos musculosqueleticos.
· En artritis reumatoide, gonorreica y gotosa la velocidad desedimentación
aumenta sobremanera.
· En osteoartritis, la velocidad de sedimentación aumenta ligeramente.
· En la neuritis, miositis y lumbalgia, la VSG se encuentra dentro de los
límites normales.
Problemas vasculares:
· Infarto al miocardio la VSG aumenta.
· En al agina de pecho, la VSG no aumenta.
Cáncer:
· En el mieloma múltiple, linfoma o cáncer metastático, la VSG es muy
elevada.
Sin embargo, existe poco correlación entre el grado de aumento de La
VSG y el pronostico en cualquier caso.
· Infecciones virales no complicadas y mononucleosis infecciosa.
· Insuficiencia renal activa con insuficiencia cardiaca.
· Alergia activa.
· Ulcera péptica.
Aviso clínico:
· La velocidad de sedimentación globular aumenta exageradamente en el
linfocarcinoma maligno de colon y mama, mieloma y artritis reumatoide.
5.1 MÉTODO DE WINTROBE
Materiales requeridos:
-Tubo de Wintrobe graduado de 0 - 100 mm.
-pipeta Pasteur.
Procedimiento:
32
- En un tubo se extrae sangre venosa, se mezcla mediante movimientos

rotatorios sobre una superficie lisa.
- Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo
de Wintrobe, el cual tiene una graduación de 0 - 100 mm de arriba hacia abajo
y presenta ambos extremos abiertos.
- La sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posición
vertical sobre una gradilla especial que obtura ambos extremos.
Resultados
Medir los milímetros descendidos de glóbulos rojos mediante la columna
de plasma por encima del paquete globular.
Valores de referencia:
Hombres menores de 50 años: 0 – 15 mm/hora

Hombres mayores de 50 años: 0 – 20 mm/hora
Mujeres menores de 50 años: 0 – 25 mm/hora
Mujeres mayores de 50 años: 0 – 30 mm/hora
33
MÉTODO DE WESTERGREN
Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar
sangre anticoagulada en un tubo en posición vertical. Se lee
macroscópicamente la columna de plasma al cabo de una hora de reposo.
Material
-Tubos de Westergren.
-Soporte para tubos de Westergren.
-pipeta Pasteur
Procedimiento
- En un tubo que contiene 0,5 ml de anticoagulante citrato de sodio al 3,8% se

extrae sangre venosa, se mezcla mediante movimientos rotatorios sobre una
superficie lisa.
- Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo de
Westergren, el cual tiene una graduación de 0 a 200 mm de arriba hacia abajo
y presenta ambos extremos abiertos.
- La sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posición vertical
sobre una gradilla especial que obtura ambos extremos.
Resultados
Medir los milímetros descendidos de glóbulos rojos mediante la columna de
plasma por encima del paquete globular.
Hombres : 1 - 10 mm de altura/hora
Mujeres : 3 - 14 mm de altura/hora
34
EOSINOFILO MOCO NASAL

GENERALIDADES:
Investigar alergias, desordenes asmáticos, e infecciones parasitarias.
Las rinitis pueden producirse por causas infecciosas y no infecciosas. Las

rinitis infecciosas se caracterizan por secreciones nasales predominantemente
espesas (blancas, amarillas o verdes), con muchos neutrófilos.
Las rinitis no infecciosas se caracterizan por una secreción acuosa o

mucoide. El grupo de las no infecciosas puede ser dividido en rinitis alérgica
estacional, rinitis alérgica perenne y rinitis no alérgica perenne.
Existe evidencia de que la rinitis no alérgica perenne es un desorden

heterogéneo que consta al menos de dos subgrupos, las rinitis intrínsecas y
las rinitis colinérgicas. Las rinitis intrínsecas se caracterizan por eosinofilia
nasal (presencia alta de un tipo de células llamadas eosinofilos en las
secreciones nasales) gran incidencia de pólipos (formaciones de la mucosa
nasal de aspecto gelatinoso asemejando a una uva, ocasionadas por la
inflamación de la mucosa y que no son de origen tumoral) radiografía anormal
de senos paranasales, asma no alérgico concurrente y buena respuesta al
tratamiento con corticoides. Por el contrario tales características faltan en las
rinitis colinérgicas. No obstante tal subdivisión de los pacientes con rinitis no
alérgica no siempre puede ser posible en casos particulares.
Las pruebas cutáneas positivas concordantes con la historia clínica nos

dan el diagnóstico. Si no se pueden realizar pruebas cutáneas puede utilizarse
RAST, ELISA o CAP, para detectar IgE sérica específica contra el o los
alergenos sospechosos. Una eosinofilia superior al 10% en el frotis nasal
apoya el diagnóstico. Puede haber un engrosamiento de la mucosa maxilar
aunque en general las alteraciones radiológicas son ligeras. En casos dudosos
se puede el diagnóstico corroborar mediante la realización de provocaciones
nasales con el o los antígenos incriminados.
PROCEDIMIENTO:
MATERIALES:
Aplicadores de madera
Laminillas (Portaobjetos esmerilizados).
TÉCNICA:
35
Realizar dos placas de secreción nasal con aplicadores; dejar secar al

aire no es necesario fijar.
Almacenamiento: A temperatura ambiente: 24horas: Refrigeradas: 1

semana
Contraindicaciones: Fijar con soluciones para citologías
Muestra: Secreción nasal en portaobjetos
Método : Tinción de Wright/Microscopía
PROCEDIMIENTO
 Identifique el lado de la laminilla que contiene la muestra
 Tiña las laminillas según la técnica de Wrigth
 Deje secar las laminillas al aire
 Realice una lectura a 100 X a cada laminilla, estimando la
cantidad de leucocitos presentes:
 En campo, Realice un conteo diferencial ( polimorfonucleres,

mononucleares y Eosinofilos) en 100 células.
Recorra la cinta adhesiva por encima del portaobjetos
Rango de referencia 0-1%
A menudo los eosinófilos están aumentados en la sangre y en el esputo de

pacientes con asma, usualmente en relación con la severidad del proceso. El
porcentaje de eosinófilos en esputo no hace el diagnóstico de asma, pero
niveles mayores del 80% (en relación con la proporción de neutrófilos) son muy
sugestivos de asma o de bronquitis crónica con dificultad respiratoria. Esto es
evidencia de una correlación inversa entre el número de eosinófilos en la
circulación y/o esputo y la función pulmonar.
36
CÉLULAS L.E.
Generalidades:
Las células L.E. Lupus eritematoso son leucocitos polimorfonucleares

Neutrofilos PMN que han fagocitado material nuclear alterado. Pueden
determinarse en la Sangre periférica, mediante una prueba especifica de
laboratorio, o bien hallarse de forma expóntela en los exudados de los
enfermos con Lupus Eritematoso Sistemático. También pueden ser positivas en
la Sangre periférica de pacientes con otros procesos autoinmunes como
Colagenopatías mixtas y Artritis Reumatoide, y su observación es mas rara de
pacientes con dicha enfermedades.
Material:
Tubo de ensaye
Colador
Varilla de vidrio
Tubo de Wintrobe
Pipeta Pasteur
Bulbo para pipeta Pasteur
Reactivo:
Colorante de Wright
Solución Buffer
Aceite de Inmersión
Equipo:
Baño maría
Centrifuga
Microscopio
Procedimiento:
Con un tubo lleno de 10 ml. De Sangre total en un tubo sin

anticoagulante colocarlo en baño maría por dos horas a 37°C; Decantar
suero obtenido
37
El coagulo formado, colocarlo en el colador de mallas finas, con ayuda

de la varilla de cristal se hace presión a manera de mortero sobre el
coagulo a tal forma que se exprima.
La sangre tratada de este modo se traslada a un tubo de Wintrobe con la
pipeta Pasteur
El tubo de Wintrobe se centrifuga 10min. A 3500 Rpm
Con la capa leucocitaria se hace un extendido/ Frotis ( se deja secar)
Se le agrega Wright por dos minutos
Se le añade Solución Buffer durante tres minutos y se sopla ligeramente,
para poder obtener la capa dorada.
Se observa a 100x con aceite de Inmersión
Se reportan los resultado si se encontraron o no Células L.E.
Valores Normales:
La sangre de dicho paciente se considera normal si no presenta ningún tipo de

células L.E.
Fuentes de error:
Realización de un Frotis mal teñido y mal realizado en lo que cabe a el

extendido.
Patologías:
1. Erupción malar: Eritema fijo, plano o alto, sobre las eminencias

malares, que no suele afectar los surcos nasogenianos.
2. Erupción discoide: Placas eritematosas altas, con descamación
queratósica adherente y tapones foliculares; puede haber cicatrices
atróficas en las lesiones más antiguas.
3. Fotosensibilidad: Erupción cutánea a causa de una reacción insólita a
la luz solar, referida por el paciente u observada por el médico.
4. Úlceras bucales: Ulceración nasofaríngea, por lo común indolora,
observada por un médico.
5. Artritis: Artritis no erosiva que afecta dos o más articulaciones
periféricas, caracterizada por dolor a la palpación, tumefacción o
derrame.
6. Serositis: Pleuritis o pericarditis documentada por electrocardiograma o
frote o evidencia de derrame pericárdico.
7. Enfermedad renal: Proteinuria persistente mayor a 0,5g/día o 3+ o
cilindros celulares.
8. Trastorno neurológico: Convulsiones o psicosis en ausencia de otra
causa conocida.
38
9. Trastorno hematológico: Anemia hemolítica o leucopenia (<

4.000/mm3) o linfopenia: (< 1.500/mm3) o plaquetopenia (<
100.000/mm3) en ausencia de fármacos que produzcan esta alteración.
10. Trastorno inmunológico: Anti-DNA, anti-Sm, y/o Anticuerpos
antifosofolipido (AFL).
11. Anticuerpo antinuclear: Un título anormal de ANA por
inmunofluorescencia o análisis equivalente en cualquier momento y en
ausencia de medicamentos relacionados con el síndrome de lupus de
origen farmacológico.
Cualquier combinación de 4 o más de los 11 criterios, bien documentado

durante cualquier intervalo de la historia del paciente, cumple el diagnóstico de
LES (especificidad del 95 % y sensibilidad del 75%).
39
RECUENTO DE RETICULOCITOS
Los reticulocitos son glóbulos rojos inmaduros formados por ARN y
protoporfirina en el citoplasma.
Fundamento
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede
teñir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinación con una
misma cantidad de sangre anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la
temperatura (baño maría) se produce la coloración de estos eritrocitos jóvenes
visualizándose en los frotices sanguíneos por microscopía.
Materiales
 Láminas portaobjetos.
 Tubos de ensayos de 12 x 75 mm.
 Embudo.
 Filtro de papel.
 Pipetas Pasteur con chupones.
 Contador manual (no imprescindible).
 Solución saturada de azul de cresil brillante (filtrada).
Procedimiento
1. En el tubo de ensayo colocar dos gotas de sangre total con
anticoagulante.
2. Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la misma
cantidad de colorante.
3. Mezclar la solución.
4. Se coloca luego en baño maría por espacio de 10 a 15 minutos.
5. Se realizan frotices sanguíneos.
6. Se lee con objetivo de 100x.
7. Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersión.
Cuente cuidadosamente:
8. Cantidad total de glóbulos rojos.
9. Número total de reticulocitos que haya entre ellos. El recuento se ha
venido haciendo clásicamente de forma manual mediante la observación
en el microscopio óptico. El resultado se da en porcentaje sobre cada
100 hematíes. Es más útil calcular el número de reticulocitos por litro,
mediante la fórmula:
Observación
En la actualidad existe la posibilidad de hacer el recuento rutinario de forma
automática, mediante aparatos específicamente diseñados al respecto, bien a
través de adaptaciones de los clásicos autoanalizadores para hemogramas. En
estos casos se puede conocer, además, las distintas proporciones de
reticulocitos según su grado de maduración, su volumen medio y el índice de
maduración.
Adultos 0,5 - 1,5%
Al nacer 2,5 - 6,0%
40
CAUSAS DE AUMENTO
· Eritroblastosis fetal
· Anemia hemolítica
· Post-hemorragia
· Enfermedad renal con aumento de producción de eritropoyetina
CAUSAS DE DEFICIT
“Insuficiencia de la medula osea”
Cirrosis hepática
Deficiencia de folato
Deficiencia de hierro
Radioterapia
Deficiencia de vitamina B12
Enfermedad renal con disminución en la producción de eritropoyetina
CAUSAS DE ERROR
Recuento insuficiente de hematíes y reticulocitos
La hemoglobina H se desnaturaliza por el azul brillante y aparece en forma de
inclusiones redondeadas azul verdosas
No debe leerse después de 3 horas de incubación
La prescripción debe hacerse tras un estudio racional de los datos del
hemograma
CONSIDERACIONES GENERALES
El reticulocito puede ser abundante o escaso según su estadio evolutivo y
presentar aspecto grosero o fino dependiendo de la intensidad o, pH de la
tinción utilizada, la rapidez del fijador y la composición del fijador .
. Colorante precipitado. En este caso hay que filtrar la solucción.

· El reticulocito se tiñe pobremente o no se tiñe cuando existe concentraciones
muy elevadas de glucosa.
· Los reticulocitos mas maduros (grupo IV) presentan los mayores problemas
técnicos a la hora de identificación
· El grado de reticulocitosis es proporcional a la gravedad de la anemia.
Reticulocitos en Contadores Coulter:
41
Son superiores a los métodos manuales. Cuentan 32 000 reticulocitos por vez,
emplean azul de metileno (precipita ARN y complejos ribosómicos) y variadas
metodologías : impedancia, conductividad y dispersión de luz laser.
42
Recuento de Plaquetas
Material:
 Pipeta de Thomas
 Aspirador de boquillas
 Cámara de Neubauer
 Hematimetro
 Microscopio
 Gasa
 Caja de petri
 Oxalato de amonio al 1 %
Procedimiento:
1. Homogenizada la sangre durante al menos 5 minutos se aspira
hasta la marca 1en la pipeta, limpiar la pipeta. Aspirar
cuidadosamente el diluyente hasta la marca 101. Retirar el tubo
aspirador y tapando lo extremos, homogenizar durante 5 minutos.
2. Se dispones de la cámara limpia y seca y con el hematimetro
montado. Con la mezcla bien homogenizada, se desprecia las
dos primeras gotas de la pipeta, ya que solo contiene liquido
diluyente, se llena por capilaridad.
3. Una vez cargada se coloca dentro de la cámara húmeda o se le
pone encima la placa de petri, previamente preparada
4. Se cuentan en la cuadriculas de eritrocitos, en el objetivo de 40x
Resultados
Se reporta con la siguiente formula
Nº de plaqueta/mm=
En el caso que se utilice la pipeta de blancos se multiplica por 2000
43
Tiempo de sangría
Método de Ivy
Principio
Mediante esta prueba se estudia la adhesión de las plaquetas al endotelio
vascular y su capacidad para formar el trombo plaquetario que detiene la
hemorragia a nivel de un vaso de pequeño calibre. Consiste, por tanto, en
realizar una pequeña herida y medir el tiempo que tarde en dejar de sangrar.
Materiales
 Esfingomanómetro o tensiómetro de mercurio.
 Lanceta (dispositivo descartable estandarizado para tiempo de sangría).
 Cronómetro.
 Papel Wathman Nº 1, cortado en círculos.
 Vendita compresiva.
 Algodón y alcohol.
Técnica
1. Exponer el antebrazo del paciente y escoger una zona libre de vénulas,
hematomas, heridas y otros. Si el paciente tiene marcada cantidad de
vellos, afeite la zona.
2. Limpie con alcohol la zona escogida.
3. Coloque el tensiómetro en el brazo del paciente y regúlelo a 40 mm Hg.
4. Se extrae la lanceta de su reservorio estéril y se quita el seguro. No
deben pasar más de 30 a 60 segundos entre la inflada del tensiómetro y
la producción de la incisión.
5. Se presiona el disparador al mismo tiempo que el cronómetro y un
segundo después retire el dispositivo.
6. Cada 30 segundos secar con el papel de filtro, no tocar los bordes de la
incisión para no interferir con el tapón plaquetario. Se anota el tiempo
que tarda en cesar la hemorragia, lo que corresponde al tiempo de
sangría.
Interpretación del resultado
El valor normal del tiempo de sangría según esta metodología es de 2 a 8
minutos, por lo que los valores superiores a 10 minutos pueden ser ya
considerados patológicos. Cuando el tiempo se alarga más de 20 minutos,
puede detenerse la hemorragia aplicando sobre la herida una compresa de
algodón o gasa estéril si es muy profunda.
Limitaciones
 Si existe trombocitopenia menor de 50 000/mm3 el tiempo debe ser
prolongado.
 Debe tenerse cuidado de que el paciente no haya ingerido medicamento
que interfieran la función plaquetaria, como aspirina u otros, hasta 7 a 8
días antes de la prueba.
Interpretación
44
El tiempo de sangría por este método es la mejor valoración de la función

plaquetaria. La prolongación del tiempo en esta prueba se encuentra en
trombocitopenias o las enfermedades de alteración funcional de las plaquetas,
como son la enfermedad de Von Willebrand, la tromboastenia de Glasmann, el
Síndrome de Bernard-Soulier, la enfermedad de Storage Pool y otras. Mide in
vivo la adhesión, la agregación y la liberación plaquetaria como respuesta del
organismo a la lesión vascular.
Al realizar esta prueba, debe tenerse siempre en cuenta que la ingesta
previa de ácido acetilsalicílico puede alterar los resultados.
Método de Duke
Con una lanceta se hace una pequeña incisión en el lóbulo de la oreja. La
sangre fluye por esta incisión y se mide el tiempo que transcurre hasta que se
detiene el sangrado.
Este ensayo se lleva a cabo:
 Para diagnosticar ciertos padecimientos hemorrágicos.
 Antes de realizar operaciones quirúrgicas.
 Antes de efectuar una punción en el hígado o el bazo.
Materiales
1. Una lanceta estéril.
2. Éter.
3. Filtro de papel (o papel secante).
4. Si es posible, un cronómetro o, en su lugar, un reloj con segundero
Método
1. Limpie con suavidad el lóbulo de la oreja utilizando una pieza de algodón
embebida en éter. No frote. Déjese secar.
2. Haga la incisión en el lóbulo de la oreja con cierta profundidad, al mismo

tiempo cronometrar. La sangre deberá fluir libremente sin que se
necesite exprimir el lóbulo de la oreja.
3. Después de 30 segundos. Recoja la primera gota de sangre en una

esquina del papel secante. No toque la piel con el papel.
45
4. Espere otros 30 segundos y recoja la segunda gota de sangre con el

papel secante, un poco más adelante de la
primera.
5. Cuando las gotas de sangre dejen de fluir,
detener el cronómetro (o anote el tiempo
transcurrido según el reloj, o contar el número de
gotas recogidas en el papel secante y
multiplicarlo por 30 segundos
Resultados
Comunique el tiempo de sangrado redondeándolo al medio minuto más
cercano.
Observaciones
Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una extensión de sangre teñida
según el método de Romanowski para observar si las plaquetas son escasas.
Interpretación del resultado
El valor de referencia del tiempo de sangría según este método es de 1 a 4
segundos.
46
Tiempo de coagulación
Principio
Se observa la formación del coágulo en tubos de vidrio en condiciones
estandarizadas; esta prueba mide el mecanismo intrínseco de la coagulación.
Materiales (Fig. 1)
1. Un baño maría a 37 ºC, o un matraz al vacío, con agua a la misma
temperatura.
2. Dos tubos de ensayo limpios, de 10 x 75 mm, del mismo calibre,
marcados en el nivel de 1 mL.
3. Un cronómetro.
4. Utensilios y materiales para punción venosa.
Método:
1. Mediante una jeringa de material plástico extraiga poco más de 3 mL de
sangre venosa, puncione la vena rápidamente, de la manera adecuada.
Cronometrar el tiempo desde el momento que la sangre entre a la
jeringa.
2. Llenar cada uno de los tubos de ensayo con 1 mL de sangre. Taponar
con parafilm. Colocar en baño maría a 37 ºC.
3. Después de 3 a 5 minutos sacar el primer tubo del baño maría. Inclinar

hacia un plano de 90º en rotación a intervalos de 30 segundos hasta que
la sangre coagule (la sangre no fluye cuando el tubo está en posición
horizontal).
4. Examine el segundo tubo inmediatamente después que haya coagulado
la sangre del primero, lo que por lo general es inmediato. Cronometrar.
Se notifica como tiempo de coagulación la media de los dos tubos.
47
Resultados
El tiempo normal de coagulación en tubo es de 5 a 15 minutos a 37 ºC.
Interpretación
 El tiempo de coagulación está prolongado cuando hay severa
deficiencia de todos los factores de coagulación, excepto en la
trombocitopenia y deficiencia de factor VII o XIII. También está
prolongado en presencia de heparina o anticoagulantes circulantes
endógenos. Un tiempo de coagulación normal no excluye un desorden
de la hemostasia.
 Es una prueba muy poco dolorosa y es prolongada apenas cuando la
deficiencia es severa.
 El factor deficiente puede estar a 5% de lo normal sin afectar la prueba.
48
Tromboplastina Parcial
La tromboplastina parcial líquida activada I.D. se obtiene a partir de cerebro
de conejo, contiene un activador plasmático soluble con el que se logra que la
activación del plasma se realice independientemente de la superficie del
recipiente, por lo cual el reactivo puede ser usado tanto en pruebas manuales
como en equipos automáticos.
Debido a su sensibilidad el reactivo puede ser usado en las siguientes
pruebas de laboratorio:
- Tiempo parcial de tromboplastina, detección de los factores VIII y IX en
trastornos de coagulación.
- Tiempo de generación de tromboplastina.
- Reacción de Hicks-Pitnney. (Modificación del tiempo de generación de
tromboplastina)
- Deficiencias de los factores de contacto.
El reactivo debe conservarse en refrigeración entre 2º y 8ºC.
Tiempo parcial de tromboplastina
El tiempo parcial de tromboplastina se fundamenta en que, en la prueba
de tiempo de protrombina, los tiempos de coagulación obtenidos con plasma
hemofílico son iguales a los obtenidos con plasma normal, pero al llevar a cabo
la prueba del tiempo parcial de tromboplastina, los tiempos del plasma
hemofílico están alargados con respecto al plasma normal.
Reactivos
- Tromboplastina parcial líquida activada I.D.
- Cloruro de calcio 0.02 M
- Citrato de sodio al 3.8%.
- Oxalato de sodio 0.1 M.
Procedimiento
1. Colocar 0.1 ml. de tromboplastina parcial líquida activada I.D. en un tubo
de ensayo de 13x100 en baño de agua a 37ºC. Incubar por dos minutos.
2. Agregar 0.1 ml. del plasma problema o control, mezclar bien y dejar
incubar por dos minutos.
3. Después de dos minutos adicionar 0.1 ml. de cloruro de calcio 0.02 M.,
previamente colocado en baño de agua a 37ºC. simultánea mente
accionar el cronómetro.
4. Colocar de nuevo el tubo en el baño de agua durante 30 segundos,
retirarlo y al observar los primeros hilos de fibrina, parar el cronómetro.
Resultados:
Plasma citratado menos de 40 seg. menos de 35 seg
49
Tiempo de Protrombina
50
Tiempo de Fibrinógeno
51
52
Prueba del Torniquete
53
54
Prueba de Retracción del coagulo
55
Anexo
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
Nombre del Paciente: _________________________________Sexo:______

Edad: ______ Medico: _________________________Dx: _______________
Muestra: __________________
Formula Roja
Conteo de Eritrocitos Hombres: 4.5 - 5.5x106/mm3 Mujeres:4 - 5 x106/mm3
Hematocrito Hombres: 40% - 54% Mujeres: 38% - 48%
Hemoglobina 14,0- 18 g/dl
Vsg Hombres: 1-15mm/hora Mujeres: 1-25mm/ hora
Formula Blanca
Conteo de Leucocitos 5000 – 10 000 leucocitos /mm3
Neutrofilo
Diferencial Segmentado__________ Neutrófilos segmentados: 35-65 %
Neutrofilo
Cayado:______________
Neutrófilos Cayados: 3-5%
Eosinofilos:__________ Eosinófilos: 1-4%
Basofilos:____________ Basófilos: 0-1%
Monocitos:___________ Monocitos: 4-8%
Linfocitos:____________ Linfocitos: 22-40%
Indice Eritrocitario
VCM 85+/- 10 micrometros cubicos
HCM 23 +/- 3 picogramos
CHCM 32+/- 3 g/dl
Perfil Hemostatico
Conteo de plaquetas 150 000 - 450 000 plaquetas/mm3
TP 15-20 segundos
TPT 35-43 segundos
Tiempo de sangrado lvy: 2,5-9,5 minutos Duke: 1-4 minutos
Tiempo de coagulación 5-11 minutos
Retracción del Coagulo comienza a los 15-20 minutos Total a los 60 minutos
Frafilidad capilar
67
A
R
Anexo, 56
Recuento de Plaquetas, 43
RECUENTO DE RETICULOCITOS, 40
C
Recuento eritrocitario, 10
CELULAS L.E., 37 Recuento Leucocitario, 14
Reporte de Hematologia, 67
D
T
Diferencial de Leucocitos, 19
Técnica de Determinación de Hemoglobina, 29
E Tiempo de coagulación, 47
Tiempo de Fibrinógeno, 51
EOSINOFILO MOCO NASAL, 35 Tiempo de Protrombina, 50
Tiempo de sangria, 44
H Toma de muestra sanguínea y Frotis. Véase
Tromboplastina Parcial, 49
Hematocrito, 7
V
M
Velocidad de Sedimentación Globular, 31
MÉTODO DE WESTERGREN, 34
P
Prueba de Retracción del coagulo, 55
Prueba del Torniquete, 53
68

Tecnicas de Hematologia y Coagulación

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Cbtis 92

Toma de muestra sanguínea y Frotis

Objetivo: Realizar la toma sanguíneo y un frotis con el cual se puede hacer un

Con la sangre se puede múltiples estudios pruebas de química clínica,

5. Se retira el estuche protector de la aguja y se coge la jeringa de tal

Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro

Limpiar la zona con alcohol al 70% o alcohol

El paciente deberá abrir y cerrar la mano durante

Se retira el estuche protector de la aguja y se coge

Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena, se

Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje

 Mala localización de la vena

Procedimiento para frotis:

Una vez extraída la sangre con cualquiera de las

Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la

Deslizar suavemente y a velocidad moderada el

Conclusión: La obtención de la sangre venosa correctamente es importante

Objetivo: Realizar la técnica de hematocrito para la determinación del volumen

Fundamento: Mide la fracción que comprende a los glóbulos rojos (masa

Este volumen nos permite conocer la concentración de lo hematíes dentro

Sus valores Normales son: Hombre: 40-54%

1. Llenar el tubo con sangre previamente tomada con anticoagulante EDTA

Llenar el tubo con sangre previamente

Tapar para evitar la evaporación de la

Centrifugar a 3000 rpm por el tiempo

Conclusiones: es uno de los métodos más usado que ha venido siendo

Hombres: 40% - 54%

Mujeres: 38% - 48%

Objetivo: Realizar un conteo eritrocitario para conocer el numero de eritrocitos

Fundamento: La sangre se diluye en un líquido que nos permite observar

Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta

Introducir la pipeta en el tubo o frasquito

Se coloca en un rotador automático o se hace

Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del

Hacer el recuento con objetivo de 40x

Conclusión: Este método ha venido siendo remplazando por el automático ya

 Objetivo: Realizar un conteo eritrocitario para conocer el número de

leucocitos presentes en la sangre ya que esto nos da conocimientos si el

 Fundamento: La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que

permite evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los

Un bajo número de glóbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse

 Insuficiencia de la médula ósea (por ejemplo: debido a infección, tumor o

Un alto número de glóbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse

5000 - 10 000 leucocitos / mm3

El aumento del número total de leucocitos circulantes se llama Leucocitosis. Se

La disminución del número total de leucocitos circulantes se denomina

se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos

y a limpiar la punta con papel absorbente

Introducir la pipeta en el tubo que

Monte la laminilla de vidrio en la cámara

Agitar la pipeta y descartar las cuatro

Deje reposar por espacio de 3 minutos

Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4

Conclusión: Este método ha venido siendo remplazando por el automático ya

 Objetivo: Determinar los porcentajes de las distintas clases de

Fundamento: La práctica del frotis sanguíneo, también llamado

extendido, es de gran importancia en hematología ya que el diagnóstico de

El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la

La fórmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las

Cualquier infección o estrés agudo ocasiona un aumento en la producción de

Es importante saber que el aumento anormal de un tipo de leucocito puede

Un aumento del porcentaje de neutrófilos puede deberse a:

Una disminución en el porcentaje de neutrófilos puede deberse a:

Un aumento en el porcentaje de linfocitos puede deberse a:

Nombre del Paciente: ___________________________Sexo: