Centro de Investigación, Tecnología e Innovación

Universidad de Sevilla
Avda. Reina Mercedes, nº 4-B, 41012 Sevilla, Spain

Sistema de Gestión de Calidad del CITIUS

PNT07BIO0072
MEDICIÓN CON EL NANODROP 2000

Aprobado
Firma

Nombre Julián Martínez

Fernández
Cargo Director SGI

Fecha de aprobación: Revisión: 00

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ÍNDICE

CONTROL DE REVISIONES 2

1.-OBJETO Y ALCANCE 3

2.- DESARROLLO 3

2.1.- PUESTA EN MARCHA Y USO. 3

2.2.- REALIZACIÓN DEL BLANCO. 4
2.3.- LIMPIEZA DEL PEDESTAL. 5

CONTROL DE REVISIONES
Nº Rev/Fecha Naturaleza de la revisión

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1.-OBJETO Y ALCANCE

El objeto del presente PNT es facilitar a los usuarios el procedimiento más

adecuado para la utilización del equipo NANODROP 2000 del Servicio General
de Biología de la Universidad de Sevilla.

Su aplicación permitirá llevar a cabo un buen uso del equipo por parte de los
usuarios del Servicio.

2.- DESARROLLO

2.1.- PUESTA EN MARCHA Y USO.

1. Haga doble clic en el icono de escritorio softwere NanoDrop 2000 y

seleccione la aplicación de intereses.

2. Selecciones el ensayo que vaya a realizar: Nuecleic Acid, Protein A280,

etc.

3. Aparecerá en la pantalla el siguiente mensaje: “ Load last workbook

“…..?” Pulsar NO.

4. Una vez realizada esta operación aparecerá el siguiente cuadro de

diálogo: “ Routine verefication of measured wavelengths needs to be
done. Make sure the arm is down and click ok to start the verification”. A
continuación pulsar OK.

5. Establecer un blanco con el tampón adecuado. Tomar 1-2 ul del blanco y

depositarla en la parte inferior del pedestal, baje el brazo y haga clic en
el botón que indica Blanc. Generalmente se usa como blanco el mismo
tampón donde la molécula de interés se haya suspendido o disuelto.

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6. Limpie el pedestal e introduzca el ID de la muestra en el campo

correspondiente. Pipetear 1 ul de la muestra y medir.
- Se recomienda siempre tomar una nueva alícuota de la muestra para
cada medición.

Después de una medición:

- Limpie los pedestales de medición con un paño de laboratorio que no
suelte pelusa. El instrumento está listo para la siguiente muestra.

2.2.- REALIZACIÓN DEL BLANCO.

En general se recomienda que una parte alícuota del búfer se medirá como si
se tratara de una muestra. Esto confirmará que el instrumento está funcionando
bien y la muestra seca desde cualquier medición anterior no es una
preocupación. Para ejecutar un Blanking Cycle, realice lo siguiente:

1. Carga una alícuota del blanco sobre el pedestal de medición.

2. Haga clic en el botón Blank para guardar la referencia en blanco.

3. Analizar una réplica del fresco en blanco como si se tratara de una

muestra mediante la selección de la medida. El resultado debe ser un
espectro que varía no más de 0,04 A (10 nm de absorbancia
equivalente)

4. Limpie las superficies de medición, tanto del pie y repetir el proceso

hasta que el espectro se encuentra dentro de un 0,04.

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Aunque no es necesario el blanco entre cada muestra, se recomienda que se

tome un nuevo blanco cada 30 minutos a la hora de medir muchas muestras.

2.3.- LIMPIEZA DEL PEDESTAL.

1. Aplicar 3-5 ul de dH2O a la parte inferior del pedestal. Nunca use una
jeringa para aplicar el agua des-ionizada o ningún otro líquido a la
superficie del instrumento.

2. Baje el brazo de la parte superior del pedestal para formar una columna
de líquido; dejar que repose durante unos 2-3 minutos.

3. Limpie el agua de la parte superior e inferior del pedestal con un paño

seco que no deje pelusas.

- Entre medición: Limpie la muestra desde la parte superior e inferior

pedestales con un paño limpio y seco, el paño que no suelte pelusa
al limpiar, para evitar que arrastre la muestra y evitar la acumulación
de residuos.

- Entre usuarios: Una limpieza final de la superficie de medición,

tanto con dH2O se recomienda después de la medición de la última
muestra.

- Limpieza adicional: Sustituir HCL 0,5 M para la dH2O en el

procedimiento anterior cuando las proteínas se han secado en el
pedestal.

- Descontaminación - Use una solución desinfectante, como una

solución al 0,5% de hypochorite de sodio (1:10 de dilución de la
solución de lejía comercial común, recién preparada), para

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descontaminar los pedestales de medición. A continuación limpiar

con 3 -5 ul de dH20.

El uso de detergentes o alcohol isopropílico no es recomendable, ya que

puede afectar a las superficies de medición del pedestal. Si bien se
utiliza, es importante seguir con 3-5 ul de dH2O.

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