UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II

ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRCTICA ABRIL /2016

GGT
1. OBJETIVO: Determinar la concentracin de GGT en suero o plasma por el
mtodo Cintico UV.
2. DEFINICIONES:
GGT: Es una enzima catalizadora que se encuentra en grandes
cantidades en el hgado y pncreas y en menor cantidad en rin y
prstata.Su incremento en casos de ictericias obstructivas sus niveles
se elevan mas temprano se debe a un mecanismo de induccin
enzimtico, en cirrosis biliar, hepatitis aguda, en el alcoholismo sutil
para el diagnostico y manejo del alcohlico.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
3.1. Fundamento: El sustrato especifico paragamaglutamil es la gamaglutamil
3carboxi-3-carboxi-4-nitroanilida mas un aceptor de grupo carboxi y
ademas le da PH optimo mas glicilglicina
para darnos
gamaglutamilglicilglicina mas 5-amino-2-nitrobenzoato que se lee a 405
nm.
L-y-Glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida
L-y-glutamilglicilglicina

Glicilglicina

5-amino-2- nitrobenzoato

3.2. Muestra: Suero.

3.2.1. Cantidad: 100 ul.
3.2.2. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco.
3.3. Equipos, materiales y reactivos:
3.3.1. Equipos:
Centrifuga
Espectrofotmetro (Stat Fax)
Bao mara a 37C
Vortex
3.3.2. Materiales:
Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul
Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)
Reloj marcador

GGT

3.3.3. Reactivos:
Reactivo 1 (buffer)
Reactivo 2 (sustrato)
3.4. Procedimiento: Enumerar los tubos de la siguiente forma:
REACTIVOS

Reactivo de
trabajo
Muestra

BLANCO
1 ml
-

DESCONOCIDO
1 ml
100 ul

Preincubar 2 min a 37C.

Leer en el STAT FAX: N de prueba____.
Mezclar inmediatamente en el vortex y disparar el cronometro.
Tiempo de reaccin 2 min (Leer absorbancias a los 60 seg (X1) y 120 seg
(X2)).
Registrar los resultados e informar.
3.5. Valores de referencia:
Temperatura: 37 C
Hombres : 9 - 54 U/L
Mujeres : 8 - 35 U/L
Sustancias interferentes conocidas:
Suero con hemlisis visible o intensa.
No se observan interferencias por: bilirrubinas hasta 20mg/l y
hemoglobina hasta 100-500 mg/dl.
El uso de anticoagulantes.
Linealidad:
La reaccin es lineal hasta 800U/L
Para valores superiores, diluir con Sol. Fisiolgica y repetir la
determinacin. Multiplicar el resultado por el factor de dilucin
empleado.
Preparacin de reactivos de trabajo: Estndar listo para usar
Reactivo de trabajo: mezclando 5 partes del Rvo. 1 (1 ml) + 1 parte
del Rvo.2 (200 ul) de esta mezcla, medir 1ml del premezclado listo
para usar.
Los volmenes pueden ser modificados deacuerdo a la necesidad

Estabilidad y condiciones de almacenamiento:

La GGT en suero es estable 7 das de 2 a 25 C, 1 mes a 4C y 1
ao a (-20C).
Los reactivos 1 y 2 son estables de 2 a 8C hasta la fecha de
vencimiento indicada en la caja.
Una vez abiertos, no deben permanecer destapados y fuera del
refrigerador
durante de lapsos de tiempo prolongados, evitar
contaminaciones.
Reactivo de trabajo (premezclado): Es estable por 21dias de 2 a 8 C
a partir de su preparacin
Almacenamiento y estabilidad del suero:
La GGT en suero es estable 7 das de 2 a 25 C, 1 mes a 4C y 1 ao a (20C).
4. Clculos de los resultados:
GGT U/L = diferencia de Abs / min x factor
Factor a 37C =1.158

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SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II
ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRCTICA ABRIL /2016

FOSFATASA ALCALINA
1. OBJETIVO: Determinar la concentracin de Fosfatasa Alcalina en suero o
plasma por el mtodo Cintico UV.
2. DEFINICIONES:
Fosfatasa Alcalina: Es una enzima ampliamente distribuida en el
organismo, en el adulto proviene en parte del hgado, hueso, sistema
reticuloendotelial y vascular dando lugar a distintas izo enzimas,
alcanza su mayor actividad en nios en edad de crecimiento. Entre las
patologas: carcinomas metastsicos en hgado y hueso, colestasis
biliar, fenmenos osteoblasticos, etc.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
Fundamento: La fosfatasa alcalina (ALP o monoester orto fosfrico
fosfohidrolasa) hidroliza al p-nitrofenilfosfato que es incoloro, produciendo
fosfato y p-nitrofenol a pH alcalino. La velocidad de aparicin del anin pnitrofenolato (amarillo) a 405 nm, es proporcional
a la actividad
enzimtica de la muestra.
3.1. Muestra: Suero o plasma con heparina.
3.2. Cantidad: 100 ul.
3.2.1. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco.
3.3.
3.3.1.

Equipos, materiales y reactivos:

Equipos:
Centrifuga
Espectrofotmetro o(Stat Fax)
Bao mara a 37C


3.3.2.

3.3.3.

Vortex
Materiales:
Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul
Pipetas de 5, 10 ml
Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)
Reloj marcador
Reactivos:
Reactivos A (sustrato)
Reactivo B ( buffer)

4. Procedimiento: Enumerar los tubos de la siguiente forma:

REACTIVOS
Reactivo de
trabajo
Muestra

BLANCO
1 ml -

STANDAR
1 ml

DESCONOCIDO
1 ml

100 ul
Preincubar 2 min a 37C.
Leer en el STAT FAX: N de prueba 2.
Mezclar inmediatamente en el vortex y disparar el cronometro.
Tiempo de reaccin 2 min (Leer absorbancias a los 60 seg (X1) y 120 seg
(X2)).
Registrar los resultados e informar.

5. Valores de referencia:
Adultos : 65 - 300 U/L
Nios y adolescentes : hasta 645 U/L
6. ANEXOS:
Sustancias interferentes conocidas:
Suero o plasma con hemlisis visible o intensa.
No se observan interferencias por: bilirrubinas hasta 16 mg/l,
triglicridos hasta 1000 mg/dl, ni heparina hasta 50 UI/ml.
Hemolisis moderadas (hasta 200 mg/dl) no producen interferencias
pero hemolisis muy intensas pueden producir variaciones en los
resultados.
Las lecturas del reactivo de trabajo superior a 0.900 D.O. son indicio de
deterioro del mismo.

Linealidad
La reaccin es lineal hasta 1500 U/L
Para valores superiores, diluir con Sol. Fisiolgica 1/5 o 1/10 y repetir
la determinacin. Multiplicar el resultado por el factor de dilucin
empleado.
Preparacin de reactivos de trabajo:
Usar Reactivo de trabajo: mezclando 4 partes (4 ml) de Rvo. A + 1
parte (1ml) Rvo. B de acuerdo a la necesidad de trabajo los volmenes
pueden ser modificados.
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:
Los reactivos A y B son estables en refrigerador (2-10 C) hasta la
fecha de vencimiento indicada en la caja.
Una vez abiertos, no deben permanecer destapados y fuera del
refrigerador por periodos prolongados, evitar contaminaciones.
Reactivo de trabajo (premezclado): Es estable en refrigerador (2-10C)
por 1 mese a partir de la fecha de su preparacin.
Almacenamiento y estabilidad del suero:
La Fosfatasa Alcalina en suero es estable 6 Hrs. posteriores a su
obtencin, la muestra debe conservarse en el congelador.

7. Clculos de los resultados:

Fosfatasa Alcalina U/L = diferencia de Abs / min x factor
Factor = 6.812