Fagocitosis

Dra. Adriana Gutiérrez Hoya

 Ilya Ilych Metchnikoff (1845-1916)
(Comparte el Premio Nobel con Paul Ehrlich en 1908)
Mechnikov, describió las células fagocíticas (1884).

Presentes en todos los animales.

Teoría fagocítica de la inmunidad.
 Teoría Fagocítica de la Inmunidad

Los microorganismo que llegan a

implantarse en los tejidos son ingeridos y
posteriormente destruidos por un grupo
de células llamadas fagocitos.
Células fagocíticas de la sangre.

Fagocitos ingiriendo levaduras

Macrófagos de un ganglio linfático con macrófagos con
antracosis
 ONTOGENIA DE LAS CÉLULAS FAGOCÍTICAS CIRCULANTES
MÉDULA ÓSEA
PRECURSOR (BLASTO) AM
PROLIFERACIÓN (6-7

pDC
MIELOBLASTO MONOBLASTO

PROMIELOCITO

MIELOCITO PROMONOCITO
MADURACIÓN (7-8 d)

METAMIELOCITO
MACRÓFAGOS ALVEOLARES
PMN JUVENIL O EN
BANDA
MICROGLIA
PMN MADURO MONOCITO
d)

SANGRE
6h 1-5 d
DC
SEMANAS

TEJIDO

MICROAMBIENTE
TISULAR
 DC EN BAZO

Steinman, R.M., and Cohn, Z.A.

Identification of a novel cell type in
peripheral lymphoid organs of mice. J.
Exp. Med. 137:1142-1162 (1973)

DC EN PIEL DC EN EPITELIO RESPIRATORIO

 BM-MN PB-MN BM-MN

GM-CSF, IL-4 GM-CSF

TGFbeta

LANGERHANS CELLS DENDRITIC CELLS

Tabla 1. Sistema fagocítico mononuclear
Células “veladas”* Tejido linfoide
Células de Kupffer Hígado
Células de Langerhans Piel
Células dendríticas Piel y Tejido linfoide (FDC)
Células Interdigitantes* Tejido linfoide
Células mesangiales Riñón (mesangio)
Histiocitos Tejido conectivo
Macrófagos Tejido linfoide
Macrófagos alveolares Pulmón
Macrófagos de la microglia Tejido del sistema
nervioso
Macrófagos peritoneales Cavidad peritoneal
Osteoclastos Tejido óseo
Células epitelioides y células Reacciones inflamatorias
gigantes crónicas
 1
PROTEÍNAS DE
QUIMIOTAXIS: ADHESINAS, 2
ADHESIÓN,
FACTORES RECEPTORES
QUIMIOTACTICOS Y MEDIADORES DE
RECEPTORES FAGOCITOSIS Y
LIGANDOS
MICROBIANOS

TRANSDUCCIÓN DE 3 4 ENDOCITOSIS,
SEÑALES Y ACTIVACIÓN FORMACIÓN DEL
DEL CITOESQUELETO, FAGOSOMA E
ENDOCITOSIS, RADICALES INTERACCIÓN CON
LIBRES DEL OXÍGENO ENDOSOMAS
TEMPRANOS Y
TARDÍOS, ROI

5 6

FUSIÓN FAGOLISOSOMAL
Y DIGESTIÓN DE LOS EXOCITOSIS
MICROORGANISMOS
Vasos sanguíneos (VS) y linfáticos (VL) en la dermis

VL

VS

VS
 Quimiotaxis,
quimiotaxia o quimiotaxismo
Fenómeno por el cual las bacterias y otras células de
organismos uni o multicelulares dirigen sus
movimientos de acuerdo con la concentración de ciertas
sustancias químicas en su medio ambiente.
 Quimioatrayente

Agentes que hacen que las células se desplacen hacia los

sitios en que esos agentes se encuentran en mayores
concentraciones.

No todos los quimioatrayentes son quimiocinas.

Otros incluyen a los subproductos de complemento (C5a

y C3a) y diversos péptidos producidos por la degradación
de proteínas bacterianas.
 Quimioatrayente
El efecto se obtiene a través de los receptores quimiotácticos
, los agentes quimioatrayentes de un ligando son específicos
de una células objetivo y dependiente de la concentración
 Quimiocinas

Son un subconjunto de citocinas cuya

característica distintiva es su capacidad de
actuar como quimioatrayentes.
 Marginación y adherencia
intravascular de leucocitos,
inducida por la administración
intradérmica de fMet-Leu-Fen

Antes del
estímulo

10 min después
del estímulo
Salida por diapédesis de
macrófagos. Flechas:
procesos citoplásmicos
entre las uniones inter-
endoteliales
Normalmente hay emigración reducida de
todos los leucocitos hacia el tejido
extravascular.
Tabla 6. Principales familias de moléculas de adhesión en leucocitos y
endotelios
Familia Miembros Localización
representativos*
“De las Igs” ICAM-1, Endotelios
(IgCAM) ICAM-2, Endotelios
VCAM-1 Endotelios

Integrinas 2 LFA-1 LcT, NK, PMN, LcB**

Mac-1 o Mo-1 PMN, MN
Gp150/95 PMN, MN, Lc

Selectinas Selectina-E Endotelios, plaquetas

Selectina-P Endotelios, plaquetas
Selectina-L Leucocitos
*ICAM, intercellular adhesion molecule; VCAM, vascular adhesion molecule; LFA, lymphocyte function
associated molecule; MAC/Mo, macrophage/monocyte; Gp, glycoprotein.
**LcB, células B transformadas por el virus de Epstein-Barr.
ADHESINAS DE LA FAMILIA DE LAS INTEGRINAS β2

β
α1(CD11a)
α1
LFA-1 α2
β(CD18)
α3

α2(CD11b)

MAC-1/Mo-1
β(CD18)

α: 155-177 kD
α3(CD11c)
β: 95 kD
Gp150/95
β(CD18)
SELECTINA LIGANDO
IC TM CR EGF LECT

P HOOC- -NH2 PSGL-1 (Leuc)

(Plaquetas, Cs
endoteliales)

HOOC- -NH2 Integrinas 2

E
(CD18) (Leuc)
(Cs endoteliales)

L HOOC- -NH2 IgCAMs

(endotelios):
(PMN, MN, Lc) MadCAM-1
GlyCAM-1
CD34
PSGL-1 = P selectin glycoprotein ligand 1
LAD (Leukocyte adherence deficiences), primeros reportes:
Hayward et al. Delayed separation of the umbilical cord, widspread infections
and defective neutrophil motility. Lancet 1, 1999 (1979).
(Normalmente el cordón se desprende a los 5-8 d del nacimiento)

Abramson et al. Recurrent infections and delayed separation of the umbilical

cord in an infant with abnormal phagocytic cell locomotion and oxidative
response during particle phagocytosis. J. Pediatr. 99, 887 (1981).
Crowley et al. An inherited abnormality of neutrophil adhesion. Its genetic
transmission and its association with a missing protein. NEJM 302, 1163
(1980).
Arnaout et al. Defficiency of a granulocyte membrane glycoprotein (gp150) in
a boy with recurrent bacterial infections. NEJM 306, 693 (1982).
 Características de los pacientes con LAD LAD
(Leukocyte adherence deficiences)
Manifestaciones clínicas:
1. Afección de ambos sexos
2. Retardo en la separación del cordón umbilical √
3. Infecciones piógenas recurrentes por Staphylococcus,
Pseudomonas, Klebsiella, Proteus y otros géneros:
Otitis media, gingivitis, traqueobronquitis, septicemias,
vaginitis, neumonías.

Datos de Laboratorio de los pacientes con LAD

1. Leucocitosis persistente ( 2 veces lo normal).
2. Niveles normales de inmunoglobulinas en el suero.
3. Niveles normales de complemento (C3 y CH50).
4. Niveles normales de linfocitos T y B.
Actividad de los fagocitos PMN de los pacientes con deficiencia
en proteínas de adhesión (LAD)

1. Defectuosa endocitosis de partículas

opsonizadas con complemento (C3b) y/o anticuerpo (IgG).
2. Reducida liberación enzimática y producción de
superóxido en respuesta a estímulos fagocíticos.
3. Respuesta oxidativa normal al PMA y a ionóforos de calcio
(PMA→ROI).
4. Defectuosa adhesión y expansión sobre superficies.
5. Defectos quimiotácticos, en algunos casos.
 Paciente masculino de 10 meses de edad con
LAD-1 (total ausencia de CD18), con adenitis
causada por K. pneumoniae. Después de la
incisión y drenaje la lesión tardo 4 meses en
sanar

Ulceración labial en una paciente de 8 meses

de edad con LAD-1, de la cual se aisló E. coli.

Paciente femenino de 3 años de edad con LAD-

1. Note la típica gingivoestomatitis frecuente
en estos pacientes

(Leukocyte adherence deficiences),

LAD: PERIODONTITIS: JUVENIL Y DEL ADULTO
“Una causa
frecuente de la caída
de los dientes en los
adultos……..”

Contenido de una
placa periodontal de
un paciente con
periodontitis
SEÑALIZACION INICIADA POR PROTEÍNAS DE ADHESIÓN
ICAM
QUIMIOTAXIS  FAGOCITOSIS

ADHESINAS
INTEGRINA CITOCINAS

PG POLIMERIZACIÓN DE LA
ACTINA

PROTEÍNA
PKC PKC*

TF PKs PAs

NÚCLEO
mRNA
TF*

PROMOTORES GENES
Membrana basal Células endoteliales

Marginación  Rodamiento
■ Adhesinas constitutivas
Fagocito ■ Adhesinas inducibles
SEL E
ICAM-2
VCAM-1

Diapedesis

Factores quimiotácticos
10 min 4h

Reacción inflamatoria temprana promovida por infección .

Respuestade
Histología inflamatoria a la infección
piel inoculación con S. aureus en la pata del
con S. aureus.
ratón.
GP MTB 2H ZN 10X GP MTB 2H ZN 100X

Infiltrado polimorfoneuclear en la piel de cobayo a las 2 h de

infección con M. tuberculosis
El objeto de la inflamación es hacer llegar
las células con capacidad fagocitaria a la
zona de lesión para que fagocitaran a los
agentes infecciosos.
 Inflamación
Es una respuesta inespecífica frente a las
agresiones del medio, y está generada por los
agentes inflamatorios.

Ocurre sólo en tejidos conectivos

vascularizados, con el fin defensivo de aislar y
destruir al agente dañino, y reparar el tejido u
órgano dañado.
 Agentes inflamatorios

• Agentes o condiciones que producen necrosis, las células

necróticas liberan moléculas que activan la respuesta
inflamatoria, como ácido úrico, ADP o incluso ADN, ejemplos:
– Agentes físicos: Radiaciones, frío, calor, rayos UV.
– Agentes químicos: Venenos, toxinas.
– Traumatismos y cuerpos extraños: Dañan los tejidos
(necrosis) o inoculan microorganismos;
– Alteraciones vasculares: Isquemia.
Las características básicas de una reacción inflamatoria localizada
fueron descritas por primera vez por los romanos hace casi 2,000
años:
– Tumefacción (del latín tumor),
– Enrojecimiento (rubor),
– Calor y
– Dolor.

– En el siglo II, Galeno añadió otra característica de la inflamación,

la pérdida de la función (functio laesa).
 Inflamación aguda

Combate las primeras fases de una infección y

pone en marcha procesos que llevan a la reparación del tejido
dañado.

En la inflamación aguda distinguimos tres puntos clave:

• Cambios hemodinámicos,
• Alteración de la permeabilidad vascular y
• Modificaciones leucocitarias.
 Cambios hemodinámicos

Minutos después de la lesión tisular:

1. Existe una vasodilatación.
2. Incremento del volumen sanguíneo en
la zona.
3. Mayor volumen de sangre calienta el
tejido y lo hace enrojecerse.
 Alteración de la permeabilidad
vascular
Al elevarse la permeabilidad vascular
ocasiona el escape de líquido desde los
vasos sanguíneos, en particular en las
vénulas poscapilares.

Esto da por resultado la acumulación de

líquido (edema) que expande el tejido.
 Modificaciones leucocitarias

En pocas horas, en la región inflamada se adhieren

leucocitos a las células endoteliales y atraviesan las
paredes de los capilares para ingresar en los espacios
tisulares, un proceso llamado extravasación o diapédesis.

Estos leucocitos fagocitan a los patógenos invasores y

liberan mediadores moleculares que contribuyen a la
reacción inflamatoria y al reclutamiento y la activación de
células efectoras.
 Mediadores moleculares

Son proteínas reguladoras de bajo peso molecular denominadas

citocinas.

Las citocinas son secretadas por los leucocitos y otras células en

repuesta a estímulos.

Regulan el desarrollo y comportamiento de las células efectoras

inmunitarias.
 Fagocitosis
Es un tipo de endocitosis por el cual algunas
células (fagocitos y protistas) rodean con su
membrana citoplasmática partículas sólidas y
las introducen al interior celular.

La una vesícula formada es conocida como

fagosoma, la cual se fusiona posteriormente
con los lisosomas para degradar la partículas
fagocitadas.
Etapas de la fagocitosis en el sistema
inmunológico
1. Infección.
2. Diapédesis y quimiotaxis.
3. Adherencia.
4. Ingestión o endocitosis.
5. Amplificación de la respuesta
infamatoria.
6. Fusión fagosoma-lisosoma.
7. Digestión y exocitosis.
 Infección
Una vez establecidos, los microorganismos
proliferan liberando pequeños péptidos con
actividad quimiotáctica.

Factores quimiotácticos (quimioatrayentes)

derivados del tejido lesionado y de la activación
del complemento también se difunden hasta
hacer contacto con los fagocitos.
 Diapédesis y quimiotaxis
En respuesta al contacto con los factores
quimiotácticos, las células endoteliales y
fagocíticas incrementan la síntesis de proteínas de
adhesión y se vuelven más pegajosas entre si.

Esto propicia que los fagocitos se adhieran a las

superficies de los endotelios y rueden sobre ellos
hasta procurarse una salida entre las uniones de
las células endoteliales (Diapédesis).
 Diapédesis y quimiotaxis
Ya fuera de los vasos sanguíneos, los fagocitos se
desplazan hasta los focos de infección donde
hacen contacto con los microorganismo
amplificando la reacción inflamatoria.

El contacto es mas firme cuando los

microorganismos se encuentran recubiertos por
opsoninas.
 Opsoninas
Son moléculas coadyuvantes de la fagocitosis.

Su nombre se construyó a partir del griego opson,

condimento.

Entre ellas se encuentran las inmunoglobulinas

IgG e IgA, componentes del sistema del
complemento como C3b, colectinas y la lectina
fijadora de manosa.
Diapédesis y quimiotaxis
Quimiotaxis de leucocitos PMN inducida por fMet-Leu-Fen

A C

B D
FACTORES QUIMIOTACTICOS

Péptidos liberados por microorganismos:

f-Met-Leu-Phe y derivados
Subproductos del complemento: C5a, C5b-6-7
Proteínas tisulares alteradas
Citocinas
Quimiocinas:
Alfa (-C-X-C-): IL8 (PMN)
Beta (C-C): MIP (MFS, DC), MCP (Macrophage chemotactic protein) (MFS)
Gamma (-XC-): Linfotactina (MN, DC)
Delta (-C-X3-C-): Fractalkina (MN)

Los FQs, incluyendo las quimiocinas, estimulan el movimiento celular porque

interaccionan con receptores específicos presentes en la membrana
plasmática.
El citoesqueleto: la maquinaria contráctil de la célula (tinción para tubulina)
DISFUNCIÓN DE LA ACTINA: LAZY LEUKOCYTE SYNDROME

Miller ME et al. 1971. Lazy leukocyte syndrome. A new disorder of

neutrophil function. Lancet i, 665-669.

Boxer LA et al. Neutrophil action dysfunction and abnormal neutrophil

behavior. New Engl J Med. 291, 1093-1098.

Goldman JM et al. 1984. Lazy leukocyte syndrome. J Roy Soc Med. 77, 140-
141.
Macrófagos peritoneales de ratón, 24 horas después de haberse
infectado con Mycoplasma pulmonis
 5 min 10 min

Macrófagos peritoneales de ratón, infectados con M.

pulmonis opsonizado con anticuerpo
Opsoninas →
Fagocitosis Anticuerpos
Emil Von Behring

Almroth Wright (1861-1947) OPSONIZACIÓN -

OPSONINAS
Opsoninas presentes en el suero
Anticuerpos: IgG1, IgG2, IgG3 (No IgG4)
Complemento: C3b y C3bi
Proteína C-reactiva
Fibronectina
Colectinas:
Proteína enlazadora de manosa (MBP)
Proteína surfactante A (SPA)
Colectinas: Un primitivo mecanismo de defensa anti-microbiano

A B
Región rica en
cisteína

Región similar
a la colágena

Región del
cuello

Región con + C vía MBP

actividad de lectina ↓
C3b
 Adherencia
La membrana de los fagocitos tiene mecanismos que le permiten
adherirse a los microorganismos, ya sea a productos microbianos
específicos o sobre opsoninas del sistema inmune.

Receptor de manosa, es un receptor que tiene afinidad por los

componentes de manosa presentes en las glucoproteínas y
glucolípidos de las paredes celulares microbianos.

Receptores de reconocimiento de patrón (PRRs) como son los

Receptores Scavenger (SR), se unen directamente a microorganismos y
a moléculas de LDL modificadas.

PRRs y PAMPs
 Adherencia
CD14 y C1q, son ligandos reconocen componentes
estructurales conservados en los microorganismos
(PAMP, pathogen associated molecular patterns)

Transmembranal de 7 hélices alfa, su función está

asociada a señales de quimiocinas y ciertos péptidos
microbianos.

Receptores para opsoninas, IgG (FcR), C3b/C3bi,

colectinas, etc.
Receptores de membrana que reconocen
a los microorganismos
RECEPTORES RELACIONADOS CON FAGOCITOSIS

Receptores (PRRs) Ligandos

MR Polisacáridos con manosa
• DEC 205 Mananas e integrinas (CD11b/CD18)
• ScR Lipopolisacáridos (LPS)
• MBPR Proteína enlazadora de manosa (MBP)
• SPR210 Proteína surfactante A
• TLRs Varios ligandos (PAMPs)
• DC-SIGN ICAM-2, ICAM-3, Polisac. con manosa
• Receptores para opsoninas
• FcR’s Fc de inmunoglobulinas IgG
• C3bR C3b
• C3biR C3bi
•
 -NH2 Receptores TLR y sus ligandos más comunes
TLR Ligando
TLR-1 Triacil lipopéptidos de bacterias Gram negativas
TLR-2 Lipoproteínas de bacterias Gram- y Gram+
Peptidoglicana y ácidos lipoteicoicos de bacterias Gram+,
Lipoarabinomanana (LAM) de micobacterias,
Zimosan (levaduras)
TLR-3 RNA viral de doble cadena
TLR-4 Lipopolisacáridos de bacterias Gram-negativas
TLR-5 Flagelina (de bacterias Gram-negativas)
TLR-6 Diacil lipopéptidos de Micoplasma
TLR-7 RNA viral de una cadena
TLR-8 RNA viral de una cadena
HOOC--

TLR-9 Secuencias específicas del DNA microbiano (CpG)

TLR TOLL TL-11 Bacterias uropatogénicas
Fagocitosis de eritrocitos por
macrófagos murinos.

Durante la fagocitosis, una

célula fagocítica puede ingerir,
en una hora, más del 200% de
su membrana celular.
La membrana plasmática y la
membrana fagosomal, son
esencialmente diferentes.
Para reponerse, la membrana
debe reciclarse (Tulkens, 1977)
 Endocitosis
La unión a receptores de adherencia promueve
señales de comunicación intracelular que resultan
en la evaginación de la membrana del fagocito
rodeando al receptor y su ligando patogénico.

Al rodear por completo al complejo receptor-

molécula, la membrana se une en sus extremos y
libera al interior de la célula un fagosoma. Esto
puede ocurrir en más de un punto de la membrana
celular.
EXTENSA UTILIZACIÓN DE MEMBRANA DURANTE LA FAGOCITOSIS
 Digestión
Una vez que el fagosoma esta en el citoplasma comienza la
desintegración del mismo, el proceso se realiza por
mecanismos dependientes o independientes de oxígeno.

Primero se activan rutas metabólicas que consumen

oxígeno, lo cual produce la liberación de radicales libres del
oxígeno, que son tóxicos para los microorganismos.

Después intervienen los lisosomas, que se fusionan al

fagosoma conformando el fagolisosoma, liberando enzimas
hidrolíticas que destruirán al antígeno.
Digestión
 Hidrolasas y
Lisosomas péptidos
antimicrobianos Endosomas
tempranos
Rab-5
5 min

40 min

(pH 4.5-5.5)

10
H+ATPasa min
Rab-7
20 min Endosomas
tardíos

Vieria et al. Biochem J. 366,

689-704: 2002
DESGRANULACIÓN LISOSOMAL (FAGOLISOSOMA)
ALGUNOS COMPONENTES DE LOS GRANULOS LISOSOMALES
1.- Proteasas neutras y ácidas
2.- Nucleasas: RNasas, DNasas, Oligonucleotidasas
3.- Polisacaridasas de varios tipos (incluyendo Lisozima)
4.- Lipasas de varios tipos,
5.- Mieloperoxidasa
6.- Lactoferrina
7.- Proteínas catiónicas:
- Leukina (activa sobre Gram negativos)
- BPI (bacterial permeability increasing factor)
- MUMP1-MUMP3 (activas sobre Gram- y Gram+
- Defensinas (Péptidos antibióticos)
IMPORTANCIA DE LOS MECANISMOS BACTERICIDAS NO OXIDATIVOS

Spitznagel y col (J Clin Invest 51, 93a: 1972): describen el caso de un

paciente cuyos leucocitos PMN presentaban una deficiente actividad
bactericida in vitro, asociada a una marcada deficiencia en lactoferrina y
lisozima. El paciente falleció por infección bacteriana severa.
Hansen y Andersen (Br J Haematol. 24, 613: 1973): Comunican el caso de
un paciente severamente afectado cuyos leucocitos PMN eran deficientes
en lisozima.
Strauss y col (NEJM, 290, 478: 1974): Describen el caso de un paciente con
infecciones severas y recurrentes cuyos leucocitos PMN eran deficientes
en fosfatasa alcalina.
Sly y col (J Pediatr. 82, 249: 1973): Describen el caso de un paciente con
infecciones bacterianas severas y recurrentes cuyos leucocitos fueron
deficientes en beta-glucuronidasa. No se hicieron pruebas funcionales de
los PMN.
 CAMBIOS METABÓLICOS OXIDATIVOS ASOCIADOS A FAGOCITOSIS
(ESTALLIDO RESPIRATORIO)

• AUMENTO EN EL CONSUMO DE OXÍGENO

• AUMENTO EN EL CONSUMO DE GLUCOSA
• AUMENTO EN LA ACTIVIDAD DEL CICLO DE LAS PENTOSAS
• ACTIVACIÓN DEL SISTEMA DE LA NADPH-OXIDASA
• PRODUCCIÓN DE ANIÓN SUPERÓXIDO, PERÓXIDO DE
HIDRÓGENO, RADICALES HIDROXILO
• ACTIVACIÓN DEL SISTEMA DE LA MIELOPEROXIDASA

Nicotinamida Adenina Dinucleótido Fosfato

 1.- NADPH-OXIDASA
CAMBIOS METABÓLICOS OBSERVADOS DURANTE LA
2.- SUPEROXIDO DISMUTASA
FAGOCITOSIS (“ESTALLIDO RESPIRATORIO”)
3.- GLUTATION PEROXIDASA
4.- NADPH OXIDASA
2 5.- HEXOQUINASA
-
O2 O2 H2O2 HO
SOD2
6.- G-6-P DESHIDROGENASA
1 3 7.- LACTONASA
8.- DESCARBOXILASA
NADPH-OX GPO

NADPH NADP G-SH GS-SG

4
NADPH-OX

NADP NADPH
6

5 G6P DH
GLU G-6-P GL-6-P
HEXO-K 7 LACTONASA

AC-6-PG
ATP ADP DESCARBOXILASA
8
RIB-5-P AN
 O2
NADPH-OXIDASA
MICROORGANISMO

gp91 p22
Cyt B558
RECEPTOR
p47
p67
p40 Rap1A
PLC IP3
Rac-1 NADPH

DAG
PG (GTPasa) PLC NADP+
NBT
PKCs O2- H2O2

SEÑALIZACIÓN SOD NBTH2

p40 p67 P47 H2O2

Rac-1 Rap1A .
OH , 1O2

Generación de radicales libres del oxígeno

Mieloperoxidasa
Neutrofilos humanos
 Causas de muerte de los
microorganismos
Fagolisosoma -Peroxidación de lípidos de
membranas
- - .
O2 O2 O2 . OH -Halogenación de proteínas
SOD -Descarboxilación de aminoácidos
-
O2- 2O2 H2O2 -Formación de aldehídos
-Labilización de proteínas
SOD 1O + O2 =
2 -Despurinación del DNA
-Fragmentación del DNA y RNA
H2O2
H2O2 -Inactivación de enzimas
Cl- ClO-
MPO MPO -Interferencias metabólicas
hidrolasas
Catalasa H+ Otros efectos
H+ H+
H2O + O2 hidrolasas ácidas y neutras
proteasas, glicosidasas,
Protón ATPasa nucleasas, lipasas, péptidos
Lisosomas microbicidas (BPN, leukinas,
defensinas, proteínas
catiónicas, etc.
 Sistema de mieloperoxidasa

La mieloperoxidasa (MPO) es una enzima

lisosomal que hidroliza el peróxido de
hidrógeno producido por las células
fagocíticas para generar intermediarios
inestables que interacción con haluros (Cl- y I-
) para formar radicales halogenantes (ácido
hipocloroso, hipoclorito e hipoyodito).
 Los metabolitos del nitrógeno
Las células fagocíticas, pero principalmente los
macrófagos, responden a los estímulos infecciosos con la
producción de oxido nítrico.

El oxido nítrico es un biproducto del metabolismo de la

arginina, y su síntesis se incrementa cuando los
macrófagos son activados por el IFNγ.
OXIDO NÍTRICO
UN EFICIENTE METABOLITO MICROBICIDA DEL NITRÓGENO

LcTh1 (RIC)

TNF Microorganismo
IFN
IFN R TNFR .NO

arginina
. .NO
Señalización Señalización NO
iNOS

TF TF citrulina
.NO

TNF iNOS
.NO

.NO + O2- NOO-

 5 SEM

MF
(APC)

13 SEM

IL-12

LcTh1
IFNγ

21 SEM

TNFα→ iNOS→.NO
 O2

NADPH-OXIDASA
O2 (3)

O2- MHC-I-Ag
ROI PROTEASOMA
ROI: H2O2 + .OH + 1O2
microorganismo (10)
(6) (11)
LISOSOMAS (7) HIDROLASAS
MHC-II-Ag

(4) (5) FAGOLISOSOMA (8)

FAGOSOMA (9) EXOCITOSIS
(1) PRRs

(2) INGESTIÓN
(ENDOCITOSIS)

INM. INNATA INM. ADQUIRIDA (RIC Y RIH)

 Exocitosis
Las hidrolasas degradan a los componentes
microbianos hasta fragmentos de tamaño
variable que pueden ser reutilizados por la
células.

Lo que no es utilizado, se desecha por

exocitosis, que es esencialmente el proceso
inverso a la endocitosis
Los pacientes con ECG presentan inflamación crónica, granulomas y gingivitis
por infecciones recurrentes. Las infecciones más frecuentes son por
microorganismos catalasa positivos. Úlceras y linfadenitis son también
manifestaciones comunes de la enfermedad.
Prueba de reducción del NBT
 Reducción del NBT y Quimioluminescencia: Dos pruebas útiles
como apoyo al diagnóstico de ECG

60e6

100 QL (LUMINOL/ PMA)

50e6
Reducción del NBT

40e6

50 30e6 Control sano

CPM

20e6

Paciente
10e6

0
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
S P
minutos
NETS (NEUTROPHIL EXTRACELLULAR TRAPS)

NETs (DNA, elastasa, MPO, histonas) PMA, LPS, IL-8, C. albicans, P. falciparum, M.
tuberculosis.
NETS, PIEL COBAYO, M.TB, 30 MIN
CUANTIFICACIÓN DE

LA ACTIVIDAD

FAGOCÍTICA
PRINCIPIO DE LA CUANTIFICACIÓN
DE LA ACTIVIDAD FAGOCÍTICA
100

% DE FAGOCITOSIS
80

60

40

MACRÓFAGO / 20
o
GRANULOCITO 10 min, 0 C 0
0 3 5 10
TIEMPO (min)
2.5 min, 37oC

+ 5 min, 37oC

E. Coli 10 min, 37oC

FITC
 ACTIVIDAD FAGOCITICA DISMINUIDA DE LOS GRANULOCITOS
(CD15+) DE SANGRE PERIFERICA
DE PACIENTES CON SHOCK SEPTICO
R1=Granulocitos Control negativo (R1) E. Coli Positivo (R1)
Control
9 5 .4 5 %
0.84%
R1

Paciente con Shock Séptico

57%
0. 73 %

R1
 LOS MONOCITOS (CD14+) DE SANGRE PERIFERICA
DE PACIENTES CON SHOCKSEPTICO
PRESENTAN UNA ACTIVIDAD FAGOCITICA DISMINUIDA
R1=Monocitos Control negativo (R1) E. Coli Positivo (R1)
Control

2 .2 5 % 8 1 .2 8%

R1

Paciente con Shock Séptico

1.30%
3 6 .7 4 %

R1
CUANTIFICACIÓN DE

LA ACTIVIDAD

MICROBICIDA
 PRINCIPIO DE LA CUANTIFICACIÓN
DE LA ACTIVIDAD MICROBICIDA
O2

-
e

1
O2 O2 - 1
O2
H 2O 2 3+ *
Fe OH
SOD -
-
OH
Cl
-
Catalasa
OCl H 2O 2 H 2O
Glutation
Mieloperoxidasa
peroxidasa
 PRINCIPIO DE LA CUANTIFICACIÓN
DE LA ACTIVIDAD MICROBICIDA

WASHING BUFFER

fMLP
+ E. Coli

MACRÓFAGO TPA
GRANULOCITO
GENERACIÓN DE
RADICALES LIBRES
1,2,3- DIHIDRO- RODAMINA RODAMINA

NO FLUORESCENTE FITC
R1

R2

Quadrant Statistics

File: Oxi RMC-3.005 Log Data Units: Linear Values

Sample ID: W.B Patient ID: 10
Tube: Panel:
Acquisition Date: 9-Dec-98 Gate: G1
Gated Events: 2155 Total Events: 3995
X Parameter: SSC-H SSC-Height (Linear) Y Parameter: FL1-H Rodamina (Log)
Quad Location: 148, 10

Quad Events % Gated % Total X Mean X Geo Mean Y Mean Y Geo Mean
UL 0 0.00 0.00 *** *** *** ***
UR 64 2.97 1.60 708.08 683.15 43.09 19.03
LL 0 0.00 0.00 *** *** *** ***
LR 2091 97.03 52.34 675.00 657.90 5.11 5.01
R1

R2

Quadrant Statistics

File: Oxi RMC-3.005 Log Data Units: Linear Values

Sample ID: W.B Patient ID: 10
Tube: Panel:
Acquisition Date: 9-Dec-98 Gate: G2
Gated Events: 115 Total Events: 3995
X Parameter: SSC-H SSC-Height (Linear) Y Parameter: FL1-H Rodamina (Log)
Quad Location: 148, 10

Quad Events % Gated % Total X Mean X Geo Mean Y Mean Y Geo Mean
UL 0 0.00 0.00 *** *** *** ***
UR 5 4.35 0.13 273.80 270.20 11.53 11.47
LL 14 12.17 0.35 112.14 110.25 5.43 5.21
LR 96 83.48 2.40 230.90 225.56 5.68 5.54
R1

R2

Quadrant Statistics

File: Oxi RMC-3.006 Log Data Units: Linear Values

Sample ID: E.Coli Patient ID: 10
Tube: Panel:
Acquisition Date: 9-Dec-98 Gate: G1
Gated Events: 5843 Total Events: 10000
X Parameter: SSC-H SSC-Height (Linear) Y Parameter: FL1-H Rodamina (Log)
Quad Location: 148, 10

Quad Events % Gated % Total X Mean X Geo Mean Y Mean Y Geo Mean
UL 0 0.00 0.00 *** *** *** ***
UR 552 9.45 5.52 686.71 665.12 276.84 53.29
LL 0 0.00 0.00 *** *** *** ***
LR 5291 90.55 52.91 690.27 674.45 5.14 5.02
R1

R2

Quadrant Statistics

File: Oxi RMC-3.006 Log Data Units: Linear Values

Sample ID: E.Coli Patient ID: 10
Tube: Panel:
Acquisition Date: 9-Dec-98 Gate: G2
Gated Events: 300 Total Events: 10000
X Parameter: SSC-H SSC-Height (Linear) Y Parameter: FL1-H Rodamina (Log)
Quad Location: 148, 10

Quad Events % Gated % Total X Mean X Geo Mean Y Mean Y Geo Mean
UL 1 0.33 0.01 136.00 136.00 16.11 16.11
UR 62 20.67 0.62 252.52 246.87 76.30 33.27
LL 48 16.00 0.48 109.17 106.55 4.83 4.61
LR 189 63.00 1.89 232.49 226.90 6.05 5.89
El flujo sanguíneo global de la circulación de un
adulto en reposo es de unos 5000 ml min-1,