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Edilberto Santos Poblano Ortiz INGENIERIA MECANICA AGRICOLA Universidad Autnoma Chapingo CULTIVO DEL ALGA SPIRULINA SPP.

La Spirulina es un micro alga microscpica que apareci en la Tierra hace ms de tres mil quinientos millones de aos atrs. Contiene ms de cien nutrientes que la convierten en la fuente ms completa de nutricin orgnica. La Spirulina pertenece a la familia de las Cianofceas, cuyo nombre se deriva del latn de la palabra espiral y se refiere a la configuracin fsica de esta alga. Sus clulas cilndricas tienen un ancho de 3 a 12 milimicrones, alcanzando a veces hasta 16. Sus filamentos presentan un esquema en forma de hlice abierta y llegan a medir entre 100 y 200 milimicrones. Las condiciones de esta hlice y sus medidas dependern de las condiciones ambientales y del crecimiento del alga. La reproduccin se efecta por fisin binaria transversal. El alargamiento del tricoma o filamento se debe a las numerosas divisiones transversales de sus clulas. La multiplicacin se produce solamente por fragmentacin del filamento y es de naturaleza intracelular, destruyendo la clula intercalar existente dentro de los mismos filamentos. Hoy en da, la Spirulina es conocida hoy como el alimento del futuro, ya que contiene un 70% de protena, con todos los aminocidos esenciales y no esenciales en perfecto balance: potasio, calcio, zinc, magnesio, manganeso, selenio, hierro y fsforo, son minerales presentes en abundante cantidad en la Spirulina. Pero eso no es todo: entre las vitaminas es rica en vitaminas B6 (Piridoxina), Bioitina, cido pantotnico, cido flico, Inositol, Niacina, Riboflavina (B2), Tiamina (B1) y Tocoferol (Vitamina E).6 Condiciones de crecimiento. Cintica del crecimiento: El crecimiento de Spirulina spp en un cultivo por lotes, bajo condiciones pre-establecidas por cada investigador o productor, presenta las siguientes fases: Fase de adaptacin. Fase de crecimiento exponencial. Fase de crecimiento lineal. Fase estacionaria. Fase de muerte.

Temperatura: Desde 30 C, sin embargo la mxima velocidad de crecimiento se alcanza entre los 35 38 C, por encima de esta temperatura hay riesgo de la destruccin rpida del cultivo.

Edilberto Santos Poblano Ortiz INGENIERIA MECANICA AGRICOLA Universidad Autnoma Chapingo Iluminacin: Fotoperiodos regulados de tiempo 12/12 (da/noche). La cantidad a escala de laboratorio puede variar entre 2000 y 5000 luxes. pH: Dentro de un rango de 8.5 -10.5. CO2: Es preferible que vare entre 0.05 5 % (v/v), y que este material, gaseoso, se suministre a cultivos de laboratorio, por burbujeo y mezclado con aire. 2 Medios de cultivo para un cultivo de alga spirulina spp. Medio Zarrouk. Este es el primer medio sinttico formulado para el cultivo del alga Spirulina spp., el cual es todava usado como medio estndar. Fue definido por primera vez en 1966, y trabajos anteriores muestran que algunos componentes de este medio pueden ser diluidos un poco ya que la concentracin de algunos de sus nutrientes es lo suficientemente alta. Tabla 1. Medio de cultivo Zarrouk (Zarrouk, 1966) Sustancia Concentracin NaHCO3 13.61 g/L Na2CO3 1.03 g/L K2HPO4 0.50 g/L NaNO3 2.50 g/L KSO4 1.00 g/L NaCl 0.20 g/L MgSO47H2O 0.04 g/L CaCl22H2O 0.01 g/L FeSO47H2O 0.05 g/L H3BO3 2.86 g/L MnCl24H2O 1.18 g/L ZnSO47 H2O 0.22 g/L NaMoO42H2O 0.39 g/L CuSO45 H2O 0.079 g/L Co(no3)26 H2O 0.049 g/L VOSO45 H2O 49.6 mg K2Cr2(SO4)42 H2O 96.0 mg NiSO47 H2O 47.8 mg Na2WO42 H2O 17.9 mg TiOSO4 33.3 mg Co(NO3)26 H2O 44.0 mg En este medio el fsforo tiene un rol esencial ya que mantiene altas tasas de produccin en cultivos de micro algas.

Edilberto Santos Poblano Ortiz INGENIERIA MECANICA AGRICOLA Universidad Autnoma Chapingo El potasio, es un cofactor para muchas enzimas, est involucrado en la sntesis de protenas, regulacin osmtica y es esencial para el crecimiento. El sulfuro es un constituyente de algunos aminocidos esenciales, vitaminas y sulfolpidos, que ayudan al crecimiento del alga. El bicarbonato acta no solo como fuente de carbonos, sino que regula las condiciones alcalinas en el cultivo. La Spirulina por ser una cianobacteria no-diazotrpica requiere nitrgeno en el medio generalmente suministrado por el NaNO3. Ademas, este ltimo es fundamental para el crecimiento y no se debe tener en concentraciones menores a 25 g/lt. El nitrgeno es requerido para la sntesis de aminocidos que hacen las protenas y otros componentes celulares como la ficocianina. Una reduccin en el NaCl refleja una reduccin en el crecimiento. El magnesio ocupa una posicin estratgica en el aparato fotosinttico como centro de la molcula de clorofila, entonces, todas las cianobacterias tienen un absoluto requerimiento de este elemento, as mismo tiene un rol en la agregacin de ribosomas en unidades funcionales y en la formacin de catalasa. La reduccin de CaCl2 conduce un decrecimiento significativo del alga, y el calcio es un requerimiento esencial para la actividad en la membrana celular y un catalizador en reacciones enzimticas.1 Este medio de cultivo es muy utilizado para la produccin de algas por su efectividad y su antigedad, como se menciona al principio es un medio estndar. Sin embargo existen otros medios, los cuales tambin son utilizados por empresas productoras; cada empresa crea su propio medio segn los requerimientos de su cultivo y las experiencias que acumulan al final de cada ciclo de estos, se ha experimentado y algunos de ellos son los siguientes: Medio Urea. Consta bsicamente de una fuente de carbono y una de nitrgeno esto es bicarbonato y urea, respectivamente. La urea, tambin conocida como carbamida, carbonildiamida o cido arbamdico, es el nombre del cido carbnico de la diamida cuya formula qumica es (NH2)2CO. Tabla 2. Medio de cultivo con Urea Sustancia Concentracin Bicarbonato de sodio 25.61 gr/lts agua destilada Urea 3.5 gr/500 ml agua destilada

Edilberto Santos Poblano Ortiz INGENIERIA MECANICA AGRICOLA Universidad Autnoma Chapingo La Urea seleccionada como fuente de nitrgeno para la Spirulina incrementa la produccin de biomasa y tambin el contenido de clorofila. La Urea se hidroliza a amoniaco en un medio alcalino y puede ser toxica para el alga en concentraciones altas y debido a la volatilidad del amoniaco puede causar un dficit en la nutricin del alga pero se puede solucionar con la continua adicin de Urea. Medio Utex. Como recomendacin de este medio se debe prevenir la formacin de precipitados preparando 2 soluciones por separado. Despus de completar las 2 soluciones, se debe verter la solucin 2 en la solucin 1 (ver tabla 3 y 4) y agitar para mezclar completamente, y se recomienda mantener a temperaturas bajas para mayor conservacin del medio.1 Tabla 3. Solucin 1 para medio de cultivo Utex (Utex ,2006) Sustancia Concentracin 13.61 g/500 ml H2O 4.03 g/500 ml H2O 0.5 g/500 ml H2O Tabla 4. Solucin 2 para medio de cultivo Utex (Utex ,2006) Sustancia Concentracin NaNO3 2.5 g/500L K2SO4 1 g/500L NaCl 1 g/500L MgSO47H2O 0.2 g/500L CaCl22H2O 0.04 g/500L Na2EDTA2H2O 0.75 g/L FeCl36 H2O 0.097 g/L MnCl24 H2O 0.041 g/L ZnCl2 0.005 g/L CoCl26 H2O 0.002 g/L Na2MoO42H2O 0.004 g/L CuSO45 H2O 0.02 g/L ZnSO47 H2O 0.044 g/L H3BO3 0.62 g/L HEPES buffer pH 2.4 g/ 200 mL H2O 7.8 Vitamina B12 0.027 g/ 200 mL H2O

NaHCO3 Na2CO3 K2HPO4

Edilberto Santos Poblano Ortiz INGENIERIA MECANICA AGRICOLA Universidad Autnoma Chapingo Nota: EDTA: cido etilendiamino tetractico; aumenta la solubilidad de iones metlicos como B, Fe, Mn, Co, Cu, Zn, V, Ni, W y Te, lo que permite que estn disponibles como nutrientes para Spirulina spp.2 Es importante mencionar que las soluciones anteriores se utilizarn en un experimento de trabajo de grado en la Universidad Nacional de Colombia sede Medellin y se obtuvo como resultado que el mayor crecimiento del alga se logr en el medio de cultivo Utex; en los medios Zarrouk y Urea el crecimiento fue muy similar. El mayor contenido proteico obtenido se present en el medio Urea (medio sugerido en ese trabajo) seguido por el medio Utex y por ltimo el medio Zarrouk.1 Medio de cultivo propuesto por DIC (Dainippon Ink & Chemicals Inc., Japan). Este medio fue propuesto basado en la experiencia obtenida en la empresa DIC en Japn en relacin con el cultivo del alga.3 Tabla 5. Medio de cultivo propuesto por DIC Ingredientes Concentracin (g/lts) NaHCO3 16.8 K2HPO4 0.50 NaNO3 2.50 K2SO4 1.00 NaCl 1.00 MgSO4 . 7H2O 0.20 CaCl2 . 2H2O 0.04 FeSO4 . 7H2O 0.01 EDTA 0.08 Medio de cultivo propuesto por Raoof (RM6). Este medio fue propuesto por los investigadores Raoof, Kaushiks y Prasanna en el ao 2006.4 Tabla 6. Medio de cultivo por Raoof (RM6) Sustancia Concentracin Sper fosfato 1.25 g/lt Nitrato de sodio 2.50 g/lt Muriato de potasio 0.98 g/lt Cloruro de sodio 0.50 g/lt Sulfato de magnesio 0.15 g/lt Cloruro de calcio 0.04 g/lt Bicarbonato de sodio (grado comercial) 8.00 g/lt

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Medio Zarrouk modificada por la Universidad Politcnica de Madrid, Espaa. Tabla 7. Medio de cultivo por la UPM.5 Composicin NaHCO3 KNO3 Macronutrientes KH2PO4 MgSO4 . 7 H2O Na2 EDTA FeSO4 . 7 H2O MnCl2 . 4 H2O Micronutrientes ZnCl2 Na2MoO4 . 2 H2O CoCl2 . 6 H2O Cianocobalamina (B12) Vitaminas Tiamina (B1) Biotina Trazas Agua de mar pH Propiedades fsico Sal (%) qumicas CE25 (mS.cm-1)

gr/lt 10 2.55 0.4 0.25 0.13 0.08 1.8 x 10-4 5.2 x 10-5 6.3 x 10-5 1.8 x 10-5 30 x 10-6 35 x 10-6 50 x 10-6 10 ml/lt 8-9 10 40 20 - 40

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LITERATURA CONSULTADA.

1. Fuente: Fuente: Torres Urango Bernardo David & Correa Trujillo Daniel, Diseo conceptual de un proceso de cultivo y obtencin de Cyanobacteria Arthrospira Platensis., Proyecto de grado, Universidad EAFIT, Escuela de Ingeniera, Departamento de Ingeniera de procesos, 2008. Tomada de: http://bdigital.eafit.edu.co/PROYECTO/P660.6CDT693/ 2. Fuente: Rodrguez Cuesta A. R. & Triana Serrano C. F. (2006), Evaluacin del pH en el cultivo de Spirulina spp. (=Arthrospira) bajo condiciones de laboratorio. Trabajo de grado (tesis), Bogot. 106 pgs. 3. Fuente: Shimamatsu Hidenori, (2004), Mass production of Spirulina, an edible microalga. Japon, Artculo. Pag. 40. 4. Fuente: M. Ahsan B. Habib & Mashuda Parvin, FAO (Food and Agriculture Organization), (2008), A review on culture, production and use of Spirulina as food for humans and feeds for domestic animals and fish. ,Fisheries and Aquaculture Circular No. 1034. Roma, 41 pgs. 5. Fuente: Dran Altisent J. M. (2011), Cultivo de microalgas para biocombustibles. Universidad politcnica de Madrid; presentacin en PUCESI, Ibarra, Ecuador. 134 pgs. 6. Fuente: El alga Spirulina, www.psicologiamagica.com.ar