REGULACIN DE

LA EXPRESIN
GNICA EN
PROCARIONTES

Francois Elementos OpernJacques

Regulacin fago SP01
Jacob Lactosa Monod
 INDICE

Introduccin

Regulacin de la expresin gnica en bacterias: el opern

o Sistemas constitutivos y sistemas adaptativos

o Sistemas inducibles y sistemas represibles

o Control positivo y control negativo

o Elementos del opern

o El opern lactosa: control negativo

o El opern lactosa: control positivo

o Represin por catabolitos

o El opern triptfano

o El opern triptfano: regulacin por el atenuador.

o Interaccin entre operones

Regulacin de la expresin gnica en fagos

o Regulacin del fago T7

o Regulacin del Fago SP01

o Regulacin del Fago l

Morfognesis en virus

o Fago T4

o Fago 29

o Virus del mosaico del tabaco TMV

INTRODUCCIN
En nuestro recorrido por la Gentica hemos averiguado que son los genes,
cmo se replican y cmo se transmiten. Tambin hemos visto que la
informacin contenida en los genes se transcribe a ARN y que el ARN
mensajero se traduce a protenas. De manera que la informacin contenida
en los genes se convierte en protenas. Sin embargo, an no hemos visto de
qu manera la clula regula su funcionamiento, es decir, Cmo decide la
clula que protenas necesita producir en cada momento y qu cantidad de
protena es necesario sintetizar?.
En los organismos pluricelulares con diferentes rganos y tejidos est claro
que existe un reparto de las funciones, de manera que las clulas de
diferentes tejidos llevan a cabo distintas misiones y para ello necesitan
sintetizar diferentes tipos de protenas. De forma que un hepatocito (clula
del hgado) produce una coleccin de protenas diferentes a las de un
reticulocito. Por consiguiente, en los diferentes tejidos de un individuo
pluricelular adulto, se estn expresando distintas bateras de genes.
 MARCO TERICO

REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN BACTERIAS

En las bacterias, a pesar de ser organismos unicelulares, tambin es
necesario regular la expresin de los genes adaptndola a las necesidades
ambientales. Es un principio de economa celular el que la expresin de los
genes este regulada segn las circunstancias celulares. Un buen ejemplo de
esta situacin en bacterias es la regulacin de las enzimas implicadas en el
metabolismo de los azcares. Las bacterias pueden emplear para obtener
energa distintas fuentes de carbono, como la glucosa, lactosa, galactosa,
maltosa, ramnosa y xilosa. Existen enzimas capaces de introducir cada uno
de estos azcares en la bacteria y enzimas capaces de romperlos para
obtener energa. Lgicamente, sera un despilfarro energtico producir
simultneamente todos los enzimas necesarios para metabolizar los
diferentes azcares mencionados. Por consiguiente, sera mucho ms
econmico para la clula producir solamente las enzimas necesarias en
cada momento, es decir, si en el medio en el que vive la bacteria la principal
fuente de carbono es la lactosa, solamente se expresaran los genes
necesarios para metabolizar la lactosa, mientras que los otros genes no se
expresaran. Por tanto, es esencial que exista un mecanismo de regulacin
de la expresin gnica, de manera que los genes se expresen cuando sea
necesario.
La regulacin de la produccin de protenas (sntesis de protenas)
considerando el proceso en su conjunto, puede llevarse a cabo en tres
niveles:
Replicacin

Transcripcin

Traduccin.

De los tres niveles de regulacin, uno de los mejor conocidos actualmente

es la regulacin durante la transcripcin. Aunque la regulacin de la
transcripcin en eucariontes es ms compleja que en bacterias, muchos de
sus aspectos son similares. Por tanto, comenzaremos por el estudio de la
regulacin de la transcripcin en bacterias.

SISTEMAS CONSTITUTIVOS Y SISTEMAS ADAPTATIVOS

Es evidente que existen algunos procesos metablicos que son necesarios
para el funcionamiento normal de casi todas las clulas, de manera que
existen una serie de necesidades bsicas para el mantenimiento normal de
una clula. Por consiguiente, los genes que codifican para las enzimas
necesarias para el metabolismo bsico celular se estn expresando
continuamente, es decir, se expresan de forma constitutiva o continua. Por
tal motivo, a este tipo de genes se les denomina, "genes que guardan la
casa" o genes constitutivos. Estos genes que se estn expresando
continuamente no significa que su actividad no est regulada, simplemente
estn sometidos a un tipo de regulacin diferente que hace que se estn
expresando siempre. Los genes constitutivos codifican para sistemas
enzimticos constitutivos, que se necesitan siempre para la actividad
normal de la clula.
Frente a los genes constitutivos, nos encontramos con los genes que se
expresan solamente en determinadas situaciones y que, por consiguiente,
codifican para enzimas que solamente se necesitan en momentos
concretos. A este tipo de genes se les llama genes adaptativos y a las
enzimas codificadas por ellos, sistemas enzimticos adaptativos. Se
denominan as pensando en que se expresan cuando la clula se adapta a
una determinada situacin ambiental. En algunos libros de texto se
denomina a este tipo de genes, genes regulados, sin embargo, esta
nomenclatura no es demasiado buena, ya que parece que los nicos genes
cuya expresin est regulada seran estos.

SISTEMAS INDUCIBLES Y SISTEMAS REPRESIBLES

Sistemas inducibles: cuando el sustrato sobre el que va actuar la enzima
provoca la sntesis del enzima. Al efecto del sustrato se le
denomina induccin positiva. Por ejemplo, en E. coli en ausencia de
galactsido (sustrato) hay de una diez unidades de galactosidasa (enzima)
por miligramo de materia seca, mientras que en presencia de galactsido
se detectan hasta 10.000 unidades de galactosidasa por miligramo de
materia seca. Al compuesto que desencadena la sntesis del enzima se le
denomina Inductor.
Sistemas represibles: cuando el producto final de la reaccin que cataliza
el enzima impide la sntesis de la misma. Este fenmeno recibe el nombre
de induccin negativa. Al compuesto que impide la sntesis del enzima se
le denomina correpresor.
Los sistemas inducibles se corresponden a procesos catablicos de
degradacin, por ejemplo, el opern lactosa, el opern arabinosa, el opern
maltosa. Se trata de sistemas enzimticos encargados de degradar la
lactosa, arabinosa, maltosa, etc.
Los sistemas represibles se corresponden con procesos sntesis o
Anabolismo, por ejemplo el opern triptfano y el opern histina. Se trata de
las rutas metablicas que conducen a la sntesis de triptfano y sntesis de
histidina.

CONTROL POSITIVO Y CONTROL NEGATIVO

Control positivo: Se dice que un sistema est bajo control positivo cuando
el producto del gen regulador activa la expresin de los genes, acta como
un activador.
Control negativo: se dice que un sistema est bajo control negativo
cuando el producto del gen regulador reprime o impide la expresin de los
genes, acta como un represor.

ELEMENTOS DEL OPERN

Jacob, Monod y colaboradores analizaron el sistema de la lactosa en E. coli,
de manera que los resultados de sus estudios permitieron establecer el
modelo gentico del Opern que permite comprender como tiene lugar la
regulacin de la expresin gnica en bacterias. Jacob y Monod recibieron en
1965 el Premio Nobel pos estas investigaciones.

Francois Jacob Jacques Monod

Un Opern es grupo de genes estructurales cuya expresin est regulada
por los mismos elementos de control (promotor y operador) y genes
reguladores.
Los principales elementos que constituyen un opern son los siguientes:
Los genes estructurales: llevan informacin para polipptidos. Se
trata de los genes cuya expresin est regulada. Los operones
bacterianos suelen contener varios genes estructurales, son
polignicos o policistrnicos. Hay algunos operones bacterianos que
tienen un solo gene estructural. Los operones eucariticos suelen
contener un slo gen estructural siendo monocistrnicos.
El promotor (P): se trata de un elemento de control que es una
regin del ADN con una secuencia que es reconocida por la ARN
polimerasa para comenzar la transcripcin. Se encuentra
inmediatamente antes de los genes estructurales. Abreviadamente se
le designa por la letra P.
El operador (O): se trata de otro elemento de control que es una
regin del ADN con una secuencia que es reconocida por la protena
reguladora. El operador se sita entre la regin promotora y los genes
estructurales. Abreviadamente se le designa por la letra O.
El gen regulador (i): secuencia de ADN que codifica para la
protena reguladora que reconoce la secuencia de la regin del
operador. El gen regulador est cerca de los genes estructurales del
opern pero no est inmediatamente al lado. Abreviadamente se le
denomina gen i.
 Protena reguladora: protena codificada por el gen regulador. Est
protena se une a la regin del operador.
Inductor: sustrato o compuesto cuya presencia induce la expresin
de los genes.

Elementos del opern lactosa

Promotor
Elementos de
control
Operador

Elementos que Protenas reguladoras

intervienen en la Molculas
Efectores
regulacin de la difusibles
expresin gnica en Inductores
bacterias. Elementos
del Opern. Genes
Codifican para polipptidos
Estructurales

Codifica para protena

Gen regulador
reguladora

EL OPERN LACTOSA: CONTROL NEGATIVO

El Opern lactosa, que abreviadamente se denomina Opern lac, es un
sistema inducible que est bajo control negativo, de manera que la protena
reguladora, producto del gen regulador i, es un represor que impide la
expresin de los genes estructurales en ausencia del inductor. El inductor
del sistema es la lactosa. Como veremos ms adelante, el opern
lac tambin est bajo control positivo, ya que existe otra protena que
estimula la transcripcin de los genes estructurales.
Los genes estructurales del opern lactosa son los siguientes:
El gen z+: codifica para la b-galactosidasa que cataliza la hidrolisis
de la lactosa en glucosa ms galactosa.
El gen y+: codifica para la galactsido permeasa que
transporta b-galactsidos al interior de la clula bacteriana.
El gen a+: codifica para la tiogalactsido transacetilasa que
cataliza la transferencia del grupo acetil del acetil Coenzima A al 6-
OH de un aceptor tiogalatsido. Este gen no est relacionado con el
metabolismo de la lactosa.
El verdadero inductor del sistema es la Alolactosa y no la lactosa de
manera que la -galactosidasa transforma la lactosa en Alolactosa. En
los estudios del opern lactosa se utiliza como inductor un anlogo sinttico
de la lactosa que es el Isopropil tiogalactsido (IPTG). El IPTG no
necesita ser transportado por la galactsido permeasa para entrar en la
bacteria.
Las cepas normales de E. coli son inducibles, de manera que en ausencia
del inductor (la lactosa), la protena represora producto del gen i se
encuentra unida a la regin operadora e impide la unin de la ARN-
polimerasa a la regin promotora y, como consecuencia, no se transcriben
los genes estructurales.

Opern lactosa en ausencia de lactosa

Sin embargo, en presencia del inductor (la lactosa), este se une a la
protena reguladora que cambia su conformacin y se suelta de la regin
operadora dejando acceso libre a la ARN-polimerasa para que se una a la
regin promotora y se transcriban los genes estructurales. Por consiguiente,
la presencia del inductor hace que se expresen los genes estructurales del
opern, necesarios para metabolizar la lactosa.

Opern lactosa en presencia de lactosa

Tambin es conveniente recordar que los tres genes estructurales del
opern lactosa se transcriben juntos en un mismo ARNm, es decir que los
ARN mensajeros de bacterias suelen serpolicistrnicos, polignicos o
multignicos. Sin embargo, en eucariontes los mensajreos suelen
sen monocistrnicos o monognicos, es decir, corresponden a la
transcripcin de un solo gen estructural.

Opern lactosa: ARNm multignico o policistrnico

En la siguiente tabla se muestra la expresin de los genes del opern
lactosa en ausencia y en presencia del inductor (lactosa) en una bacteria
normal i+ p o z+y+a+. SI = significa que se expresan, NO = significa que no
se expresan.

Expresin de los genes estructurales del Opern lactosa

Bacteria
normal Ausencia de inductor (Sin Presencia de inductor (Con
lactosa) lactosa)

Genotipo z+ y+ a+ z+ y+ a+

i+ p o
NO NO NO SI SI SI
z+y+a+

El conocimiento profundo del funcionamiento del opern lactosa se obtuvo

gracias a la obtencin de mutantes que afectaban a los genes estructurales,
a los elementos de control (promotor y operador) y al gen regulador.
Adems, tambin fue muy importante el estudio del opern lactosa en
bacterias diploides parciales o merocigotos.
Bacteria diploide parcial o merocigoto: bacteria que tiene parte de sus
genes en dos dosis. Lo habitual en las bacterias es que los genes estn en
una sola dosis, ya que se trata de individuos haploides. Sin embargo, a
veces es posible mediante conjugacin entre una bacteria donadora F + y
una receptora F-, obtener bacterias descendientes diploides parciales o
merocigotos. Sin embargo, estos diploides parciales son inestables. Por tal
motivo, fue muy importante el descubrimiento de bacterias F' que tienen en
el factor sexual (plasmidio) parte del cromosoma principal bacteriano. En el
caso del estudio del opern lactosa, se consiguieron factores F' que tenan
incorporado exclusivamente los genes del opern lactosa. De esta forma,
una bactera con un factor F' de estas caractersticas tiene dos veces los
genes del opern lactosa, una en el cromosoma principal y otra en el factor
F'.
Los primeros mutantes fueron aislados por Lederberg y colaboradores y
afectaban a los genes estructurales (z, y, a). Se dedujo que los estos genes
estaban juntos y en el orden z-y-a. Los mutantes en estos genes se
denominan z-, y- e a- y ,dan lugar a alteraciones en la estructura de las
enzimas codificadas por estos genes.
Jacob y Monod aislaron bacterias mutantes i- y OC que afectan al gen
regulador (i) que lleva informacin para la protena reguladora y a la regin
operadora (O), respectivamente. Ambos son mutantes de tipo constitutivo.
Mutantes constitutivos: son aquellos en los que siempre se expresan o
transcriben los genes del opern lactosa, independientemente de si est o
no est presente el inductor.
La mutacin constitutiva i- altera la estructura de la protena
reguladora o protena represora de manera que ya no es capaz de
unirse a la regin operadora. Por tanto, esta alteracin afecta a la
 regin de la protena represora encargada de unirse al operador. Al no
poder unirse la protena represora al operador, la regin promotora
queda asequible para la ARN polimerasa y se produce la transcripcin
de los genes estructurales en ausencia de inductor (lactosa). La
protena represora es un tetrmero (cuatro cadenas polipeptdicas
idnticas).
La mutacin constitutiva en el operador (OC), consiste en una
alteracin en la secuencia de bases nitrogenadas de la regin del
Operador que tienen como consecuencia que la protena reguladora
producto del gen i ya no sea capaz de unirse al operador. Al no poder
unirse la protena represora al operador, la regin promotora queda
asequible para la ARN polimerasa y se produce la transcripcin de los
genes estructurales en ausencia de inductor (lactosa). El estudio de
diferentes mutantes del operador ha permitido determinar que el
operador es una regin de 17 a 25 nucletidos situada justo antes del
gen z y despus del promotor. Esta regin muestra una enorme
especificidad por la protena represora.
Es importante destacar que tanto la mutacin i- como la OC actan
simultneamente sobre los tres genes estructurales del opern lactosa. En
la siguiente tabla se indica la expresin de los genes del opern lactosa en
los dos mutantes constitutivos estudiados, en el regulador constitutivo (i- )
y en el operador constitutivo (OC).

Expresin de los genes estructurales del Opern

Mutantes lactosa
constitutiv
os Ausencia de inductor (Sin Presencia de inductor (Con
lactosa) lactosa)

Genotipo z+ y+ a+ z+ y+ a+

i- P
SI SI SI SI SI SI
OC z+y+a+

i+P
SI SI SI SI SI SI
O z+y+a+

Tambin es importante conocer lo que sucede en los diploides parciales o

merocigotos que contienen una regin operadora normal y una regin
operadora mutante constitutiva, es decir, bacterias diploides parciales O/OC.
 Diploide parcial: opern lactosa
En estos diploides parciales, se ha comprobado que el operador constitutivo
es dominante en posicin CIS, es decir, ejerce su efecto solamente sobre
los genes estructurales que estn en su misma molcula de ADN que la
mutacin del operador, pero no acta sobre los genes estructurales de otra
molcula de ADN. Esto significa que el operador es una secuencia de bases
en el ADN que no codifica para ninguna molcula difusible. En el siguiente
diploide parcial i+ P O z+y+a+/ i+ P OC z+y+a+ tanto en ausencia como en
presencia de lactosa se produce la expresin de los tres genes estructurales
del opern. Esto se debe a que los genes estructurales que estn en la
misma molcula de ADN que la mutacin constitutiva OC se van a expresar
siempre. En el siguiente esquema se indica lo que sucede en un diploide
parcial O/OC en ausencia de inductor.
 Diploide parcial O/OC: Sin Inductor (lactosa)
En el siguiente esquema se indica lo que sucede en un diploide
parcial O/OC en presencia de inductor.
Sin embargo, en los diploides parciales con un gen regulador normal y un
gen regulador mutante constitutivo, es decir, en baterias diploides
parciales i+/i-, el gen regulador normal i+ esdominante en posicin
TRANS, es decir, ejerce su efecto sobre los genes estructurales de la misma
molcula de ADN en que est la mutacin del gen regulador y tambin
sobre los genes estructurales de otra molcula de ADN diferente. Por tanto,
el gen regulador codifica para una protena o producto difusible que puede
ejercer su efecto en diferentes molculas de ADN. En el siguiente diploide
parcial i+P O z+y+a+/ i- P O z+y+a+ en ausencia de lactosa no hay expresin
de los genes estructurales mientras que en presencia de lactosa si se
expresan. Esto se debe a que la protena represora normal producida por el
gen i+ al ser difusible se puede unir a ambas regiones operadoras. En el
siguiente esquema se indica lo que sucede en un diploide parciali+/i- en
ausencia de inductor de inductor.

Diploide parcial i+/i-: Sin Inductor (lactosa)

En la siguiente tabla se indica la expresin de los genes del opern lactosa
en los dos diplides parciales, uno con en el regulador constitutivo (i- ) y el
otro con en el operador constitutivo (OC).

Expresin de los genes estructurales del

Opern lactosa
Diploides parciales
Presencia de
Ausencia de inductor
inductor (Con
(Sin lactosa)
lactosa)

Genotipo z+ y+ a+ z+ y+ a+

i+ P O z+y+a+/ i+ P SI SI SI SI SI SI
OC z+y+a+

i+P O z+y+a+/ i- P O z+y+a+ NO NO NO SI SI SI

Mutantes del Promotor (OO): estos mutantes presetan una alteracin en

la secuencia de bases nitrogenadas de la regin promotora, como
consecuencia la ARN-polimerasa no reconoce la secuencia promotora y, por
consiguiente, no se produce la transcripcin de los genes estructurales. A
estos mutantes se les ha denominado "Operador cero" (OO), pero es
necesario recordar que afectan a la regin promotora.
Adems de los mutantes anteriormente indicados tambin se han obtenido
otros tipos de mutantes que afectan al gen regulador. Entre estos mutantes
se encuentran los siguientes:
Mutante i-: la primera mutacin que hemos visto es el
mutante i- que ya hemos dicho que es recesivo con respecto al i+ en
los diploides parciales(i+/i-). Da lugar a un represor que es inactivo.
Mutante iQ: mutacin en el promotor del gen regulador que codifica
para la protena reresora (iQ): la consecuencia es que no aparece
protena represora y, por tanto, siempre se estn expresando los
genes del opern lactosa tanto en ausencia como en presencia del
inductor. Se trata, por consiguiente, de un mutante de tipo
constitutivo.
Mutante i-d: afecta al gen estructural de la protena represora en la
regin que codifica para el extremo amino terminal (NH2). Esta regin
es la encargada de reconocer la regin operadora. La protena
represora mutante se une al inductor (al IPTG) pero no es capaz de
unirse al operador. Esta mutacin es dominante sobre la i+ en los
diploides parciales (i+/i-d). En los diploides parciales la protena
represora mutante no se une a las regiones operadoras y se produce
siempre la trasncripcin de los genes estructurales.
Mutante iS: afecta al gen estructural de la protena represora
modificando la parte central de la protena encargada de unirse al
inductor (al IPTG). La protena represora mutante se une al operador
pero no es capaz de reconocer al inductor (IPTG). Se trata de un
mutante que est siempre reprimido en el que no se expresan los
genes del opern lactosa ya que la protena represora est
permanentemente unida a la regin operadora y no se suelta a pesar
de aadir el inductor. Este mutante es dominante sobre i+ en los
diploides parciales (i+/iS). En los diploides parciales el represor
mutante se une a ambas regiones operadoras bloqueando la
transcripcin de los genes estructurales.
El comportamiento de las mutaciones i-d e iS en los diploides parciales se
explica mejor sabiendo que la protena represora del opern lactosa es un
tetrmero (protena constituida por cuatro cadenas polipptdicas idnticas
con un peso molecular cada una de 38.000). En el diploide parcial (i+/iS) ,los
tetrmeros con polipptidos mutantes estaran unidos a las regiones
operadora acaparndolas de forma permanente e impidiendo la
transcripcin. En el diploide parcial (i+/i-d) los polipptidos normal y mutante
se unen al azar para formar tetrmeros, de manera que la mayora de los
tetrmeros tienen al menos un polipptido mutante (15/16) y solamente una
pequea fraccin de los tetrmeros tiene todos los polipptidos normales
(1/16), por tanto, la inmensa mayora de los tetrmeros no son capaces de
unirse a las regiones operadoras y se transcribiran los genes estructurales.

OPERN LACTOSA: CONTROL POSITIVO

Como ya he mencionado anteriormente, el opern lactosa tambin est
sujeto a un control de tipo positivo, de manera que existe una protena que
estimula la transcripcin de los genes estructurales. En los sistemas de
control negativo existe una protena que que impide la transcripcin de los
genes estructurales, en los sistemas de control positivo existe una prtena
activadora que estimula la transcripcin de los genes. En principio existen
cuatro tipos de sistemas posibles de regulacin de la expresin gnica:
Tipo 1: Inducible, control negativo (opern lactosa y opern
galactosa)
Tipo 2: Inducible, control positivo (opern arabinosa y opern
maltosa)
Tipo 3: Represible, control negativo (opern triptfano y opern
histidina)
Tipo 4: Represible, control positivo (no se han descrito)

Por supuesto, un opern pude estar sujeto a ms de un tipo de control,

como sucede en el caso del opern lactosa que esta bajo control negativo
ejercido por la protena represora y bajo control positivo ejecutado
por una protena activadora por catabolitos (CAP) tambin
llamada protena activadora del AMP cclico (CRP). El control positivo
del opern lactosaa como veremos est estrechamente relacionado con
la Represin catablica.

REPRESIN POR CATABOLITOS

Cuando la bacteria E. coli crece en un medio que contiene glucosa, prefiere
este azcar como fuente de energa y como consecuencia los operones que
ponen producen las enzimas necesarias para obtener energa de otros
azcares estn bloqueados. Uno de los catabolitos del metabolismo de la
glucosa acta sobre el AMP cclico (AMPc). El AMP cclico (AMPc) es
necesario para la transcripcin de todos los operones que son inhibidos por
el catabolismo de la glucosa. Es decir, para que se transcriban los genes del
opern lactosa se necesitan niveles elevados de AMPc. Esto mismo sucede
con los operones de arabinosa, maltosa, galactosa, etc.. Se trata. por tanto
de un sistema general de control positivo que se denomina represin
catablica. Cuando E. coli crece en un medio con glucosa, los niveles de
AMPc son muy bajos y como consecuencia no se transcriben los operones
de otros azcares. An no se conoce el motivo por el que los niveles de
AMPc son bajos cuando E. coli crece en un medio con glucosa como fuente
de energa.
Cuando E. coli crece en un medio sin glucosa pero con lactosa los niveles
de AMPc son altos, el AMPc se une a la protena receptora receptora de
AMPc (CRP) activndola y la protena activada CRP-AMPc a su vez
estimula la transcripcin de los genes estructurales del opern lactosa y de
otros operones de azcares. La protena activadora por catabolitos
(CAP) es un dmero que al unirse al AMPc se activa y estimula la
transcripcin de los genes del opern lactosa, de manera que la protena
activadora CAP-AMPc es necesaria para la unin de la ARN-polimerasa al
promotor de los genes del opern lactosa. La protena activadora CAP-AMPc
parece ser que se une a la regin promotora cerca del nucletido que ocupa
la posicin -60 (60 nucletidos antes del comienzo del gen z).
Los mutantes que afectan a la adenilato ciclasa, enzima que transforma el
ATP en AMPc, muestran niveles muy bajos de expresin de los genes del
opern lactosa, debido a que los niveles de AMPc son muy bajos en
ausencia de glucosa.
Los mutantes que afectan a la protena CRP o CAP tambin presentan
niveles muy bajos de expresin de los genes del opern lactosa en ausencia
de glucosa.

EL OPERN TRIPTFANO
El opern triptfano (opern trp) es un sistema de tipo represible, ya que el
aminocido triptfano (Correpresor) impide la expresin de los genes
necesarios para su propia sntesis cuando hay niveles elevados de
triptfano. Sin embargo, en ausencia de triptfano o a niveles muy bajos se
transcriben los genes del opern trp. Los elementos del opern trp son en
esencia semejantes a los del opern lactosa:
Genes estructurales: existen cinco genes estructurales en el
siguiente orden trpE-trpD-trpC-trpB-trpA.
Elementos de control: promotor (P) y operador (O). El promotor y el
operador estn al lado de los genes estructurales y en el siguiente
orden: P O trpE-trpD-trpC-trpB-trpA. Curiosamente, las enzimas
codificadas por estos cinco genes estructurales actan en la ruta
metablica de sntesis del triptfano en el mismo orden en el que se
encuentran los genes en el cromosoma.
Gen regulador (trpR): codifica para la protena reguladora. Este
gen se encuentra en otra regin del cromosoma bacteriano aunque
no muy lejos del opern.
Correpresor: triptfano.

En el siguiente esquema se indican los elementos del Opern Triptfano:

 Elementos del Opern Triptfano
Los genes estructurales del opern triptfano se encuentran en el mismo
orden que actan las productos codificados por ellos en la ruta biosinttica
del triptfano (ver el siguiente esquema).

Orden de los genes estructurales del opern triptfano y ruta de sntesis del
triptfano
En ausencia de triptfano, o cuando hay muy poco, la protena reguladora
producto del gen trpR no es capaz de unirse al operador de forma que la
ARN-polimerasa puede unirse a la regin promtora y se transcriben los
genes del opern triptfano.
 Opern triptfano: en ausencia de triptfano
En presencia de triptfano, el triptfano se une a la protena reguladora o
represora cambiando su conformacin, de manera que ahora si puede
unirse a la regin operadora y como consecuencia la ARN-polimerasa no
puede unirse a la regin promotora y no se transcriben los genes
estructurales del opern trp.

Opern triptfano: en presencia de triptfano

Por tanto, la diferencia esencial entre el opern lac (inducible) y el opern
trp (represible), es que en este ltimo el represor del triptfano solamente
es capaz de unirse al operador cuando previamente est unido al trp.
Al estudiar ms profundamente el opern trp se encontr que adems del
mecanismo de regulacin represor-operador exista otro mecanismo de
regulacin que se denomin regulacin por atenuacin.
EL OPERN TRIPTFANO: REGULACIN POR ATENUACIN
Cuando Yanosfky analiz mutantes que afectaban al gen trpR que codifica
para la protena represora y que continuaban produciendo ARNm del opern
trp an en presencia de triptfano, observ que la eliminacin del triptfano
del medio produca un aumento casi de 10 veces en la produccin del ARNm
del opern trp, incluso aunque el represor estuviera inactivo. Yanofsky
identific la regin del ADN responsable de este aumento en la produccin
del ARNm del opern trp. Demostr que estos mutantes tenan una delecin
entre el operador y el primer gen estructural, el gen E.

La secuencia atenuadora se encuentra en la regin lder

Secuencia de bases de la regin atenuadora y comienzo de la

secuencia del gen trpE
Yanofsky aisl el ARN-m multignico del opern trp y secuenci la regin del
extremo 5 encontrando una regin lder del 160 bases que no se traduce a
aminocidos. Esta secuencia se encuentra antes del primer triplete que se
transcribe. Cuando analiz la secuencia correspondiente en el mutante que
siempre produce niveles mximos de trp, detect una delecin de una 30
bases que se extenda desde la posicin 130 a la 160. Yanofsky
llam atenuador a la regin del ADN inactivada por la delecin, ya que su
presencia conduce aparentemente a disminuir la tasa de transcripcin.
Yanofsky comprob utilizando mutantes trpR- que incluso en presencia de
altos niveles de trp, que deberan hacer que la regin atenuadora redujera
en 10 veces la tasa de transcripcin, se seguan transcribiendo las primeras
141 bases de la regin lder del ARN-m del opern trp, aunque el ARN-m de
longitud normal solo apareca a un nivel 10 veces menor. De forma, en
presencia de altos niveles de trp las primeras 141 bases se transcriben al
mximo, pero por el mecanismo de atenuacin que tiene lugar en esa
regin, solamente uno de cada 10 ARNm se transcribe hasta el final. Por
consiguiente, la regin atenuadora acta como una regin terminadora de la
transcripcin en presencia de triptfano, mientras que en ausencia de
triptfano el atenuador se desactiva y todas las molculas de ARNm se
completan.
La regin lder del opern triptfano se caracteriza por tener una sede de
reconocimiento para los ribosomas y los codones de 14 aminocidos, entre
ellos dos residuos de triptfano. Adems, la siguiente regin puede formar
una estructura secundaria palindrmica en forma de lazo u horquilla.
Cuando los niveles de triptfano son altos, la traduccin de la primera parte
del segmento lder del mensajero impide de alguna manera la transcripcin
ms all de la estructura secundaria. Cuando los niveles de triptfano son
bajos disminuye o cesa la traduccin del polipptido sintetizado por la
secuencia lder, permitiendo que la ARN polimerasa transcriba el opern
completo. Aunque no se conoce la forma en la que tiene lugar la
terminacin anticipada, es posible que los ribosomas que traducen la regin
lder produzcan la desaparicin de la estructura secundaria de la segunda
parte de la regin lder y se produzca el reconocimiento de esta regin por
el factor de terminacin.

Estructura secundaria de la regin lder

 Esquema de lo que sucede con niveles altos (b) y
bajos (c) de triptfano
La regulacin por atenuacin probablemente tiene lugar en otros operones
bacterianos relacionados con la sntesis de aminocidos, ya que en todos los
casos el segmento inicial del polipptido transrcito es rico en el aminocido
que controla dicho opern. Cuando hay poca cantidad del aminocido
correspondiente la traduccin del pptido lder se detiene en los codones
correspondientes al mismo el tiempo suficiente para que se formen las
estructuras secundarias que permiten que la ARN polimerasa pueda
continuar con la transrcipcin.

Porcin que se traduce de la regin lider del opern triptfano

Porcines que se traducen de las regiones lder de los operones de
Fenilalanina (a) e Histidina (b)

INTERACCIN ENTRE OPERONES

Es obvio que en las clulas existen muchos genes que estn sometidos a
diferentes sistemas de regulacin. Si nos fijamos en dos sistemas
enzimticos cualesquiera, puede darse los siguientes casos:
Que ambos sean dependientes: de manera que la presencia de uno
de ellos sea necesaria para la presencia del otro.
Que sean excluyentes: la presencia de uno impide la presencia del
otro.
Que sean alternativos: la presencia de uno no depende de la
presencia del otro.
Esta situacin puede explicarse suponiendo que los productos finales
catalizados por los diferentes enzimas acten como inductores o
correpresores del otro sistema. Por ejemplo, el producto de un enzima
induce la expresin de los genes de otro sistema enzimtico, o por el
contrario, el producto de otra enzima impide la expresin de los genes de
otro sistema enzimtico.
Por consiguiente, las interacciones entre operones son algo frecuente en los
seres vivos y hacen ms complejo el entendimiento de la regulacin de la
expresin gnica.

REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN FAGOS

Los bacteriofagos son virus que infectan a bacterias que han desarrollado a
lo largo de la evolucin mecanismos cada vez ms eficientes para poner a
su servicio la maquinaria de las clulas bacterianas a las que infectan, de
forman que ponen a su servicio la sntesis de ADN y la sntesis de protenas.
Por tanto, el conocimiento profundo de los sucesos que tienen lugar durante
la infeccin de una bacteria por un fago, nos indicar que genes del fago se
estn expresando para llevar a cabo su ataque y en qu momento lo hacen.
Los fagos han desarrollado diferentes sistemas para infectar a las bacterias.
Los principales mecanismos utilizados por los fagos para dirigir la sntesis
del ADN y de protenas de la bacteria a la que infectann ponindola a su
servicio son los siguientes:
Sntesis de una nueva ARN polimerasa (Fago T7)
 Sntesis de subunidades de nueva formacin de la ARN polimerasa
(Fago SP01)
Produccin de protenas activadoras o represoras de los operones del
fago (Fago l)
Seguidamente vamos a ver unos ejemplos de Regulacin temporal o
Regulacin encascada que tienen lugar durante la infeccin de los fagos T7,
SP01 y fago l.

REGULACIN DEL FAGO T7

Vamos a comenzar con un ejemplo de regulacin de la expresin gnica en
virus en el que el mecanismo empleado es la sntesis de una nueva ARN
polimerasa a partir del ADN del virus.
El fago T7 tiene una relacin de tipo ltico con la bacteria E. coli, su ADN
doble hlice lineal de 12 micras de longitud carece de extremos
redundantes. Los genes del fago T7 estn organizados en tres tipos o grupos
de genes que se denominan:
Genes de la clase I: entre otros los genes 0.3 (Metilasa, vence el
sistema restriccin de la bacteria), 0.7 (Protena quinasa), 1 (ARN
polimerasa) y 1.3 (ADN ligasa).
Genes de la clase II: entre oltros los genes 2 (Sntesis de ADN), 3
(Endonucleasa), 3.5 (Lisozima, 4 (Sntesis de ADN), 5 (ADN
polimerasa) y 6 (Exonucleasa).
Genes de la clase III: entre otros los genes 10 (Protina principal de
la cpside), 11, 12 y 17 (Protenas de la cola), 13 (Protena interna),
14, 15 y 16 (Protenas de la cpside), 18 y 19 (Maduracin del ADN).
En el siguiente esquema se indica la disposicin d estos tres tipos de genes
en el ADN lineal del fago T7:
 Esquema de los genes del Fago T7
Cuando el fago T7 inyecta su ADN en el interior de E. coli, la ARN polimerasa
de la bacteria reconoce tres promotores que se encuentran en el extremo
del ADN del fago junto a los genes de la clase I. Los genes de la clase I
tambin reciben el nombre de genes tempranos por ser los primeros en
expresarse. El ARN mensajero policistrnico que se produce contiene los
siguientes cinco genes: 0.3, 0,7, 1, 1.1 y 1.3. Entre estos genes es preciso
destacar al gen 1, ya que lleva informacin para una nueva ARN polimerasa
de origen viral que reconoce al resto de los promotores de los genes de la
clase II y de la clase III. La protena quinasa producto del gen 0.7 fosforila la
ARN polimerasa de la bacteria e impide su funcionamiento, de manera que
una vez trasncritos los genes de la clase I del fago T7, dejan de transcribirse
los genes bacterianos.
Posteriormente, la nueva ARN polimerasa transcribe los genes de la clase II,
tambin denominados genes medios. Dichos genes estn relacionados con
la replicacin del ADN del virus (2, 4 y 5) y con ls degradacin del ADN
bacteriano (genes 3 y 6) y lisis de la bacteria (gen 3.5).
Por ltimo, la nueva ARN polimerasa transcribe los genes de la Clase III
tambin llamados genes tardos. Dichos genes codifican para protenas de la
cabeza, de la cola, protenas de maduracin del ADN y protenas necesarias
para el ensamblaje final de las partculas virales.
Como se puede observar, los genes del fago T7 se encuentran situados en
el cromosoma en el mismo orden en el que se expresan, producindose
una Regulacin temporal o Regulacin en cascada que implica un orden de
expresin de los genes que va de los genes de la clase I (tempranos), pasa a
los genes de la clase II (medios) y termina con los genes de la clase III
(tardos).

REGULACIN DEL FAGO SP01

El siguiente ejemplo que vamos a ver es el de un virus cuya estrategia
cuando infecta a las bacterias es producir subunidades nuevas que se unen
a la ARN polimerasa del la bacteria y modifican su capacidad para reconocer
a los promotores de los genes bacterianos.
Este es el caso del fago SP01 que infecta a la bacteria Bacillus subtilis. En
este virus tambin se distinguen tres tupos de genes en cuanto al orden
temporal de expresin:
Genes tempranos: los promotores de dichos genes son reconocidos
por la ARN polimerasa de la bacteria Bacillus subtilis y entre ellos se
encuentra el Polipptido 28. El polipptido 28 se une a la ARN
polimerasa de la bacteria que ahora es capaz de reconocer a los
promotores de los genes medios. Dicha polimerasa al interaccionar
con el polipptido 28 deja de reconocer a los promotores de los genes
bacterianos.
Genes medios: la ARN polimeras de la bacteria unida al polipptido
28 transcribe seguidamente los genes medios entre los que se
encuentran los polipptidos producto de los genes 33 y 34. Los
polipptidos producto de los genes 33 y 34 se unen a la ARN
polimerasa de la bacteria y reconocen los promotores de los genes
tardos.
Genes tardos: son los ltimos en expresarse.

En el siguiente esquema se indican los sucesos fundamentales que tienen

lugar durante la regulacin de la infeccin del fago SP01:
 Regulacin del Fago SP01
Como se puede observar, de nuevo se ha producido una expresin ordenada
en el tiempo de tres tipos de genes, por consiguiente se trata de
una Regulacin Temporal o Regulacin en cascada.

REGULACIN DEL FAGO l

El fago l posee ADN lineal doble hlice con extremos cohesivos. Cuando el
fago l infecta a E. coli pueden iniciarse dos respuestas diferentes:
Respuesta Ltica: el fago inyecta su ADN en el interior de la
bacteria, su ADN se replica, se sintetizan los distintos componentes
de la cpside y se lisa la bacteria liberndose nuevas partculas
virales.
Repuesta Lisognica: el fago inyecta su ADN en el interior de la
bacteria, El ADN se circulariza y posteriormente se integra en el ADN
principal de la bacteria en un punto concreto. Cuando el ADN del fago
est integrado se le denomina profago y se replica al mismo tiempo
que se replica el ADN bacteriano. A veces el profago se suelta del
ADN bacteriano, fenmeno denominado induccin, y despus se
replica y termina lisando a la bacteria.
Se pueden distinguir varias regiones en ADN lineal del fago l en base al tipo
o funcin de los genes que contiene cada una de ellas: regines con
funciones de regulacin, funciones de integracin (recombinacin) del ADN
del fago en el ADN bacteriano, regiones que contienen genes relacionados
con la replicacin del ADN, la lisis bacteriana, regiones con genes
relacionados con la maduracin del virus (regiones con genes para las
protenas de la cabeza y de la cola). En el siguiente esquema se indican ls
posiciones de las mutaciones letales y no letales adems de los
agrupamientos de genes con funciones relacionadas:
 Mapa del Fago l
El mecanismo que utiliza el fago para expresar sus genes es la produccin
de protenas activadoras o represoras de los operones del fago. Para
explicar la regulacin de este fago distinguiremos los siguientes aspectos:
Regulacin durante el ciclo ltico.

Regulacin durante el ciclo lisognico

Competencia entre lisis y lisogenia.

Induccin del profago.

Regulacin durante el ciclo ltico

El ciclo ltico consta de tres fases sucesivas que se corresponden con tres
rondas de trasncripcin:
Transcripcin temprano-inmediata

Trasncripcin temprano-retrasada

Trasncripcin tarda.

En la transcripcin temprano-inmediata la ARN polimerasa de E.coli se une

al promotor de la hlice derecha (P R) para transcribir hacia la derecha el
gen cro y al promotor de la hlice izquierda (PL) para transcribir la protena
N producto del gen N.
 Transcripcin temprano-inmediata de los genes N y cro
El gen cro est relacionado con la decisin lisis versus lisogenia, por tanto,
hablaremos ms tarde de l.
La protena N acta como activador de la transcripcin de los genes
temprano-retrasados que son cII, O, P y Q en la hlice R que se transcribe
hacia la derecha y del gen cIII en la hlice L que se transcribe hacia la
izquierda. El producto N impide que termine la transcripcin antes del gen Q
interaccionando con la ARN polimerasa antes de que se inicie la
transcripcin cerca de los promotores PR y PL.

Transcripcin temprano-retrasada
Los genes cII y cIII estn involucrados en la regulacin de la lisogenia. Sin
embargo, los genes O y P codifican para productos necesarios para la
replicacin del ADN. El producto del gen Qacta como activador de la
transcripcin de los genes tardos de manera semejanbte a comonel
producto del gen N. La transcripcin de los genes tardos incluye los
genes S y R que intervienen en la lisis bacteriana, los genes A, W, B, C, nu3,
D, E FI y FII involucrados en la sntesis y el ensamblaje de las protenas de la
cabeza del fago, y los genes Z, U, V, G, T, H, M, L, H, I y J necesarios para la
sntesis y ensamblaje de las protenas de la cola del virus. De esta manera
se completa el ciclo ltico del virus con la liberacin de nuevas partculas
virales, ya que se ha llevado a cabo la replicacin del ADN, sntesis y
ensamblaje de todas las protenas necesarias (cabeza y cola), la lisis y
maduracin.
El producto N es muy inestable de manera que su concentracin intracelular
disminuye rpidamente, de forma que para que se establezca el ciclo ltico
se necesita la expresin continua del genN.

Regulacin durante el ciclo lisognico

Como ya hemos visto en el apartado anterior, una vez que el fago ha
inyectado su ADN en el interior de la bacteria se produce la transcripcin
temprano- inmediata de los genes N y cro. Posteriormente el producto N
estimula la transcripcin de los genes cII en la hlice derecha (R) y del
gen cIII en la hlice izquierda (L). Los productos cII y cIII estimulan la
transcripcin del gen cI y del gen rex a partir del promotor PRE (promotor
para el establecimiento del represor). El gen cI codifica para
el represor I o represor del fago l. El producto cIII protege a la protena
cII de la proteolisis. La protena represora I bloquea las regiones
operadoras OR y OL e impide la transcripcin de los genes temprano-
inmediatos N y cro, y por tanto, tampoco se expresan los genesO,
P y Q (temprano-retrasados) ni los genes tardos necesarios para el ciclo
ltico. De esta forma se establece la lisogenia. Por tanto,
el represor I impide el ciclo ltico.
 Transcripcin de los genes cI y rex a partir del promotor
PRE
Ahora bien, el establecimiento de la lisogenia necesita adems que el ADN
del fago se integre en el ADN bacteriano. Se ha visto que los productos cII y
cIII estimulan la expresin de los genes necesarios para la integracin a
partir del promotor PINT situado en la regin att-exo.
El anlisis de los operadores OR y OL revela que estn formados por tres
regiones semejantes (OR1, OR2, OR3, OL1, OL2 y OL3), pero no idnticas, de
unas 17 pares de bases capaces de unirse de forma independiente
al represor I. Dichas regiones estn separadas entre si por regiones ricas
en pares A-T.

Detalle de las regiones operadoras OR y OL .

Competencia entre lisis y lisogenia

La produccin de la protena represora I se puede llevar a cabo a partir de
dos promotores diferentes. Como hemos visto la transcripcin del gen cI se
estimula por los productos cII y cIII a partir del promotor para el
establecimiento del represor, PRE . El gen cI tambin se transcribir
estimulado por el propio represor I a partir del promotor para el
mantenimiento del represor, PRM. En este ltimo caso, se trata de un
proceso de autorregulacin o regulacin autgena, en el que una propia
protena (represor I) regula su propia expresin.
 Transcripcin del gen cI a partir del promotor PRM
Si recordamos, cuando la lisogenia est establecida, el represor I impide la
transcripcin de los productos cII y cIII a partir de los promotores P R y PL . Por
tanto, la transcripcin del gen cI a partir del promotor P RM mantiene la
sntesis del represor I. Adems, el promotor solapa con la regin operadora
OR en la regin OR3 .
El represor del fago l (represor I) y el producto del gen cro (antirrepresor)
pueden bloquear los operadores OR y OL. El represor I es indispensable
para el mantenimiento de la lisogenia y el producto de cro es necesario para
la lisis. Para mantener la lisogenia (represin) tienen que dejar de
expresarse todos los genes implicados en el desarrollo viral (ciclo ltico) y
expresarse los genes del sistema de represin. El represor I consigue
realizar esta funcin mediante su autorregulacin y mediante su actividad
represora de los promotores PR y PL. Esta regulacin incluye el uso de las tres
regiones OR1, OR2 y OR3.
La respuesta ltica depende de la protena reguladora cro, cuya afinidad pos
las tres regiones operadoras es la siguiente: O R3 > OR2 = OR1. A bajas
concentraciones de cro se une preferentemente a OR3 que impide la
trascripcin de cI a partir del promotor PRM y estimula la transcripcin del
promotor PR. Concentraciones altas de cro bloquean las regiones OR2 y OR1
impidiendo su propia transcripcin.
La actuacin del represor I y del producto del gen cro (antirrepresor) puede
resumirse de la siguiente forma:
Respuesta lisognica: los dmeros del represor ocupan las sedes O R1 y
OR2 y dejan libre la OR3, como consecuencia se transcribe el gen cI y
no se transcribe el gen cro.
Cambio de respuesta lisognica a ltica (induccin): se inactiva
el represor I debido a la actividad protesica de la protena RecA
codificada por el gen reca que se activa por dao gentico en el ADN
(respuesta SOS). Disminuye la concentracin de dmeros del represor,
 quedan libres las sedes O R2 y OR1 como consecuencia deja de
transcribirse el gen cI y comienza a transcribirse el gen cro.

Induccin del profago

La integracin y la escisin del ADN del fago son tambin procesos clave de
la regulacin del ciclo del fago l. La integracin del ADN circular del fago se
produce por recombinacin en la regin att del ADN del virus y conduce a la
aparicin del profago (ADN integrado del virus). La situacin opuesta
consiste en la liberacin o escisin del ADN del fago que vuelve a ser ADN
doble hlice circular libre.
Se ha propuesto que la integracin y la escisin se llevaran a cabo a travs
de una regin de 15 pares de bases (regin central O) comn a las
sedes att del virus y de la bacteria. La secuencia de estos quince pares de
bases de la regin O y los puntos de corte es la siguiente: GCTTTTTTATA-
CTAA.
La integracin requiere solamente la actuacin de la protena int, mientras
que la escisin necesita de la actuacin de las protenas int y xis. Las
protenas cII y cIII son necesarias para producir altos niveles de la
protena int y para realizar una eficiente integracin.
Se ha propuesto que la protena int podra actuar como una endonucleasa
de restriccin que reconocera a la regin O y producira extremos cohesivos
en el ADN el fago y de la bacteria.