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Objetivos: 1. Realizar el conteo de eritrocitos por mm3 2. Comprender el fundamento del método manual para conteo de leucocitos 3.

Comparar los resultados con los valores de referencia y establecer la importancia diagnóstica del la cuenta total de leucocitos. Introducción: Los leucocitos son células sanguíneas incoloras, se encuentran en menor cantidad respecto a los glóbulos rojos, se originan de la célula madre pluripotencial. Se localizan en un fondo común de leucocitos en la médula ósea que después es abandonado para pasar a la circulación periférica y de ahí a los diferentes tejidos. Tienen forma redondeada cuando están en sangre periférica, pero pueden adquirir otras formas cuando están en los tejidos. Las infecciones estimulan la liberación de leucocitos de la médula ósea lo que representa un aumento en el número de de leucocitos en sangre periférica, sin embargo en el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), su número es reducido. La alteración por aumento en el número de leucocitos, se denomina leucocitosis, donde pueden aumentar todos los tipos de glóbulos blancos, o solo uno de ellos, según el tipo de leucocito que está aumentado, se presenta neutrofilia, linfocitosis y eosinofilia. Se denomina leucopenia a la disminución en el recuento de glóbulos blancos. En la leucocitosis aumentan principalmente los neutrófilos (neutrofilia) y, en segundo lugar, los linfocitos (linfocitosis). Existe leucocitosis de forma normal, sin que signifique problema de salud, en la infancia y el embarazo, o después de un intenso esfuerzo físico. En la leucopenia la causa más frecuente es que se trate de una neutropenia. Los fármacos son la causa más frecuente de neutropenia. Entre los más habituales tenemos el captopril, la indometacina, las penicilinas, los antitiroideos y el cloranfenicol. El recuento total de leucocitos es un parámetro útil que orienta al médico en los procesos virales, bacterianos, inflamatorios o sépticos, marcándole una pauta en su diagnóstico y tratamiento. Para poder valorar cuáles son las posibles causas de una alteración de los glóbulos blancos en los estudios hematológicos, debe tenerse en cuenta el recuento total y el análisis diferencial de los glóbulos blancos. Los valores de referencia pueden variar dependiendo de la edad, sexo, raza y estados fisiológicos específicos. Fundamento: El recuento de leucocitos por el método manual se fundamenta en la dilución de sangre total anticoagulada con EDTA, utilizando una pipeta de Thoma para glóbulos blancos para dicha dilución y el conteo de las células mediante un hemocitómetro (cámara de Neubauer) y microscopio óptico convencional. Para el cálculo se toma en cuenta la dilución, el área de la superficie contada y la altura de la cámara utilizada.

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE GUERRERO UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS MANUAL DE PRÁCTICAS DE HEMATOLOGÍA PRÁCTICA NO. 10 RECUENTO DE LEUCOCITOS (Método manual)

3. 11. Colocar el tubo de goma con boquilla en la pipeta de glóbulos blancos y aspirar sangre hasta la marca 0. jeringas etc. pero no a los leucocitos ni a los eritrocitos nucleados. 1mm . Contar los leucocitos de cada uno de los cuatro cuadros de 1 mm de las esquinas de la cámara de Neubauer.Hacer el recuento al microscopio con los objetivos 10 x o 40 x. 4. Material: Microscopio Pipeta de Thoma para glóbulos blancos Cámara de Neubauer Agitador de pipetas Tubos de ensaye de 13 x 100 mm Piceta con agua destilada Boquillas Material para punción venosa (etanol 70%. Cargar la cámara de Neubauer de los dos lados y dejar en reposo durante 3 minutos 10. Obtener una muestra de sangre anticoagulada con EDTA.Nota: Se debe de tomar en cuenta que el líquido de Türk lisa a los eritrocitos. Sellar los extremos de la pipeta con papel parafilm 6. 2. Descartar las primeras 3 ó 4 gotas de la pipeta de glóbulos blancos en posición vertical 9.) Papel seda para limpieza de lentes Papel parafilm Papel absorbente suave (pañuelos desechables) Jabón de tocador para aseo de manos Material biológico: Muestra fresca de sangre anticoagulada Reactivos: Líquido de Türk Anticoagulante EDTA 10% Solución de hipoclorito al 5 % para limpieza de área de trabajo Procedimiento: 1. Agitar durante 2 minutos 7. Aspirar el líquido de dilución (líquido de Türk) hasta la marca 11 5. limpiar perfectamente las paredes de la pipeta sin tocar la punta de ésta. Limpiar y preparar la cámara de Neubauer 8.5. torundas torniquete. Homogenizar la muestra de sangre automáticamente o en forma manual por inversión 20 veces.

Hematología clínica. Manual de Hematología Clínica. 1983..¿Cuándo y porque es necesario hacer una corrección de la cuenta total de leucocitos? 8... Gómez-Almaguer D.¿En qué patología se presenta leucopenia? 3... Segunda edición. 2000. . Organización Panamericana de la Salud.¿Cual es la composición del líquido de Türk y que efecto tiene sobre la sangre? 7...¿En que patologías se puede presentar linfocitosis? 5.Menciona las principales causas de eosinofilia.500 a 10. 2000. 000 mm3 Cuestionario: 1. QBP Isabel Santos Aranda. Ediciones Cuellar.Cálculos: Número de leucocitos = N x 20 x 10 = leucocitos / mm3 4 Número de leucocitos = N x 50 = leucocitos / mm3 Donde: N= número de leucocitos contados 20= factor de dilución 10= corrección de la altura de la cámara 4= Número de cuadros de 1mm2 donde se hizo el conteo Valores de referencia: 4..¿Qué fármacos pueden alterar (incremento y disminución) la cuenta de leucocitos? 6. segunda edición.B. 4. Manual de Técnicas Básicas Para un Laboratorio de Salud.¿Cuáles son las principales causas de leucocitosis? 2. El manual moderno..¿por qué es importante acompañar una cuenta total de leucocitos con una cuenta diferencial? Bibliografía: McKenzie S.

eosinófilos y basófilos) y mononucleares con núcleo único generalmente situado en el centro de la célula (linfocitos y monocitos). Fundamento: La cuenta diferencial de glóbulos blancos se fundamenta en la observación microscópica de 100 o 200 células en un extendido de sangre total periférica convenientemente teñido. La cuenta diferencial varía con la edad. para poder observar elementos atípicos como. La cuenta diferencial de leucocitos permite saber el porcentaje de cada una de las células de este grupo en sangre total periférica y además revela el estado morfológico y de madurez de las células. blastos. elementos inmaduros de la serie mieloide. Comparar los resultados con los valores de referencia e interpretarlos 4.UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE GUERRERO UNIDAD ACADÉMICA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLOGICAS LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA PRÁCTICA NO.0 x 109/L. Se clasifican morfológicamente en: polimorfonucleares también llamados segmentados o granulocitos con núcleo lobulado y de acuerdo a la afinidad de la granulación citoplasmática por la tinción de Romanowsky (neutrófilos.11 CUENTA DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS Objetivos: 1. Identificar y registrar la presencia de leucocitos con morfología atípica Introducción: Los leucocitos son un grupo de células sanguíneas con funciones relacionadas con la defensa del organismo frente a diversos agentes patógenos. Errores en la cuenta diferencial: Distribución irregular no aleatoria de de los leucocitos en los extendidos . Asimismo. Identificar los diferentes tipos de glóbulos blancos 2. Cuando el recuento total de glóbulos blancos está por debajo de 1. Calcular el porcentaje de cada uno de los glóbulos blancos 3. En esta situación. la cuenta puede realizarse contando 50 células blancas. El incremento en el porcentaje de un tipo de glóbulo blanco está acompañado de la disminución de otro tipo específico por lo que es indispensable que la cuenta diferencial esté acompañada de un recuento total de leucocitos Para la cuenta diferencial de leucocitos es indispensable que los frotis sanguíneos estén bien realizados con una buena distribución de las células que no sea excesivamente gruesa ni muy fina y con una tinción de calidad. podría ser difícil encontrar muchas células sanguíneas blancas en el extendido. Este hecho debe anotarse claramente en el reporte. eritroblastos o linfocitos reactivos. puede apreciarse la morfología eritrocitaria y las plaquetas.

Limpiar el dorso de la preparación con una gasa con alcohol 6. 3. Fijar los frotis con metanol durante 3 minutos (4 a 5 gotas) mantener en posición ligeramente vertical para permitir la evaporación del metanol. Sumergirla verticalmente en colorante de Giemsa o colocar las laminillas en el puente para tinción y cubrir los extendidos sanguíneos con colorante durante 7 minutos (el tiempo depende del colorante y de cada laboratorio). Lavar la extensión con abundante agua destilada y secar al aire.8 (9 volúmenes) Metanol absoluto Anticoagulante EDTA al 10% Agua destilada en piceta Solución de hipoclorito al 5 % para limpieza de área de trabajo Material biológico: Sangre fresca anticoagulada con EDTA Procedimiento: 1. Reportar en porcentaje el número de células contadas. Valores de referencia: . Observar al microscopio inicialmente a 10 x para observar la calidad de la extensión y posteriormente con el objetivo de inmersión contar 100 glóbulos blancos.Recuento de células en un lugar de la extensión inadecuado Variaciones en la calidad de la tinción Observación de un número insuficiente de células Dificultades en la identificación celular Material: Portaobjetos limpios (libres de polvo y grasa) Microscopios Gradilla Aceite de inmersión Tubos de ensaye de 13 x 100 “Piano” para cuenta diferencial Pipeta automática de 10 µL con puntas amarillas Papel absorbente Gasas Material para punción venosa (etanol 70% torundas torniquete jeringas) Puente para tinción Lápices de colores Jabón de tocador para aseo de manos Reactivos: Colorante de Giemsa _ (1 volumen) más amortiguador de fosfatos pH 6. 4. Preparar los frotis de acuerdo al procedimiento de la práctica número dos 2. (es importante que al hacer el recorrido por la extensión no se cuenten dos veces las mismas células) 7. 5.

. 3. Organización Panamericana de la Salud. Ediciones Cuellar..¿E n que patologías aumenta el número de linfocitos? 4. Segunda edición.-Investiga cuales son las causas de disminución en el porcentaje de neutrófilos....5% Cuestionario: 1.-Da cinco ejemplos de patologías en las que el número de linfocitos esté disminuido.¿Cuál es la función normal de los eosinófilos? 10.. 6.. Manual de Técnicas Básicas Para un Laboratorio de Salud.¿A que se debe el aumento del porcentaje neutrófilos en sangre periférica? 2.¿Cuales son las causas de incremento en el número de eosinófilos? 9. Manual de Hematología Clínica. 2000.B. Hematología clínica. segunda edición. 2000. El manual moderno. Gómez-Almaguer D.¿En que patologías aumenta el número de monocitos? 8. 1983.¿Explica brevemente cuál es la función normal del monocito? 7.. .Neutrófilos 60 al 65% Linfocitos 25 al 30% Monocitos 5 al 10% Eosinófilos 1 al 3% Basófilos 0.-Investiga cuales son las causas de incremento en el número de basófilos Bibliografía: McKenzie S.Explica brevemente cual es la función de los linfocitos 5.