Preparación de medios de cultivo para el establecimiento de semillas y explantes de
especies vegetales.
Rodriguez- Preciado Josue1
INTRODUCCION
El cultivo in vitro permite el crecimiento y desarrollo de
material vegetal en recipientes de vidrio (de ahí la palabra
vitro, que significa vidrio) y/o plástico transparente que lo
separan del ambiente exterior. El principal objetivo de esta
técnica consiste en cultivar un inoculo con potencial de
diferenciación bajo condiciones asépticas en presencia de
de nutrientes y freguladores de crecimiento. (Abdenlour y
Escalant, 1994). Una de las características principales del
cultivo in vitro, es contar con un medio de cultivo, ya que en
ellos se encuentran las sustancias necesarias para el
crecimiento y desarrollo de los tejidos vegetales, que
normalmente este hace un aporte de de agua, sales,
nutrientes, y dependiendo del objetivo, se agregan factores
de crecimiento de interés. Los medios de cultivo se pueden
utilizar de forma líquida o con un agente gelificante como el
agar. (Cruz Pizarro, 2012)En este trabajo se utilizó el
medio MS (Murashige y Skoog, 1962), este medio es muy
común en el cultivo de tejidos vegetales , y su constitución
ya es conocida, en donde, lo que varía es la concentración
de agar y sacarosa, y además sí se desea agregar algún
factor de crecimiento.
OBJETIVO
Preparar medios de cultivo realizando las soluciones stock
con las especificaciones que se exigen.
MATERIALES Y METODOS
La preparación del medio de cultivo MS, se hizo desde
pesar los componentes de las soluciones stock:
macronutrientes, micronutrientes, de Fe-EDTA, CaCl2-2H2O,
vitaminas y sacarosa, todas estas soluciones stock para la
preparación del concentrado del medio de cultivo MS, el
cual se conservó refrigerado.
Días después se llevó a cabo la fase de vaciado de los
medios, donde en el medio 1, se le agregaron 10 mL de
concentrado del medio de cultivo MS y se aforo a 500 mL
con agua destilada, se ajustó el pH a 5.8; utilizando NaOH
para aumentar alcalinidad y HCl para hacer la solución mas
acida, esto depende del pH que se presente en la solución;
se agregó 4g de agar a la solución y este pasó a licuarse al
microondas hasta hervir en tres veces, finalmente se el
medio se vació en veinte frascos con 25mL
aproximadamente y se rotularon. Y para el medio2 se
realizó el mismo procedimiento, a excepción que en este,
antes de aforar a 500 mL se agregó 2.5 mL de Kinetina y
50µl de ANA. Finalmente se esterilizó en el autoclave a
121°C a una presión de 1.3kg/cm2 durante 15 min.
RESULTADOS Y DISCUCIÓN
En el medio 1 se obtuvieron veinte frascos con 25mL
(aproximadamente) de medio MS sin reguladores de
crecimiento, y el en medio 2 se obtuvieron veinte frascos
con 25mL (aproximadamente) de medio MS con
reguladores res de crecimiento, Kinetina y ANA.
Los medios de cultivo tienen una serie de componentes
generales y específicos cuya presencia y concentración
estará en dependencia del objetivo que se persiga en su
utilización. Los medios de cultivo están constituidos por
sustancias minerales, vitaminas, aminoácidos, azúcares,
reguladores del crecimiento y otros elementos. (Krikorian
1991)
CONCLUSIÓN
La preparación de los medio de cultivo desde la saluciones
stock implica una precisión absoluta para que el medio
tenga las especificaciones que se requieren y este tenga
éxito en el cultivo de tejidos vegetales.
BIBLIOGRAFIA
Abdelnur Esquivel, A., Escalant, J.V. 1994. Conceptos básicos del
cultivo de tejidos vegetales. CATIE. Costa Rica. 2p.
Cruz Pizarro, F. 2012. Cultivo de tejidos vegetales. UNAM. Facultad
de estudios superiores Cautitlán. 14p.
Krikorian A. D. 1991. Medios de cultivo: generalidades y
preparación Regeneración de plantas en el cultivo de
tejidos. Embriogénesis somática y organogénesis. Roca,
WM y Mroginski LA. Cultivo de Tejidos en la Agricultura:
Fundamentos y Aplicaciones. CIAT, Cali pp 41-59.
1) Describa con sus propias palabras que es un medio de cultivo.
El medio de cultivo constituye una parte fundamental en el cultivo de tejidos vegetales, ya que estos tienen una
serie de componentes generales y específicos, esto dependerá del objetivo que se persiga en su utilización. Los
medio de cultivo pueden ser líquidos, solidos o semisólidos, tienen sustancias minerales, vitaminas, aminoácidos
esenciales y se le pueden adicionar fitohormonas.

2) ¿Cuáles son los componentes del medio MS y los aditivos que contiene el concentrado?
Nombre del Compuesto Fórmula mg/L
Nitrato de Amonio NH4NO3 1650
Nitrato de Potasio KNO3 1900
Cloruro de Calcio Dihidratado CaCl2 2H2O 440
Sulfato de Magnesio Heptahidratado MgSO4 7H2O 370
Fosfato de Ptasio Monobásico KH2PO4 170
Etilendinitrilotetraacetato Na2EDTA 37.3
Sulfato Ferroso Heptahidratado FeSO4 7H2O 27.8
Acido Bórico H3BO3 6.2
Sulfato de Manganeso Monohidratado MnSO4 H2O 22.3
Sulfato de Zinc Heptahidratado ZnSO 7H2O 8.6
Yoduro KI 0.83
Molibdato de Sodio Dihidratdo Na2 MoO4 2H2O 0.25
Sulfato de Cobre Pentahidratado CuSO4 5H2O 0.025
Cloruro de Cobalto Hexahidratado CoCl2 6H2O 0.025
Aditivos: Nombre de la mezcla Cantidad
KInetina 5 mL
ANA 100 µl
VitaminasL2 10mL
Fuente de carbono Cantidad
Sacarosa 30g

3) ¿Qué relación mantiene el EDTA con la asimilación del Fe?

El hierro es esencial en procesos bioquímicos tales como la fotosíntesis, la respiración celular de las plantas, el
metabolismo de los carbohidratos, la reducción del nitrógeno y la formación de numerosas enzimas.
Su quelatado, en este caso el EDTA, aporta una liberación instantánea de Fe a la planta, ya que es un quelato muy
estable en soluciones moderadamente ácidas (<6 pH), favorece la rápida actuación y asimilación de éste por el
cultivo. De este modo, se alcanza el equilibrio nutricional en menos tiempo y por tanto, se acelera la recuperación
del ritmo productivo de la planta. (Benavides, 1999)
4) ¿Por qué se debe ajustar el pH del medio?
El pH puede afectar la disponibilidad de los nutrientes: para que el aparato radical pueda absorber los distintos
nutrientes, éstos obviamente deben estar disueltos. Valores extremos de pH pueden provocar la precipitación de
ciertos nutrientes con lo que permanecen en forma no disponible para las plantas. También puede afectar al
proceso fisiológico de absorción de los nutrientes por parte de las raíces: todas las especies vegetales presentan
unos rangos característicos de pH en los que su absorción es idónea (Muñoz, 2006)

BIBLIOGRAFIA
Muñoz de Malajovich, M. A. (2006) Biotecnología. Editorial Universidad Nacional de Quilmes.

Benavides, M. A. (1999) ABSORCION Y ASIMILACION DE HIERRO EN LAS PLANTAS. Depto. de Horticultutra. Universidad Agraria de Antonio
Narro.

Musashige,T and F. Skoog. (1962)A Revised medium for rapid growth and bio-assays with tobacco tissue culture. Physiol, Plant.15:473-497