Universidad Veracruzana Facultad de Ciencias Agrícolas

EE: Fitomejoramiento
Docente: Dulce María Murrieta Hernández
PRÁCTICA
No 5. Cultivo de Tejidos

INTERANTRES:
Kassandra Salcedo González
Luis Angel Aguirre León
Brenda Viviana Ramírez Ramírez
Wendy Esperanza Martínez Rosa
Jacqueline Andrade Durán
 ELABORACIÓN DE EL MEDIO DE CULTIVO
El cultivo in vitro es una técnica que se utiliza en diversos campos de la biología para
mantener organismos vivos, o partes de estos, bajo condiciones controladas dentro de un
laboratorio. Si bien las áreas más desarrolladas de esta técnica son la microbiología y la
biología celular de líneas celulares animales, el cultivo de tejidos vegetales también ha
mantenido un desarrollo constante en las últimas décadas, y es aplicado en la conservación
de plantas ornamentales como las orquídeas endémicas de la selva, la restauración de
bosques, la generación de plantas modificadas para producir nutrientes esenciales, o la
producción de fármacos, entre otros.

¿CÓMO SE REALIZA EL CULTIVO IN VITRO?

El cultivo in vitro se realiza tomando una porción de una planta (hoja, tallo, semilla, otros) y
colocándola en un medio nutritivo estéril donde se regenerará una o muchas plantas. Este
cultivo se incuba bajo condiciones de luz, temperatura y humedad controladas, que junto
con las fisicoquímicas y nutricionales propician el desarrollo del explante hacia la formación
de una masa celular amorfa denominada callo, de donde parte todo lo demás.
Para hacer nuestro cultivo utilizamos los siguientes reactivos

Macronutrientes mg/L g/10L g/20L g/40L

Stock 1
NH4O3 1650 16.5 33 66
KNO3 1900 19.0 38.0 76
MgSO4.7H2O 370 3.7 7.4 14.8
KH2PO4 170 1.7 3.4 6.8

Stock 2
CaCl2.H2O 440 4.4 8.8 17.6

Micronutrientes mg/L mg/10L mg/20L mg/40L mg/100L

Stock 3
KI 0.83 8.3 16.6 33.2 83
H3BO3 6.2 62.0 124.0 248 620
MnSO4.4H2O 22.3 223.0 446.0 892 2230
(MnSO4.H2O) 16.89 168.9 337.8 675.6 1689
ZnSO4.7H2O 8.6 86.0 172.0 344 860
Na2MoO4.2H2O 0.25 2.5 5.0 10 25
CuSO4.5H2O 0.025 0.25 0.5 1 2.5
CoCl.6H2O 0.024 0.25 0.5 1 2.5

Solución de fierro* mg/L mg/10L mg/20L mg/40L

Stock 4
Na2EDTA 37.3 373.0 746.0 1492
FeSO4.7H2O 27.8 278 556.0 1112

Compuestos mg/L g/10L g/20L g/40L

orgánicos Vitaminas
Stock 5
Inositol (Myo-inositol) 100.0 1.0 2.0 4.0

Stock 6 mg/L mg/10L mg/20L mg/40L mg/80L

Ac. Nicotínoco (B3) 0.5 5 10 20 40
Piridoxina HCl (B6) 0.5 5 10 20 40
Tiamina-HCl (B1) 0.1 1 2 4 8

Aminoácidos mg/L mg/10L mg/20L mg/40L

Stock 7
Glicina 2.0 20 40 80

Carbohidratos g/L
Sacarosa 30

Medio Nutritivo Murashige & Sckoog (1962)

*Disolver el FeSO4.7H2O en 50 ml de agua destilada. Disolver el Na2EDTA en agua destilada caliente, seguir calentando
y mezclar con el FeSO4.7H2O, así resulta un complejo más estable.
 El cultivo de tejidos se inicia con la disección microscópica de la planta bajo condiciones
estrictamente higiénicas, con el propósito de transferir un tejido que crece activamente (los
tejidos meristemáticos) con seguridad y limpieza, dentro de un recipiente estéril sin
introducir microorganismos contaminantes. Las células y tejidos que crecerán y se
desarrollarán a partir del explanto original dependen de los objetivos del cultivo de tejidos.
En algunos casos las células conformarán una masa aparentemente desorganizada,
conocida como callo, en otros estarán presentes otras estructuras reconocibles como tallos,
raíces, bulbos u otros órganos. Estos tejidos cultivados in vitro se hallan dentro de un
microcosmos estéril de un recipiente de vidrio o de plástico, protegidos del medio exterior
no estéril. Es esencial mantener la esterilidad del ambiente confinado en el recipiente,
debido a que cualquier microorganismo, que pueda entrar al mismo, crecerá de forma
oportunista a una velocidad mucho más rápida que los tejidos vegetales y eventualmente
colonizarán y matarán a los tejidos.

El cultivo eleido fue: Pinguicula agnata.

Imágenes del proceso:

Lo primero que Después se

Después se hizo el
hicimos fue hacer diseccionaron para
lavado las ojas de
nuestra mezcla de poder inocularlas
nuestra plantas
nutrientes

Así se observaba el
resultado de el cultivo
de Luis Ángel el día 17
de octubre

El 19 de septiembre
realizamos nuestra
siembra en loas
frascos

“De todo el grupo de la clase, solo el cultivo del

compañero Luis tuvo un resultado positivo”