UNIVERSIDAD SAN MARTIN DE PORRES – FILIAL NORTE

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N° 9 DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES Y ALBÚMINA

1. INTRODUCCIÓN

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el

organismo, esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y
aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. En el
plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante, transportan
sustancias relativamente insolubles y actúan en la inactivación de compuestos tóxicos y en la
defensa contra agentes invasores. La determinación de proteínas totales es útil para el
monitoreo de cambios ocasionados por diversos estados de enfermedad. En condiciones
patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, etc., suelen
presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis
bacteriana y hemoconcentración de diversos orígenes, (ej.: deshidratación) se observan
hiperproteinemias.

La albúmina es el principal contribuyente de las proteínas totales plasmáticas. Entre sus

múltiples funciones se pueden mencionar: - transporte de una amplia variedad de sustancias
como hormonas esteroides, ácidos grasos, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son
insolubles en medio acuoso; - mantenimiento de la presión coloidosmótica, que estaría
relacionado con su bajo peso molecular y su gran carga neta. Los aumentos anormales de
albúmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con la deshidratación que provoca la
reducción en el contenido del agua plasmática. La hipoalbuminemia ocurre en condiciones
patológicas tales como pérdida excesiva de proteínas en el síndrome nefrótico, desnutrición,
infecciones prolongadas, quemaduras severas. Otras causas son disminución en la síntesis por
una dieta deficiente, enfermedad hepática o malabsorción.

2. OBJETIVOS

 Aplicar el manejo adecuado de la técnica para la determinación de proteínas totales en

una muestra biológica.
 Aplicar el manejo adecuado de la técnica para la determinación de albúmina sérica en
una muestra biológica.
 Mencionar las principales patologías que se presentan si tenemos valores altos o bajos
de proteínas totales y albúmina en una muestra biológica.
 3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico en medio alcalino, para dar
un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya intensidad es proporcional a la
concentración de proteínas totales en la muestra.

La albúmina reacciona específicamente (sin separación previa) con la forma aniónica de la 3,3',5,5'-
tetrabromo cresolsulfon ftaleína (BCG). El aumento de absorbancia a 625 nm respecto del Blanco
de reactivo, es proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra.

4. PREPARACION
4.1 MUESTRAS CLINICAS
Suero, plasma heparinizado u orina. Otros anticoagulantes como el citrato o EDTA no son
recomendables. Una vez efectuada la extracción, centrifugar y separar el suero lo antes posible.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario

 5 tubos de ensayo de 13 X100mm.

 1 Micropipeta de 1.0 mL.
 1 Micropipeta de 20µL.
 1 Micropipeta de 200 µL
 Puntas para micropipeta.
 Gradilla Pipeta de 2 mL

Equipo

 Fotómetro termostable a 37ºC con filtro de 540 nm (proteínas totales) y a 625 nm

(albúmina).
 Cronómetro

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO

PROTEINAS TOTALES

Reactivo A: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en hidróxido de sodio 875 mmol/l y alquil aril poliéter
(AAP).

ALBÚMINA

Reactivo A: solución de BCG 0,3 mmol/l, buffer acetato 0,1 mol/l y polioxietilén lauril éter 0,9 g/l.
5. PROCEDIMIENTO
5.1 TECNICA
Proteínas totales:

Albúmina:
6. RESULTADOS

6. VALORES DE REFERENCIA
Proteínas totales: 6,1 a 7,9 g/dl
Albúmina: 3,5 a 4,8 g/dl
Relación A/G: 1,2 a 2,2